尿毒清胶囊及其拆方对5/6肾切除大鼠肾组织TGF-β1 mRNA表达的影响

[目的]观察尿毒清胶囊及其拆方对慢性肾功能哀竭(CRF)模型大鼠肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达的影响.[方法]采用5/6肾切除法复制CRF大鼠模型,造模成功的SD大鼠随机分为模型组、黄芪组(剂量1.5 g·kg-1·d-1)、丹参组(剂量为1 g·kg-1·d-1)、大黄组(剂量为1 g·kg-1·d-1)、黄芪丹参大黄组(剂量为1 g·kg-1·d-1)、尿毒清组(剂量为1 g·kg-1·d-1);各给药组灌胃给药6周后,检测各组大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)水平,并采用逆转录聚合酶链反应检测各组大鼠肾组织TGF-β1 mRNA的表达水平.[结果]各给药组均可降低血清BUN、SCr水平,与模型组比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01),其中尿毒清组降低SCr水平作用优于大黄组(P＜0.05);TGF-β1 mRNA在各组肾组织中均有不同程度的表达,其中模型组表达最强烈,尿毒清组和黄芪丹参大黄组表达最轻.[结论]尿毒清治疗CRF的作用与其能下调TGF-β1 mRNA在肾组织中表达有关,且中药复方作用优于单味中药.     

健脾益肾方对5/6肾切除大鼠肾组织TGF-β1表达的影响

目的:探讨健脾益肾方治疗慢性肾功能衰竭(CRF)及其抗肾纤维化的作用机制,为临床应用提供实验依据.方法:将70只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(假手术组)10只、模型组、低剂量治疗组、高剂量治疗组各20只.除假手术组外其余各组均行5/6肾切除手术制作CRF动物模型.于造模第二次手术后1 w开始干预,干预8 w后取血清及肾组织标本,全自动生化分析仪检测血清尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr);免疫组织化学方法检测肾组织TGF-β1的表达.结果:模型组、低剂量治疗组、高剂量治疗组大鼠血清BUN、Scr、肾脏组织TGF-β1与假手术组比较,有显著性差异(P＜0.01);模型组血清BUN、Scr、肾脏组织TGF-β1与高、低剂量治疗组比较,有显著性差异(P＜0.05,P＜0.01).结论:健脾益肾方是治疗CRF的有效方剂,其机理可能与抑制大鼠肾组织内TGF-β1等细胞因子的表达,从而抑制参与肾纤维化的细胞增殖和转分化,延缓肾纤维化的进展,达到治疗和延缓CRF进展的目的.     

健脾益肾方对5／6肾切除大鼠肾组织TGF-β1 mRNA表达的影响

目的:探讨健脾益肾方治疗慢性肾衰竭(CRF)及其抗肾纤维化的作用机制.方法:将Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组(N组),模型组(M组),健脾益肾方低剂量治疗组(L组)、高剂量治疗组(H组),除N组外均行5/6肾切除手术复制CRF动物模型.治疗组给予健脾益肾方灌胃.于第8周后用全自动生化分析仪检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr);RT-PCR法检测肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA的表达.结果:各组大鼠肾脏均有TGF-β1 mRNA表达,N组有较弱表达,M组、L组大鼠肾组织表达较N组显著增加(P＜0.01),H组表达较N组增加,但差异无显著性(P＞0.05);L组及H组表达较M组明显减少(P＜0.01);H组表达较L组均显著减少(P＜0.01).结论:健脾益肾方可能通过抑制大鼠肾组织TGF-β1的表达,延缓肾纤维化的进展,达到治疗和延缓CRF进展的目的.     

益气化瘀中药对糖尿病皮肤溃疡大鼠转化生长因子β1的影响

目的:探讨益气化瘀中药及其拆方(益气方和化瘀方)促进糖尿病溃疡创面愈合的分子机制。方法:将60只大鼠随机分为益气化瘀组、益气组、化瘀组、贝复济组、模型组和正常对照组。通过腹腔注射链脲佐菌素和外科方法建立糖尿病大鼠全层皮肤缺损模型,给予不同中药煎剂口服及贝复济外用对照,运用免疫组织化学、图像分析和Western blotting的技术手段分别检测各组治疗后创面新生肉芽组织中转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达水平。结果:糖尿病溃疡模型组TGF-β1表达水平低于正常对照组(P<0.01);各治疗组TGF-β1表达水平高于糖尿病溃疡模型组(P<0.01);益气化瘀组TGF-β1表达水平高于拆方组和贝复济组(P<0.05)。结论:TGF-β1表达水平下降可能是糖尿病创面难以愈合的机制之一,益气化瘀中药可能是通过提高创面TGF-β1的表达水平,促进创面愈合。     

云南灯盏花胶囊对慢性肾功能衰竭大鼠TGF-β_1与PAI-1 mRNA表达及肾功能的影响

目的:研究中药复方制剂云南灯盏花胶囊对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠肾功能及肾组织纤维化的影响。方法:60只SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组、苯那普利组和灯盏花组。应用Platt 5/6肾切除方法制备CRF模型。苯那普利组予盐酸苯那普利(0.29 mg/100 g)灌胃,灯盏花组予灯盏花胶囊(0.3 g/100 g)灌胃,正常组及模型组予等量生理盐水灌胃,疗程12周。检测各组大鼠血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量;RT-PCR方法检测各组大鼠肾组织肿瘤生长因子-β1(TGF-β1)、血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的mRNA表达。结果:灯盏花组及苯那普利组大鼠血清肌酐、尿素氮浓度和24 h尿蛋白定量与模型组比较均明显降低(P0.05),且灯盏花组大鼠血清肌酐、24 h尿蛋白定量均低于苯那普利组(P0.05)。灯盏花组、苯那普利组大鼠肾组织TGF-β1和PAI-1 mRNA表达均低于模型组,差异有统计学意义(P0.05),且灯盏花组TGF-β1和PAI-1 mRNA表达水平低于苯那普利组(P0.05)。结论:云南灯盏花胶囊能改善CRF大鼠的肾功能,抑制肾组织纤维化。     

参芪解毒汤治疗慢性肾功能衰竭的实验研究

目的：验证参芪解毒汤治疗慢性肾功能衰竭（CRF）的疗效。方法：采用腺嘌呤制作大鼠CRF模型，将其分为正常组、模型组、科索亚组及参芪解毒汤高、低剂量组，治疗8周后，测量各组血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、血清白蛋白（ALB）、甘油三脂(TG)、胆固醇（CHO）、血清瘦素（Leptin）水平，并对大鼠肾脏组织进行病理观察检测转化生长因子β1(TGF-β1)在肾组织的表达。结果：参芪解毒汤高、低剂量组，科索亚组SCr、BUN、Leptin水平均低于模型组，ALB高于模型组（P＜0.05）。病理结果表明，各用药组大鼠的肾组织病理损伤要明显轻于模型组，高剂量组损伤最轻。各用药组TGF-β1在肾组织的表达均明显低于模型组（P＜0.05）。结论：参芪解毒汤可有效降低CRF大鼠SCr、BUN、Leptin水平，升高ALB水平，具有减轻大鼠肾组织的损伤、减少TGF-β1在肾组织的表达、延缓CRF进展的作用。     

益气、化瘀、化痰中药制剂及其合剂对肾间质纤维化大鼠TGF-β1/Smad通路及TRB3的影响

目的：观察益气、化瘀、化痰中药制剂及其合剂———益气化瘀化痰制剂对单侧输尿管结扎（unilateral ureteral obstruc－tion,UUO）模型大鼠肾间质纤维化的影响及其可能机制。方法：42只雌性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、替米沙坦组、益气组、化瘀组、化痰组及益气化瘀化痰组,每组6只。除假手术组外,其余各组采用UUO法建立肾间质纤维化模型。UUO术后3周,模型组及假手术组以等量生理盐水灌胃,其余各组以相应制剂灌胃治疗,每日1次,连续用药12周后处死大鼠。检测大鼠血清尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）、肌酐（serum creatinine,Scr）水平。取大鼠术侧肾组织,HE染色观察组织形态学改变,Masson染色观察胶原纤维沉积情况,Western blot检测转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）蛋白表达水平;qRT-PCR 检测TGF-β1、Smad3、Smad7、TRB3、α-SMA、E-cadherin mRNA 表达水平。结果：与假手术组比较,模型组肾间质纤维化明显,BUN、Scr水平明显升高（P<0.01）,而各药物干预组肾间质纤维化程度及BUN、Scr水平均较模型组明显改善,其中益气化瘀化痰组、替米沙坦组及益气组改善较明显（P<0.05）。与模型组相比,益气化瘀化痰组、替米沙坦组及益气组TGF-β1、Smad3、TRB3、α-SMA mRNA表达明显降低（P<0.05）,E-cadherin mRNA表达明显升高（P<0.05）。各组间Smad7 mRNA表达无显著差异。TGF-β1、α-SMA、E-cadherin的蛋白表达与其mRNA表达趋势一致。结论：益气、化瘀、化痰及益气化瘀化痰中药制剂和替米沙坦均能改善UUO大鼠肾间质纤维化,且以益气化瘀化痰制剂、替米沙坦及益气制剂的改善作用较为明显,其机制可能是通过调控TRB3、TGF-β1/Smad信号通路,进而抑制肾小管上皮细胞向间充质细胞转化。     

实脾固肾化瘀方对阿霉素肾纤维化大鼠肾组织TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的探讨实脾固肾化瘀方对阿霉素(ADR)肾纤维化大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads信号通路的影响。方法研究于2016年8—12月在上海中医药大学附属曙光医院肾病研究所进行,40只雄性SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、实脾固肾化瘀方组、福辛普利钠组等4组,每组10只。除正常对照组外,其余3组大鼠均采用尾静脉注射ADR(4mg/kg)法制成肾纤维化大鼠模型。造模成功后实脾固肾化瘀方组予以实脾固肾化瘀方浸膏(43g/kg);福辛普利钠组予以福辛普利钠溶液(2mg/kg);模型组和正常对照组予以生理盐水。实验结束后,留取全部大鼠24 h尿量、血清及肾脏组织,观察各组大鼠肾脏病理变化及肾组织TGF-β1、Smad2及Smad7表达的变化。结果 Masson染色发现,正常对照组大鼠肾组织形态结构正常,未见肾小管、间质纤维化及炎细胞浸润等异常改变。肾间质胶原纤维微弱表达,胶原纤维呈蓝色,肌纤维及红细胞呈红色。模型组大鼠肾组织出现明显的病理损害,实脾固肾化瘀方组、福辛普利钠组大鼠肾组织病理损害明显减轻,且实脾固肾化瘀方组大鼠肾组织病理改善比福辛普利钠组更明显。免疫组化染色并对其灰度值测定后发现,模型组肾组织TGF-β1、Smad2表达较正常对照组明显上调(P<0.01),实脾固肾化瘀方组大鼠肾组织TGF-β1及Smad2表达较模型组明显下调(P<0.01),Smad7表达明显上调(P<0.01),与福辛普利钠组相比,实脾固肾化瘀方组大鼠肾组织TGF-β1、Smad2表达差异无统计学意义(P>0.05),而Smad7表达则明显上调(P<0.05)。结论实脾固肾化瘀方可能通过下调TGF-β1及Smad2表达、上调Smad7表达,干预TGF-β1/Smads信号通路,从而发挥改善ADR肾病大鼠肾纤维化、保护肾功能的作用。     

活血祛瘀方对单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1和CTGF表达的影响

目的 通过研究活血祛瘀方对单侧输导管梗阻 (UUO) 大鼠肾组织转化生长因子-β₁ (TGF-β₁)、结缔组织生长因子 (CTGF) 表达的影响,探讨其抗肾间质纤维化的作用机制。方法 建立大鼠 UUO 模型,48 只 SD 大鼠随机分为假手术组、模型组、代文组、活血祛瘀方组,于治疗 4 周后腹主动脉采血检测血肌酐 (SCr)、尿素氮 (BUN);收集 24 h 尿液检测 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 (NAG)、β₂-微球蛋白 (β₂-MG);取梗阻侧肾组织,HE 染色观察肾小管间质病变;免疫组织化学染色观察 TGF-β₁、CTGF 的阳性表达,并进行半定量分析。结果 与假手术组相比,模型组大鼠血 SCr、BUN 和尿 NAG、β₂-MG 水平以及 TGF-β₁、CTGF 阳性表达显著升高。与模型组相比,活血祛瘀方组大鼠 BUN 水平降低,尿 β₂-MG、NAG 排泄减少;活血祛瘀方组和代文组肾间质 TGF-β₁、CTGF 阳性表达显著下调。结论 活血祛瘀方可降低 UUO 大鼠尿 NAG、β₂-MG 和血 BUN 水平,表明具有保护肾小管功能和改善肾功能作用,可能因其能抑制肾间质 TGF-β₁、CTGF 过度表达,从而减缓肾纤维化病程的进展。     

腺嘌呤所致大鼠慢性肾功能衰竭肾组织中TGF-β1、TSP-1、VEGF的表达

目的:探讨腺嘌呤所致大鼠慢性肾功能衰竭(chronic renal failure,CRF)肾组织中转化生长因子-β1(transforning growth-β1,TGF-β1)、血小板反应因子-1(thrombospondin-1,TSP-1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达情况。方法:雄性SD大鼠60只,随机分为两组:模型组(n=30),以2.5%腺嘌呤悬混液灌胃;正常对照组(n=30),给相同体积淀粉溶液灌胃。两组分别于7天、14天、21天留尿标本后,各处死大鼠10只,取血、肾脏标本。测定体重(BW)、24 h尿蛋白定量(24 h U-TP)、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖酐酶(NAG)、肾重指数(肾脏重量/体重,KI)、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、血白蛋白(ALB),光镜下观察肾组织的病理变化,免疫组织化学法检测肾脏、TGF-β1、TSP-1、VEGF的表达情况。结果:7天时模型组大鼠与同时相点对照组相比,BW增加缓慢(P<0.01),ALB无明显变化;14天和21天时模型组大鼠与同时相点对照组和前一时相点自身对照比较,BW明显下降(P<0.01),血ALB明显降低(P<0.01);7天、14天和21天时模型组大鼠24 h U-TP、KI、尿NAG、SCr、BUN呈进行性升高(P<0.01)。7天、14天和21天时模型组大鼠TGF-β1和TSP-1表达均呈进行性增高(P<0.01)。在对照组肾组织中,VEGF广泛表达于肾小管上皮细胞及足突细胞,随着肾间质病理损害程度加重,模型组肾组织中VEGF的表达逐渐减少。在模型组大鼠各时相点中,肾间质TGF-β1表达量与肾小管TGF-β1表达量呈显著正相关(r_s=0.940,P<0.01);肾小管VEGF与TGF-β1表达量呈显著负相关(r_s=-0.945,P<0.01),同时与肾间质TSP-1呈显著负相关(r_s=-0.923,P<0.01)。各时相点对照组各指标无明显改变。结论:TSP-1-TGF-β1轴表达增强促使肾间质纤维化发生、发展,推测TSP-1在腺嘌呤灌胃法制备CRF模型中可能具有重要作用;VEGF表达下降也是导致肾间质纤维化发生、发展因素。     

尿毒清胶囊及其拆方对5/6肾切除大鼠肾组织TGF-β_1 mVRNA表达的影响

【目的】观察尿毒清胶囊及其拆方对慢性肾功能哀竭（CRF）模型大鼠肾组织转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA表达的影响。【方法】采用5/6肾切除法复制CRF大鼠模型,造模成功的SD大鼠随机分为模型组、黄芪组（剂量1.5 g&#183; kg^-1&#183; d^-1）、丹参组（剂量为1 g&#183; kg^-1&#183; d^-1）、大黄组（剂量为1 g&#183; kg^-1&#183; d^-1）、黄芪丹参大黄组（剂量为1 g&#183; kg^-1&#183; d^-1）、尿毒清组（剂量为1 g&#183; kg^-1&#183; d^-1）;各给药组灌胃给药6周后,检测各组大鼠血清尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）水平,并采用逆转录聚合酶链反应检测各组大鼠肾组织TGF-β1mRNA的表达水平。【结果】各给药组均可降低血清BUN、SCr水平,与模型组比较均有显著性差异（P〈0.05或P〈0.01）,其中尿毒清组降低SCr水平作用优于大黄组（P〈0.05）;TGF-β1mRNA在各组肾组织中均有不同程度的表达,其中模型组表达最强烈,尿毒清组和黄芪丹参大黄组表达最轻。【结论】尿毒清治疗CRF的作用与其能下调TGF-β1mRNA在肾组织中表达有关,且中药复方作用优于单味中药。     

尿毒清颗粒对单侧输尿管梗阻肾间质纤维化大鼠肾脏Toll样受体4表达的影响

目的观察尿毒清颗粒对单侧输尿管梗阻模型大鼠肾组织Toll样受体4(TLR4)表达的影响,探讨TLR4在导致肾间质纤维化中的作用。方法将24只大鼠随机分为正常对照组、假手术组、手术组和尿毒清组,每组6只。14 d后处死大鼠,检测各组大鼠的肾功能及总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力、丙二醛(MDA)水平。采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA的表达水平。采用免疫组化半定量法分析TLR4表达,并观察肾脏病理变化。结果 4组大鼠尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、T-SOD、MDA水平比较,差异均有统计学意义(P<0.01);4组大鼠TGF-β1mRNA和TLR4的表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。其中,假手术组与手术组、手术组与尿毒清组的TGF-β1mRNA和TLR4表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论单侧输尿管梗阻可以诱导大鼠肾间质纤维化,氧化应激可能通过TLR4途径参与肾间质纤维化的形成,尿毒清治疗可明显改善大鼠的肾间质纤维化程度。     

羟苯磺酸钙对慢性肾功能不全大鼠TGF-β1、BMP-7表达的影响

目的 观察羟苯磺酸钙对慢性肾功能不全(CRF)大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)和骨形态发生蛋白(BMP-7)的影响.方法 32只雄性SD大鼠分为对照组(n=8)、模型组(n=012)、治疗组(n=12),采用单肾切除加2次静脉注射阿霉素法造成慢性肾功不全模型,实验第5～8周治疗组羟苯磺酸钙灌胃,分别于实验6周、8周处死部分大鼠观察肾组织病理改变、TGF-β1和BMP-7表达情况.结果 肾小球硬化指数(GI)和模型组较同期对照组明显升高,治疗组较同期模型组比较明显降低,差异有显著性(P<0.01);TGF-β1表达:模型组较同期对照组明显增加,治疗组较同期模型组明显减少,差异有显著性(P<0.01);BMP-7表达:模型组较同期对照组表达减少,差异有显著性(P<0.01),治疗组较同期模型组增加,差异有显著性(P<0.01).结论 羟苯磺酸钙可减轻肾小球硬化和肾间质纤维化、降低致纤维化因子、增加抗纤维化因子改善肾功能.     

基于TGF-β/Smads信号通路探讨桃核承气汤治疗慢性肾衰竭的机制

目的 观察桃核承气汤对慢性肾衰竭（chronic renal failure,CRF）大鼠肾脏功能、肾脏病理形态及对TGF-β/Smads信号通路的影响,探讨本方治疗CRF的机制。方法 将60只雄性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、尿毒清组、桃核承气汤组。模型组、尿毒清组与桃核承气汤组行5/6肾切除手术,假手术组仅行双肾被膜剥离术,空白组不进行手术,术后4周予不同的药物治疗,空白组、模型组、假手术组大鼠给予蒸馏水灌胃,尿毒清组予尿毒清灌胃,桃核承气汤组予桃核承气汤灌胃;治疗后观察肾组织病理变化、免疫功能指标及肾功能指标。结果 与假手术组比较,模型组大鼠SCr、BUN、血β2-MG、尿β2-MG、尿RBP及24 h尿蛋白含量,肾组织TGF-β1、Smad2、Smad3表达水平均显著升高（P<0.05）;模型组大鼠Smad4和Smad7表达水平均显著降低（P<0.05）。与模型组比较,尿毒清组、桃核承气汤组大鼠SCr、BUN、血β2-MG、尿β2-MG、尿RBP及24 h尿蛋白含量,肾组织TGF-β1、Smad2、Smad3表达水平均显著降低（P<0.05）;Smad4和Smad7表达水平显著升高（P<0.05）。与尿毒清组比较,桃核承气汤组大鼠SCr、BUN、血β2-MG、尿β2-MG、尿RBP及24 h尿蛋白含量,肾组织TGF-β1、Smad2、Smad3表达水平均显著降低（P<0.05）;Smad4和Smad7表达水平显著升高（P<0.05）。结论 桃核承气汤可以明显改善CRF大鼠的肾功能,降低血清SCr、BUN、β2-MG及24 h尿蛋白、尿β2-MG、RBP的含量;桃核承气汤可以通过影响TGF-β/Smads信号通路抑制TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白和促进Smad4、Smad7蛋白的表达来实现肾间质纤维化。     

帕歌斯对慢性肾功能衰竭大鼠肾功能的影响

目的帕歌斯是一种用于风湿性疾病和各种疼痛治疗的天然止痛药物。文中探讨帕歌斯对慢性肾功能衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠肾功能的影响。方法将52只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、帕歌斯低剂量组与高剂量组、双氯芬酸组。采用腺嘌呤法制作CRF大鼠模型,并给予相应的药物,造模后及给药30d后检测各组肾功能相关指标,包括24h尿量、24h尿蛋白定量、肾重/体重、血尿素氮(BUN)、肌肝(Scr)、血红蛋白(Hb)和电解质。HE、Masson染色观察肾脏病理改变与肾纤维化情况。免疫组化法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)在肾组织中的表达。结果成功建立CRF大鼠模型。帕歌斯高、低剂量组治疗前后的肾功能相关指标及HE、Masson染色中无加重及升高,双氯芬酸组病变最重。TGF-β1在帕歌斯高、低剂量组表达较少,在双氯芬酸组表达最多。结论帕歌斯没有加重CRF大鼠肾小管-间质损害,没有造成肾功能的进一步恶化。其肾保护机制与帕歌斯减少TGF-β1在肾组织中的表达之间的关系有待进一步研究。     

大蒜素对大鼠肾间质纤维化干预作用及对肾组织TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的观察大蒜素对大鼠肾间质纤维化的干预作用,探讨其与TGF-β1/Smads信号通路的关系。方法 18只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和大蒜素组,每组6只,采用单侧输尿管结扎术(UUO)建立大鼠肾间质纤维化模型,造模后第1天大蒜素组大鼠予大蒜素60mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,假手术组和模型组大鼠予等量生理盐水灌胃。造模后第15天称量大鼠体质量及左肾质量,计算肾脏指数,检测三组大鼠血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)及24h尿蛋白(U-TP),并处死大鼠,摘取肾组织,包埋切片后行Masson染色,观察肾组织病理结构,运用免疫组化法检测大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,Western Blot法测定肾组织磷酸化信号转导分子2(p-Smad2)和磷酸化信号转导分子3(p-Smad3)表达。结果与模型组比较,造模后第15天大蒜素组大鼠体质量显著增高[(298.52±14.82)g比(275.53±23.92)g,P0.05],肾脏指数显著下降[(0.53±0.15)%比(0.84±0.25)%,P0.01],肾脏组织病变程度有所改善,血SCr、BUN及U-TP均显著低于模型组[SCr:(48.54±5.03)μmol/L比(55.10±7.50)μmol/L;BUN:(5.56±0.43)mmol/L比(6.25±0.51)mmol/L;U-TP:(1009.87±105.02)mg/L比(1300.57±229.65)mg/L,P0.05或P0.01],肾组织TGF-β1、α-SMA、p-Smad2和p-Smad3蛋白表达量均有下调[TGF-β1:(0.227±0.011)比(0.282±0.020);α-SMA:(0.326±0.009)比(0.471±0.012);p-Smad2:(0.195±0.011)比(0.279±0.016),p-Smad3:(0.220±0.020)比(0.699±0.076),P均0.01]。结论大蒜素可能通过调节TGF-β1/Smads信号通路,改善大鼠肾间质纤维化程度,对肾功能起到一定的保护作用。     

益肾泻浊方抑制裸角质层同源物2活性干预慢性肾衰竭的机制研究

  目的  通过建立慢性肾衰竭(CRF)小鼠模型, 以裸角质层同源物2(NKD2)为切入点, 观察益肾泻浊方对CRF小鼠各项肾功能指标的改善作用, 并初步探讨其作用机制。  方法  采用单侧输尿管梗阻法(UUO)构建小鼠CRF模型, 末次给药结束后处死小鼠, 观察测量小鼠肾脏形态和质量, HE和Masson染色观察肾脏病理情况, 使用肾小管损伤评分和肾纤维化区域量化指标评估肾衰竭程度。运用ELISA法测定血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的水平, 试剂盒检测BUN和SCr水平。Western blot检测小鼠肾脏Collagen α1、FN1、α-SMA及NKD2蛋白含量。  结果  与正常组相比, 模型组小鼠肾脏组织出现水肿、颜色变浅、体积增大; 肾脏质量指数显著增加(P < 0.01), 肾小管损伤评分升高(P < 0.01), 肾纤维化水平和Collagen α1免疫组化表达量显著增加(P < 0.01);血清BUN、SCr、IL-6、IL-1β以及TNF-α水平均明显升高(P < 0.01);肾脏Collagen α1、FN1、α-SMA及NKD2蛋白表达量均增加(P < 0.01)。与模型组相比, 低剂量复方组小鼠肾小管损伤评分差异无统计学意义, 而肾脏质量指数(P < 0.01)、肾纤维化水平(P < 0.05)和Collagen α1免疫组化表达量(P < 0.05)均显著下降; 血清BUN、SCr、IL-6、IL-1β以及TNF-α水平均明显下降(P < 0.01), 肾脏Collagen α1、FN1、α-SMA及NKD2蛋白表达量显著减少(P < 0.01)。与模型组相比, 高剂量复方组小鼠肾脏质量指数、肾小管损伤评分和肾纤维化水平均明显减少(P < 0.01);血清BUN、SCr、IL-6、IL-1β以及TNF-α水平和肾脏Collagen α1、FN1、α-SMA及NKD2蛋白表达量均显著降低(P < 0.01)。  结论  益肾泻浊方能够下调NKD2表达, 减少肾脏ECM沉积, 抑制炎症反应, 从而延缓CRF进展。      

地灵丹汤对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾间质纤维化的防治作用

目的：研究中药复方地灵丹汤对单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction，UUO）致肾间质纤维化模型大鼠肾间质纤维化的防治作用及其可能机制。 方法：将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依那普利组及地灵丹组。采用UUO法建立肾间质纤维化大鼠模型，观察血尿素氮、血清肌酐和24h尿蛋白定量及肾组织病理改变，并采用免疫组织化学法检测转化生长因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、纤维连接蛋白（fibronectin，FN）及层黏连蛋白（laminin，LN）的表达。 结果：第7天模型组肾间质大量炎症细胞浸润及胶原表达，TGF-β1、FN和LN表达面积百分率较假手术组明显增加（P＜0．05）；地灵丹组间质纤维化面积较模型组减少（P＜0．05）。第14天地灵丹组和依那普利组肾间质TGF-β1、α-SMA、FN和LN表达面积百分率较模型组减少（P＜0．05），BUN、SCr和24h尿蛋白无明显差异。第21天地灵丹组SCr、肾间质纤维化和TGF-β1表达面积百分率较依那普利组和模型组下降（P＜0．05）。 结论：地灵丹能减轻单侧输尿管梗阻模型大鼠的蛋白尿和肾间质纤维化，抑制TGF-β1、α-SMA、FN和LN的表达。在较长时间应用后，地灵丹对模型大鼠的肾功能保护作用优于依那普利。     

益气活血汤对慢性肾功能衰竭大鼠CTGF、PDGF-B的影响

目的 探讨益气活血汤对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠结缔组织生长因子(CTGF)、血小板源性生长因子-B(PDGF-B)的影响。  方法 采用腺嘌呤制作大鼠CRF模型,将其分为正常对照组、模型对照组、科索亚组及模型中药高、中、低剂量组,治疗8周后,测量各组血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、甘油三脂(TG)、胆固醇(CHO)、血清白蛋白(ALB)、血红蛋白（HB）水平,HE染色观察大鼠肾脏组织病理学变化,免疫组织化学SP法检测CTGF、PDGF-B在大鼠肾组织的表达 结果 模型中药高、中、低剂量组及科索亚组SCr、BUN、CHO 水平均低于模型对照组,ALB、HB高于模型对照组(P<0．05)。病理结果显示,各用药组大鼠的肾组织病理损伤明显轻于模型对照组,模型中药高剂量组损伤最轻。免疫组化结果显示,各用药组CTGF、PDGF-B在肾组织的表达均明显低于模型对照组(P<0．05)。 结论 益气活血汤可有效降低CRF大鼠SCr、BUN、CHO水平,升高ALB、HB水平,具有减轻大鼠肾组织的损伤、减少CTGF、PDGF-B在肾组织的表达、延缓CRF进展的作用。     

六味地黄丸通过调控NF-κB及TGF-β/Smad双信号通路减轻糖尿病肾病炎症及纤维化

【目的】基于核因子kappa B(NF-κB)及转化生长因子β(TGF-β)/Smad双信号通路,观察六味地黄丸对糖尿病肾病炎症及纤维化的影响,探讨其对肾保护作用机制。【方法】将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组,每组10只。采用一次性腹腔注射链脲佐菌素法复制糖尿病大鼠模型。中药组给予大鼠六味地黄丸(剂量为6.75 g·kg-1·d-1)灌胃,正常组、模型组给予大鼠等体积生理盐水灌胃。给药12周后取材,检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、24h尿蛋白量(24h-Pro),采用苏木素—伊红(HE)与Masson染色观察肾组织病理变化,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肾组织NF-κB、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、TGF-β、alpha平滑肌抗体(α-SMA)、Smad2、Smad3、Smad7的表达。【结果】生化指标结果显示:与正常组比较,模型组大鼠FBG、BUN、SCr、24h-Pro升高(P0.01);六味地黄丸治疗后上述指标均有所改善(P0.05)。HE与Masson染色结果显示,模型组肾小球官腔变窄、系膜基质增生及炎症细胞浸润,而中药组有所改善。Western blot结果显示:与正常组比较,模型组的NF-κB、MCP-1、TGF-β、α-SMA、Smad2、Smad3表达均呈明显上调,而Smad7表达降低(P0.01);中药组NF-κB、MCP-1、TGF-β、α-SMA、Smad2、Smad3表达下调,Smad7表达上调(P0.05)。【结论】六味地黄丸具有肾脏保护作用,其机制可能与通过调控NF-κB及TGF-β/Smad双信号通路,从而减轻糖尿病肾病炎症损伤和纤维化有关。