过氧化氢抑制三氧化二砷诱导的伯基特氏淋巴瘤细胞凋亡

目的 探讨过氧化氢(H2O2)对三氧化二砷(As2O3)诱导人类伯基特氏淋巴瘤细胞凋亡的影响及双染法荧光显微技术在检测细胞凋亡中的作用。方法 应用As2O3诱导人类伯基特氏淋巴瘤细胞株BJAB细胞凋亡，采用Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)核染料双染法荧光显微镜和透射电镜对细胞死亡进行观察及定量分析．结果 BJAB细胞经As2O3处理后，荧光显微镜下可见大多数细胞出现细胞染色质凝集、核边集、核碎裂等凋亡的特征性改变；在低剂量(200μmol／L)H2O2的影响下，抑制了As2O3诱导的细胞凋亡，降低细胞的死亡率；细胞的死亡方式由凋亡转变为核固缩性坏死，表现为既无凋亡的特征性改变，又非典型的细胞坏死，死亡细胞的细胞核呈固缩状态而非肿胀。结论低浓度(200μmol／L)H2O2可抑制临床治疗浓度的As2O3诱导的人类伯基特氏淋巴瘤BJAB细胞凋亡；双染法荧光显微镜技术不但可明确区分细胞凋亡及坏死．还可判断早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞，并可进行定量分析．是一种良好的细胞凋亡检测方法。     

过氧化氢抑制三氧化二砷诱导的伯基特氏淋巴瘤细胞凋亡

目的 探讨过氧化氢(H₂O₂)对三氧化二砷(As₂O₃)诱导人类伯基特氏淋巴瘤细胞凋亡的影响及双染法荧光显微技术在检测细胞凋亡中的作用。方法 应用As₂O₃诱导人类伯基特氏淋巴瘤细胞株BJAB细胞凋亡,采用Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)核染料双染法荧光显微镜和透射电镜对细胞死亡进行观察及定量分析。结果 BJAB细胞经As₂O₃处理后,荧光显微镜下可见大多数细胞出现细胞染色质凝集、核边集、核碎裂等凋亡的特征性改变;在低剂量(200 μmol/L)H₂O₂的影响下,抑制了As₂O₃诱导的细胞凋亡,降低细胞的死亡率;细胞的死亡方式由凋亡转变为核固缩性坏死,表现为既无凋亡的特征性改变,又非典型的细胞坏死,死亡细胞的细胞核呈固缩状态而非肿胀。结论 低浓度(200 μmol/L)H₂O₂可抑制临床治疗浓度的As₂O₃诱导的人类伯基特氏淋巴瘤BJAB细胞凋亡;双染法荧光显微镜技术不但可明确区分细胞凋亡及坏死,还可判断早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞,并可进行定量分析,是一种良好的细胞凋亡检测方法。     

谷氨酸介导的大脑皮层神经细胞凋亡

目的 观察相对低浓度谷氨酸（Glutamate,Glu)对培养皮层神经细胞的兴奋毒性作用。方法 以30μmol／L处理培养第7天神经细胞30min，应用吖啶橙色荧光显微镜观察及流式细胞仪定量分析法，分别观察Glu作用后细胞凋亡形态特征及不同时间点（6h,12h,18h,24h)凋亡细胞所占比例。结果 Glu作用后6h即有凋亡细胞的出现，12h后渐增多，以18h达到高峰，为12％。结论 相对低浓度Glu可诱导大脑皮层神经细胞凋亡。     

鱼藤素阻断HL-60细胞生存信号通路调控作用的初步研究

目的：研究鱼藤素对人类白血病细胞株HL-60细胞系体外抗肿瘤作用,探讨AKT的功能活化状态p-AKT及抗凋亡蛋白Survivin、Bcl-2在白血病HL-60细胞中的表达及相关性。方法：采用WST-1细胞增殖实验观察细胞的生长抑制作用,原位末端标记（TUNEL）法观察细胞凋亡指数,应用AnnexinV／PI双染和流式细胞仪计数,观察细胞是否发生凋亡,利用透射电镜观察细胞形态学变化。Western blot检测鱼藤素对HL-60细胞内p-AKT、Survivin、Bcl-2蛋白表达的影响,并进行分析。结果：WST1实验结果显示,经过10～80nmol／L鱼藤素处理48h后,HL-60细胞的生长受到不同程度的抑制,抑制率分别为（10．13±3．16）％、（13．84±2．02）％、（30．72±3．82）％和（47．05±1．36）％,并呈现出比较明显的浓度依赖关系。鱼藤素诱导HL-60细胞发生了早期凋亡,40nmol／L鱼藤素处理HL-60细胞48h和72h,AnnexinV-PI^-标记的早期凋亡细胞所占的比例分别为相应对照组的2．06倍和5．33倍,透射电镜、荧光显微镜下能观察到胞核浓缩、碎裂以及凋亡小体的形成。细胞内P—AKT、Bcl-2及Survivin均发生不同程度的降解,细胞内重要的生存信号通道P13K／AKT被阻断,细胞发生凋亡。结论：鱼藤素可以通过清除细胞内重要信号蛋白、阻断细胞生存信号通路来诱导HL-60细胞发生凋亡。     

露蜂房纯化蛋白对白血病细胞形态学影响的研究

目的 观察中药露蜂房纯化蛋白Ⅱ(nidus vespae protein-Ⅱ,NVP-Ⅱ)对人早幼粒白血病细胞株HL-60和急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)形态学的影响.方法 采用体外细胞培养,加入不同浓度NVP-Ⅱ作用于HL-60细胞和AML患者BMMNC, 培养72 h后,生长曲线法测定NVP-Ⅱ对白血病细胞增殖的影响,倒置显微镜下观察细胞生长状况,并收集细胞常规制备超薄切片,透射电子显微镜下观察HL-60细胞和AML患者BMMNC的超微结构.结果 光镜下NVP-Ⅱ处理组白血病细胞数量明显减少,并出现细胞碎片;透射电镜下,NVP-Ⅱ处理组白血病细胞出现核固缩,染色质浓缩边集,呈新月状、块状或碎裂为质膜包绕的团块,形成凋亡小体;线粒体基质深染,出现空泡样变.结论 NVP-Ⅱ有明显诱导白血病细胞凋亡的作用,并呈现典型的细胞凋亡形态学改变.     

甘氨鹅脱氧胆酸盐对人正常肝细胞HL-7702的影响

目的 观察甘氨鹅脱氧胆酸盐(glycochenodeoxcholate,GCDC)对人正常肝细胞HL-7702凋亡诱导作用,探讨GCDC诱导HL-7702细胞凋亡的机制.方法 终浓度分别为50、100、150、200、250 μmol/L的GCDC处理HL-7702细胞4、8、12、24 h,光学显微镜镜下观察细胞形态学改变、用Am-Blue 细胞活性检测和乳酸脱氢酶活性的测定及AnnexinV-FITC/PI双染色法检测GCDC对HL-7702细胞凋亡的影响,用荧光指示剂Fluo-3/AM测定HL-7702细胞内钙离子浓度.结果 (1)终浓度为150 μmol/L的GCDC处理HL-7702细胞24 h后,细胞出现典型的凋亡细胞形态学改变,包括核固缩、核碎裂和凋亡小体形成等.(2)Am-Blue吸光光度法、GENMED 乳酸脱氢酶(LDH)总活性比色法及 AnnexinV-FITC/PI双染色法定量检测结果均显示, GCDC均可诱导HL-7702细胞凋亡且呈剂量及时间依赖性.(3)GCDC能使HL-7702细胞内钙离子浓度增加且具有浓度和时间依赖性.结论 GCDC可能通过增加HL-7702细胞内钙离子浓度诱导人正常肝细胞HL-7702凋亡,其作用具有浓度和时间依赖性.     

TRAIL和抗肿瘤药物协同诱导非小细胞肺癌凋亡的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）体外诱导非小细胞肺癌渊亡的效果及和抗肿瘤药物的协同作用。方法用20-160ng／ml浓度范围的rhTRAIL单独及联合阿霉素、顺铂和紫醇处理体外培养的非小细胞肺癌NCI—H460细胞，8h后测定细胞Caspase 3的活性变化，并于24h后用荧光显微镜观察药物处理对NCI—H460细胞核形态的影响。结果经药物处理8h后NCI-H460细胞的Caspase3活性提高，24h后各处理组细胞出现不同程度的细胞核固缩、碎裂等形态学改变，联合用药组上述变化更明显，细胞凋亡率更高。结论TRAIL可以有效诱导非小细胞肺癌的体外凋亡，其效果与作用浓度呈正相关；TRAIL和常用抗肿瘤药物有协同促进肿瘤细胞凋亡的作用。     

露蜂房纯化蛋白对人早幼粒白血病HL-60细胞的生长抑制作用

目的研究中药露蜂房纯化蛋白（nidus vespae protein-Ⅱ,NVP-Ⅱ）对人早幼粒白血病HL-60细胞的生长抑制作用。方法采用NVP-Ⅱ在体外作用于HL-60细胞,经光镜、电镜、荧光显微镜观察形态学变化,TdT缺口末端标记（TUNEL）技术检测NVP-Ⅱ对HL-60细胞增殖、凋亡的影响。结果①光镜下观察到,与生理盐水对照组比较,NVP-Ⅱ处理组HL-60细胞数量减少,胞质内颗粒增多。②透射电镜下发现,NVP-Ⅱ处理组HL-60细胞核染色质靠核膜边集,呈块状或半月形;有的细胞核固缩、断裂为质膜包绕的碎块,有凋亡小体出现。③荧光显微镜下观察到,NVP-Ⅱ处理组HL-60细胞核染色质高度凝聚,致密浓染,或裂解呈碎块状,边缘光滑清晰,呈现典型的凋亡形态特征。④TUNEL检测见阳性细胞核深染,NVP-Ⅱ处理组与生理盐水处理组比较,凋亡细胞明显增多（P〈0.05）。结论NVP-Ⅱ可抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡。     

TUNEL技术原位检测肝癌细胞凋亡激光共聚焦显微镜观察

目的 用缺口末端标主技术（ＴＵＮＥＬ）对肝硬变,肝细胞肝癌及培养肝细胞癌细胞系的细胞凋亡进行形态学观察。方法 采用德国宝灵曼公司生产的原位末端标记试剂盒对福尔马林固定,石蜡包埋的肝组织和培养肝细胞进行ＴＵＮＥＬ染色,激光共聚焦显微镜观察会细胞凋亡的形态特征。结果：ＴＵＮＥＬ阳性信号为黄绿色或黄色强荧光,位于胞核,呈环行,小圆形或颗粒状,提示凋亡细胞有典型的新月体状染色质边集,核浓缩以及有大量微核体     

紫杉醇诱导HeLa细胞凋亡的研究

目的：探讨紫杉醇抑制ＨｅＬａ细胞生长的机制。方法；经荧光染色，电镜观察细胞形态，ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ及流式细胞仪检测凋亡细胞。结果：紫杉醇作用２４ｈ经荧光染色细胞呈不均一亮蓝色，作用４８ｈ细胞被染色红色，电镜观察可见细胞变小，染色质浓缩并产生凋亡小体，ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ未见明显的梯形条带，流式细胞仪检测紫杉醇作用２４ｈ细胞凋亡。结论；紫杉醇可诱导细胞凋亡，也可直接杀伤ＨｅＬａ细胞，而且以后者为主     

土贝母苷甲诱导的人宫颈癌HeLa细胞凋亡的超微结构变化及环孢菌素A的保护作用

目的 观察土贝母苷甲(TBMS1)诱导的人宫颈癌HeLa细胞凋亡的超微结构变化及环孢菌素A的保护效果,探讨以线粒体为中心的内源性凋亡途径在TBMS1诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡时的作用.方法 利用透射电镜观察不同浓度TBMS1作用不同时间引起的细胞超微结构的变化,以及环孢菌素A预处理对TBMS1作用的影响.结果 随着土贝母TBMS1浓度的增高和作用时间的延长,人HeLa细胞的结构发生了连续性变化.肿瘤细胞逐渐减小,细胞间隙逐渐增大,线粒体逐渐肿胀、退化,粗面内质网逐渐扩张,核逐渐变小、核碎裂.在TBMS1低浓度时,环孢菌素A能够在一定程度上保护细胞免受TBMS1的损伤.环孢菌素A对TBMS1的损伤有保护效果.但当TBMS1浓度增大时,环孢菌素A的这种保护就不起作用了.结论 TBMS1诱导HeLa细胞发生一系列凋亡特征的超微结构变化,线粒体肿胀、退化为其特征之一,从形态学角度提供了以线粒体为中心的内源性凋亡途径起一定作用.     

氧化砷诱导食管癌细胞系细胞凋亡的研究

目的:研究食管癌细胞系SHEEC1以三氧化二砷（AS2O3）诱导细胞凋亡光镜和电镜的形态改变。方法：SHEEC1细胞常规培养在199培养基,在5umoL/LAs2O3作用72h收获细胞以苏木精－伊红染色,TUNEL标记,透射电镜和流式细胞仪检查。结果：光镜下凋亡细胞核致密,染色质片段化,胞浆红染,TUNEL标记阳性,流式细胞仪检查出现凋亡峰（亚G1／G 0峰）。电镜下可见两种死亡细胞：一种是核固缩,有染色质凝集靠近核膜等典型凋亡改变;另一种细胞浆退行性变及细胞坏死改变。结论：食管癌细胞系SHEEC1可以用As2O3引起凋亡,提示其可以作为治疗食管癌的辅助药物。     

4-HPR体外诱导A549细胞凋亡与Bax/Bak蛋白相关性研究

目的:观察4-HPR对肺腺癌细胞A549凋亡的影响并探讨其机制。方法:不同剂量4-HPR处理A549细胞,倒置显微镜观察A549细胞形态学变化和对细胞生长的抑制作用,Hoechst33258染色观察凋亡情况,Western Blot分析凋亡相关蛋白Bax/Bak等的表达。结果:细胞数目随药物浓度增加而减少,失去正常生长,光泽度下降,变小变圆;细胞凋亡程度随药物浓度增加而增强,细胞核肿胀变圆,致密浓染或碎裂;凋亡过程,Bax/Bak、P53表达明显增加。结论:4-HPR可明显抑制肺腺癌A549细胞的增殖,增加Bax/Bak、P53的表达,促进A549凋亡,为进一步探讨4-HPR治疗肺腺癌的机制提供实验依据。     

板蓝根组酸诱导耐药人肝癌原位移植瘤的细胞凋亡研究

目的　研究板蓝根组酸诱导耐药人肝癌原位移植瘤的细胞凋亡作用及机制。方法　利用已建立的人耐药肝癌BEL 74 0 4 /ADM动物模型 ,应用FCM、透射电子显微镜等方法观察板蓝根组酸在体内对耐药肝癌细胞的形态学特征变化。结果　FCM检测到的凋亡细胞为 :BEL 74 0 4细胞组 0 5 % ,ADM组为 8 3% ,组酸 ADM组为 1 7 6 % ,两组比较有显著性差异 (P <0 0 5 ) ;电镜下见组酸 ADM组的肿瘤组织中多个凋亡细胞聚集 ,细胞核内染色质空虚 ,或染色质浓缩成新月体帽状结构 ,核仁浓缩或碎裂 ,凋亡小体形成 ,粗面内质网结构松散、脱粒、滑面内质网增多 ,排列无序 ,线粒体呈泡状或出现絮状物 ,嵴模糊不清 ,桥粒连接疏松 ,细胞膜微绒毛脱落或消失 ,溶酶体减少。结论　经组酸 ADM作用于肿瘤后 ,耐药肝癌中凋亡细胞明显增多 ,肝癌细胞的超微结构形态学改变符合程序化死亡的过程 ,说明板蓝根组酸联合ADM能诱导耐药肝癌细胞发生凋亡 ,具有逆转耐药作用。     

NF-κB途径在舒林酸促人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用

目的探讨核因子κB（NF-κB）途径在舒林酸促人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,舒林酸（0.1、0.3、0.6、1.2、2.4 mmol/L）作用后,苏木精-伊红染色、电镜观察药物作用后细胞形态学变化,免疫组化、Western-blot方法检测药物对人胃癌SGC-7901细胞核因子κB（NF-κB）、bcl-2、bax蛋白表达的影响。结果苏木精-伊红染色检测结果显示舒林酸抑制肿瘤细胞生长,肿瘤细胞出现核固缩、核碎裂、染色质边集等凋亡及坏死的形态学表现;电镜下可看到染色质边集、凋亡小体;免疫组化、West-ern-blot结果显示舒林酸作用48 h后人胃癌SGC-7901细胞NF-κB、bcl-2表达逐渐下降,bax表达逐渐上升,具有剂量依赖性。NF-κB与bcl-2蛋白表达率之间具有相关性（r=0.846 5,P〈0.01）。结论舒林酸可以促进人胃癌SGC-7901细胞凋亡,NF-κB途径在舒林酸促进胃癌SGC-7901细胞凋亡中发挥部分作用。     

不同能量等级钬激光照射对膀胱癌细胞株T-24增殖活性与凋亡的影响

目的观察不同能量等级钬激光照射人膀胱癌细胞株对膀胱肿瘤细胞增殖活性的影响与诱导肿瘤细胞凋亡中的作用。方法人膀胱癌细胞株T-24细胞以不同等级低剂量钬激光直接照射48h后,应用MTT法观察细胞增殖受抑制情况以及光镜下观察细胞形态学的改变;并根据结果选择适宜的钬激光能量值照射T-24细胞后,采用免疫荧光分析钬激光照射肿瘤细胞株后对肿瘤细胞增殖的抑制情况以及对细胞凋亡情况的影响。结果随着钬激光辐射能量的增大,细胞增殖抑制率上升,呈现出一定的剂量依赖关系。根据预试验结果选取钬激光能量值为800mJ辐射细胞株干预后48h采用普通光镜及荧光显微镜观察细胞形态均提示实验组细胞生长密度降低,与对照组细胞在形态学上差异明显,符合细胞凋亡的改变。结论体外细胞试验结果表明,采用钬激光照射人膀胱癌细胞株T-24,能够抑制肿瘤细胞增殖活性并诱发肿瘤细胞凋亡。     

蓝舌病毒HbC3株致人宫颈癌HeLa细胞死亡方式的研究

目的:研究蓝舌病毒湖北株致人宫颈癌HeLa细胞死亡方式及其作用机制。方法:原位末端标记(TUNEL法)观察病毒诱导细胞凋亡情况;激光扫描共聚焦显微镜检测荧光标记的细胞核及内质网变化;萤光照度仪检测病毒诱导细胞Caspase-3/7,Caspase-8,Caspase-9活性变化。结果:凋亡染色未见明显凋亡细胞,共聚焦检测见细胞核膜不完整,染色质分散,有的凝集在核膜周围,部分染色质外溢,内质网分散,混浊不清,细胞与细胞之间分界不清;萤光照度仪检测酶活性可见Caspase-3/7,Caspase-8,Caspase-9活性均无明显变化。结论:蓝舌病毒湖北株诱导HeLa细胞胀亡而发挥其抑瘤作用。     

熊果酸对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的探讨熊果酸（UA）对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法采用MTT法观察UA对SiHa细胞增殖的影响,流式细胞术检测UA对细胞周期和凋亡率的影响,Hoechst33258荧光染色和透射电镜观察凋亡细胞的形态变化,RT-PCR技术检测SiHa细胞中转化生长因子（TGF）-β1mRNA和Smad 4 mRNA表达的变化。结果 UA可明显抑制SiHa细胞生长,并呈时间和浓度依赖趋势（P〈0.05或0.01）;流式细胞术检测发现,UA作用24 h、48 h和72 h后SiHa细胞周期阻滞在G0/G1期,并检测到凋亡峰,凋亡率分别为1.16%、16.37%、18.70%（P〈0.05或0.01）;Hoechst33258荧光染色观察可见胞核染色质不均,呈颗粒状或块状荧光,透射电镜观察出现胞质浓缩、胞核染色质凝聚、边集等典型凋亡细胞核形态变化;RT-PCR检测到TGF-β1mRNA表达减弱,并呈时间依赖趋势,Smad 4 mRNA表达随时间延长而增强。结论熊果酸在体外对SiHa细胞具有抗增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与TGF-β/Smads信号传导通路有关;UA可能通过上调Smad 4的表达恢复TGF-β/Smads信号传导通路,从而诱导细胞凋亡。