Nucleostemin基因在乳腺肿瘤组织中的表达及意义

目的 检测nucleostemin(NS)基因在人乳腺肿瘤组织中的表达情况,探讨NS基因与乳腺肿瘤恶性程度的关系.方法 提取组织总RNA.用半定量RT-PCR方法 检测NS基因在乳腺肿瘤中的表达情况,分析NS基因与乳腺肿瘤病理分级、组织学类型和转移的关系.结果 乳腺肿瘤组织中NS基因有不同程的表达,病理分级越高,NS基因的表达量越高(F=41.776,P=0.000),正常乳腺组织中没有NS基因的表达;转移组NS基因表达量高于无转移组(t=6.033,P=0.000).NS基因的表达量高低与乳腺肿瘤组织学类型无关(F=2.163,P=0.48).结论 乳腺肿瘤组织中有NS基因表达,NS基因的表达量高低与乳腺肿瘤病理分级和转移有关,与组织学类型无关.     

核干细胞因子基因在胃癌、结肠癌和直肠癌组织中的表达

目的: 建立并采用实时定量PCR法检测核干细胞因子(nucleostamin,NS)基因在胃癌、结肠癌和直肠癌组织中的表达,研究该基因在胃肠道癌症诊断中的意义.方法: 构建NS基因和内参基因GAPDH标准品,并采用RT-PCR和实时定量 PCR 检测43例胃癌、结肠癌和直肠癌患者肿瘤组织NS基因的表达.结果: RT-PCR结果显示NS基因在胃癌组织中的阳性率为90%(27/30),在直肠癌组织中的阳性率为83.3%(5/6),在结肠癌组织中的阳性率为100%(7/7).NS基因在胃肠道肿瘤组织中表达上调,表达水平与病理分期未见显著相关性,但表达量与癌组织分化程度显著相关,分化程度较低的癌组织NS表达较高,分化程度较高的癌组织NS表达较低(P＜0.05).结论: NS基因过表达可能在胃肠道肿瘤的发生中起着一定的作用,该基因可能会成为胃肠道肿瘤治疗的靶基因之一,检测该基因的表达有助于胃肠道肿瘤的诊断.     

胃癌组织和SGC-7901细胞中nucleostemin基因表达的实验研究

目的检测nucleostemin(NS)基因在胃癌组织和胃癌SGC-7901细胞中的表达情况。方法21例胃癌手术标本,提取胃癌组织和胃癌SGC-7901细胞株总RNA,用半定量RT-PCR方法检测胃癌组织和SGC-7901中NS基因的表达情况。用脂质体法将PCDNA4/C-NS-silencer质粒及空载体PCDNA4/C-vector质粒分别转染SGC-7901细胞,分别命名为silencer组和vector组,未转染的SGC-7901细胞记为normal组,RT-PCR方法检测NS基因表达量。用MTT法检测3组细胞的生长增殖情况。结果胃癌组织和SGC-7901细胞中皆有NS基因表达。定性分析显示,与vector组和normal组比较,silencer组细胞趋于分化,NS基因表达量下降。细胞培养24 h、48 h、72 h后,si-lencer组和vector组细胞增殖抑制率间差别均有统计学意义(P<0.01)。结论胃癌组织和SGC-7901细胞中有NS基因表达;NS基因特异性RNA干扰使NS基因表达量下降,抑制SGC-7901细胞株体外增殖。     

核干细胞因子在肿瘤细胞中的差异表达及意义

目的: 通过检测核干细胞因子(Nucleostemin,NS)基因在多种肿瘤细胞中的差异表达情况,探讨NS基因与肿瘤细胞增殖调控的相关性。方法: 体外培养子宫颈癌细胞、乳腺癌细胞、乳腺导管癌细胞、肝癌细胞(SMCC-7721)、肝癌细胞(HpeG2)与正常肝细胞,提取对数生长期肿瘤细胞总RNA,以RT-PCR方法检测NS在mRNA水平的差异表达;提取肿瘤细胞的总蛋白,以Western blot方法检测NS在翻译水平的差异表达。结果: 肿瘤细胞中NS基因均有较高水平的表达,尤其以乳腺癌细胞、乳腺导管癌细胞、肝癌细胞(SMCC-7721)与肝癌细胞(HepG2)中NS基因表达量为最高,而正常肝细胞未检测到NS的表达。结论: NS在肿瘤细胞中的高表达具有普遍性,而在终末分化的细胞中不表达,判断NS基因参与了肿瘤细胞的增殖调控,其为肿瘤的基因治疗和基因诊断提供了一个新的途径和指标。     

Neuritin基因在肺癌及正常肺组织中表达的检测

目的:了解neuritin基因在肺癌组织中的表达情况,探讨neuritin基因表达与肺癌发生发展的相关性.方法:收集肺癌、正常肺石蜡及新鲜组织标本,利用免疫组化检测组织中neuritin的表达情况.利用RT-PCR方法检测新鲜肺癌及正常肺组织中neuritin mRNA表达.结果:肺癌组织中neuritin的表达高于正常肺组织,差异有统计学意义(p＜0.05).结论:neuritin在肺癌组织和正常肺组织表达存在显著差异,提示neuritin表达可能与该肿瘤的发生发展相关.     

食管癌Eca109细胞中Nucleostemin基因表达的实验研究

目的：研究Nucleostemin（NS）基因在食管癌Eca109细胞中的表达及凋亡作用。方法：提取各组食管癌细胞总RNA,用半定量RT-PCR方法检测NS基因的表达情况;用CCK-8法检测3组细胞增殖抑制率;TUNEL试剂盒法检测细胞凋亡情况。结果：与对照组比较,实验组细胞NS基因表达量下降,细胞增殖抑制率〉65%,细胞凋亡增加（凋亡指数为39.47%）差别具有统计学意义。结论：NS基因特异性RNA干扰使食管癌Eca109细胞中NS基因表达量下降,出现细胞增殖抑制,细胞凋亡增加。     

c-erbB-2及GST-π基因在汕头地区胃癌患者中的表达特点

目的 探讨癌基因c-erbB-2及GST-π基因在汕头地区胃癌患者中表达情况,分析癌基因表达与胃癌临床病理特征之间的相关性.方法 采用免疫组化SP法,检测265例胃癌石蜡包埋的肿瘤蜡块中c-erbB-2基因及GST-π基因表达情况.结果 正常胃黏膜中两种基因均无表达.胃癌组织中c-erbB-2阳性表达比例为65.3%（173/265）,基因的表达与肿瘤的大小相关（P＜0.01）：肿瘤直径≥4 cm者基因表达明显高于直径小的肿瘤患者;临床分期越晚者肿瘤基因表达率越高（P＜0.05）;此外基因的表达还与肿瘤的位置相关（P＜0.05）;GST-π基因表达阳性率为65.3%（173/265）,与肿瘤病理学分型相关（P＜0.05）.结论 c-erbB-2基因表达与肿瘤的大小及临床分期相关,也许可以作为肿瘤恶性程度标志物,此外该基因在不同位置发生的肿瘤上表达有差异可以作为一个鉴别手段用于临床病理诊断.     

11例人膀胱移行细胞癌基因表达谱变化的临床分析

目的探讨人膀胱移行细胞癌基因表达谱的变化.方法使用人肿瘤基因表达谱芯片检测11例膀胱移行细胞癌组织及其膀胱黏膜组织基因表达谱的差异.结果以膀胱黏膜组织为对照,11例膀胱肿瘤组织中有87条基因表达明显下调,102条基因表达明显上调.结论膀胱肿瘤与膀胱黏膜组织之间存在大量差异表达的基因,说明膀胱肿瘤的发生与发展是多种肿瘤相关基因表达失常或肿瘤抑制基因失活所致.     

前列腺癌组织中RECK的表达及其与MMP-9的关系

目的:观察前列腺癌组织RECK基因及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达,探讨前列腺癌发生中RECK基因的可能作用机制.方法:取20例前列腺癌及12例正常前列腺组织,RT-PCR及real-time RT-PCR检测RECK基因表达,RT-PCR法检测MMP-9的表达,Western印迹法检测RECK蛋白表达.结果:RT-PCR及real-time RT-PCR检测发现前列腺癌组织RECK基因表达明显低于正常组织(P＜0.01),而MMP-9 mRNA表达明显高于正常组织(P＜0.01).Western印迹分析见前列腺癌组织中RECK蛋白的表达明显低于正常组织(P＜0.01).结论:前列腺癌组织中RECK基因表达较低,RECK基因可能通过抑制前列腺组织MMP-9表达发挥抑癌作用.     

肿瘤谱阵列芯片技术分析人体不同癌组织hHBrk1基因的差异表达

目的检测不同肿瘤及其癌旁正常组织中hHBrk1基因的差异表达,为进一步研究hHBrk1基因对肿瘤生物学过程的影响提供线索。方法以154对正常及肿瘤组织(19种不同人体组织)和10种肿瘤细胞株的cDNA的肿瘤谱阵列芯片(Cancer profiling arrayⅡ)为研究材料,采用Northern杂交方法分析目的基因表达水平的差异。根据阳性结果收集临床肿瘤组织样本,用RT-PCR检测hHBrk1基因表达,以验证芯片结果的可靠性。结果154对组织及10个肿瘤细胞株均表达hHBrk1基因。其中肺肿瘤组织高表达hHBrk1基因,与正常配对肺组织表达丰度差异有显著性(P<0.01);在肾癌组织中的hHBrk1基因表达丰度低于配对肾组织(P<0.01)。RT-PCR证实8临床肺肿瘤组织中5例高表达hHBrk1基因。结论肿瘤谱阵列芯片技术能够快速检测hHBrk1基因在不同组织中的表达差异,hHBrk1基因可能与肺癌及肾癌的发生、发展有关。     

In vitro study of Nucleostemin gene as a potential therapeutic target for human lung carcinoma

Objective Nucleostemin (NS) is a GTP-conjugated protein located in the nucleoli of stem cells and some cancer cells,and maintains cell self-renewal.We aimed to evaluate NS as a potential target for lung carcinoma gene therapy by investigating NS gene expression and its effect on A549 cell proliferation.Methods NS mRNA and protein expression in A549,HepG2,SMMC-7721,HeLa,and U251 cells was analyzed by RT-PCR and western blotting following transfection of NS siRNAs and negative control siRNA (NC).The effect on cell proliferation was also analyzed by MTT assays.Results NS mRNA and protein were both expressed in A549 cells and four other tumor cell lines; the relative expression levels were similar in all five cell lines.The three pairs of NS siRNA,either transfected alone or cotransfected into A549 cells,could effectively inhibit the expression of NS mRNA and protein.Moreover,the interference ratio showed an obvious concentration-dependent relationship.NS siRNA treatment resulted in significant inhibition of A549 cell proliferation by 35.7％.Conclusion NS gene was not only highly expressed but also played an important role in A549 cell proliferation.Thus,targeting of NS may be a promising novel strategy for the treatment of lung carcinoma.     

丙型肝炎病毒NS3基因真核表达载体的构建及表达

目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因NS3的真核表达载体,并分析其在HeLa细胞中的表达。方法:以HCV全长cDNA质粒为模板进行PCR扩增,获得全长NS3基因,将其插入克隆载体pMD18-T中,鉴定后与真核表达载体pcDNA3.1(+)重组,用脂质体介导法转染HeLa细胞,间接免疫荧光法及Western blot鉴定转染后HCVNS3蛋白的表达。结果:PCR扩增的NS3序列正确,构建的真核表达载体成功转染HeLa细胞,表达的NS3蛋白相对分子量为70kD。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)/NS3,并在HeLa细胞中获得表达。     

H7N9亚型禽流感病毒非结构蛋白-1真核表达载体的构建与表达

目的:构建甲型H7N9亚型禽流感病毒非结构蛋白NS1真核表达载体并转染293T细胞以表达其编码的蛋白?方法:从南京分离株H7N9流感病毒[A/Nanjing/1/2013(H7N9)]提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增NS1全长基因,将其克隆至pMD18-T 载体中构建pMD18-T-NS1质粒,以pMD18-T-NS1质粒为模板扩增NS1基因?双酶切NS1基因PCR产物与PXJ40-MYC后,连接构建真核表达载体PXJ40-MYC-NS1,经酶切及测序鉴定后将质粒转染到293T细胞中,通过Western blot鉴定NS1蛋白的表达?结果:经双酶切?测序鉴定证实NS1基因的真核表达载体构建成功?Western blot法可见NS1基因编码蛋白的成功表达?结论:成功构建了H7N9非结构蛋白NS1真核表达载体,该表达载体的构建为后期建立稳定表达NS1蛋白的细胞模型和NS1蛋白功能研究奠定基础?     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B基因酵母表达载体的构建及表达

目的：构建丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白NS4B基因的酵母细胞表达载体，为探索HCVNS4B在细胞内的相互作用蛋白奠定基础。方法：用多聚酶链反应（PCR）的方法在HCV全长质粒pBRTM／HCV-1为模板扩增HCVNS4B基因，克隆到pGEM-T载体中，双酶切后回收连接到酵母表达质粒pGBKT7中表达。提取酵母蛋白质，进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western免疫印迹分析。结果：成功构建HCVNS4B基因酵母表达载体，Western免疫印迹分析显示了HCVNS4B在酵母细胞中融合表达。表达产物在胞内存在，融合蛋白的相对分子量约为48ku左右。结论：HCVNS4B蛋白在酵母中表达成功。     

一个唐氏综合征下调表达基因片段的克隆、鉴定及细胞定位分析

目的:克隆唐氏综合征(Down syndrome,DS)相关新基因,并对其进行组织表达谱和细胞定位分析,探索其在DS脑病变发生中可能参与的环节.方法:在分析前期基因芯片结果的基础上,选取在正常和DS胎儿大脑皮层中差异表达的表达序列标签(expression sequence tags,EST) AI480014,利用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA end ,RACE)对其进行末端延伸;利用多组织Northern印迹技术分析其在组织中的表达谱和剪接体情况,用半定量RT-PCR进一步验证其组织表达谱的结果;通过细胞原位杂交技术,对其进行体外原代培养的混合胶质细胞表达定位分析;最后用半定量RT-PCR分析其在DS和正常胎儿脑皮层表达情况.结果:成功地将AI480014的3'端延伸232 bp,得到一个3'端完整、长682 bp的新基因片段(Genbank序列号DQ275636);Northern印迹表明分析其在心、肝、脾、肾、脑组织均有表达,且在脑组织中的表达量最高,而在脑组织中又以额叶、海马的表达量最高,各组织无可变剪接体的存在;在混合培养的胶质细胞中检测到该基因的表达;DQ275636染色体定位为5q14.结论:得到一个新基因片段(DQ275636);其组织来源和在脑组织中的表达特性提示其可能参与DS脑病变发生的某个环节.     

muc-1基因在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨muc-1基因在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况及其与淋巴结转移的相关性和临床意义。方法：应用RT-PCR方法检测36例NSCLC组织和10例正常肺组织中muc-1基因的表达情况。结果：36例NSCLC组织中有19例muc-1基因阳性表达,阳性表达率为52.7%,正常肺组织无muc-1表达。muc-1 mRNA在NSCLC组织中的阳性表达与患者的年龄、性别、组织学类型、病理分级、TNM分期及肿瘤大小无关（P>0.05）,与淋巴结转移有关(χ² =6.733,P<0.05)。有淋巴结转移的NSCLC组织中muc-1基因阳性表达率高（N₀　10%,N₁　58.82%,N₂　88.9%）。结论：muc-1基因阳性表达的NSCLC患者淋巴结转移率高,检测muc-1基因表达对NSCLC患者的预后和术后综合治疗具有指导性作用。     

脑胶质瘤中PCNA nm23的表达及临床意义

目的:研究增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和肿瘤转移抑制基因nm23在脑胶质瘤中的表达与肿瘤病理分级的关系,探讨在胶质瘤预后判断上的价值.方法:应用免疫组织化学SP法检测47例脑胶质瘤和12例正常脑组织中PCNA和nm23的表达.结果:PCNA在胶质瘤中绝大部分阳性表达,在正常脑组织中全部阴性表达,PCNA在胶质瘤的表达明显升高(P＜0.01),并随恶性程度增高而升高(P＜0.01);nm23基因在正常脑组织中全部阳性表达,胶质瘤中部分阳性表达,nm23在胶质瘤的表达明显降低(P＜0.01),且随恶性程度增高而降低(P＜0.05).两者呈负相关. 结论 :PCNA、 nm23检测可能成为脑胶质瘤诊断及判断恶性程度与预后的指标.     

用mRNA差异显示PCR技术筛查慢性砷中毒相关基因片段

目的：对慢性砷中毒组织的表达差异基因进行分析。方法：采用mRNA差异显示PCR技术(mRNA differential display PCR)，以慢性砷中毒病人具有皮损表现的手掌部皮肤组织为标本，正常人体手掌部皮肤组织为对照，提取组织mRNA，对砷中毒组织的表达差异基因进行分析，选择高表达和低表达的基因片段各一条进行了克隆和序列分析，经RNA印迹法确证，并在基因数据库中进行了同源性比较。结果：获得25条差异表达明显的cDNA片段，分别在砷中毒病人组织中呈高表达和低表达，已测序的两个序列均为未知基因序列。结论：慢性砷中毒病人病变皮肤组织与正常人体皮肤组织相比在mRNA水平有基因表达差异，差异表达的片段可能为砷中毒相关基因片段。