半乳糖凝集素-3 (Gal-3)在上皮性卵巢癌中的表达及其对增殖、迁移和侵袭的影响

 目的  研究半乳糖凝集素-3(galectin-3,Gal-3)在上皮性卵巢癌中的表达及对人上皮性卵巢癌细胞株增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法  分别采用real-time PCR和Western blot法检测上皮性卵巢癌中Gal-3的mRNA及蛋白表达;在上皮性卵巢癌细胞中运用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和慢病毒感染方法,分别下调和过表达Gal-3后,采用CCK-8试剂盒检测细胞的增殖,Matrigel和Transwell小室检测细胞的迁移及侵袭能力,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的蛋白表达水平。结果  与正常卵巢组织相比,Gal-3在上皮性卵巢癌组织中高表达,并与临床分期有关(P＜0.05)。在上皮性卵巢癌细胞中分别过表达和下调Gal-3后,癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力均相应地增强和下降,与对照组比较均有明显统计学意义(P＜0.001),Cyclin D1和MMP-9蛋白表达分别上调和下调,而E-钙黏蛋白表达分别出现下调和上调。结论  Gal-3在上皮性卵巢癌中高表达,并促进上皮性卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭。     

LIM同源盒基因8对卵巢癌细胞SKOV3生物学行为的影响

目的 探讨LIM同源盒基因8(Lhx8)对卵巢癌细胞株SKOV3增殖、转移和侵袭的影响.方法 采用Lhx8过表达慢病毒(LV-Lhx8)转染卵巢癌细胞株SKOV3构建过表达模型;设阴性对照慢病毒(LV-NC)组通过Lipofectamine 2000转染Lhx8-siRNA构建细胞干扰模型并设阴性对照序列(FAM-siRNA;NC)组;野生(WT)组细胞仅给予等量不含病毒或任何干扰片段的转染试剂.通过免疫荧光、蛋白质印迹法和qPCR验证过表达和干扰效果.采用EDU和细胞周期实验检测过表达或干扰Lhx8后细胞的增殖能力;采用Transwell和划痕实验分别检测转染后细胞的迁移和侵袭能力.结果 Lhx8过表达组SKOV3细胞中Lhx8的表达高于LV-NC和WT组(P＜0.01),干扰后Lhx8的mRNA和蛋白表达均降低,与NC和WT组相比差异有统计学意义(P＜0.01).与WT和LV-NC组相比,Lhx8过表达抑制SKOV3细胞的增殖(P＜0.01),而干扰Lhx8后其增殖能力增加(P＜0.01);细胞周期实验结果示过表达Lhx8能够增加进入G0/Q期的细胞数目,从而抑制细胞增殖(P＜0.01),干扰Lhx8表达后进入S期的细胞数目多于WT和NC组(P＜0.01).划痕和Transwell实验结果示SKOV3细胞过表达Lhx8后其迁移和侵袭能力均低于WT和LV-NC组(P＜0.01),干扰Lhx8表达后细胞的迁移和侵袭能力均高于WT和NC组(P＜0.01).SKOV3细胞过表达Lhx8后基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达均低于WT和LV-NC组(P＜0.01),干扰Lhx8后MMP-2、MMP-9表达均高于WT和NC组(P＜0.01).结论 Lhx8能够抑制SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭,同时能够下调MMP-2和MMP-9的表达.     

RNAi抑制卵巢癌SKOV3细胞MMP-24基因表达及对细胞侵袭的影响

目的 探讨应用RNA干扰技术沉默MMP-24基因表达,研究其对人卵巢上皮癌SKOV3细胞侵袭力的影响.方法 设计合成2条特异性针对MMP-24基因的siRNA,转染至SKOV3中,采用RT-PCR和Western blotting检测MMP-24mRNA和蛋白表达情况,细胞侵袭实验观察转染后细胞侵袭能力的变化.结果 转染siRNA后,卵巢癌细胞MMP-24mRNA表达受抑制,蛋白表达降低,细胞侵袭力减弱.结论 RNAi沉默MMP-24基因可影响卵巢癌细胞的侵袭,有可能成为治疗卵巢癌的新途径.     

褪黑素对卵巢癌SKOV3细胞侵袭、迁移和血管生成的影响

研究褪黑素对卵巢癌SKOV3细胞侵袭、迁移和血管生成的影响。MTT实验、划痕实验和Transwell侵袭实验分别观察褪黑素对SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移的影响。诱导HUVECs成管,观察褪黑素对其影响。Western blot法检测SKOV3细胞内血管内皮生长因子(VEGF)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)、基质金属蛋白酶9(MMP9)和波形蛋白(Vimentin)的表达。建立卵巢癌移植瘤模型,免疫组化检测CD31的表达。结果显示,褪黑素能抑制卵巢癌SKOV3细胞的侵袭和迁移,并且明显下调MMP-9、Vimentin和VEGF蛋白的表达,上调E-cadherin的表达。此外,褪黑素抑制了HUVECs的小管生成,体内CD31的免疫组化结果也显示褪黑素能够抑制微血管密度。结果提示,褪黑素能抑制卵巢癌细胞的侵袭、迁移和血管生成。     

慢病毒介导siRNA干扰CEP55表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响

本文通过慢病毒介导siRNA干扰卵巢癌SKOV3细胞中心体相关蛋白55(CEP55)表达,以观察其对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移等生物学行为的影响。实验分为CEP55组(转染CEP55 siRNA慢病毒)、阴性对照组(转染不含CEP55 siRNA的慢病毒)和空白对照组(不处理)。结果显示:CEP55 siRNA慢病毒转染效率为(89.4±4.7)%,CEP55组CEP55的mRNA和蛋白表达显著降低(P＜0.05),第12、24、36、48、72 h时的OD(570)值显著降低(P＜0.05),细胞凋亡率[(23.7±6.9)%]显著增加(P＜0.05),穿膜细胞数目[(11.3±4.1)/个]明显减少(P＜0.05),细胞迁移距离[(245.8±33.7)μm]明显减小(P＜0.05)。提示慢病毒介导siRNA干扰CEP55表达可显著抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、促进其凋亡、降低其侵袭和迁移能力。     

下调ARPC2通过抑制Wnt/β-catenin通路激活水平降低卵巢癌OVCA429细胞恶性转移潜能

目的 探讨下调肌动蛋白相关蛋白复合体2(ARPC2)对卵巢癌OVCA429细胞恶性转移潜能的影响和机制。方法 qRT-PCR和Western blot检测卵巢癌Skov3、A2780、OVCA429细胞和正常卵巢IOSE386细胞中ARPC2表达变化。在卵巢癌OVCA429细胞中转染ARPC2 siRNA,MTT测定细胞增殖,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭,用Western blot方法检测细胞中ARPC2、β-catenin、c-myc、MMP-9、MMP-2蛋白表达变化。用Wnt/β-catenin激活剂LiCl处理转染ARPC2 siRNA后的卵巢癌OVCA429细胞,同样利用上述方法测定细胞增殖、迁移、侵袭变化。结果 卵巢癌Skov3、A2780、OVCA429细胞中ARPC2表达水平明显高于正常卵巢IOSE386细胞。卵巢癌OVCA429细胞中ARPC2表达水平最高。转染ARPC2 siRNA后的卵巢癌OVCA429细胞增殖能力下降,细胞迁移和侵袭能力也下降,细胞中ARPC2、β-catenin、c-myc、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平均降低。Wnt/β-catenin激活剂LiCl可以逆转ARPC2 siRNA对卵巢癌OVCA429细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 下调ARPC2通过抑制Wnt/β-catenin通路激活水平降低卵巢癌OVCA429细胞恶性转移潜能。     

靶向沉默CCDC132表达对卵巢癌细胞SKOV3生长、迁移及侵袭能力的影响及其机制研究

目的研究shRNA靶向沉默CCDC132基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其机制。方法体外培养卵巢癌SKOV3细胞株,设计CCDC132-siRNA及空转序列,转染卵巢癌SKOV3细胞,分别为shCCDC132组及对照组,利用qRT-PCR检测各组细胞CCDC132相对表达量,CCK8法检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western Blot法检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达情况。结果转染后,sh-CCDC132组细胞中CCDC132表达水平较对照组显著降低(P0.01);sh-CCDC132组细胞增殖率较对照组显著降低(P0.01),迁移率下降(P0.01)、侵袭细胞数显著降低(P0.01),caspase-3、Bax蛋白表达显著上调(P0.01),而β-catenin(P0.01)、Cyclin D1(P0.01)和c-myc(P0.05)蛋白表达水平显著降低。结论沉默CCDC132可抑制SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭能力,其具体机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。     

VEGF-C反义寡核苷酸对卵巢癌细胞SKOV3的黏附、侵袭能力的影响

目的:探讨VEGF-C反义寡核苷酸(VEGF-C,ASODN)对人卵巢癌细胞SKOV3黏附、侵袭能力的影响.方法:以VEGF-C基因编码区为靶点合成反义寡核苷酸,脂质体介导转染.MTT法检测卵巢癌细胞与细胞外基质黏附能力;利用transwell小室,检测卵巢癌细胞侵袭人工基底膜的能力;免疫组化法检测细胞中VEGF-C蛋白表达,western blot检测细胞中MMP-2蛋白表达.结果:与空白对照组及正义序列转染组相比,ASODN组对细胞外基质黏附率明显降低(P＜0.01),穿透重组基质膜数目明显下降(P＜0.01),细胞中VEGF-C、MMP-2蛋白表达明显下降(P＜0.01).结论:VEGF-C ASODN可明显抑制卵巢癌细胞体外实验中的黏附和侵袭能力,下调MMP-2的表达可能是其作用途径.     

组蛋白去乙酰化酶1基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞迁移及侵袭能力的影响

目的：观察组蛋白去乙酰化酶1（HDACl）基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞迁移及侵袭能力的影响.方法：体外合成针对HDAC1的小干扰RNA （siRNA）,利用脂质体转染入人卵巢癌SKOV3细胞;通过Western blot方法检测细胞内HDAC1蛋白和乙酰化组蛋白H4（Ac-H4）的表达,利用荧光定量PCR方法检测HDAC1、尿激酶型纤溶酶原激活因子（uPA）和尿激酶型纤溶酶原激活因子受体（uPAR）基因的mRNA表达;通过划痕实验检测细胞迁移能力,利用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力.结果：经转染HDAC1基因siRNA后,卵巢癌SKOV3细胞HDAC1基因mRNA和蛋白表达水平均下调,细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加;SKOV3细胞迁移速度降低,穿过Transwell滤膜的细胞数量减少;SKOV3细胞内uPA和uPAR基因mRNA表达也降低.结论：HDAC1基因沉默能够抑制人卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭能力,机制可能与增加组蛋白乙酰化水平、抑制uPA和uPAR基因表达有关.     

Rac1蛋白在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞株SKOV3增殖及迁移的作用

目的 研究Rac1蛋白在人卵巢浆液性腺癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞株SKOV3恶性增殖和迁移的影响.方法 Western blot检测人卵巢浆液性腺癌组织、卵巢良性浆液性囊腺瘤组织及卵巢正常组织中Rac1蛋白的表达水平;构建Rac1表达缺失的细胞株SKOV3-Rac1i;分别用细胞划痕实验、MTT及平板克隆实验检测SKOV3-Rac1i细胞迁移能力、细胞增殖及克隆形成能力.结果 卵巢浆液性腺癌组织中Rac1蛋白表达水平显著高于卵巢良性浆液性囊腺瘤组织[(0.89 ±0.17)vs(0.69 ±0.24),P＜0.05]和卵巢正常组织[(0.89±0.17) vs (0.72±0.12),P＜0.05];与亲代细胞相比,SKOV3-Rac1i细胞表现出迁移能力减弱(P＜0.05)和增殖能力明显受限(P＜0.05).结论 Rac1在人卵巢浆液性腺癌组织中呈高表达,其可能是通过影响细胞迁移能力及细胞的增殖而促进卵巢癌细胞的恶性生物行为.     

干扰整合素转接激酶表达对口腔鳞癌细胞迁移侵袭影响研究

目的 研究干扰整合素转接激酶(ILK)表达对口腔鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响及机制。方法 以口腔鳞癌SCC-25细胞为研究对象,细胞转染小干扰RNA阴性对照(siRNA control)和ILK小干扰RNA(ILK siRNA)分别记为si-NC组和ILK siRNA组,同时以没有转染的SCC-25细胞作为对照组。RT-PCR和Western blot法检测转染效果;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖;细胞划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室检测细胞侵袭;Western blot法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达。结果 si-NC组ILK mRNA水平和蛋白水平、细胞存活率、细胞迁移率、细胞侵袭数目以及细胞中的MMP-9、MMP-2蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。ILK siRNA组ILK mRNA水平和蛋白水平、细胞存活率、细胞迁移率、细胞侵袭数目和细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达水平明显低于对照组和si-NC组(P<0.05)。结论 干扰ILK能够下调口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。     

Nek2基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞侵袭能力的影响

目的研究RNA干扰Nek2表达对卵巢癌SKOV3细胞侵袭能力的影响以及相关的分子机制。方法设计合成3条针对Nek2基因的siRNA,转染至SKOV3细胞中,采用Real-time RT-PCR和Western blot技术筛选出抑制效率最高的Nek2-siRNA序列,用Transwell方法检测转染该序列的SKOV3细胞侵袭能力的改变,并用Western blot方法检测Nek2-siRNA转染后SKOV3细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1蛋白表达的变化。结果①RNA干扰序列2对SKOV3细胞中Nek2的抑制效果最明显;②与未转染组和阴性对照组相比,转染了Nek2-siRNA的SKOV3细胞侵袭能力明显下降(P<0.01);③Western blot检测表明,与未转染组和阴性对照组相比,Nek2-siRNA转染48 h后SKOV3细胞中MMP-2、MMP-9的表达明显下调,而TIMP-1的表达明显上调(P<0.01)。结论 Nek2-siRNA能有效得沉默SKOV3细胞中Nek2的表达,通过下调MMP-2、MMP-9的表达,上调TIMP-1的表达,从而抑制SKOV3细胞的侵袭转移。     

HOXB7基因对卵巢透明细胞癌ES-2细胞系侵袭的影响

目的研究人类同源异型盒基因HOXB7小分子干扰RNA（siRNA）对卵巢透明细胞癌ES-2细胞侵袭的影响。方法采用半定量RT-PCR,Western blot印迹方法分别检测卵巢透明细胞癌细胞株ES-2,卵巢浆液性囊腺癌细胞株SKOV3的HOXB7基因mRNA及蛋白质表达水平。将ES-2细胞分为3组：空白组、阴性对照组（转染阴性质粒pRNAT-neg）、HOXB7 siRNA组（转染干扰质粒pRNAT-hoxb7）。荧光显微镜观察转染效率、RT-PCR、Western blot检测干扰效应。Transwell小室检测3组细胞侵袭、运动能力的变化;明胶酶谱实验检测3组细胞上清中基质金属蛋白酶活性;Western blot检测细胞内基质金属蛋白酶-2（MMP-2）变化。结果RT- PCR、Western blot结果显示：HOXB7在卵巢癌SKOV3,ES-2细胞中均阳性表达。转染质粒pRNAT-hoxb7到ES-2细胞后,HOXB7基因的表达受到高效且特异的抑制（P〈0．01）;细胞侵袭力及趋向运动能力均下降。明胶酶谱、Western blot结果显示HOXB7干扰后,ES-2细胞MMP-2表达下降。结论HOXB7 siRNA可有效抑制卵巢透明细胞癌ES-2细胞HOXB7基因的表达与MMP-2表达,同时可抑制其迁移、侵袭能力,提示HOXB7可能在卵巢癌转移中发挥作用。     

干扰STAT3的siRNA真核表达载体对人卵巢癌的侵袭转移性的相关研究

目的：通过构建针对STAT3的siRNA真核表达载体,研究STAT3对卵巢癌SKOV3细胞侵袭转移能力的影响。方法：使用软件Primer Premier 5设计siRNA靶序列,在合成修饰靶序列之后,构建siRNA-STAT3-脂质体复合物,并转染卵巢癌SKOV3细胞;通过Western blot检测细胞STAT3的表达,通过Transwell小室及对卵巢癌SKOV3细胞侵袭相关蛋白MMP-2的检测,探讨siRNA-STAT3对卵巢癌细胞侵袭力的影响。结果：构建干扰STAT3的siRNA真核表达载体转染SKOV3细胞可显著抑制细胞中STAT3的蛋白表达;与SKOV3细胞对照组和SKOV3细胞阴性对照组相比,SKOV3细胞siRNA-STAT3组中细胞侵袭转移能力明显下降。结论：构建干扰STAT3的siRNA真核表达载体可有效抑制STAT3的表达及卵巢癌SKOV3细胞的侵袭转移能力。     

RNA干扰沉默HIF-1α基因对卵巢癌SKOV3细胞定植和侵袭的影响

【目的】构建针对HIF-1α基因的短发夹干忧RNA真核表达质粒，探讨低氧条件下其对卵巢癌SKOV3细胞定植和侵袭能力的影响。【方法】根据siRNA设计原则，结合psilencer 2．1-U6-neo质粒特点，针对HIF-1α基因设计并合成2条寡聚DNA片段，退火后将其克隆人DSilencer2．1-U6-neo质粒中，采用脂质体法将重组真核表达质粒转染人卵巢癌SKOV3细胞。缺氧培养后，应用实时定量PCR和Western blotting方法检测HIF-1α蛋白及mRNA表达水平；用软琼脂克隆形成实验和体外侵袭实验检测SKOV3细胞的定植和侵袭能力。【结果】成功构建的HIF-1α的短发状siRNA真核表达载体，转染卵巢癌SKOV3细胞，低氧条件下细胞HIF-1蛋白及mRNA表达水平下降；同时SKOV3细胞在软琼脂中形成的克隆数和穿透Matrigel膜的细胞数明显减少。【结论】构建的HIF-1α短发状siRNA真核表达载体，下调卵巢癌SKOV3细胞HIF-1α基因表达，卵巢癌细胞的定植和侵袭能力降低。     

miR-182-5p靶向TRIM52逆转卵巢癌SKOV3细胞对顺铂耐药的机制

目的 研究miR-182-5p靶向三结构域蛋白52(TRIM52)对卵巢癌SKOV3细胞顺铂(CDDP)耐药的影响。方法 采用qRT-PCR法测定卵巢癌SKOV3细胞中miR-182-5p水平。以卵巢癌SKOV3细胞作为研究对象,在细胞中转染miR-182-5p mimics,给予CDDP处理(记为SKOV3/CDDP细胞),采用MTT、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡,Transwell小室测定细胞迁移和侵袭,Western blot测定基质金属蛋白酶9(MMP-9)、C-Caspase-3蛋白表达。在线靶基因预测软件预测miR-182-5p和TRIM52 3’UTR端互补结合,使用荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将TRIM52过表达载体和miR-182-5p mimics共转染到卵巢癌SKOV3/CDDP细胞中,检测细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移情况。结果 卵巢癌SKOV3/CDDP细胞中miR-182-5p水平低于卵巢癌SKOV3细胞(P<0.001)。miR-182-5p mimics、CDDP和二者联合处理后的卵巢癌SKOV3/CDDP细胞增殖、迁移和侵袭能力均下降,细胞凋亡增多...     

肝/肾/骨型碱性磷酸酶基因ALPL抑制卵巢癌细胞系SKOV3增殖的研究

目的 研究肝/肾/骨型碱性磷酸酶基因(alkaline phosphatase,liver/bone/kidney,ALPL)在卵巢癌细胞株中的表达及其对卵巢癌细胞SKOV3增殖的影响.方法 通过qRT-PCR检测ALPL在不同卵巢癌细胞株(HEY、SKOV3、8910、ES-2、OVCAR3、3AO、A2780)mRNA中的表达,并与正常卵巢组织进行比较.在低表达ALPL的卵巢癌细胞株SKOV3中外源性过表达ALPL,通过MTT法、平板克隆实验检测细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞周期.通过建立裸鼠皮下种植瘤模型,观察过表达ALPL的SKOV3细胞在体内的成瘤能力.结果 ALPL在卵巢癌细胞中的mRNA表达低于正常卵巢组织(P＜0.01),外源性过表达ALPL可抑制SKOV3细胞的增殖和克隆形成率(P＜0.01),阻滞细胞G1期向S的转化,并抑制肿瘤细胞的成瘤能力(P＜0.05).结论 ALPL表达的恢复可以明显抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖及成瘤能力.     

基因沉默整合素连接激酶对滋养细胞生物学功能的影响

目的：研究基因沉默整合素连接激酶（ILK）对人滋养细胞TEV-1细胞增殖、迁移和侵袭等的影响。方法：构建ILK-siRNA慢病毒载体后,转染人TEV-1细胞,分ILK基因沉默组（KD组）和空白质粒转染组（NC组）进行;qRT-PCR和Western blot检测mRNA和蛋白表达,MTT法、Transwell法和划痕实验等检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果：基因沉默ILK后,TEV-1细胞的ILK基因和蛋白的表达水平显著降低（P＜0.05）,证明干扰ILK表达成功。沉默ILK后,TEV-1细胞的增殖能力、侵袭能力、迁移能力均显著下降（P＜0.05或P＜0.01)。ILK-siRNA转染TEV-1细胞后,MMP-9和p-GSK3β mRNA和蛋白水平显著下降（P＜0.01）。结论：沉默ILK通过下调GSK3β和MMP-9的表达抑制人滋养细胞的增殖、迁移和侵袭。     

长链非编码RNA BCYRN1对SKOV3细胞恶性生物学行为的影响

  目的  探讨长链非编码RNA brain cytoplasmic RNA 1在卵巢癌组织中的表达及对SKOV3细胞恶性生物学行为的影响。  方法  选取温州市中心医院2017年3月—2019年3月收治的32例卵巢癌患者癌组织及其相应的癌旁组织标本,正常卵巢上皮细胞系IOSE和卵巢癌细胞系(SKOV3、HO8910、A2780)购自美国ATCC; 癌组织和癌细胞中BCYRN1的水平采用实时荧光定量法(qRT-PCR)检测; 采用BCYRN1高表达质粒和低表达质粒及其相应的对照物转染SKOV3细胞,分别构建BCYRN1高表达和低表达的细胞系; 采用BrdU法检测细胞的增殖; 采用划痕愈合实验检测细胞的迁移; 采用Transwell法检测细胞的侵袭。  结果  BCYRN1在卵巢癌组织中的表达(5.64±1.02)高于在癌旁组织中的表达(2.12±0.65);BCYRN1在卵巢癌细胞中的水平为SKOV3(2.25±0.78)、HO8910(2.85±0.78)、A27809(3.12±1.01),显著高于IOSE(1.01±0.12);BCYRN1高表达能够促进SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭。  结论  BCYRN1在卵巢癌中表达上调,其作为促癌基因促进卵巢癌的进展。      

肿瘤相关成纤维细胞与上皮性卵巢癌顺铂耐药性的研究

目的 探讨卵巢癌相关成纤维细胞(CAFs)对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响及其可能作用机制.方法 收取上皮性卵巢癌及正常卵巢上皮组织各10例,分离纯化培养CAFs和正常卵巢成纤维细胞(NFs),免疫荧光法鉴定CAFs;收集CAFs或NFs培养上清液与卵巢癌SKOV3细胞建立间接共培养体系;C C K8法检测细胞增殖及顺铂毒性、划痕实验检测细胞迁移能力;DCFH-DA法测定共培养体系中活性氧(ROS)含量;qPCR及Western blot法检测共培养体系SKOV3细胞耐药相关基因YAP、CTGF和Cyr61在mRNA及蛋白水平表达.结果 成功分离培养CAFs或NFs,免疫荧光结果 显示CAFs中平滑肌激动蛋白-α(α-SMA)与成纤维细胞活化蛋白(FAP)表达阳性;SKOV3细胞与CAFs间接共培养后其增殖能力(P<0.001)、顺铂半数抑制浓度(IC50)(P<0.01)、迁移能力(P<0.01)均较SKOV3细胞单独培养或与NFs共培养组增加,差异有统计学意义;CAFs共培养体系细胞中ROS含量增加(P<0.01),差异有统计学意义;CAFs共培养SKOV3细胞中耐药相关基因YAP(P<0.01)、CTGF(P<0.05)、Cyr61(P<0.01)在mRNA及蛋白水平较单独培养或与NFs共培养SKOV3中表达升高,差异有统计学意义.结论 CAFs可促进SKOV3细胞增殖、迁移,降低SKOV3细胞对顺铂敏感性.其机制一方面可能与ROS促进SKOV3细胞自噬相关;另一方面与卵巢癌细胞中耐药基因YAP、CT-GF及Cyr61表达上调有关.