经前期综合征肝气逆证模型大鼠不同组织器官的指标检测与评价

目的:复制经前期综合征肝气逆证模型大鼠,确认以情志刺激为主的多因素致病造模方法的合理性。方法:在对肝气逆证模型大鼠"病证表现"进行观察总结的基础上,进一步对该模型下丘脑、心、肝、胃、肾上腺中高香草酸(homovanillic acid,HVA)、去甲肾上腺素(noradrenaline,NE)、肾上腺素(epinephrine,E)、多巴胺(dopamine,DA)及5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)5种神经递质进行检测,并与正常组各项指标进行对比。结果:经前期综合征肝气逆证模型大鼠HVA含量在心、肝处显著低于正常组(P<0.01),胃HVA含量显著升高(P<0.01);下丘脑中NE含量显著高于正常组(P<0.05),肝脏NE含量明显高于正常组(P<0.01);下丘脑、心中E含量显著上升(P<0.01),肾上腺中E含量明显下降(P<0.01),肝脏、胃中E含量与经前期综合征肝气逆证关系不大;下丘脑、肾上腺中DA含量显著升高(P<0.01);肝脏5-HT含量明显高于正常组(P<0.01)。结论:NE、E与5-HT作为与忿怒密切相关的神经递质与激素,呈现出与肝气逆证大鼠模型情志等改变相应的特点。     

经前期综合征肝气逆、郁两证大鼠模型血清及不同脑区单胺类神经递质含量分析

目的 借助前期研制成功PMS肝气逆、郁两证大鼠模型检测其血清与不同脑区单胺类神经递质含量,探索"肝失疏泄"微观机制并对模型与中医证型关系进行初步分析. 方法 挑出动情周期非接受期大鼠40只,随机分为5组:正常对照组、PMS肝气逆证造模组、PMS肝气郁证造模组、PMS肝气逆证造模给药组、PMS肝气郁证造模给药组,肝气逆证大鼠模型以情志刺激为主多因素复合造模法制备,肝气郁证大鼠模型以慢性束缚应激法制备,模型复制成功后肝气逆大鼠模型用经前平颗粒干预,肝气郁证大鼠模型用经前舒颗粒干预.HPLC测定血清及中枢NE、DA、5-HT含量,比较各组差异并进行分析. 结果 旷场实验中,相较正常对照组大鼠造模后逆模组水平得分、垂直得分及可旷场实验总分均显著增加(P<0.05),而郁模组大鼠则显著减少(P<0.05),用药后这一趋势得到明显纠正(P<0.05).肝气逆证模型大鼠不同脑区NE、DA、5-HT含量均有上升趋势;肝气郁证模型大鼠不同脑区DA含量呈下降趋势,5-HT含量显著上升.外周单胺类神经介质变化趋势多与中枢相反. 结论 肝疏泄太过所致烦躁易怒等表现可能与边缘叶DA水平上升,下丘脑DA、边缘叶5-HT水平下降密切相关;肝气疏泄不及呈现抑郁萎靡等症状可能与下丘脑NE水平上升,下丘脑、边缘叶DA水平下降,5-HT水平上升有密切关系.据此推测,肝主疏泄可能通过调节机体该类活性物质含量而呈现作用;其功能定位为脑中枢,尤其是下丘脑.     

经前期综合征肝气逆证猕猴模型血清与尿中去甲肾上腺素测定分析

目的:研究经前期综合征(PMS)肝气逆证猕猴模型及其用药、复健后血清与尿中去甲肾上腺素(NE)含量变化。方法:运用情志刺激结合挤压造模的方法制备PMS肝气逆证猕猴模型,并用毛细管电泳法对造模组、造模给药组、复健组猕猴血、尿中NE进行检测。结果:在经前期,造模组NE含量升高,造模给药组、复健组较造模组NE含量降低,造模给药前后猕猴宏观表现有很大变化。结论:猕猴造模前后NE含量有显著性差异,经前平颗粒对NE有调节作用,PMS肝气逆证宏观表现与NE的含量升高有关。     

白香丹胶囊对经前期综合征肝气逆证模型大鼠下丘脑γ-氨基丁酸和谷氨酸的影响

目的:研究白香丹胶囊对经前期综合征(PMS)肝气逆证大鼠下丘脑γ-氨基丁酸(GABA)与谷氨酸(Glu)的影响,探讨PMS肝气逆证的发病机制。方法:以情志刺激多因素法复制PMS肝气逆证大鼠模型,采用白香丹胶囊干预,用柱前衍生高效液相色谱法检测大鼠下丘脑中GABA与Glu的含量。结果:造模后大鼠下丘脑中GABA、Glu含量均显著降低,白香丹胶囊给药后GABA、Glu含量均显著升高。结论:PMS肝气逆证大鼠下丘脑中GABA、Glu含量变化与PMS肝气逆证关系密切,白香丹胶囊能显著调节下丘脑中GABA、Glu的含量变化,使两者保持相对平衡而发挥疗效。     

PMS肝气逆证模型大鼠中枢5-HT_(1A)R结合活性分析及其药物干预

目的:检测PMS肝气逆证模型大鼠大脑皮层和海马5-HT1AR(5-羟色胺1A受体)结合活性的变化,探讨中药经前平颗粒治疗PMS肝气逆证的作用机制。方法:电刺激复制PMS肝气逆证大鼠模型。放射性配体受体结合实验测定大鼠皮层和海马5-HT1AR结合活性变化。结果:与正常组比较,肝气逆证造模组大鼠大脑皮层5-HT1AR结合活性显著上调(P<0.01),海马5-HT1AR结合活性上调但不显著(P>0.05),经前平颗粒可显著下调肝气逆证模型大鼠上述脑组织内5-HT1AR结合活性。结论:PMS肝气逆证模型大鼠的大脑皮层和海马5-HT1AR结合活性上调。中药经前平颗粒可能通过调节5-HT1AR结合活性发挥治疗PMS肝气逆证的作用。     

肝郁证雌雄大鼠神经-内分泌变化的比较

目的比较肝郁证模型雌、雄大鼠的神经-内分泌变化以探讨肝郁证现代内涵的性别差异。方法大鼠适应性喂养1周后,雄鼠与动情周期稳定的雌鼠分别随机分为正常组和模型组(每组各10只),模型组采用慢性束缚应激法复制肝郁证模型,连续28 d。实验29~30 d处杀取材,测定各组大鼠神经-内分泌相关指标:单胺类递质,血浆5-羟色胺(5-HT)、肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE);肾上腺皮质轴(HPA),下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、血清促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮/肾上腺酮(CORT);性腺轴(HPG),下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)、血清卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、泌乳素(PRL)、睾酮(T)、雌二醇(E2);甲状腺轴(HPT),下丘脑促甲状腺激素释放激素(TRH)、血清促甲状腺激素(TSH)、三碘甲腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)。结果与正常组雄鼠比较,模型组雄鼠血浆5-HT、NE及E明显升高(P<0.01);下丘脑CRH与血清CORT显著升高(P<0.05),血清ACTH无明显变化(P>0.05);血清FSH、LH、T显著降低(P<0.05,P<0.01),PRL、E2显著升高(P<0.05,P<0.01);TSH显著升高(P<0.05),T3、T4显著降低(P<0.05),下丘脑TRH无明显变化(P>0.05)。与正常组雌鼠比较,模型组雌鼠血浆E显著升高(P<0.05),5-HT、NE显著降低(P<0.05,P<0.01);下丘脑CRH与血清ACTH、CORT显著升高(P<0.01);下丘脑GnRH和血清FSH、LH、PRL、T及E2均显著升高(P<0.01);下丘脑TRH与血清T3、T4显著升高(P<0.01),TSH显著降低(P<0.01)。表明肝郁模型雌、雄大鼠均存在HPA轴的亢进,雌性还存在外周单胺类递质的代谢紊乱,HPT轴和HPG轴功能的亢进;雄性存在交感神经功能亢进,HPT轴和HPG轴功能的抑制。结论慢性束缚法肝郁证模型雌、雄大鼠均存在神经-内分泌功能的异常,但两者各有特点,推测中医肝郁证的现代病生理学内涵因性别而有所差异。     

黄连对甲亢大鼠中枢单胺类神经递质含量的影响

本文以龙胆草为对照，观察了黄连对甲亢大鼠中枢单胺类神经递质含量的影响。结果表明：(1)甲亢大鼠下丘脑、垂体和纹状体NE．DA、5-HT及5-HIAA含量均显著低于正常对照组，而HVA高于正常对照组；(2）泻心火药黄连可显著增高甲亢大鼠下降的下丘脑、垂体和纹状体NE、DA、5-HT及5-HIAA含量，使HVA下降；(3)泻肝火药龙胆草可使甲亢大鼠下丘脑、纹状体NE和纹状体5-HT含量显著增高，使HVA下降：(4）与龙胆草相比，黄连有较强的作用。     

加味丹栀逍遥散对抑郁模型大鼠下丘脑内5-HT和NE的影响

目的:探讨加味丹栀逍遥散对抑郁模型大鼠下丘脑内5-HT和NE含量的影响。方法:将50只Wistar雄性大鼠随机分为对照组,模型组,氟西汀组,加味丹栀逍遥散高剂量组、低剂量组,每组各10只;采用慢性轻度不可预见性应激结合孤养的方式复制复合模型,除对照组外,其余各组均接受不同应激因子刺激21 d,建立慢性应激抑郁大鼠模型。氟西汀组,加味丹栀消遥散高剂量组、低剂量组分别按2.5 mg·kg-1、4.08 g·kg-1、2.04 g·kg-1剂量给药,各组均按10 mL·kg-1灌胃给药,对照组和模型组按10 mL·kg-1给予生理盐水每日1次,应激前灌胃,从造模第22天开始,至动物处死当天,共21 d,实验周期共42 d;采用酶联免疫法(ELISA)测定大鼠下丘脑内5-羟色胺(5-HT)和去甲肾上腺素(NE)含量的变化。结果:与对照组比较,模型组大鼠下丘脑内5-HT和NE含量明显减少;经过治疗后,氟西汀组与加味丹栀逍遥散高剂量组均显著高于模型组(P<0.05),加味丹栀逍遥散低剂量组NE含量显著高于模型组(P<0.05)。结论:加味丹栀逍遥散抗抑郁作用可能与升高下丘脑内5-HT和NE的含量有关。     

寒凝血瘀模型大鼠下丘脑神经递质的变化及其对生殖内分泌的影响

目的 观察寒凝血瘀模型大鼠下丘脑神经递质的变化及其对生殖内分泌的调节和影响.方法 将大鼠置于0～1℃冰水中造成妇科寒凝血瘀证大鼠模型,采用放射免疫分析方法测定血清孕酮(P)、雌二醇(E2)、睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)的含量及下丘脑β-内啡肽(β-EP)含量,采用荧光分光光度法测定下丘脑5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NA)、多巴胺(DA)含量.结果 模型组大鼠的血清E2、P、T、LH、FSH明显降低,下丘脑β-EP、5-HT、NA、DA的含量明显升高,与正常组比较有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05).结论 下丘脑分泌的神经介质β-EP、NA、DA、5-HT参与了生殖内分泌的调节和寒凝血瘀证的形成.     

穴位埋线对更年期雌性大鼠下丘脑单胺类神经递质的影响

[目的]通过观察穴位埋线对更年期大鼠下丘脑去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)等单胺类神经递质的影响,探讨其对更年期综合征防治作用的机理.[方法]选用60只SD雌性大鼠,随机分为治疗组、模型组和假手术组各20只:除假手术组外,其他组均采用手术摘除大鼠双侧卵巢复制去势更年期大鼠模型,治疗组选取肾俞、三阴交、子宫穴进行穴位埋线,1次/周,连续4周;采用放射免疫法检测下丘脑组织NE、DA、5-HT、5-HJAA含量.[结果]模型组较假手术组的NE、DA水平显著降低(P<0.05或P<0.01),5-HT、5-HIAA水平显著上升(P<0.01或P<0.001),5-HT/NE比值显著升高(P<0.001);穴位埋线组与模型组比较,可显著升高衰退的NE水平(P<0.05),降低5-HT、5-HIAA水平(P<0.05或P<0.01),且埋线组的5-HT/NE比值亦较模型组显著降低(P<0.01).[结论]穴位埋线治疗更年期综合征的作用可能与其能调整去势雌性大鼠下丘脑单胺类神经递质,纠正下丘脑紊乱的植物神经功能有关.     

肝气郁结型代谢综合征大鼠模型的建立及其特征分析

目的:建立肝气郁结型代谢综合征(MS)大鼠模型,为研究肝气郁结对MS的影响提供一种可靠的动物模型。方法:将刚离乳的自发性高血压大鼠(SHR)采用高脂饲料喂养的方式建立MS大鼠模型,将成功建模的大鼠随机分为实验组和对照组。实验组采用束缚的方式继续进行肝气郁结型MS大鼠模型造模,直至出现典型肝气郁结表现后,测两组大鼠的体质量、体长、腹围、鼠尾动脉血压、空腹血糖、血脂4项[包括总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)],计算体重指数(Lees指数)。结果:高脂组SHR在高脂饲料喂养14周后有33只大鼠的质量、腹围、Lees指数、血压、血糖、TG和HDL-C与普通膳食组平均值比较差异具有统计学意义(P0.05),符合MS大鼠模型标准。在肝气郁结造模阶段,经20 d无间断造模,实验组中16只MS大鼠与对照组比较均出现明显反应迟钝、行动迟缓,甚者出现长时间蜷伏于铁笼内不动、对外界声音刺激无警觉性反应、背毛稀疏且枯黄无泽、眼睛眯小、形体瘦小、体质量减轻(P0.05)等典型的肝气郁结动物模型表现。结论:以高脂饲料喂养14周,可诱导部分SHR出现典型的MS表现,对其继续采用束缚的方式造模20 d,可诱导MS大鼠出现典型的肝气郁结表现,成功建立肝气郁结型MS大鼠模型。     

正常猕猴月经周期表情行为变化特点及其评价

为建立经前期综合征肝气逆、肝气郁两证动物模型标准,对正常青年猕猴月经周期不同时期表情行为变化进行观察研究。观察发现,正常高、低地位猕猴月经周期表情行为均呈现黄体期、经前期、月经期相对平静,卵泡期则明显活跃的特点。认为正常实验猕猴月经周期不同时期表情行为变化特点的揭示具有实验动物基础研究重要意义,也为今后开展正式造模实验提供了基础资料。     

经前平颗粒对经前期综合征肝气逆证模型大鼠不同脑区γ-氨基丁酸A受体结合活性的影响

目的 通过检测经前期综合征（premenstrual syndrome,PMS）肝气逆证模型大鼠大脑皮质和海马γ-氨基丁酸A受体（GABA_AR）结合活性变化,探讨中药经前平颗粒对PMS肝气逆证的干预作用。方法 多因素综合刺激法复制PMS肝气逆证大鼠模型。放射性配体受体结合技术测定大鼠皮质和海马GABA_AR的结合活性变化。结果 与正常组相比,肝气逆证造模组大鼠大脑皮质和海马GABA_AR结合活性均明显增加。与模型组相比,经前平颗粒组大鼠皮质和海马GABA_AR活性均明显下降。结论 大鼠皮质和海马GABA_AR结合活性增加可能是PMS肝气逆证的重要机制之一。中药经前平颗粒可对GABA_AR 结合活性含量异常变化起到调节作用。     

经前平颗粒对PMS肝气逆证大鼠海马5-HT受体表达的影响

目的:通过观察经前平颗粒对中枢神经递质受体亚型的表达,探讨中药治疗情志障碍及经前期综合征(PMS)的微观机制。方法:PMS肝气逆症大鼠模型分别给予不同药物,连续4个月经周期,免疫组化法检测海马5-HT1A受体、5-HT2受体阳性细胞。结果:经前平颗粒能缓解焦虑症状,并使模型大鼠海马5-HT1A受体阳性细胞率明显增多(P<0.05),5-HT2受体阳性细胞率显著减少(P<0.05)。结论:中药经前平颗粒可通过调节中枢5-HT1A和5-HT2受体的表达,治疗与PMS有关的情志障碍。     

肝气逆肝气郁两证患者发病前后血清甲状腺素含量测定结果分析

目的:进一步揭示机体生物学因素在肝气逆、肝气郁两证发病机制中的作用。方法:对肝气逆、肝气郁两证患者发病前后血清甲状腺素水平进行放免检测并与正常组进行对照研究。结果:两证组在无症状增殖期与分泌期T3水平正常,与正常对照组相比无明显差异。经前期证候呈现时,肝气逆证组T3含量显著降低,与前两期相比差异显著,月经来潮后症状消失,T3亦趋正常。肝气郁证组经前期T3水平未有明显改变,但月经期T3水平却显著降低;两证组发病前后血清T4含量均显著高于同期正常对照组,月经前后两证组自身对照无明显改变;两证组经前期血中促甲状腺素(TSH)含量显著高于其他三个时期,亦显著高于同时期的正常对照组。结论:研究认为血清总T3含量变化是肝气逆、肝气郁两证发病机制之一,T4水平异常升高则是肝气逆、肝气郁两证发病的内在条件,肝气逆证主要与甲状腺素(T3)分泌减低有关,肝气郁证则尚与垂体前叶促甲状腺素和甲状腺素反馈性调节失灵有关。     

肝血虚证辅助实验诊断指标的初步研究

采用异病同证、同病异证、相关证对照的方法,选择血红蛋白（Ｈｂ）、血清铁蛋白（ＳＦ）、血浆去甲肾上腺素（ＮＥ）、肾上腺素（Ｅ）含量,以及红细胞膜ＡＴＰ酶活性、红细胞耗氧率作为研究肝血虚证的辅助实验诊断指标。结果发现：肝血虚证上述Ｈｂ、血浆ＮＥ、Ｅ含量及红细胞膜ＡＴＰ酶活性４项指标均显著低于健康人组及肝气虚证、肝阴虚证组;缺铁性贫血病人的肝血虚证同异证（心血虚证、气血两虚证）之间的Ｈｂ、血浆ＮＥ、Ｅ含     

经前期综合征肝气逆、郁两证大鼠模型建立及宏观评价方法初探

目的改进经前期综合征肝气逆、郁两证大鼠模型建立及探讨宏观评价方法,为情志病证发病机理研究提供可资利用的证候动物模型。方法应用行为学判定结合改良阴道涂片法确定大鼠动情周期,采用昼夜颠倒配合旷场法筛选行为学得分相近大鼠进入实验减小误差,调整造模刺激强度及持续时间,应用昼夜颠倒配合旷场法对模型大鼠宏观表现予以量化评价。结果与正常对照纽比较大鼠造模后逆模纽水平得分、垂直得分及旷场实验总分均显著增加（P〈0.05）,而郁模组大鼠则显著减少（P〈0.05）,用药后这一趋势得到明显纠正（P〈0.05）。结论大鼠模型较好模拟了PMS病证临床表现及病理变化,造模方法成熟可靠,具有较好可信度及可重复性;应用旷场法可明确鉴别肝气逆、郁两证大鼠模型,为证候动物模型中医辨证提供直接依据。     

基于UPLC-Q-TOF的经前期综合征肝气逆证大鼠模型代谢表征研究

目的研究经前期综合征（PMS）肝气逆证大鼠代谢指纹差异,以期为PMS肝气逆证在代谢层次上的发病机制寻找证据。方法用电刺激法复制经前期综合征肝气逆证大鼠模型,UPLC-TOF-MS法检测各组大鼠尿液的代谢指纹变化。结果对照组、造模组在主成分分析中得到了较好的区分,给予白香丹胶囊后代谢网络有修复趋势。结论利用代谢组学能够较好地区分PMS肝气逆证模型大鼠代谢模式及药物调控趋势,该方法可为情志病证发病机制及模型评价研究提供新手段,显示出代谢组学在中医证候研究中的可行性。     

经前舒颗粒对经前期综合征肝气郁证模型大鼠海马单胺氧化酶A、B表达的影响

目的：研究经前舒颗粒对经前期综合征（PMS）肝气郁证大鼠海马单胺氧化酶A/B（MAOA/B）表达水平的影响。方法：雌性未孕SD大鼠48只,随机分为3组：正常对照组、模型组、经前舒治疗组,束缚造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型,旷场实验对模型进行评价,治疗组采用经前舒颗粒治疗,RT-PCR和Western blot方法分别检测各组大鼠海马MAOA/B的mRNA及蛋白的表达。结果：模型大鼠海马MAOA mRNA及蛋白表达显著升高,经前舒颗粒治疗后,MAOA mRNA和蛋白表达均显著降低,而MAOB mRNA和蛋白表达各组间没有显著性变化。结论：PMS肝气郁证大鼠海马MAOA表达出现异常,经前舒颗粒的作用机制可能是通过调节海马MAOA的表达而发挥作用。