右美托咪定预处理对大鼠缺血再灌注心律失常的影响及机制研究

目的观察右美托咪定预处理对大鼠缺血再灌注心律失常的影响及机制。方法 2015年3-6月于武汉大学基础医学院选择30只雄性SD大鼠,随机分为假手术组(SO组)、缺血再灌注组(I/R组)、右美托咪定预处理组(DEX组)各10只。I/R组、DEX大鼠先结扎冠状动脉30 min引起心肌缺血,再松开结扎线给予心肌再灌注120min。SO组只带线不结扎,DEX组在缺血前2 h给予右美托咪定100μg/kg腹腔注射,I/R组给予等体积生理盐水。监测记录各组缺血再灌注心律失常的发生情况,以实时定量PCR法检测心肌组织L型钙通道(Cav1.2)、钠钙交换体(NCX)mRNA的水平。结果 SO组心律无明显变化,心律失常评分为0分。DEX组心律失常发生率低于I/R组,缺血30 min和再灌注120 min心律失常评分均低于I/R组(4.5±0.6 vs.2.1±0.4,3.7±0.5 vs.1.1±0.3,P均<0.05)。与SO组比较,I/R组、DEX组心肌组织Cav1.2和NCX的mRNA水平均升高,而DEX组较I/R组明显降低(P均<0.05)。结论右美托咪定预处理可减少缺血再灌注心律失常发生,与减少Cav1.2和NCX的mRNA水平,抑制钙超载有关。     

炎性小体在右美托咪定减轻大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用

目的 评价炎性小体(NLRP3)在右美托咪定减轻大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用。方法 清洁级成年雄性Sprague-Dawley 大鼠32只,采用数字表法随机分为假手术组(Sham组,n=8)、肾缺血再灌注损伤组(I/R组,n=8)、肾缺血再灌注损伤+右美托咪定预处理组(I/R+Dex预处理组,n=8)(于缺血前1h腹腔注射右美托咪定10μg/kg)和肾缺血再灌注损伤+右美托咪定后处理组(I/R+Dex后处理组,n=8),于再灌注后1h腹腔注射右美托咪定10μg/kg。肾缺血再灌注损伤模型采用夹闭双侧肾动脉45min后,恢复灌注24h。采用全自动生化分析仪测定各组血肌酐(Cr)和血尿素氮(BUN);酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清TNF-α和IL-10的水平;TUNEL法检测各组凋亡细胞的数量;Western blot法检测NLRP3、凋亡信号(caspase-1、Cleaved caspase-1、Bcl-2)的表达。结果 与Sham组比较,I/R组血清Cr和BUN、炎性标志物(TNF-α和IL-10)水平及肾组织NLRP3、caspase-1和Bcl-2表达水平明显升高(P<0.05),同时肾小管凋亡细胞显著增多(P<0.05);与I/R组比较,I/R+Dex预处理组和I/R+Dex后处理组血Cr和BUN、TNF-α和IL-10水平均明显降低(P<0.05),肾组织NLRP3、caspase-1、Cleaved caspase-1和Bcl-2表达水平显著降低;肾小管凋亡细胞显著减少(P<0.05)。结论 右美托咪定可显著减轻大鼠肾缺血再灌注损伤,其可能与抑制NLRP3,降低炎性反应和细胞凋亡有关。     

线粒体融合与裂变在右美托咪定减轻小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及其机制

目的 探讨右美托咪定（DEX）对小鼠脑缺血/再灌注（I/R）损伤的影响及线粒体融合与裂变在其中的作用。方法 将雄性ICR小鼠随机分为假手术（sham）组、缺血/再灌注（I/R）组、缺血/再灌注+右美托咪定（I/R+DEX）组、缺血/再灌注+右美托咪定+dorsomorphin（I/R+DEX+dorsomorphin）组。采用改良线栓法制备小鼠大脑中动脉栓塞模型,于缺血前30 min 腹腔注射DEX50 μg/kg,缺血1 h,再灌注24 h;采用Longa五分法对小鼠进行神经行为学评分;TTC染色法检测小鼠脑梗死体积,并计算脑梗死体积百分率;透射电镜法观察线粒体形态变化;免疫印迹法检测磷酸化AMP蛋白激酶、线粒体融合蛋白2、线粒体裂变相关蛋白的表达变化。结果 DEX 预处理降低了 I/R 组小鼠神经行为学评分和脑梗死体积百分率,在使用 DEX 的基础上加用dorsomorphin后,小鼠神经行为学评分和脑梗死体积百分率升高（P<0.01）;电镜结果显示,DEX减轻了缺血再灌注导致的线粒体损伤（P<0.01）,线粒体形态有所恢复。免疫印迹检测结果显示,DEX预处理增加了磷酸化AMP蛋白激酶、线粒体融合蛋白2表达,降低了线粒体裂变相关蛋白表达,而加用dorsomorphin后,磷酸化AMP蛋白激酶、线粒体融合蛋白2表达明显降低,线粒体裂变相关蛋白表达显著增加（P<0.01）。结论 DEX预处理可以减轻I/R损伤,其机制可能与激活AMPK从而促进线粒体融合 及抑制线粒体裂变有关。     

超声造影定量评价肾缺血再灌注损伤后兔肾皮质血流动力学改变

目的 探讨超声造影定量分析技术评价兔肾缺血再灌注损伤后不同阶段兔肾皮质血流灌注的变化及其与肾脏病理改变的相关性.方法 15只雄性家兔术前行左肾超声造影作为对照组（R0,n=15）,然后将其随机分为缺血后再灌注第1d组（R1,n=5）、第3d组（R2,n=5）、第5d组（R3,n=5）.均切除右肾并建立左肾缺血再灌注损伤模型,分别行超声造影并应用时间-强度曲线测量灌注峰值时间（TTP）、曲线上升支斜率（β）、灌注峰值强度（A）、曲线下面积（AUC）,统计各参数的变化并观察与病理改变的相关性.结果 肾缺血恢复灌注后各组与对照组相比TTP、AUC值增加,β值降低（P〈0.05）;缺血再灌注组各组间TTP,β差异有统计学差异（P〈0.05）,其中恢复灌注后第3d TTP的延长和β的下降最为显著.结论 超声造影定量分析技术能反映兔肾血流灌注异常,其中TTP,β是评价肾血流灌注损伤价值的有效指标.     

盐酸右美托咪定预处理对缺血-再灌注损伤大鼠心肌Bax和Bcl-2表达的影响

目的研究盐酸右美托咪定对大鼠心肌缺血-再灌注损伤时心肌凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达的影响。方法将21只健康SD大鼠随机分为3组:假手术组(sham组,n=7)、缺血-再灌注组(I/R组,n=7)、缺血-再灌注+盐酸右美托咪定组(DEX组,n=7)。采用结扎左冠状动脉前降支的方法制备在体大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型。采用RT-PCR、免疫组化方法检测Bcl-2和Bax mRNA、蛋白的表达,TUNEL法检测凋亡细胞TTC染色测定心肌梗死面积。结果与sham组比较,I/R组Bcl-2和Bax mRNA和蛋白表达增加(P<0.05);与I/R组比较,DEX组Bcl-2mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),Bax mRNA和蛋白表达下降(P<0.05),凋亡细胞明显减少(P<0.01),心肌梗死面积减小(P<0.05)。结论盐酸右美托咪定预处理可上调心肌缺血-再灌注损伤大鼠心肌Bcl-2mRNA和蛋白表达,下调Bax mRNA和蛋白表达,表明盐酸右美托咪定在心肌缺血-再灌注损伤中有抗凋亡的作用。     

右美托咪啶抑制NF-κB活化减轻肢体缺血再灌注损伤的研究

目的探讨右美托咪啶预处理对抑制NF-κB活化及减轻肢体缺血再灌注损伤的影响及机制。方法将21只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I/R组）、缺血再灌注+右美托咪啶预处理组（DEX组）,每组各7只。DEX组在麻醉后腹腔注射右美托咪啶25滋g/kg,其余两组给予相应体积的0.9%氯化钠溶液,30min后单侧股部切口,无创动脉夹夹闭股动脉,用橡皮筋以恒定张力结扎该侧肢体,Sham组仅行股部手术、分离股动脉不夹闭,其余两组缺血3h后去除动脉夹及橡皮筋。采用ELISA法检测血清IL-1、IL-6、TNF-α,Westernblot检测胞核NF-κB,光镜观察腓肠肌形态,并测定湿/干重比值。结果显微镜下可见Sham组大鼠腓肠肌肌纤维排列整齐、间质少有炎性细胞浸润,I/R组大鼠腓肠肌肌纤维排列紊乱并出现明显水肿、间质中出现大量炎症细胞,DEX组大鼠腓肠肌肌纤维排列欠规则、间质中有少量炎性细胞,但较I/R组有所好转。与Sham组相比,I/R组湿/干重比值、IL-1、IL-6、TNF-α、NF-κB水平均明显升高（均P＜0.05）;与I/R组相比,DEX组湿/干重比值、IL-1、IL-6、TNF-α、NF-κB水平均明显降低（均P＜0.05）。结论右美托咪啶可抑制NF-κB信号通路活化,减轻肢体缺血再灌注损伤。     

右美托咪定对肝缺血再灌注损伤模型大鼠炎性因子及肾功能的影响

目的探讨右美托咪定对肝缺血再灌注损伤模型大鼠炎性因子及肾功能的影响。方法选择Wistar大鼠36只,分为对照组、缺血再灌注损伤模型组(I/R组)、右美托咪定干预组(Dex组),I/R组和Dex组建立肝脏缺血再灌注损伤模型,给予Dex组右美托咪定干预。再灌注后12 h,采集血清并测定ALT、AST、BUN、Cr的水平,收集肝脏组织并测定炎性因子的水平。结果再灌注后12 h,I/R组大鼠血清中丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平高于对照组,Dex组大鼠血清中ALT、AST的水平低于I/R组(均P<0.05);I/R组大鼠肝脏组织中白细胞介素-1 (IL-1)、白细胞介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平高于对照组,Dex组大鼠肝脏组织中IL-1、IL-6、TNF-α的水平低于I/R组(均P<0.05);I/R组大鼠血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)的水平高于对照组,Dex组大鼠血清中BUN、Cr的水平低于I/R组(均P<0.05)。结论右美托咪定能够减轻肝缺血再灌注损伤模型大鼠的肝损伤,改善肾功能,其机制与抑制炎性因子释放有关。     

超声造影与核素肾动态显像在评价兔肾缺血再灌注损伤中的对比研究

目的：探讨超声造影及核素肾动态显像在评价兔肾缺血再灌注损伤中的诊断价值,并比较两种检测手段的优劣势。方法：建立肾缺血再灌注损伤模型,分别于缺血前及缺血再灌注后24h行超声造影及核素动态显像检查,并对造影的时间-强度曲线（TIC）各参数以及核素肾动态显像的肾小球滤过率（GFR）进行分析,比较其前后变化。结果：超声造影检查组缺血前TIC曲线上升支斜率（Grad）明显高于缺血再灌注24h组,开始增强时间（arrival time,AT）、灌注峰值时间（time to peak,TTP）、曲线下面积（AUC）明显低于缺血再灌注后24h。而肾皮质灌注峰值强度变化（amplitude of peak intensity,A）值在缺血前及再灌注24h后无明显改变。核素动态显像组所得GFR值在缺血再灌注后24h较缺血前明显降低。结论：核素肾动态显像可以直接反映肾功能状态,但具有放射性损伤且误差较大。超声造影诊断能对肾脏局部血流灌注进行定量分析,间接评价肾功能状态,具有安全、费用低、重复性强、无明显禁忌症和并发症等优点。     

右美托咪啶预处理对大鼠肾缺血再灌注后肝肾抗氧化能力的影响

目的探究右美托咪啶（dexmedetomidine,DEX）预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤后。肾及肝抗氧化能力的影响。方法90只雄性SD大鼠随机分为3组（n=30）,右美托咪啶预处理组（DEX组）,缺血再灌注组（IRI组）,假手术组（Sham组）。DEX组于建模前30min腹腔注射DEX（100μg／ks）,其余两组腹腔注射等量0．9％氯化钠注射液,建立肾缺血再灌注模型,再灌注后2h、8h、24h肝肾组织匀浆检测超氧化物歧化酶（serum levels of superoxide dismutase,SOD）、一氧化氮（nitric oxide,NO）、乳酸（lactate dehydrogenases,LD）、还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）及总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T—AOC）。结果与IRI组相比,DEX组肾匀浆SOD升高,总NO降低,T—AOC升高（P〈0．05）,LD再灌注8h后降低明显（P〈0．05）;肝SOD升高,总NO升高,T—AOC升高（P〈0．05）,LD再灌注8h、24h降低显著（P〈0．05）。结论右美托咪啶预处理可提高大鼠肾缺血再灌注后肾及肝的抗氧化能力,减少乳酸堆积。     

PARP⁃1在右美托咪定减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的：评价聚二磷酸腺苷核糖聚合酶?1（PARP?1）在右美托咪定减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法：健康清洁级雄性成年SD大鼠48只,体重200~240 g,8~12周龄,采用随机数字表法分为3组（n=16）：假手术组（S组）、缺血再灌注组（I/R组）和缺血再灌注+右美托咪定组（I/R+Dex组）。S组仅开胸穿线不结扎;I/R组和I/R+Dex组采用结扎冠状动脉左前降支30 min恢复再灌注120 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型;I/R+Dex组于再灌注前15 min腹腔注射右美托咪定5 μg/kg,S组和I/R组给予等容量生理盐水。分别于缺血前（T0）、缺血30 min（T1）、再灌注60 min（T2）和再灌注120 min（T3）时观察并记录平均动脉压（MAP）、心率（HR）和心率收缩压乘积（RPP）;再灌注120 min时取左心室组织,称重并计算心肌梗死体积比率;采用Western blot法检测心肌组织PARP?1活化产物PAR和凋亡相关蛋白Caspase?3的表达;采用ELISA法测定心肌组织中TNF?α和IL?6的含量。结果：与T0时比较,I/R组和I/R+Dex组在T1~T3时MAP、HR和RPP水平降低（P＜0.05）;与S组比较,I/R组和I/R+Dex组在T1~T3时MAP、HR和RPP水平降低,梗死体积比率、TNF?α和IL?6含量升高,PAR和Caspase?3表达水平上调（P＜0.05）;与I/R组比较,I/R+Dex组在T1、T2时MAP、HR和RPP水平降低,T3时水平升高,梗死体积比率、TNF?α和IL?6含量降低,PAR和Caspase?3表达水平下调（P＜0.05）。结论：右美托咪定可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,机制与降低PARP?1活化抑制炎症和凋亡有关。     

超声造影定量评价兔肾缺血再灌注损伤

目的 通过灰阶超声造影及其量化分析技术评价兔肾缺血后不同时间的再灌注损伤.方法 术前先对10只新西兰家兔行左肾超声造影检查作为对照(R_0组,n=10);再将10只家兔随机分为术后缺血30 min后再灌注30 min组(R_1组,n=5)和再灌注60 min组(R_2组,n=5),分别建立肾缺血再灌注模型.灰阶超声造影观察各组肾皮质灌注,并分析灌注峰值时间(TP)、灌注峰值强度(A)、Qontraxl时间-强度曲线(TIC)上升斜率(β)和曲线下面积(AUC).结果 随着再灌注损伤加重,超声造影显示肾皮质灌注回声无明显变化;TP和AUC呈增加趋势,β值逐渐降低,组间差异有统计学意义(P<0.05或尸<0.01),其中AUC变化显著(P<0.01);A值无明显变化(P>0.05).结论 AUC是评价兔肾缺血再灌注损伤的有效指标.     

超声造影定量评价兔肾缺血再灌注损伤

目的 通过灰阶超声造影及其量化分析技术评价兔肾缺血后不同时间的再灌注损伤.方法 术前先对10只新西兰家兔行左肾超声造影检查作为对照（R_0组,n=10）;再将10只家兔随机分为术后缺血30 min后再灌注30 min组（R_1组,n=5）和再灌注60 min组（R_2组,n=5）,分别建立肾缺血再灌注模型.灰阶超声造影观察各组肾皮质灌注,并分析灌注峰值时间（TP）、灌注峰值强度（A）、Qontraxl时间-强度曲线（TIC）上升斜率（β）和曲线下面积（AUC）.结果 随着再灌注损伤加重,超声造影显示肾皮质灌注回声无明显变化;TP和AUC呈增加趋势,β值逐渐降低,组间差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）,其中AUC变化显著（P〈0.01）;A值无明显变化（P〉0.05）.结论 AUC是评价兔肾缺血再灌注损伤的有效指标.     

缺血再灌注的兔肾动脉阻力指数与肾组织TNF-α表达的相关性研究

目的探讨肾组织肿瘤坏死因子(TNF-α)表达与肾缺血再灌注(I/R)后肾动脉阻力指数(RI)的相关性,为评价肾缺血再灌注损伤(IRI)的发生提供可行方法。方法将48只大白兔随机分为假手术组、I/R组。应用彩色多普勒血流显像(CDFI)监测各组大白兔主肾动脉(MRA)、段动脉(SRA)、叶间动脉(IRA)的RI变化,免疫组化检测肾组织中TNF-α的表达。结果与假手术组比较,I/R组大白兔再灌注2h肾动脉无明显RI改变,再灌注8h及24h分别出现SRA、IRA的RI增大及MRA、SRA、IRA的RI增大(P<0.05)。I/R组8、24h大白兔肾组织的TNF-α表达水平高于假手术组(P<0.05)。各组MRA、SRA和IRA的RI与肾组织TNF-α表达呈正相关(P<0.05)。结论利用CDFI检测缺血再灌注的肾动脉的RI是一种无创、及时的评价肾IRI发生的可行方法。     

早期CKD患者超声造影参数及与实验室指标的相关性研究

目的 探讨超声造影（CEUS）定量分析对评估早期慢性肾脏疾病（CKD）血流灌注改变以及病变严重性的价值。方法 20例临床确诊CKD 1~3期患者纳入研究（病例组）,同时以15例正常成年人为对照（对照组）。对所有受检者进行左肾皮质实时灰阶CEUS,比较两组受检者反映肾脉血流灌注的时间-强度曲线（TIC）参数差异。将两组受检者差异有统计学意义的TIC参数与病例组估算肾小球滤过率（eGFR）、尿蛋白定量与胱抑素C进行相关性分析。结果 病例组与对照组比较,TIC的上升时间（rise time,RT)、曲线下面积（area under the curve,AUC）、峰值半降时间（time from peak to one half）、达峰时间（time to peak,TTP）的差异有统计学意义（P<0.05）。eGFR与上述4个TIC参数均呈负相关（P均<0.05）,尿蛋白定量与其中3个TIC参数（除外RT）、胱抑素C与4个TIC参数均呈正相关（P均<0.05）。结论 超声造影定量分析数据能反映早期肾脏疾病患者血流灌注与正常人的不同,并与反映肾脏损害的实验室数据相关性较高,为评估肾脏疾病患者疾病程度提供了影像学的定量证据。     

兔自体骨髓干细胞移植对缺血再灌注损伤肾功能的影响

目的建立兔肾脏缺血再灌注(I/R)损伤模型,通过肾动脉灌注移植自体骨髓干细胞,观察其对I/R损伤肾功能的影响。方法分离28只兔的骨髓干细胞,建立肾脏I/R损伤模型后随机均分为移植组和对照组。移植组于肾血流恢复后经肾动脉推注骨髓干细胞悬液,对照组同样方法推注等量生理盐水。分别于I/R损伤前和I/R损伤后第1、3、5、7、14、21、28天于兔耳缘静脉采血,检测血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN),观察肾功能情况,相同时间点取肾组织行病理学观察。结果I/R损伤后第1天和第3天两组动物Scr、BUN均达到最高水平,以后逐渐下降;第7天后移植组Scr及BUN水平逐渐低于对照组,到实验观察结束时的第28天,对照组Scr和BUN分别为(135.6±32.5)μmol/L和(10.9±2.5)mmol/L,移植组Scr和BUN分别为(90.1±11.1)μmol/L和(8.0±1.5)mmol/L,两组间有显著性差异(P<0.05)。病理学观察发现,I/R损伤后肾小管上皮细胞变性、坏死、脱落。结论骨髓干细胞移植能较早的降低肾脏I/R损伤后血清Scr和BUN水平,在一定程度上促进I/R损伤后肾功能修复。     

G蛋白偶联受体激酶4调控小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤的机制探讨

目的 探讨G蛋白偶联受体激酶4(G protein-coupled receptor kinase 4,GRK4)对小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤的影响及其作用机制.方法 取SPF级健康野生型[8周龄、体质量(21.34±0.42)g]和GRK4转基因型[8周龄、体质量(21.87 ±0.68)g] C57BL/6小鼠,各12只.各型分别按随机数字表法分为4组(n=6):野生型假手术对照组、野生型肾脏缺血再灌注损伤组、GRK4转基因型假手术对照组、GRK4转基因型肾脏缺血再灌注损伤组.假手术对照组均采用开腹后不阻断肾动脉血流;缺血再灌注损伤组均采用夹闭肾动脉缺血45 min再灌注24 h,建立小鼠肾脏I/R模型.各组处死小鼠后,取血标本进行肾功能检测(血肌酐、血尿素氮);HE染色观察肾脏病理形态改变,并行肾小管损伤半定量评分;测定肾脏组织中过氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)等氧化应激水平改变;TUNEL染色检测肾脏组织中细胞凋亡情况;蛋白质免疫印记方法检测各组小鼠肾脏组织中GRK4和AT1受体的蛋白表达变化.结果 野生型小鼠肾脏I/R模型后肾功能受损,血肌酐、血尿素氮升高,肾脏小管上皮细胞脱落、死亡(P＜0.05);肾脏组织中GRK4蛋白表达含量增加,差异有统计学意义(P＜0.05).在GRK4过表达小鼠上研究结果发现,过表达GRK4的肾脏在缺血再灌注损伤后,肾功能损害进一步加重;肾脏病理损伤评分明显增加(P＜0.05).肾脏氧化应激水平明显上升,总SOD下降和MDA升高(P＜0.05);肾脏凋亡细胞数目显著增多(P＜0.05).肾脏组织中AT1受体表达量增加(P＜0.05),AT1受体含量的升高可以加重小管细胞氧化应激和凋亡的发生.结论 GRK4可以通过上调肾脏AT1受体表达,增加肾脏氧化应激水平和肾小管细胞凋亡,加重肾脏缺血再灌注损伤.     

缺血预处理及后处理对家兔肾脏缺血-再灌注损伤的保护机制研究

目的探讨缺血预处理及缺血后处理对家兔肾脏缺血-再灌注损伤的保护作用。方法首先建立家兔肾脏缺血-再灌注模型。40只雄性家兔随机分为4组（n=10）：假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I/R组）、缺血预处理组（IPC组）及缺血后处理组（IPO组）。再灌注60min后分别检测血清中丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性,光镜下观察肾组织病理学改变。结果与Sham组比较,I/R组、IPC组和IPO组血清SOD活性降低,MDA含量升高,病理损伤明显;与I/R组相比,IPC组和IPO组血清SOD活性升高,MDA含量降低,病理损伤减轻。结论缺血预处理及后处理能够减轻家兔肾脏缺血-再灌注损伤,其机制与增强机体的抗氧化损伤能力有关。