PCDH8基因表达对鼻咽癌细胞生物学效应的影响

目的 探讨PCDH8基因表达对鼻咽癌细胞株CNE-1生物学行为的影响.方法 采用脂质体介导质粒pcDNA3.1-PCDH8(实验组)与质粒pcDNA3.1(对照组)转染至鼻咽癌细胞株CNE-1,RT-PCR、Western blot检测转染后CNE-1细胞的PCDH8 mRNA及蛋白表达;通过CCK-8细胞生长曲线、流式细胞技术、Transwell侵袭实验及CCK-8细胞药物敏感实验,进一步对转染PCDH8基因质粒的细胞株CNE-1的增殖能力、生长周期、细胞侵袭能力及对化疗药物的敏感性进行了分析,并与转染对照质粒的细胞株进行比较.结果 RT-PCR、Western blot检测结果表明转染质粒pcDNA3.1-PCDH8的实验组细胞株中PCDH8 mRNA及蛋白成功表达并明显高于转染质粒pcDNA3.1的对照组细胞株.CCK-8细胞生长曲线结果表明实验组细胞株的生长速度明显低于对照组.流式细胞仪检测结果表明实验组细胞株G0/G1期较对照组增加,S期细胞较对照组减少;Transwell侵袭实验结果表明实验组细胞株侵袭能力明显低于对照组;CCK-8细胞药物敏感性实验结果表明PCDH8基因的高表达能显著提高鼻咽癌细胞株CNE-1对顺铂化疗药物的敏感性.结论 PCDH8基因的表达能降低鼻咽癌细胞的增殖、侵袭能力,延缓细胞分裂周期,提高对顺铂化疗药物的敏感性.     

Mus81对人乳腺癌SKBR3增殖、侵袭和迁移的影响

目的 研究Mus81过表达对人乳腺癌SKBR3增殖、侵袭和迁移能力的影响.方法 从相应甘油菌中抽提Mus81过表达质粒和阴性对照质粒,通过Lipofectamine@2000脂质体转染人乳腺癌SKBR3细胞.分别利用RT-PCR和Western blot法检测Mus81过表达效果,CCK-8增殖实验检测过表达前后细胞增殖能力变化,Transwell侵袭实验检测过表达前后细胞侵袭能力变化,Transwell迁移实验和细胞划痕实验检测过表达前后细胞迁移能力变化.结果 RT-PCR和Western blot法表明Mus81基因过表达效果良好.Mus81过表达后,增殖实验结果显示实验组细胞增殖速度明显低于对照组（P＜0.05）.Transwell侵袭实验显示,实验组细胞每高倍视野平均穿膜个数低于对照组（P＜0.05）.Transwell迁移实验显示,实验组细胞每高倍视野平均穿膜个数同对照组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）.细胞划痕实验结果显示,实验组划痕愈合率同对照组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 Mus81过表达抑制了人乳腺癌SKBR3细胞的增殖,降低了细胞的侵袭能力,但对SKBR3细胞迁移能力没有明显影响.     

Slug对食管癌细胞Eca-109侵袭能力的影响及其分子机制探讨

目的研究Slug与食管癌侵袭转移间的关系并探讨其分子机制。方法构建正义全长Slug真核表达载体pcDNA3.1-Slug并转染食管癌细胞系Eca-109;光镜下观察转染前后细胞形态的变化,免疫细胞化学、Westernblot分别检测细胞中上皮标志物E-钙粘素(E-cadherin)与间质标志物波形蛋白(Vimentin)的表达变化,Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化。结果转染pcDNA3.1-Slug真核表达载体后,Eca-109细胞形态变得细长;免疫细胞化学和Western blot结果显示E-cadherin表达明显下调,Vimentin表达则上调;Transwell小室显示转染pcDNA3.1-Slug载体的Eca-109细胞穿透matrigel胶的细胞数明显增多。结论转录因子Slug能促进食管癌上皮细胞间质化转变(epithelial-mesenchymaltransition,EMT),并提高其侵袭转移能力。     

食管癌细胞株中Slug高表达对细胞转移的影响和机制研究

目的 探讨Slug在食管癌细胞侵袭和转移过程中的作用.方法 用脂质体转染法将pcDNA3.1-Slug真核表达载体和空载体pcDNA3.1导入食管癌Eca-109细胞,G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆.光镜下观察转染前后细胞形态的变化,免疫荧光化学、Western-blot分别检测细胞中上皮标志物E-钙粘素(E-cadherin)与间质标志物波形蛋白(Vimentin)的表达变化,Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 细胞转染pcDNA3.1-Slug真核表达载体以后,形态变得更加细长且融合度降低;免疫荧光化学和Western blot结果显示E-cadherin表达明显降低,Vimentin表达升高;Transwell细胞侵袭实验显示转染pcDNA3.1-Slug载体的Eca-109细胞穿透matrigel胶的细胞数明显增多.结论 转录因子Slug能有效促进食管癌细胞发生上皮间质转化(EMT),并能增强食管癌的体外侵袭转移能力.     

MMP-9 过表达对骨肉瘤143B 细胞 侵袭与迁移能力的影响

目的 研究MMP-9 过表达对成骨肉瘤143B 细胞侵袭与迁移能力的影响。方法 通过慢病毒介导 MMP-9 过表达载体转染骨肉瘤143B 细胞,实验分为3 组：实验组（转染pLV-Puro MMP-9 过表达序列）、 对照组（转染pLV-Puro MMP-9-NC 序列）、空白组（PBS）;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检 测MMP-9 和VEGF mRNA 的表达;Western blot 法检测MMP-9 和VEGF 蛋白的表达;Transwell 小室侵袭 实验检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 实验组MMP-9 和VEGF 的mRNA 和蛋 白表达量较对照组和空白组上调（P < 0.05）;实验组穿过人工基底膜细胞数高于对照组和空白组（P < 0.05）; 实验组划痕愈合率高于对照组和空白组（P <0.05）。结论 慢病毒介导MMP-9 过表达通过作用于VEGF 靶 基因,抑制成骨肉瘤143B 细胞侵袭及迁移能力。     

调控RECK基因表达对早孕绒毛外滋养细胞MMP-2活化及细胞侵袭力的影响

目的观察RECK基因过表达对人早孕绒毛外滋养细胞系TEV-1的MMP-2活化比例及细胞侵袭力的影响。方法以脂质体Lipofectamine^TM 2000介导的方法将含RECK全长基因的真核重组表达质粒pcDNA3-RECK转染入TEV-1细胞，以获得稳定转染目的基因的TEV-1细胞株。RT-PCR、流式细胞术检测目的基因的表达；明胶酶谱法、Transwell侵袭小室实验分别检测TEV-1细胞MMP-2活化比例及细胞侵袭力变化；四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和细胞生长曲线法观察质粒DNA转染的细胞毒性情况。结果目的基因RECK在TEV-1细胞mRNA和蛋白水平分别有独立表达；明胶酶谱显示重组质粒pcDNA3-RECK转染组活化的MMP-2比例均明显低于正常对照组、空载质粒转染组（均P〈0.05），Transwell侵袭实验显示重组质粒pcDNA3-RECK转染组穿透Matrigel的细胞数目均明显低于正常对照组、空载质粒转染组（均P〈0.01）；MTT法测重组质粒pcDNA3-RECK转染组细胞生长曲线与正常对照组、空载质粒转染组无明显差异。结论RECK过表达可显著减少绒毛外滋养细胞的MMP-2活化及其侵袭能力，可能参与了早孕绒毛外滋养细胞侵蚀机制。     

BTG1过表达对胰腺癌细胞增殖、侵袭和cyclin D1、cyclin B1、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响

目的探讨B细胞易位基因1(BTG1)过表达对胰腺癌细胞增殖和侵袭的影响及其机制。方法采用qRT-PCR和Western blot检测人胰腺癌细胞株PANC-1、AsPC-1、BxPc-3和正常胰腺导管上皮细胞株H6C7中BTG1 mRNA和蛋白的表达水平。将体外培养的BxPc-3细胞分为对照组(未转染)、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1空载体质粒)和BTG1组(转染pcDNA3.1-BTG1过表达质粒),转染48 h后,qRT-PCR和Western blot检测转染效果;MTT法、流式细胞术和Transwell小室法分别检测各组细胞的增殖能力、周期分布和侵袭能力;Western blot检测各组细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白的表达情况。结果与H6C7细胞相比,PANC-1、AsPC-1、BxPc-3细胞中BTG1 mRNA和蛋白的表达水平均明显降低(P0.05),且BxPc-3细胞差异最为显著。与对照组相比,BTG1组细胞的增殖、侵袭能力、细胞在S期的百分比以及细胞中cyclin D1、cyclin B1、MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平均明显降低,而细胞在G0/G1期的百分比明显升高(P0.05);而pcDNA3.1组和对照组细胞的增殖能力、侵袭能力、周期分布情况以及cyclin D1、cyclin B1、MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平均无统计学差异(P0.05)。结论 BTG1过表达可抑制胰腺癌细胞的增殖和侵袭,其作用机制可能与下调cyclin D1、cyclin B1、MMP-2、MMP-9蛋白的表达有关。     

BHRF1基因对丝裂霉素诱导胃癌细胞SGC7901凋亡影响

目的探讨EB病毒早期基因BHRF1的表达对丝裂霉素诱发胃癌细胞SGC7901凋亡的影响。方法构建pcDNA3.1-BHRF1表达载体,应用脂质体转染法将BHRF1表达载体转染胃癌细胞系SGC7901,MTT法检测细胞生长情况。实验分为细胞对照组、空载体对照组和目的基因转染组,细胞对照组仅接种SGC7901细胞,空载体对照组将pcDNA3.1空载体转染入SGC7901细胞中,目的基因转染组将重组质粒pcDNA3.1-BHRF1转染入SGC7901细胞中。分别培养24、48和72 h后,用浓度为30 mg/L的丝裂霉素处理,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33258荧光染色方法检测凋亡小体。结果 pcDNA3.1-BHRF1重组质粒构建成功。MTT实验显示目的基因转染能明显拮抗由于丝裂霉素作用导致的细胞生长抑制;BHRF1转染+丝裂霉素处理组凋亡小体明显少于对照组,细胞凋亡率明显低于对照组,差异均有统计学意义(F=6 250.510,q=56.992、51.613,P<0.01)。结论 BHRF1基因具有明显拮抗丝裂霉素诱导胃癌SGC7901细胞凋亡的作用。     

外源性FHIT基因转染对人胃癌细胞系MKN-45迁移和侵袭能力的影响

目的：探讨脆性组氨酸三联体（FHIT）基因转染对人胃癌细胞MKN-45迁移和侵袭能力的影响。方法：将载有人外源性FHIT基因的真核表达质粒pcDNA3.1-FHIT,转染至FHITmRNA阴性表达的人胃癌细胞MKN-45,分别应用Millicell小室细胞迁移实验、Transwell小室侵袭实验检测转染前后MKN-45细胞迁移能力和侵袭力的改变。结果：外源性FHIT基因转染MKN-45细胞后,MKN-45细胞的迁移能力明显降低（P〈0.05）,但细胞侵袭能力无明显变化（P〉0.05）。结论：外源性FHIT基因转染致MKN-45细胞系的迁移能力明显降低,对MKN-45细胞系的侵袭能力无明显影响。     

干细胞与肿瘤干细胞

目的了解干细胞、肿瘤干细胞和恶性肿瘤关系的研究进展。方法复习国内外相关文献,综述肿瘤干细胞与干细胞的关系、肿瘤干细胞与恶性肿瘤发生发展的关系、研究现状、前景及存在的问题。结果正常干细胞和肿瘤干细胞之间存在很强的相似性,其中淋巴造血系统恶性肿瘤和少数实体瘤干细胞分离鉴定的成功有力支持了肿瘤干细胞理论。结论肿瘤干细胞理论可解释很多恶性肿瘤的生物学行为,但目前仍迫切需要相关分离、纯化、鉴定实体瘤干细胞的思路和方法。     

肝星状细胞和胰腺星状细胞的比较

肝星状细胞和胰腺星状细胞在各自纤维化疾病中都发挥着重要作用,两者在诸多方面存在相似之处.文章就两者的生物学特性、凋亡、信号转导通路方面进行总结和比较,以探讨它们之间的关系.     

肝星状细胞和胰腺星状细胞的比较

肝星状细胞和胰腺星状细胞在各自纤维化疾病中都发挥着重要作用,两者在诸多方面存在相似之处。文章就两者的生物学特性、凋亡、信号转导通路方面进行总结和比较,以探讨它们之间的关系。     

回转器模拟失重对SGC-7901、HFE-145细胞增殖和周期的影响

目的探讨模拟失重对胃癌SGC-7901细胞和胃黏膜上皮HFE-145细胞增殖和周期的影响。方法采用回转器模拟失重,两种细胞各分为两组,回转组和1G对照组,实验时间共72h。采用免疫组化法观察两种细胞增殖核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）表达的变化,应用流式细胞仪测定细胞周期。结果与对照组相比,回转组SGC-7901细胞48h及72hPCNA抗体阳性率明显减少（P〈0.05及P〈0.01）,G0＋G1期细胞显著增多（P〈0.01及P〈0.05）;12h、24h及36h PCNA抗体阳性细胞的比率无显著性差异。与对照组相比,回转组HFE-145细胞12hPCNA抗体阳性率明显减少（P〈0.05）,G0＋G1期细胞显著增多（P〈0.05）。结论回转器模拟失重使胃癌SGC-7901细胞48h及72h时出现细胞周期阻滞、增殖抑制。胃黏膜上皮HFE-145细胞在12h时出现上述变化。     

透明细胞性肾细胞癌和肾嫌色细胞癌的临床病理及免疫表型比较

目的 探讨透明细胞性肾细胞癌和肾嫌色细胞癌的临床病理学特征、诊断和鉴别诊断.方法 对手术切除的57例肾透明细胞癌和22例肾嫌色细胞癌进行临床特点、肉眼观、光镜和免疫组织化学染色.结果 透明细胞性肾细胞癌多有血尿或肾区疼痛临床症状,巨检切面呈多彩状多伴出血、坏死及囊变;嫌色细胞癌临床上大多无症状,巨检切面呈淡棕色,出血、坏死罕见.镜下透明细胞性肾细胞癌胞浆透明或嗜酸性;嫌色细胞癌胞膜厚似植物状、部分胞质嗜酸性可见明显核周空晕.免疫组化染色57例透明细胞性肾细胞癌E-cadherin全阴性表达,Vimentin全阳性表达,而22例嫌色细胞癌两者的表达正好相反,有显著性差异(P<0.01).结论 透明细胞性肾细胞癌与嫌色细胞癌虽在形态上有一定的交叉,但结合临床病理特征及联合检测E-cadherin和Vimentin的表达可做出正确诊断与鉴别诊断.     

米非司酮对子宫肌瘤细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

目的探讨米非司酮对子宫肌瘤和内膜组织Ki67基因、MMP2基因、Fas基因表达的影响。方法 62例子宫肌瘤患者随机分为对照组24例和治疗组38例,治疗组患者从月经周期第2~3d开始,每日服用25mg米非司酮,连续服用1个月后行子宫手术;对照组病人入院后不服用任何药物,直接手术,术中均取瘤体及内膜组织。用免疫组化SP法检测子宫肌瘤及内膜组织中Ki67、MMP2、Fas基因的表达水平。结果治疗组子宫肌瘤组织Fas阳性率为55.3%,明显高于对照组的29.2%,差异有统计学意义(P0.05);治疗组子宫肌瘤Ki67的阳性表达率为36.8%,明显低于对照组的70.8%,差异有统计学意义(P0.01);治疗组子宫肌瘤MMP2的阳性表达率为36.8%,明显低于对照组的66.7%,差异均有统计学意义(P0.05);但两组子宫内膜组织中Ki67、MMP2和Fas的表达没有显著变化,差异均无统计学意义(P均大于0.05)。结论米非司酮抑制子宫肌瘤细胞的增殖和侵袭转移,促进肌瘤细胞凋亡,这可能是米非司酮治疗子宫肌瘤的作用机理。     

姜黄素对鼻咽癌CNE—1细胞增殖和周期的影响

目的讨论姜黄素对鼻咽癌CNE-1细胞增殖和周期的影响。方法 MTT法检测增值抑制率,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。结果不同浓度的姜黄素作用细胞48h时,抑制率随浓度的增加而增加,流式细胞仪分析证实姜黄素能使CNE-1细胞阻滞在G2/M期,并出现亚二倍体凋亡峰。结论 姜黄素对CNE-1细胞具有增殖抑制作用,并阻滞细胞于G2/M期和诱导细胞凋亡。     

香叶木素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及周期阻滞的机制研究

目的 研究香叶木素对人肝癌HepG2细胞的增殖、凋亡及周期阻滞的影响并揭示其分子机制.方法 MTT方法检测不同浓度香叶木素对肝癌HepG2的细胞活力的影响;流式细胞术检测不同浓度香叶木素处理对HepG2细胞周期阻滞及细胞凋亡的作用;Western blot检测香叶木素处理对细胞p53、Bcl-2、Bax、Cleaved-cas-pase3、Cleaved-caspase8、Cleaved-PARP、Bak、cdc2、cyclinB1、p21等细胞周期调节或细胞凋亡相关蛋白表达的调节.结果 香叶木素能显著抑制人肝癌HepG2细胞的增殖并且诱导细胞凋亡(P<0.05);流式细胞术对细胞周期检测示:香叶木素处理HepG2细胞,使G0/G1期细胞比例显著降低,而G2/M期细胞比例显著升高(P<0.05).香叶木素可下调HepG2细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2、cdc2、cyclinB1的蛋白表达,上调p53、p21、Bax、Bak,Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase8、Cleaved-PARP等促凋亡蛋白.结论 香叶木素在体外实验能通过激活p53/Bcl-2细胞凋亡通路抑制人肝癌HepG2细胞的增殖及促进细胞凋亡,同时通过上调p53、p21下调cdc2、cyclinB1诱导细胞G2/M周期阻滞.     

乳腺癌干细胞耐放射性与细胞周期的关系

肿瘤的放射疗法是一种建立在细胞周期基础上的治疗方法,乳腺癌干细胞在放疗过程中出现的G2/M期阻滞、衰老途径下调、APE1水平升高及细胞周期调控相关基因p21和p53活性等改变直接或间接导致细胞周期紊乱,均与乳腺癌干细胞的耐放射性密切相关,是分子遗传学和肿瘤生物学研究的热点.