肾络通对肾间质纤维化实验大鼠Ⅲ型胶原及转化生长因子-β1的影响

目的观察肾络通对实验大鼠肾间质纤维化的拮抗作用并探讨其作用机制。方法选择健康、雌性SD大鼠50只,采用单侧输尿管结扎诱导的大鼠肾间质纤维化模型,将其随机分为缬沙坦组、肾络通组、肾络通加缬沙坦组与模型组,并设假手术组。观察实验大鼠梗阻侧肾脏组织形态学改变及ColⅢ、TGF-β1蛋白及其mRNA的表达。结果模型组及各治疗组与假手术组相比均呈现程度不同的病理损害。ColⅢ蛋白的沉积:阳性面积、积分光密度5组间比较差异均有显著性意义(P<0.01),各治疗组与模型组比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。TGF-β1蛋白及其mRNA的表达、分布及半定量分析结果:5组间比较差异均有显著性意义(P<0.01),各治疗组与模型组比较,TGF-β1的表达间差异均有显著性意义(P<0.05)。结论输尿管梗阻后肾组织呈现程度不同的病理损害,肾间质ColⅢ沉积明显增加,这可能与TGF-β1蛋白及其mRNA的表达增加有关。肾络通及缬沙坦对其有一定的抑制作用,且肾络通与缬沙坦联合用药的作用比单一用药更强。     

六味地黄汤对大鼠单侧输尿管结扎后肾小管间质ColIV及TIMP-1表达的影响

目的观察六味地黄汤对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型中胶原IV(ColIV)及基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)表达的影响。方法将输尿管梗阻大鼠随机分为模型组,依那普利组,六味地黄汤组,假手术组,14d后采用免疫组织化学检测ColIV和TIMP-1的表达水平。结果与假手术组比较,其余3组ColIV和TIMP-1表达均明显高于假手术组(P<0.01),六味地黄汤组ColIV和TIMP-1表达明显低于模型组(P<0.01),高于依那普利组(P<0.05)。结论六味地黄汤可下调TIMP-1和ColIV的表达,减缓UUO大鼠肾小管间质损害,可作为梗阻性肾病辅助用药。     

肾络通对5/6肾切除肾衰竭大鼠残余肾组织PAI-1蛋白表达的影响

目的观察肾络通对5/6肾切除肾衰竭大鼠残余肾组织纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)蛋白表达的影响。方法5/6肾切除制备肾衰竭大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、肾络通组和缬沙坦组,分别灌胃给药16周取材,应用蛋白质印迹法检测肾组织PAI-1蛋白的表达。结果模型组与假手术组相比,PAI-1蛋白的表达明显增高(P<0.01);肾络通组PAI-1蛋白表达较模型组显著降低(P<0.05),与缬沙坦组比较无明显差异。结论肾络通可下调慢性进展性纤维化肾组织PAI-1蛋白表达,改善纤溶系统的失衡,延缓5/6肾切除肾衰大鼠的病程进展。     

大黄素对肾纤维化大鼠肾组织中基质金属蛋白酶组织抑制物-1表达的影响

目的 探讨中药大黄素对肾阃质纤维化模型大鼠肾组奴中基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)表迭的影响.方法 160只Wister大鼠随机分成四组:正常对照组、假手术组、模型组及大黄素治疗组.制备单侧输尿管梗阻(UUO)模型.治疗组在UUO的基础上每天以大黄素40 mg/kg灌胃,采用病理及免疫组化的方法动态观察各组大鼠术后d1、d3、d7、d14梗阻饲肾脏的组织学变化和TIMP-1在梗阻肾小管间质中表达情况.结果 模型组TIMP-1的表达持续增加;治疗组TIMP-1的表达水平低于模型组(P<0.01).结论 中药大黄素可以通过抑制TIMP-1的表达来发挥其延缓肾间质纤堆化进程的作用,对肾脏有保护作用.     

丹红注射液对单侧输尿管梗阻大鼠Ets-1、MMP-09和TIMP-1表达的影响

目的 观察丹红注射液对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠逆转录病毒E26转录因子1(Ets-1),基质金属蛋白酶9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响,初步探讨其抗肾间质纤维化的作用机制.方法 SD大鼠60只,随机分为假手术(A组),UUO(B组),厄贝沙坦[C组,50mg/(kg·d),灌胃]和丹红注射液治疗组[D组,7 mg/(kg·d),腹腔注射].手术后3、7及14d留取标本.RT-PCR测Ets-1 mRNA含量;免疫组织化学法测Ets-1、MMP-9、TIMP-1及TGF-β1和I型胶原表达.结果 D组肾间质纤维化面积和I型胶原表达明显低于B组(P<0.05).D组7d Ete-1 Mrna 表达量达峰值并明显高于B组,B组术后3d Ets-1表达开始升高,7d到达峰值,14d开始下降,与MMP-9的趋势一致.Ets-1与MMP-9和MMP-9/TIMP-1比值正相关(r=0.711和0.635,P=0.001和0.005).D组各时间点下调TIMP-1表达(P<0.05),TIMP-1与TGF-β1和I型胶原正相关(r=0.831和0.478,P＝0.000和0.045).结论 丹红注射液上调Ets-1表达促进细胞外基质降解而减轻肾间质纤维化.     

六味地黄汤对5/6肾切除大鼠MMP-2、TIMP-2表达的影响

目的观察六味地黄汤对5/6肾切除大鼠残肾基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其组织型抑制物基质金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)表达的影响,探讨六味地黄汤保护肾功能,延缓肾损害的作用机制。方法按照随机数字表法将72只SD雄性大鼠分为5组:正常组、假手术组、模型组、依那普利组、六味地黄汤组。模型组、依那普利组、六味地黄汤组采用5/6肾切除术诱导大鼠肾衰模型,假手术组同期手术,但不损伤肾脏。造模术后3 d,对大鼠进行灌胃干预,灌胃第8周后处死大鼠,观察残肾组织形态学变化并用免疫组织化学分析法检测大鼠肾脏MMP-2,TIMP-2的表达情况。结果 (1)通过大鼠生物形态学观察、5/6肾切除大鼠残肾组织细胞形态学的改变,与模型组相比,使用六味地黄汤、依那普利灌胃可减轻大鼠肾间质损害及纤维化程度;(2)免疫组化半定量分析显示六味地黄汤组肾皮质的MMP-2表达高于模型组(P<0.05),TIMP-2表达弱于模型组(P<0.05)。结论六味地黄汤可能通过上调MMP-2的表达、下调TIMP-2的表达,促进细胞外基质成分降解,从而减少细胞外基质的积聚,减轻炎症反应和纤维化程度,达到防止肾间质纤维化、保护肾脏的作用。     

羟苯磺酸钙对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的:评价羟苯磺酸钙对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化影响,并探讨其作用机制。方法:21只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、肾间质纤维化组(UUO组)及羟苯磺酸钙组(CDT组),分别采用病理及免疫组织化学方法观察UUO术后14 d大鼠梗阻侧肾脏的组织学变化和MMP-9、TIMP-l表达情况。结果:与Sham组相比,UUO组大鼠肾间质纤维组织面积显著增加(P<0.01),MMP-9、TIMP-1表达均有显著增高(P<0.01)。与UUO组相比,CDT组大鼠肾间质纤维组织面积减少,MMP-9表达增强、TIMP-1表达减弱(P<0.01),UUO组和CDT组大鼠左肾MMP-9/TIMP-1与肾间质纤维化面积成负相关,且有统计学意义(P<0.01)。结论:羟苯磺酸钙可缓解输尿管梗阻导致的肾间质纤维化,其机制可能与其调节MMP-9/TIMP-1紊乱、改善基质代谢有关。     

缬沙坦对大鼠心肌梗死后MMP-9和TIMP-1mRNA表达的影响

目的探讨缬沙坦对大鼠心肌梗死后基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1)表达的影响。方法将冠状动脉前降支结扎后24 h的SD大鼠随机分为心梗组(A组)和心梗 缬沙坦组(B组);假手术大鼠分为假手术组(C组)和假手术 缬沙坦组(D组)。灌胃4周后,各组存活动物数分别为A组7只,B组8只,C组9只,D组9只。测量各组大鼠体重、心脏重量,采用逆转录-聚合酶链反应测定梗死区及非梗死区心肌MMP-9和TIMP-1mRNA的表达。结果A组的心脏重量/体重比值(心/体比)与C、D组比较显著增加(P<0.05);B组的心/体比与A组相比明显减低(P<0.05),与C、D组比较无明显差异(P>0.05)。A、B组梗死区和非梗死区MMP-9mRNA的表达较C、D组明显增高(P<0.05);B组梗死区和非梗死区MMP-9mRNA的表达较A组相应区域明显降低(P<0.05)。A、B组梗死区及非梗死区TIMP-1mRNA的表达与C、D组相比,明显增高(P<0.01),B组梗死区和非梗死区TIMP-1mRNA的表达较A组相应区域明显增高(P<0.05)。A组梗死区和非梗死区MMP-9/TIMP-1mRNA比值与C、D组相比,明显增高(P<0.05);B组梗死区和非梗死区MMP-9/TIMP-1mRNA比值较A组相应区域明显降低(P<0.05)。结论心肌梗死后,大鼠心肌内MMP-9和TIMP-1mRNA表达增加,共同参与心室重塑。经缬沙坦处理后,大鼠心肌内MMP-9mRNA表达减少;TIMP-1mRNA的表达升高;MMP-9/TIMP-1mRNA比值降低与抑制心肌重构有关。     

缬沙坦对肾性高血压大鼠脑缺血再灌注后脑组织MMP-2和MMP-9表达的影响

目的:通过观察血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(Angiotensin receptor blocker,ARB)对肾性高血压大鼠脑缺血再灌注后脑组织中基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响,探讨ARB的脑保护机制.方法:将Wistar雄性大鼠32只随机分为高血压组和正常血压组.前组采用狭窄肾动脉方法建立肾性高血压大鼠模型,再随机分为高血压缺血再灌注组(Hypertension ischemie reperfusion,HIR)和HIR缬沙坦组(G),分别采用生理盐水和缬沙坦12mg/kg进行灌胃治疗4周;正常血压组分为假手术组(N)和缺血再灌注组(Isehemic reperfusion,IR),分别行假手术和缺血再灌注处理.采用大脑中动脉线栓法造成大脑缺血再灌注模型,缺血时间为2h,再灌注22h.采用免疫组织化学技术检测脑组织 MMP-2 和 MMP-9 的表达,用图象分析仪测定灰度值.结果:与N组比较,IR组MMP-2、MMP-9灰度值明显增高(P<001);与IR组比较,HIR组 MMP-2、MMP-9 灰度值增高(P<0.05);与HIR组比较,G组 MMP-2、MMP-9 灰度值减少(P<0.01).结论:高血压加重缺血再灌注后脑组织 MMP-2 和 MMP-9 的表达;ARB能明显抑制脑组织 MMP-2 和 MMP-9 的表达.     

抗纤灵对慢性肾功能衰竭小鼠模型肾组织相关炎症因子的干预作用

目的:观察抗纤灵对小鼠慢性肾功能衰竭(CRF)模型肾组织相关炎症因子的干预作用。方法:将40只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、雷帕霉素组和抗纤灵组,每组10只,除假手术组仅分离肾组织外,其他各组采用Platt 5/6肾切除方法制备CRF模型,雷帕霉素组、抗纤灵组分别予雷帕霉素、抗纤灵水煎剂,假手术组及模型组予等量生理盐水灌胃,疗程8周。免疫组化法检测肾组织中F4/80细胞的表达,RT-PCR法检测肾组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA的表达,ELISA法检测大鼠肾组织白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果:与假手术组比较,模型组小鼠肾组织F4/80阳性细胞,MMP-2、MMP-9mRNA水平明显升高,IL-6、TNF-α含量明显增加(P<0.01);与模型组比较,雷帕霉素、抗纤灵组F4/80阳性细胞减少,MMP-2、MMP-9mRNA水平下降,IL-6、TNF-α含量降低(P<0.05或P<0.01);雷帕霉素和抗纤灵组比较,两组无显著性差异(P>0.05)。结论:抗纤灵能够减轻CRF小鼠肾组织的炎症反应,抑制肾脏纤维化。     

鳖甲煎丸对肾间质纤维化模型大鼠肾脏的保护作用

目的观察鳖甲煎丸对肾间质纤维化实验大鼠肾脏的保护作用并探讨其作用机理。方法采用单侧输尿管结扎的方法复制大鼠肾梗阻模型,将其随机分为缬沙坦组、鳖甲煎丸组与模型组,并设假手术组。观察梗阻侧肾脏肾上腺髓质素(ADM)在蛋白及基因水平的表达,并测定其在肾组织中蛋白含量。结果模型组及各治疗组大鼠肾脏中肾上腺髓质素组织蛋白含量、蛋白表达以及mRNA的基因表达较假手术组明显降低,鳖甲煎丸组、缬沙坦组的含量及表达均高于模型组(P<0.05?,但两组之间比较无显著性差异。结论鳖甲煎丸能够明显上调肾间质纤维化大鼠肾脏ADM的蛋白及mRNA的表达,对肾脏起到保护作用。     

苦参碱对UUO模型肾小管间质MMP-3、TIMP-1和FN影响的实验研究

目的 观察苦参碱对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型肾小管间质基质金属蛋白酶-3（MMP-3）、基质金属蛋白酶组织抑制物-1（TIMP-1）和纤维联结蛋白（FN）表达水平的影响，初步探讨其对小管间质纤维化的作用机制。方法 实验采用UUO肾间质纤维化模型作为研究模型，分为正常组、假UUO组、UUO组、福辛普利治疗组（F组）、苦参碱大剂量治疗组（E组）和苦参碱小剂量治疗组（D组）。运用免疫组化技术半定量分析实验第7、14d各组的MMP-3、TIMP-1和FN表达水平。结果 UUO组和治疗组的MMP-3表达水平第7、14d均低于正常组和假UUO组（P〈0．05），但三个治疗组的表达水平高于UUO组（P〈0．05）；TIMP-1和FN在正常组和假UUO组中的表达最低，而三个治疗组的表达均低于UUO组（P〈0．05）；MMP-3、TIMP-1和FN在E组与F组间的表达差异均无统计学意义（P〉0．05）；在UUO组中，MMP-3与FN、MMP-3与TIMP-1的免疫组化半定量分析均呈负相关（P〈0．01）。结论 苦参碱可以部分恢复小管间质MMP-3的表达水平，降低TIMP-1和FN的表达水平．从而延缓肾小管间质纤维化的进程。     

UUO大鼠肾脏CNP表达特点及其对ECM代谢的调控效应

目的观察C型利钠肽(CNP)在单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾脏的表达特点和对细胞外基质(ECM)代谢的调控作用。方法健康雄性8周龄Wistar大鼠24只,随机分为UUO组和假手术组并建立模型,于术后1 d和3个月处死大鼠,检测尿蛋白浓度和血清学指标,HE染色观察肾组织形态学变化,免疫组化法、荧光实时定量PCR法检测肾组织CNP、胶原IV(Col-IV)、基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)及其组织抑制因子(TIMP-1)的表达情况。结果术后3个月,与假手术组比较,UUO组大鼠血浆白蛋白降低,肌酐、尿素氮、尿蛋白均升高(P<0.05);CNP、MMP-9、MMP-2蛋白及mRNA表达均下调(P<0.05);Col-IV、TIMP-1蛋白及mRNA表达均上调(P<0.05)。结论 CNP表达减少可能是引发ECM代谢失衡,最终导致肾小管间质纤维化的重要原因。     

胰岛素样生长因子1对肾间质纤维化模型大鼠的实验研究

目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)与肾间质纤维化的关系。方法采用单侧输尿管结扎致肾间质纤动物模型,将30只Wistar雄性大鼠,随机平均分为假手术组、模型组和治疗组,术后14 d,测肾功能,免疫组织化学、原位杂交法,测Ⅳ型胶原蛋白、肌动蛋白α(α-SMA)、组织蛋白酶抑制剂1/基质金属蛋白酶9 mRNA的表达。结果模型组、治疗组血尿素氮、血肌酐,Ⅳ型胶原蛋白、α-SMA、组织蛋白酶抑制剂1水平高于假手术组(P<0.05);而治疗组与模型组相比MMP-9水平显著降低(P<0.05)。结论 IGF-1参与梗阻性肾病的病理生理过程,导致间质纤维化和肾功能损害。     

三七总皂甙对单侧输尿管梗阻后大鼠肾间质纤维化的作用及机制研究

目的观察三七总皂甙对单侧输尿管梗阻（UU0）大鼠肾间质纤维化的影响。方法将雄性SD大鼠80只随机分为4组：UUO组（UUU,n=20）、假手术组（SOR,n=20）、三七总皂甙组（PNS,50rag／（kg·d）,n=20）和氯沙坦组（ARB,20mg／（kg·d）,n=20）。从术后24小时开始,治疗组分别予PNS及ARB治疗,连续14天。于术后3、7、14天分别随机处死各组大鼠。行Masson染色观察肾间质病理学改变;化学比色法测定肾组织匀浆中羟脯氨酸的含量;采用Western蛋白印迹从蛋白水平观察金属蛋白酶1组织抑制剂（Tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP-1）的表达情况。荧光定量PCR（Real—time PCR）从mRNA水平观察胶原I（CollagenI,Col—I）和纤维粘连蛋白（Fibroneetin,FN）的表达。结果UUO组肾脏呈进行性肾间质纤维化及肾间质胶原沉积的改变（P〈0．05）。PNS组与UUU组比较均不同程度地减轻了胶原在肾间质的沉积,改善了肾脏病理损害,抑制了TIMP-1的表达（P〈0．05）。结论PNS对UU0所致的大鼠肾脏纤维化的形成有明显的抑制作用,其机制可能与抑制TIMP-1的表达有关。     

肾间质纤维化组织中组织型转谷氨酰胺酶和结缔组织生长因子共表达

目的:探讨组织型转谷氨酰胺酶(tTG)和结缔组织生长因子(CTGF)在肾间质纤维化组织中的表达及二者的关系.方法: 采用单侧输尿管结扎(UUO)致肾间质纤维化大鼠模型.将大鼠随机分为假手术组(5只)、模型组(6只)、依那普利治疗组(6只).术后9天处死各组大鼠,肾组织标本用过碘酸-席夫染色(PAS)确证肾间质纤维化病变.以免疫组织化学染色方法观察肾组织内tTG 和CTGF的表达部位,以及细胞外基质成份纤维连接蛋白(FN)的表达变化.用Western蛋白印迹方法分析肾组织内tTG 和CTGF蛋白表达水平.结果: 假手术组大鼠tTG,CTGF和FN分别在肾小管、肾间质区仅有微量表达,肾小球内无阳性表达;模型组大鼠tTG、CTGF和FN在肾小管、肾间质区的表达信号比假手术组强;依那普利治疗后三者表达减少.双重染色结果显示,在模型组肾间质tTG阳性表达部位同时表达CTGF,并且强度相似.Western blot结果显示,模型组tTG和CTGF蛋白水平明显高于假手术组;依那普利治疗组tTG和CTGF蛋白水平明显低于模型组.各组大鼠肾内tTG蛋白水平与CTGF蛋白水平之间(r=0.683,P<0.05)以及tTG蛋白水平与肾间质内FN半定量水平之间(r=0.737,P<0.05)均有显著相关关系.结论: tTG和CTGF可能共同参与肾间质纤维化,依那普利减轻肾间质纤维化的作用可能通过下调两者的表达而实现.     

基质金属蛋白酶/组织金属蛋白酶抑制物表达失衡在衰老大鼠肾小管间质损害中的意义

目的研究基质金属蛋白酶(MMP)及组织金属蛋白酶抑制物(TIMP)在不同鼠龄的单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾小管间质中的表达变化,探讨其可能的作用.方法选用3月、26月龄大鼠制备UUO模型,采用组织病理及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹等方法观察UUO术后3、7、14 d不同鼠龄大鼠的肾脏组织学改变和MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2等在梗阻肾小管间质中的表达情况;用明胶酶谱法检测UUO术后不同时间点MMP-2、MMP-9的蛋白水解活性.结果在对照组,TIMP-1、TIMP-2仅微弱表达于3月龄肾脏中,而在26月龄大鼠肾脏中其表达显著增加(P<0.01);老年鼠肾组织中MMP-2、MMP-9的蛋白水解活性显著低于3月龄大鼠(P<0.01).与对照组相比,3月龄、26月龄大鼠梗阻侧肾脏的肾小管间质纤维化面积随UUO术后时间的延长而增加,TIMP-1、TIMP-2及MMP-2、MMP-9的mRNA及蛋白质的表达在术后各时间点均显著增高(P<0.01), MMP-2和MMP-9的蛋白水解活性随UUO术后时间的延长而逐渐下降.其活性的下降与TIMP-2及TIMP-1蛋白质表达的增加呈明显的负相关.与3月龄鼠比较,26月龄鼠肾小管间质纤维化面积在UUO术后各时间点也明显增加(P<0.01),TIMP-1、TIMP-2在肾组织中各时间点的mRNA及蛋白质表达均显著增高(P<0.01),MMP-2、MMP-9的蛋白水解活性在各时间点均显著下降(P<0.01).结论衰老引起的TIMP的高表达及MMP蛋白水解活性下降可能是使衰老大鼠肾小管间质损害加重的重要因素之一.     

肾炎康复片对梗阻性肾病大鼠肾脏金属蛋白酶1组织抑制剂和细胞间黏附分子1表达的影响

目的探讨肾炎康复片对单侧输尿管梗阻大鼠检测金属蛋白酶1组织抑制剂（tissue inhibitor of metallo-proteinase-1,TIMP-1）和细胞间黏附分子1（intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1）的作用。方法将雄性SD大鼠60只随机分为3组：假手术组（SOR,n=20）、模型组（UUO,n=20）和肾炎康复片组（SYKFT,n=20）。从术前24小时开始,肾炎康复片组按照成人每公斤体质量2倍的剂量灌胃,余组予以同等体积生理盐水灌胃,连续14d。于术后3、7、14d分别随机处死各组大鼠,取左肾组织,Masson染色观察肾间质病理学改变,化学比色法测定肾组织匀浆中羟脯氨酸的含量,采用蛋白质印迹法TIMP-1和ICAM-1的表达情况。结果模型组肾脏呈进行性肾间质纤维化及肾间质胶原沉积的改变（P〈0.05）。肾炎康复片组在不同程度上减轻了单侧输尿管梗阻大鼠肾间质胶原的沉积和肾脏病理损害,抑制了TIMP-1的表达（P〈0.05）。但肾炎康复片对ICAM-1的作用不明显。结论肾炎康复片对单侧输尿管梗阻所致的大鼠肾脏纤维化的形成有一定的改善作用,其机制可能与抑制TIMP-1的表达有关。