梗阻性黄疸肾缺血再灌注损害及其机制的研究

目的：探讨梗阻性大鼠在短暂性肾缺血再灌注过程中肾功能改变与脂质过氧化反应及肾近曲小管上皮细胞内游离钙离子浓度变化之间的关系。方法：实验大鼠分为正常对照组（S组）、正常肾缺血再灌注组（SRI组）、梗阻性黄疸组（J组）、梗阻性黄疸肾缺血再灌注组（JRI组）。在胆道梗阻１周后行双侧肾动脉夹闭10min后放开，观察再灌注后0、4、12、24h等不同时相点观察肾功能的变化。采用钙离子荧光指示剂Fura-2/Am负载测定各组24h时相点肾近曲小管上皮细胞内游离钙离子浓度。结果：JRI组内生肌酐清除率随再灌注时间延长持续下降,J组及JRI组肾组织丙二醛水平明显升高同时超氧化物歧化酶含量下降。JRI组肾近曲小管上皮细胞内游离钙离子浓度显著升高。结论：在梗阻性黄疸状态下大鼠肾脏对缺血再灌注损伤的敏感性明显升高，缺血再灌注损伤可能与梗阻性黄疸术后急性肾功能衰竭的发生有关。氧自由基及钙超载参与了这一过程。     

梗阻性黄疸大鼠肾脏缺血再灌注损伤中热休克蛋白70的表达

目的 探讨梗阻性黄疸大鼠在短暂性肾缺血再灌注过程中肾功能改变与脂质过氧化反应及大鼠肾脏热休克蛋白70(Heat-shock protein 70，HSP70)表达之间的关系。方法 实验大鼠分为正常对照组(S组)、正常肾缺血再灌沣组(SRI组)、梗阻性黄疸组(J组)、梗阻性黄疸肾缺血再灌注组(JRI组)。在胆道梗阻1周后行双侧肾动脉夹闭10min后放开，观察再灌注后0、4、12、24h等不同时相点观察肾功能的变化，采用免疫组织化学SP法观察大鼠肾脏HSP70的表达。结果 梗阻性黄疸肾缺血冉灌注组内生肌酐清除率随冉灌注时间延长呈持续性下降，梗阻性黄疸组及梗阻性黄疸肾缺血再灌注组肾组织丙二醛明显升高而超氧化物歧化酶含量下降。JHI组大鼠肾脏HSP70表达主要分布于肾近曲小管上皮细胞胞浆中，其表达量以再灌注后4h最多，12h次之，24h有所减少。结论 梗阻性黄疸状态下大鼠肾脏对缺血再灌注损伤的敏感性明显升高，缺血再灌注损伤可能与梗阻性黄疸术后急性肾功能衰竭的发生有关，脂质过氧化反应参与了这一过程。HSP70的表达是机体对梗阻性黄祖肾缺血再灌注损伤的一种保护性反应。     

梗阻性黄疸引起肾脏病量学及超微病理学改变的实验与临床研究

作者对梗阻性黄疸（梗黄）大鼠及６例临床梗黄病人的肾脏组织进行了光镜和电镜观察。目的是描述肾脏损害的病理和超微病理改变，并试图从病理改变来探讨肾脏损害的可能病因及肾功能的改变。观察主要病变为肾小球萎缩，鲍曼氏囊间隙扩大，肾小球毛血管基膜明显增厚，其三层结果消失，内有大量胆色素颗粒沉积，血管内皮窗孔明显减少，足突融合，近曲小管上皮细胞变性、坏死、胞质内有大量胆色素颗粒沉积，小管腔内可见脱落的坏死细胞，     

梗阻性黄疸引起肾脏病理学及超微病理学改变的实验与临床研究

作者对梗阻性黄疸（梗黄）大鼠及６例临床梗黄病人的肾脏组织进行了光镜和电镜观察。目的是描述肾脏损害的病理和超微病理改变，并试图从病理改变来探讨肾脏损害的可能病因及肾脏功能的改变。观察发现主要病变为肾小球萎缩，鲍曼氏囊间隙扩大，肾小球毛细血管基膜明显增厚，其三层结构消失，内有大量胆色素颗粒沉积，血管内皮窗孔明显减少，足突融合；近曲小管上皮细胞变性、坏死，胞质内有大量胆色素颗粒沉积，小管腔内可见脱落的坏死细胞、胆泥、胆栓及蛋白管型，微绒毛紊乱、稀疏、脱落，线粒体高度水肿，内质网扩张，脂滴、溶酶体明显增多。据此，我们认为：（１）梗黄可引起明显肾脏损害，其病变同时累及肾小球和肾小管，但以近曲小管病变为重；（２）胆汁成分于肾脏内的沉积在梗黄引起肾脏损害的发病中起一定作用；（３）梗黄可导致肾脏功能改变。     

人参皂甙对原位性肾炎大鼠的治疗作用

实验性原位性肾炎大鼠尿蛋白持续升高，肾脏呈现明显的病理损害，血浆和肾皮质丙二醛明显升高，超氧化物歧化酶明显降低。人参皂甙明显降低尿蛋白，改善肾脏病理损害，并使脂质过氧化程度减轻。这表明实验性原位性肾炎与脂质过氧化关系密切，人参皂甙有抗氧化作用，能减轻大鼠原位性肾炎症状，改善肾脏病理损害。     

硒对氟致肾损害的影响

给SD大鼠饮用含氟、硒、及氟加硒的水溶液8周，观察硒对氟致肾损害的影响。结果表明：氟可使肾脏脂质过氧化合物明显增加，肾近曲小管上皮细胞变性、坏死，线粒体数目增多，线粒体嵴减少，基底膜局部增厚，并可使肾近曲小管上皮细胞的琥珀酸脱氢酶（SDH）和碱性磷酸酶（ALP）活性明显降低，乳酸脱氢酶（LDH）和酸性磷酸酶（ACP）活性明显增高。补硒后则可促进肾脏的氟排泄，降低肾脏脂质过氧化物含量，肾脏的组织病理学和超微结构改变明显减轻，SDH活性增加，ACP活性降低。结果提示，硒对氟导致的肾损害具有明显的拮抗作用。     

NO与梗阻性黄疸时肾功能损害的关系

目的 探讨梗阻性黄疸时肾脏功能与血浆一氧化氮（NO）水平及肾内诱生型一氧化氮合酶（iNOS）表达之间的关系。方法 用胆总管结扎法建立大鼠梗阻性黄疸模型，模型制备成功后2周分别检测正常组（N组，n=10）、胆总管结扎组（BDL组，n=20）和N^G－硝基L精氨酸甲酯组（L－NAME组，n=20）大鼠血浆胆红素、尿素氮、肌酐和NO水平，免疫组织化学染色法观测肾内血浆胆红素无明显变化，尿素氮、肌酐与NO水平均明显下降，与正常组水平相似，其间无明显差别，肾内iNOS表达亦不明显。结论 梗阻性黄疸时肾功能明显受损，血浆NO水平增高，肾内iNOS表达增加，NO在肾功能损害的发生中起一定作用，一氧化氮合酶抑制剂对梗阻性黄疸肾功能损害有保护作用。     

二氯化汞致兔中毒性肾病和急性肾衰血中过氧化脂质的测定

给实验组家兔（n=10)静脉注射二氯化汞（2.5mg/kg)，48小时血尿素氮、肾系数都明显高于对照组家兔（n=10)，肾脏肿大、色苍白，镜下呈肾近曲小管广泛变性坏死，表明已造成中毒性肾病和急性肾功能衰竭，用硫代巴比妥酸显色法测定血浆过氧化脂质（LPO）浓度发现实验组LPO浓度较注射前显升高（P<0.001)。与对照组比较，也显升高（P<0.001)。提示在二氯化汞引起家兔中毒性肾病和急性肾功能衰竭中，脂质过氧化反应中桶参与了二氯化汞引起的肾脏损害过程。     

Ⅲ.五氧化二钒所致急性肾损与脂质过氧化的关系

给大鼠腹注五氧化二钒(V_2O_5)10mg/kg,每天一次,连续四天,导致明显肾脏损害。染毒两天后,出现尿量、尿钠与钾排泄、尿糖以及尿中ALP、LDH、GOT、GPT酶活性增加;血糖和尿渗透浓度降低。染毒四天后,除上述改变外,还出现尿蛋白、血肌酐和尿素氮增高。主要病理学改变为肾近曲小管细胞变性和坏死。用醋酸锌作为保护剂研究肾损害与脂质过氧化的关系,结果表明,大鼠用锌预处理后,V_2O_5诱导的脂质过氧化和急性肾损同时减轻。提示 V_2O_5诱导的脂质过氧化可能是形成肾损害的机理之一。     

梗阻性黄疸大鼠的肾缺血再灌注损伤

目的 研究短暂性肾缺血再灌注过程对梗阻性黄疸大鼠肾功能的影响，并观察脱氧胆酸钠在此模型中的作用。方法 实验大鼠分为正常对照组（S组）、正常肾缺血再灌注组（SRI组）、梗阻性黄疸组（J组）、梗阻性黄疸肾缺血再灌注组（JRI组）及梗阻性黄疸脱氧胆酸钠处理肾缺血再灌注组（JTRI组）。在胆道梗阻1周后行双侧肾动脉夹闭10min后放开，观察再灌注后0、4、12、24h肝肾功能、内毒素水平及肾组织丙二醛、超氧化物歧化酶含量的变化。结果 JRI组内生肌酐清除率随随再灌注时间延长呈持续性下降，JTR1组内生肌酐清队的下降无明显缓解，J组、JRI组及JTRI组肾组织丙二醛水平明显升高，同时超氧化物歧化酶含量下降。结论 梗阻性黄疸状态下大鼠肾脏对缺血再灌注损伤的敏感性明显升高，缺血再灌注损伤可能与梗阻性黄疸术后急性肾功能衰竭的发生有关，脱氧胆酸钠对此损害过程无明显防治作用。     

TH蛋白在肾组织中的定位观察及其意义

用过氧化物酶抗过氧化物酶(PAP)方法检查了大白鼠庆大霉素(GM)肾毒性模型、马杉肾炎和正常对照组肾组织中Tamm-Horsfall蛋白(THP)的分布情况。结果表明正常情况下THP为肾脏远端小管上皮细胞所排泌的一种糖蛋白,在肾小管受到损伤后,THP可沉积于间质内,这可能是由于尿液反流及外渗所致。间质THP沉积的多少似乎与小管损伤程度有关,而与炎症反应无关。因此,观察THP在间质分布情况似乎可作为判断肾小管损伤的一种形态学标志,并可用以估计肾脏疾病中肾小管的损伤程度。     

Caspase-3在缺氧和内毒素致肾小管损伤的肾组织表达

目的 为了建立缺氧和内毒素致肾小管损伤模型,观察Caspase-3在肾组织的表达,以探讨其肾小管的损伤机制.方法 以SD大鼠为实验动物,予麻醉及机械通气,同时予阴茎静脉注射伤寒杆菌脂多糖,吸入氧浓度从21%降至5%的氧,通气至180rain结束.取肾组织作HE染色病理切片检查及用Caspase-3免疫组化S-P法染色观察模型肾组织的病理改变及肾组织中Caspase-3的表达.结果 (1)病理组织学所见:大部分肾小球充血,内皮及系膜细胞轻度肿胀,肾近曲小管上皮明显肿胀,呈浊样改变;大部分远曲小管镜下未见明显改变,部分上皮细胞肿胀,浊样变性在;整个肾间质呈充血现象.无炎性细胞浸润,(2)免疫组化结果:Caspase-3染色位于胞浆,大部分远曲小管上皮呈Caspase-3阳性反应,以外髓远曲小管为明显;近曲小管偶见Caspase-3阳性细胞,肾小球Caspase-3染色阴性.结论 (1)缺氧及内毒素可致肾小管损伤,且以近曲小管为著,远曲小管及内髓部损伤相对较轻,(2)Caspase-3在远曲小管明显表达,提示在缺氧及内毒素致肾小管损伤中,同时存在细胞变性坏死及细胞凋亡,近曲小管以细胞变性坏死为著,而远曲小管细胞凋亡明显.

Abstract：

Objectives To observe the expression of caspase-3 in the kidney of a rat model of renal tubular damage induced by endotoxin and hypoxia and explore the mechanism of renal tubular damage. Methods Ten rats were anesthetized with artificial ventilation and received 2 mg/kg lipopolysaccharide (LPS) injection through the penile vein. The FiO_2 was reduced 90 min later from 21% to 5%, and the ventilation was withdrawn after another 90 min. Immediately after ventilation withdrawal, the kidney of the rats were obtained for immunocytochemistry and HE staining. Results HE staining showed obvious hyperemia in most of the glomeruli, mild swelling of the endothelial and mesangial cells, severe swelling and turbidity in the proximal tubular epithelial cells without obvious changes in most of the distal proximal tubules. A small portion of the interstitial epithelial cells showed swelling and turbidity, and the entire renal interstitium appeared hyperemic but without inflammatory cell infiltration. Immunocytochemistry detected the presence of caspase-3 in the cytoplasm, and most of the distal renal tubule cells were positive for caspase-3, while only occasional cells showed caspase-3 positivity in the proximal tubular epithelial cells. Most of the proximal tubular epithelial and glomerulus cells were negative for caspase-3. Conclusions Endotoxin and hyoxia can induce renal damage, particularly in the proximal renal tubule cells, and the distal tubular epithelial cells sustain relatively light damage. Caspase-3 is strongly expressed in the distal renal tubular cells, suggesting that in renal tubular damage induced by endotoxin and hypoxia, cell degeneration, necrosis and apoptosis coexist in the tubular epithelial cells; degeneration and necrosis occur primarily in the proximal tubular epithelial cells, while apoptosis is obvious in the distal renal cells.     

梗阻性黄疸病人内毒素血症与肾功能的初步测定

为探讨梗阻性黄疸病人内毒素血症的发生情况以及内毒素血症与肾功能之间的关系。作者对１１例梗阻性黄疸病人和１０例无黄疸病人进行术前术后内毒素和内生肌酐清除率的测定，上述病例临床上均无感染征象。     

[Ca2+]i与阻塞性黄疸大鼠肾系膜细胞损伤的研究

目的 探讨阻塞性黄疸大鼠胞浆钙活性的变化及其致肾损伤的作用机制.方法 60只SD大鼠,随机分为正常对照组、假手术组、实验组(再分为胆总管结扎后15 d和21 d两个亚组),每组15只.胆总管双重结扎法建立阻塞性黄疸大鼠模型,切取肾脏行肾小球系膜细胞原代培养,激光共聚焦显微镜法测定细胞胞浆钙离子浓度.结果 肾小球系膜细胞胞浆钙离子浓度明显升高(P＜0.05).结论 TNFa致阻塞性黄疸大鼠肾脏系膜细胞线粒体损伤中细胞浆内钙离子超载起着重要的作用.     

阻塞性黄疸大鼠肾系膜细胞线粒体膜电位变化的研究

目的 探讨阻塞性黄疸大鼠肾系膜细胞线粒体膜电位的变化及其致肾损伤的作用机制。方法 60只SD大鼠，随机分为正常对照组、假手术组、实验组（再分为胆总管结扎后15d、21d两个亚组），每组15只。胆总管双重结扎法建立阻塞性黄疸大鼠模型，切取肾脏行肾小球系膜细胞原代培养，流式细胞仪测定细胞线粒体膜电位平均荧光强度值，激光共聚焦显微镜法测定细胞浆[Ca^2＋]i浓度。结果 实验组大鼠肾小球系膜细胞线粒体膜电位平均荧光强度值明显下降（P〈0．05），肾小球系膜细胞胞浆钙浓度明显升高（P〈0．05）。结论 [Ca^2＋]i内流引起的线粒体膜电位的下降在阻塞性黄疸大鼠肾系膜细胞损伤中起着重要作用。     

血红素加氧酶1在恶性梗阻性黄疸患者小肠黏膜氧化应激损伤中的作用

目的 探讨血红素加氧酶1(HO-1)在恶性梗阻性黄疸(MOJ)患者小肠黏膜表达及其在氧化应激损伤中的作用.方法 采用前瞻性研究,收集行内镜下逆行胰胆管造影(ERCP)检查或治疗的恶性胆道梗阻伴黄疸患者15例,恶性胆道梗阻无黄疸患者10例;并以健康体检胃镜检查者10名作为对照组.取十二指肠乳头以下2～5 cm肠黏膜组织,应用比色法检测组织丙二醛含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡.应用免疫组织化学和蛋白质印迹方法检测小肠黏膜组织HO-1分布及表达变化.结果 MOJ伴黄疸患者肠黏膜脂质过氧化产物丙二醛水平(nmol·mg~(-1)·prot~(-1))明显高于无黄疸组和健康对照组(1.79±0.24比1.09±0.28、1.18±0.32,P=0.041);SOD活力(nmol·mg~(-1)·prot~(-1)则明显低(303±10比398±11、406±11,P=0.017);肠上皮细胞凋亡率(%)高(69.1±5.9比28.6±3.5、10.2±2.5,P<0.01).MOJ患者小肠黏膜HO-1阳性表达为细胞核及细胞质呈棕黄色;伴黄疸组小肠黏膜HO-1表达(0.28±0.04)明显高于无黄疸组(0.20±0.04,P<0.01)和健康对照组(0.13±0.05,P<0.01).蛋白质印迹显示伴黄疸组患者小肠黏膜HO-1蛋白表达(%)明显高于其他两组(10.7±0.7比7.6±0.5和3.9±0.4,P<0.01).结论 MOJ患者小肠上皮细胞存在氧化应激损伤,HO-1蛋白表达随着胆道梗阻的进展明显升高,这可能是减轻肠黏膜损伤的一种保护性反应.     

缺氧小鼠肾组织结构的变化

目的:通过观测缺氧后小鼠肾组织形态结构、碱性磷酸酶的量的变化,探讨不同缺氧状态下对肾脏结构和功能的影响.方法:用小鼠制作间歇性重复缺氧模型后,在不同时间点取小鼠肾组织分别作HE染色、过碘酸雪夫氏反应(PAS染色)和碱性磷酸酶染色法操作.结果:缺氧即时处理组肾实质内毛细血管扩张充血,碱性磷酸酶含量增加.但在缺氧延时处理组小鼠由于近曲小管受到损伤,其肾组织切片碱性磷酸酶染色变浅淡.该组近曲小管上皮细胞肿胀,出现颗粒变性.肾小体系膜区增宽,系膜细胞及基质增生.肾实质及肾间质血管扩张充血,间质水肿,中性粒细胞浸润.结论:缺氧时可导致小鼠近曲小管上皮细胞碱性磷酸酶含量增加,但其碱性磷酸酶染色强度随着缺氧时间的延长、近曲小管损伤的加重而成反比变化.