益气、化瘀、化痰中药制剂及其合剂对肾间质纤维化大鼠TGF-β1/Smad通路及TRB3的影响

目的：观察益气、化瘀、化痰中药制剂及其合剂———益气化瘀化痰制剂对单侧输尿管结扎（unilateral ureteral obstruc－tion,UUO）模型大鼠肾间质纤维化的影响及其可能机制。方法：42只雌性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、替米沙坦组、益气组、化瘀组、化痰组及益气化瘀化痰组,每组6只。除假手术组外,其余各组采用UUO法建立肾间质纤维化模型。UUO术后3周,模型组及假手术组以等量生理盐水灌胃,其余各组以相应制剂灌胃治疗,每日1次,连续用药12周后处死大鼠。检测大鼠血清尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）、肌酐（serum creatinine,Scr）水平。取大鼠术侧肾组织,HE染色观察组织形态学改变,Masson染色观察胶原纤维沉积情况,Western blot检测转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）蛋白表达水平;qRT-PCR 检测TGF-β1、Smad3、Smad7、TRB3、α-SMA、E-cadherin mRNA 表达水平。结果：与假手术组比较,模型组肾间质纤维化明显,BUN、Scr水平明显升高（P<0.01）,而各药物干预组肾间质纤维化程度及BUN、Scr水平均较模型组明显改善,其中益气化瘀化痰组、替米沙坦组及益气组改善较明显（P<0.05）。与模型组相比,益气化瘀化痰组、替米沙坦组及益气组TGF-β1、Smad3、TRB3、α-SMA mRNA表达明显降低（P<0.05）,E-cadherin mRNA表达明显升高（P<0.05）。各组间Smad7 mRNA表达无显著差异。TGF-β1、α-SMA、E-cadherin的蛋白表达与其mRNA表达趋势一致。结论：益气、化瘀、化痰及益气化瘀化痰中药制剂和替米沙坦均能改善UUO大鼠肾间质纤维化,且以益气化瘀化痰制剂、替米沙坦及益气制剂的改善作用较为明显,其机制可能是通过调控TRB3、TGF-β1/Smad信号通路,进而抑制肾小管上皮细胞向间充质细胞转化。     

消瘀泄浊饮对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮-间质转分化及PAR-3表达的影响

[目的] 通过检测极性蛋白-3(partitioning defective-3,PAR-3)在单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)所导致的肾间质纤维化大鼠中的表达,探讨消瘀泄浊饮对肾小管上皮-间质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。[方法] 将40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型(UUO)组、西药(贝那普利)组和中药(消瘀泄浊饮)组。从术后1 d起,每天分别给予消瘀泄浊饮药液10.4 g/(kg·d)和盐酸贝那普利溶液1 mg/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组以等体积0.9%氯化钠注射液灌胃4周。给药结束后分别检测白蛋白(albumin,ALB)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、尿酸(uric acid,UA)水平;取手术侧肾组织分别采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色及Masson染色进行相关病理检测;采用免疫荧光和免疫印迹法分别检测肾组织PAR-3的表达;采用免疫组化检测肾组织E-钙黏蛋白(E-cadherin)及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白的表达。[结果] 与假手术组比较,模型组、西药组、中药组BUN、Scr、UA水平均增高,差异有统计学意义(均P＜0.05);与模型组比较,中药组BUN、Scr、UA水平均降低,差异有统计学意义(均P＜0.05);与西药组比较,中药组Scr、UA水平均降低,差异有统计学意义(均P＜0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠肾小管间质损伤指数和肾间质纤维化相对面积均升高(均P＜0.05);与模型组比较,西药组、中药组肾小管间质损伤指数和肾间质纤维化相对面积均降低(均P＜0.05)。与假手术组比较,其余各组大鼠肾组织PAR-3水平均下降(均P＜0.05);与模型组比较,中药组肾组织PAR-3表达升高(P＜0.05)。与假手术组比较,其余各组大鼠肾组织α-SMA表达增加,E-cadherin表达减少(均P＜0.05);与模型组比较,西药组、中药组大鼠肾组织α-SMA表达减少,E-cadherin表达增加(均P＜0.05)。[结论] UUO大鼠肾组织PAR-3表达减少,消瘀泄浊饮能通过上调肾组织PAR-3表达、阻止肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化,起到改善肾间质纤维化的作用。     

益肾解毒汤对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾组织氧化应激反应的干预作用

目的研究益肾解毒汤对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织氧化应激的干预作用。方法用UUO法建立慢性肾衰竭大鼠模型,SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、益肾解毒汤组和科素亚组,于造模后7d、14d各组随机选取10只检测血肌酐(Scr),尿素氮(BUN),24h尿蛋白定量(24h Upro),肾组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)。结果与假手术组比较,模型组肾组织SOD、GSH明显降低(P0.01),Scr、BUN、24h Upro、MDA明显升高(P0.01);益肾解毒汤组与模型组比较,肾组织SOD、GSH明显升高(P0.01),Scr、BUN、24h Upro、MDA明显下降(P0.05);益肾解毒汤组与科素亚组比较,肾组织SOD、GSH明显升高(P0.05),Scr、BUN、24h Upro、MDA明显下降(P0.05)。结论在肾间质纤维化的整个发展过程中,都有氧化应激反应的参与,益肾解毒汤能有效减轻慢性肾衰竭大鼠的氧化应激反应,进而可能起到延缓肾间质纤维化的作用。     

肾炎四味片对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质NF-κB、TGF-β1表达的影响

目的 探讨肾炎四味片对肾组织纤维化的影响及作用机制.方法 采用单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾间质纤维化模型,将雄性SD大鼠60只随机分为,①假手术组(A组);②肾炎四味片假手术组(B组);③模型组(C组),行左侧输尿管结扎术;④肾炎四味片治疗组(D组).每组15只,各组分别于术后第3、7、14天处死5只大鼠,采用HE和Masson染色观察大鼠肾脏组织病理改变,应用免疫组织化学方法检测肾小管间质中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的表达情况.结果 A组和B组各指标组内及组间比较差异无统计学意义(P>0.05).病理变化,C组间质纤维化程度进行性加重,组内比较差异有统计学意义(P<0.05),D组间质胶原纤维面积明显低于相应时间点的C组,差异有统计学意义(P<0.05).免疫组织化学,C组NF-КB、TGF-β1在肾间质表达明显增强,与A组相比差异有统计学意义(P<0.05),与间质胶原纤维面积呈正相关.D组各因子的表达下调,与C组相应时间点相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 肾炎四味片可下调NF-κB、TGF-β1在肾间质中的表达,从而具有延缓肾间质纤维化的作用.     

六味地黄汤对5/6肾切除大鼠NF-κB、MCP-1、Col-Ⅲ表达的影响

目的 观察六味地黄汤对5/6肾切除大鼠残肾转录因子-核因子κB (NF-κB)、单核细胞趋化因子(MCP-1)及Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)表达的影响,探讨六味地黄汤抑制肾间质纤维化进展的作用机制.方法 按照随机数字表法将60只SD雄性大鼠分为5组:空白组、假手术组、模型组、依那普利组、六味地黄汤组,每组12只,后三组行5/6肾切除术诱导大鼠肾衰模型,假手术组同期手术,但不损及肾脏.、造模术后3d进行灌胃干预.灌胃8周后处死各组大鼠,观察各组大鼠残肾组织形态学变化并用免疫组化法检测大鼠残肾NF-κB 、MCP-1 、Col-Ⅲ的表达.结果 (1)观察5/6肾切除大鼠残肾组织细胞形态学,与模型组相比六味地黄汤、依那普利组可减轻大鼠肾间质损害及纤维化程度;(2)免疫组化半定量分析显示六味地黄汤组肾皮质的NF-κB、MCP-1及Col-Ⅲ表达均明显低于模型组(P＜0.05),与依那普利组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 六味地黄汤可能通过下调NF-κB 、MCP-1及Col-Ⅲ的表达,减少细胞外基质的积聚,减轻炎症反应和纤维化程度,抑制5/6肾切除大鼠肾间质纤维化进展,可作为慢性肾衰竭的辅助用药、     

金匮肾气丸对单侧输尿管梗阻大鼠炎症反应的影响

目的:探讨金匮肾气丸对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质炎症反应及核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:雄性SD大鼠48只,随机分为假手术组、UUO模型组、金匮肾气丸治疗组、阳性对照药依那普利治疗组,UUO术后第1天开始灌胃,连续灌胃3 d或7 d后处死大鼠,取梗阻肾组织,免疫组织化学法检测CD68和CD3在肾组织的表达,组织匀浆ELISA法检测单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在肾组织的蛋白水平,Western印迹检测磷酸化核因子-κB(P-IκB)和IκB在肾组织的表达。结果:与假手术组比较,模型组在3 d、7 d时肾间质损伤指数均明显增高,CD68阳性巨噬细胞、CD3阳性淋巴细胞增多,肾组织中MCP-1、TNF-α和p-IκB-α蛋白表达水平显著增加,IκB-α表达水平明显降低(P0.05或0.01);金匮肾气丸和依那普利治疗后,两药物组较模型组的肾间质损伤指数均明显降低,CD68阳性巨噬细胞、CD3阳性淋巴细胞明显减少,肾组织中MCP-1、TNF-α和p-IκB-α蛋白表达水平显著下降,IκB-α表达水平明显上调(P0.05)。结论:金匮肾气丸可以改善UUO梗阻肾组织的炎症反应,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的活性有关。     

杜仲对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织MMP-2表达的影响

[目的]观察杜仲对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织MMP-2的影响并探讨其可能机制。[方法]采用单侧输尿管梗阻(UUO)肾间质纤维化模型。将32只大鼠随机分为4组,每组8只,即假手术组、模型组、厄贝沙坦组和杜仲组。厄贝沙坦组给予厄贝沙坦10mg·kg-1·d-1、杜仲组给予杜仲6g·kg-1·d-1治疗。术后2周处死大鼠,光镜下观察Masson和HE染色肾间质纤维化指数,观察肾组织病理改变,并应用免疫组织化学方法检测肾组织基质金属蛋白酶-2(Matrix metal proteinase-2,MMP-2)的表达。[结果]1.UUO组与假手术组相比,BUN,Scr水平均显著增加,杜仲组较UUO组呈下降趋势。厄贝沙坦组作用效果与杜仲组相似,且两组间比较,无显著差异(P0.05)。2.与假手术组相比,肾组织行HE染色UUO组可见弥漫的肾小管上皮细胞空泡变性、扩张、部分萎缩,偶见坏死,肾间质增宽,大量的炎细胞浸润和间质纤维化,肾小球病理改变不明显,杜仲组上述改变均有所减轻,厄贝沙坦组病理改变与杜仲组相似,且两组间比较,无显著差异(P0.05)。3.与假手术组相比,Mas-son染色结果显示UUO组可见肾间质增宽、有大量胶原纤维增生,肾小球病变不明显,杜仲组上述改变均有所减轻,厄贝沙坦组病理改变与杜仲组相似,且两组间比较,无显著差异(P0.05)。4.MMP-2在假手术组大鼠肾间质中呈棕黄色颗粒状表达,UUO组中大鼠肾间质仅有少量表达且着色稀疏,杜仲组MMP-2表达较假手术组减轻,但其表达仍高于UUO组。厄贝沙坦组与杜仲组相似,且两组间比较,无显著差异(P0.05)。[结论]杜仲可上调MMP-2的表达,进而减缓肾纤维化的病程进展。     

姜黄素通过TGF-β/Smads信号通路对肾缺血再灌注后肾小管间质纤维化抑制作用

目的:探究姜黄素通过TGF-β/Smads信号通路对肾缺血再灌注后肾小管间质纤维化的抑制作用.方法:将40只健康SD大鼠按随机数字表法平均分为假手术组、模型组、低剂量组和高剂量组.使用夹闭法松开肾蒂的方法复制肾缺血再灌注大鼠模型.检测血清中血清肌酐(serum creatinine,Scr)和尿素氮(urea nitrogen,BUN)水平、肾组织胶原含量、肾组织的病理变化以及肾脏中转化生长因子-β1 (transforming growth factor β1,TGF-β1)、Smad3和Smad7蛋白表达水平.结果:假手术组肾小管形态正常,模型组肾小管间质呈现明显的病理变化,低剂量组和高剂量组肾小管间质纤维病理变化明显改善,且高剂量组改善程度高于低剂量组;模型组的肾小管间质纤维化评分、Scr、BUN、胶原含量、TGF-β1和Smad3明显高于假手术组,Smad7明显低于假手术组(P＜0.05);低剂量组和高剂量组肾小管间质纤维化评分、Scr、BUN、胶原含量、TGF-β1和Smad3均明显低于模型组,Smad7明显高于模型组(P＜0.05);高剂量组肾小管间质纤维化评分、Scr、BUN、胶原含量、TGF-β1和Smad3评分明显低于低剂量组,Smad7明显高于低剂量组(P＜0.05).结论:姜黄素对肾缺血再灌注后肾小管间质纤维化具有抑制作用,其作用机制可能为抑制TGF-β/Smad信号转导通路.     

益肾降浊冲剂对5/6肾切除模型大鼠肾纤维化及NF-κB和TGF-β_1/Smad3信号通路的影响

目的:探讨益肾降浊冲剂对5/6肾切除大鼠肾组织纤维化的影响及其机制。方法:利用大鼠5/6肾切除模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、益肾降浊冲剂低、中、高剂量组和大黄素组,每组10只。益肾降浊冲剂按照低、中、高剂量(9 g/kg,18 g/kg,36 g/kg)配成水煎剂,大黄素的剂量为500 mg/kg,灌胃量为1 mL/100 g,模型组和假手术给予等体积蒸馏水灌胃,连续用药8周。治疗结束后,取腹主动脉血检测各组大鼠尿素氮(BUN)、肌酐(SCR);ELISA法检测各组大鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;Masson染色观察肾脏纤维化程度;免疫组化法检测肾组织核因子κB(NF-κB)、转化生长因子β_1(TNF-β_1)及Smad3蛋白含量。结果:与假手术组相比,模型组大鼠血清BUN、SCR水平升高(P0.01),肾组织纤维化程度加重,血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高(P0.05,P0.01),NF-κB、TGF-β_1、Smad3蛋白表达升高(P0.05,P0.01)。与模型组相比,益肾降浊冲剂各剂量组大鼠血清BUN、SCR水平下降(P0.01),肾组织纤维化程度减轻,血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低(P0.05,P0.01),NF-κB、TGF-β_1、Smad3表达下降(P0.05,P0.01)。结论:益肾降浊冲剂可以改善尿毒症大鼠的肾脏功能,减轻肾脏纤维化,其机制可能与下调NF-κB和TGF-β_1/Smad3通路进而改善尿毒症大鼠肾纤维化有关。     

益肾解毒汤对5/6肾切除肾间质纤维化模型大鼠肾组织JAK-STAT-SOCS信号途径的影响

目的研究益肾解毒汤对5/6肾切除肾间质纤维化模型大鼠肾组织Janus激酶-信号传导及转录激活因子-细胞因子信号抑制物(JAK-STAT-SOCS)信号途径的影响,深入探讨益肾解毒汤干预肾间质纤维化、延缓肾脏疾病进展的作用机制。方法将35只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、AG490组、益肾解毒汤组4组,每组8只,建立5/6肾切除肾间质纤维化大鼠模型,造模成功后各组给予对应的药物或生理盐水,1月为1个疗程,共治疗3个疗程。末次给药后腹主动脉取血,测定血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)的含量;处死大鼠,取大鼠肾组织,一部分以多聚甲醛固定后行Masson染色,观察肾组织病理学改变,另一部分采用免疫印迹法检测P-JAK2,P-STAT3,SOCS3蛋白的表达水平。结果与假手术组比较,模型组肾间质纤维化程度明显加重,血清BUN,Scr含量及肾组织P-JAK2,P-STAT3蛋白表达水平明显升高,SOCS3蛋白表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P0.01);与模型组比较,AG490组及益肾解毒汤组肾间质纤维化程度明显减轻,血清BUN,Scr含量及肾组织P-JAK2,P-STAT3蛋白表达水平明显降低,SOCS3蛋白表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01),且益肾解毒汤组的作用显著优于AG490组,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论益肾解毒汤是有效抑制肾间质纤维化的中药制剂,可以增强JAKSTAT-SOCS信号途径的负反馈调节,降低JAK通路的磷酸化,从而抑制免疫炎症反应,减轻肾纤维化。     

血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1在梗阻性肾病肾间质中的表达和血竭素高氯酸盐对其的干预作用

目的 探讨在单侧输尿管梗阻(UUO)性肾病肾间质中血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1(serum and glucocorticoid induced kinase 1,SGK1)的表达及血竭素高氯酸盐(Dracohodin Perchlorate,DP)对其的干预作用.方法 用单侧输尿管梗阻的方法致大鼠肾间质纤维化,60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、低剂量和高剂量DP治疗组,分别在造模第3、7、14天后处死各组大鼠,采集静脉血检测肾功能(BUN、SCr)变化,肾组织标本用碘酸-席夫(PAS)染色确证发生纤维化病变,免疫组化技术检测肾组织SGK1蛋白的表达及DP干预后的变化.结果 与假手术组比较,模型组大鼠第7、14天血清BUN、SCr水平显著升高(P＜0.05),肾间质纤维化形成;与模型组比较,仅有DP高剂量治疗组大鼠血清肾功能指标好转(P＜0.05),肾间质纤维化好转.模型组大鼠肾间质SGK1蛋白的表达明显高于假手术组(P＜0.05),且随着梗阻时间延长其表达呈增强趋势;仅DP高剂量治疗组大鼠的肾间质SGK1蛋白显著低于模型组(P＜0.05).结论 在梗阻性肾病肾间质纤维化进程中,SGK1蛋白表达明显上调,而DP对SGK1蛋白的表达有显著的抑制作用,可能对肾间质纤维化病变起到一定延缓作用.     

白黎芦醇联合厄贝沙坦对肾间质纤维化大鼠模型的影响

目的观察白藜芦醇联合厄贝沙坦对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾间质纤维化的影响并探讨其可能机制。方法制备UUO肾间质纤维化大鼠模型,将40只大鼠随机分为5组,即假手术组、模型组、白藜芦醇组、厄贝沙坦组以及白藜芦醇和厄贝沙坦联合组,每组8只。术后2周处死大鼠,过碘酸-Schiff染色和脂氢过氧化病理分析肾间质纤维化指数,并应用免疫组织化学方法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),用Western Blot分析α-SMA、fibronectin、p-Smad3、p NF-κBp65、ICAM-1、TNF-α,用ELISA检测过氧化物酶体增殖剂激活受体(peroxisome proliferators-activated receptors,PPARs)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、巨噬细胞炎症蛋白2(marcophage inflammatory protein-2,MIP-2)和单核细胞趋化因子1(monocyte chemtaticprotein-1,MCP-1)。结果过碘酸-Schiff染色和脂氢过氧化结果显示模型组肾小管损伤面积远大于其它各组。免疫组化分析模型组中α-SMA的表达高于其它各组,联合治疗组α-SMA的表达在治疗组中表达较少,但高于假手术组。模型组大鼠肾间质α-SMA、fibronectin、p-Smad3、p NF-κBp65、ICAM-1、TNF-α的表达增多,联合治疗组较厄贝沙坦和白藜芦醇组的表达减少(P0.05),但厄贝沙坦和白藜芦醇组之间差异无统计学意义(P0.05)。模型组TGF-β1、MIP-2和MCP-1的水平高于其它各组,在治疗组中,联合治疗组这些细胞因子的水平低于另外2组。与模型组比较,其它组PPAR(α、β和γ)酶活性增加(P0.05)。结论白藜芦醇和厄贝沙坦可抑制NF-κB、TGF-β1等途径减缓肾纤维化的病程进展,且联合治疗对肾纤维化的减缓更显著。     

肾病Ⅰ号方对肾纤维化大鼠肾脏组织形态及Klotho表达的影响

目的:探讨肾病Ⅰ号方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾脏纤维化及Klotho表达的影响。方法:取雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组、西药组及中药低、中、高剂量组,每组5只。除假手术组外,其余各组大鼠行左侧输尿管结扎术,诱导肾纤维化模型;假手术组大鼠仅游离左侧输尿管,不行结扎。造模后第3天起,西药组灌胃给予1.67 mg·kg~(-1)·d~(-1)盐酸贝那普利片(洛丁新),中药低、中、高剂量组大鼠分别灌胃给予8.28、16.56、33.12 g·kg~(-1)·d~(-1)肾病Ⅰ号方汤剂,连续14 d。假手术组和模型组大鼠灌胃给予等体积0.9%NaCl溶液。末次给药后,采集大鼠尿液、血清、肾脏样本。检测尿液样本24 h尿蛋白(TP)含量以及血清样本尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平;HE和Masson染色后光镜下观察肾组织形态学变化,Western blot检测梗阻侧肾组织Klotho蛋白表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠Scr和BUN水平显著升高(P0.01);肾小管上皮细胞坏死,间质增厚,伴有炎症细胞浸润,并可见大量胶原纤维增生;梗阻侧肾组织Klotho蛋白表达明显减少(P0.01)。与模型组相比,西药组及中药中、高剂量组大鼠Scr和BUN水平显著降低(P0.01);肾小管和肾小球损伤明显减轻,且炎症细胞浸润和胶原纤维减少;梗阻侧肾组织Klotho蛋白表达显著上调(P0.01)。中药低剂量组各项检测指标与模型组相比,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:肾病Ⅰ号方能明显改善UUO大鼠的肾脏功能,减轻肾损伤并延缓纤维化进展,其作用机制可能与上调Klotho表达有关。     

L-Arg对肾性高血压心肌肥厚大鼠血管平滑肌核转录因子NF-κB和血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨L-精氨酸(L-Arg)对肾性高血压心肌肥厚大鼠血管平滑肌核转录因子NF-κB和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:选用雄性Wistar大鼠30只,制作二肾一夹(2K1C)型肾血管型高血压大鼠模型。实验随机将造模4周后模型成功大鼠分成3组,每组10只,A组:假手术组;B组:模型组;C组:2K1C+L-Arg(200 mg/kg.d-1)组。分别用RT-PCR和Western Blot的方法检测NF-κB和VEGF在肾性高血压心肌肥厚大鼠血管平滑肌的mRNA和蛋白表达。结果:B组、C组中大鼠血管平滑肌NF-κB、VEGF的mRNA表达明显高于正常对照组(均P<0.001);并且B组大鼠血管平滑肌NF-κBmRNA表达与C组比较差异有统计学意义(P<0.001)。NF-κB、VEGF蛋白质在正常对照组、B组和C组中均有表达。B组和C组与正常组比较差异有统计学意义(均P<0.001)。血管平滑肌中NF-κB、VEGF蛋白质在B组表达与C组比较差异也有统计学意义(P<0.05)。结论:核转录因子NF-κB和VEGF在肾性高血压心肌肥厚大鼠血管平滑肌中高表达,可能共同参与了高血压心肌肥厚的形成。L-Arg可能通过抑制血管平滑肌中NF-κB和VEGF的蛋白表达能有效地治疗高血压及逆转心肌肥厚。     

罗格列酮联合替米沙坦对单侧输尿管梗阻大鼠慢性肾纤维化的改善作用

[目的]观察罗格列酮、替米沙坦单用及联合使用对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾脏纤维化的作用。[方法]大鼠随机分成5组,即假手术组、模型组、罗格列酮干预组、替米沙坦干预组、联合用药组。术后14 d处死,RT-PCR方法检测肾皮质TGF-β1及TIMP？1 mRNA的表达,Western blotting方法检测肾皮质中MMP-9蛋白的表达。[结果]罗格列酮、替米沙坦单用都可减轻UUO模型大鼠肾脏TGF-β1和TIMP-1高表达;二者联合应用时,肾组织TGF-β1和TIMP-1表达下降更有显著性意义（P〈0.05）。罗格列酮、替米沙坦单用或联合应用对UUO模型大鼠肾组织MMP-9表达无明显影响（P〉0.05）。[结论]罗格列酮、替米沙坦均可下调TGF-β1的表达,纠正MMP-9/TIMP-l的失衡。     

缺血预适应对大鼠肾移植早期组织学及ＩＫＫβ、ＮＦ-kＢ、ＴＮＦ-αｍＲＮＡ表达的影响

目的:探讨缺血预适应(IPC)对大鼠同种异体移植肾早期组织学及IKKβ、NF-κB、TNF-αmRNA表达的影响.方法:36只成年SD大鼠为供受体,并随机分为以下三组:假手术组(A),剖腹探查后关腹;普通移植组(B),同种原位肾移植;缺血预适应组(C),供肾15 min缺血10 min灌注预处理肾移植.移植术后24 h,检测各组Scr、BUN水平及移植肾组织损伤程度,RT-PCR技术分别检测TNF-α, I κB激酶β(IKKβ)及NF-κB P65亚基的转录水平.结果:肾移植后24 h,与B组相比,C组肾小管损伤程度明显减轻(肾小管损伤指数P＜0.05),TNF-αmRNA表达亦明显减弱(P＜0.05);但B、C两组IKKβ及P65 mRNA表达无明显差异(P＞0.05);B、C两组Scr、BUN水平较A组明显升高,但两组间未有明显差异(P＞0.05).结论:15 min/10 min缺血预适应能够明显减轻大鼠移植肾早期缺血再灌注损伤,其保护作用可能与TNF-α表达抑制,TNF-α/IKKβ/NF-κB P65正反馈信号阻断有关.     

银杏叶对肾间质纤维化防治作用的实验研究

目的观察银杏叶对肾间质纤维化的防治作用及其效果。方法45只雄性SD大鼠随机分为3组,假手术组、模型组和治疗组,每组15只动物。治疗组在单侧输尿管结扎(unilated ureteral obstruction,UUO)基础上给予银杏叶(300 mg/kg.d-1)灌胃治疗,1次/d;模型组在UUO基础上给予生理盐水灌胃;对照组除不结扎输尿管外,其余同模型组。分别于实验第3、7、14 d分批处死大鼠,每次处死5只。对大鼠结扎侧肾组织进行形态学和免疫组织化学观察。采用HE、Masson两种染色观察梗阻侧肾组织病理学的改变,采用免疫组织化学的方法检测肾组织中转移生长因子-β1(transforming growth factor,βTGF-β1)、核因子kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、α-平滑肌肌动蛋白(-αsmooth muscle actin,-αSMA)的表达,采用氯胺T法测定肾组织中羟脯胺酸的含量。结果大鼠UUO术后3d,肾间质水肿,单核细胞浸润。14 d后肾小管萎缩,间质增宽,肾组织中TGF-β1、NF-κB、α-SMA的表达及肾组织中胶原蛋白含量明显增加,且随着梗阻时间延长,其阳性表达率也增加。银杏叶治疗组肾组织中TGF-β1的表达及胶原蛋白的含量较模型组明显降低,单核细胞浸润减轻,肾脏病理学明显改善。结论银杏叶能够抑制UUO大鼠肾间质炎性细胞浸润,减少肾间质胶原蛋白的含量,有防治UUO大鼠肾间质纤维化的作用。     

傣药雅盼对单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1/Smads信号转导通路的影响

目的 观察傣药雅盼对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠转化生长因子(TGF)-β1/Smads信号转导通路的影响,从而探讨该药对肾间质纤维化抑制作用的可能机制.方法 120只雄性大鼠行单侧输尿管结扎建立UUO大鼠模型,生理盐水灌胃或给药28 d后收集血清检测尿素氮(BUN)、肌酐(Scr),处死大鼠,取其肾组织行HE染色和Masson染色,免疫组织化学法检测TGF-β1、Smad2、Smad7在肾组织的表达;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测mRNA的表达;Western blot检测蛋白表达.结果 傣药雅盼各剂量组能降低大鼠BUN、Scr水平,并减轻肾小管-间质炎性细胞及肾间质纤维化程度,同时使TGF-β1、Smad2 mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05),而Smad7 mRNA和蛋白表达下调(P＜0.05).结论 傣药雅盼备浓度组均可以在一定程度抑制Smad2 mRNA的表达,上调Smad7 mRNA的表达,通过干预TGF-β1/Smads信号转导通路抑制了TGF-β1在肾组织的表达从而对UUO大鼠肾间质纤维化.     

替米沙坦对2型糖尿病大鼠肾组织MCP-1、NF-κB表达的影响

目的观察替米沙坦对2型糖尿病大鼠肾脏病变中单核巨噬细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、核因子-κB（NF-κB）表达的影响。方法雄性Wistar大鼠30只,随机分成正常对照组（A组,n=10）和糖尿病模型组（n=20）。A组给予常规饲料;模型组给予高糖高脂饲料,4周后腹腔注射链尿佐菌素（STZ）30mg/kg,造模成功后模型组再随机分成糖尿病组（B组,n=10）和替米沙坦治疗组（C组,n=10）,C组每天给予替米沙坦5mg/kg灌胃。替米沙坦干预12周后,用免疫组化法检测各组大鼠MCP-1、NF-κB在肾脏表达的变化。结果与A组比较,B、C组大鼠肾组织中MCP-1、NF-κB表达明显增加（P〈0.01）;C组比B组MCP-1、NF-κB表达明显降低（P〈0.01）。结论2型糖尿病大鼠肾组织中MCP-1、NF-κB表达明显增加,替米沙坦可通过降低肾组织MCP-1、NF-κB表达,从而减轻肾脏的炎症反应。     

下调miR-192对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的干预作用及机制

目的探讨下调miR-192对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾损伤后肾间质纤维化的干预作用及机制。方法将45只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、antagomir-192组。除假手术组外,其他两组大鼠均通过左侧输尿管结扎建立肾间质纤维化大鼠模型。术后第1、7、14天antagomir-192组大鼠给予antagomir-192尾静脉注射,而假手术组和模型组大鼠给予等量生理盐水尾静脉注射。第21天后处死大鼠,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测梗阻侧肾组织miR-192的表达变化,心脏取血测定大鼠血清中尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)含量,HE染色观察梗阻侧肾组织形态学病理改变,Masson染色计算梗阻侧肾间质胶原纤维沉积率,Western blotting检测梗阻侧肾组织上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)及I型胶原蛋白(collagen I)的表达变化。结果与假手术组比较,模型组大鼠肾组织miR-192表达水平、血清中BUN、Cr含量、肾间质损伤评分、肾间质胶原纤维沉积率均显著升高(P0.01),肾组织E-cadherin蛋白表达明显降低(P0.01),α-SMA、vimentin及collagen I蛋白的表达均明显升高(P0.01)。与模型组比较,antagomir-192组大鼠肾组织miR-192的表达水平、血清中BUN、Cr含量、肾间质损伤评分、肾间质胶原纤维沉积率均显著降低(P0.01),肾组织E-cadherin蛋白表达明显增高(P0.01),α-SMA、vimentin及collagen I蛋白表达均明显降低(P0.01)。结论 miR-192在肾间质纤维化大鼠肾组织中表达升高,下调miR-192能够抑制UUO大鼠肾间质纤维化从而起到保护作用。