orexin-B细胞及其神经纤维在癫痫模型大鼠癫痫发作不同时间点的变化及其意义

目的：观察癫痫模型大鼠orexin-B细胞及其神经纤维在致痫后不同时间点的变化，阐明其在癫痫发作中的作用。方法：用海人酸（KA）腹腔注射诱发大鼠癫痫发作，并分别于癫痫终止后8 h、1 d、3 d、7 d和慢性复发时间点采用免疫组化方法检测orexin-B免疫反应阳性细胞数及其神经纤维的变化。结果：orexin-B免疫阳性细胞主要分布在大鼠下丘脑和穹窿周围核，但是在海马有可疑的阳性，而其免疫阳性神经纤维分布广泛；orexin-B免疫阳性细脃数呈现为先稍微减少后恢复、之后减少再恢复的趋势；7 d组细胞数减少，与其他组比较差异有统计学意义（P<0.05），而其免疫反应神经纤维平均光密度值呈现出与其细胞数相反的变化。结论：orexin-B细胞数及其神经纤维在大鼠癫痫发生过程中有变化，其可能参与了癫痫的神经元放电和传播的调节，增加其浓度有助于对癫痫的控制。     

大鼠磨牙移动致牙髓CGRP样神经的变化及意义

目的研究大鼠磨牙受力移动时牙髓组织中神经肽CGRP免疫阳性神经纤维的分布变化情况及意义。方法利用免疫组化方法对大鼠磨牙切片进行染色，观察大鼠磨牙受力移动后不同时间段牙髓组织中神经肽CGRP免疫阳性神经纤维的分布变化情况。结果大鼠磨牙牙髓内CGRP免疫阳性神经纤维数量在牙齿移动早期急剧减少，此后逐渐恢复并超过正常值，约24h达到最大数量。结论大鼠磨牙移动时对牙齿产生伤害性刺激，引起牙髓末梢神经兴奋大量释放CGRP等神经肽，导致牙髓神经纤维中CGRP含量发生动态变化。     

颞叶癫痫大鼠海马Akt蛋白表达变化的研究

目的动态观察颞叶癫痫大鼠神经元磷酸化Akt(phospho-Akt)蛋白的表达变化,探讨其在癫痫发生发展中的作用。方法清洁级SD雄性成年大鼠36只,随机分为正常对照组、诱发大鼠癫痫持续状态(statusepilepticus,SE)后3h、6h、12h、24h、3d组。用氯化锂LiCl和匹罗卡品(PILO)制备癫痫动物模型,应用免疫组织化学染色技术检测致痫后各时间点磷酸化Akt蛋白表达情况。结果免疫组织化学法显示正常组与假手术组大鼠海马CA1、CA3区可见少量磷酸化Akt阳性细胞,两组间差异无统计学意义(P>0.05);模型组可见CA1、CA3区Akt阳性细胞增加(P<0.01),6h达到高峰,3d回到对照组水平。结论上调磷酸化Akt蛋白表达有利于减少海马神经元凋亡,可能是保护神经损伤的机制之一。     

艾芬地尔对戊四氮致痫大鼠海马nNOS表达的影响

目的:观察艾芬地尔对戊四氮(PTZ)急性致痫大鼠海马一氧化氮合酶(nNOS)表达的影响,探讨癫痫发生的机制及艾芬地尔的药理作用。方法:将60只大鼠随机分为空白对照组(A组)、PTZ致痫组(B组)、艾芬地尔干预组(C组),通过腹腔注射PTZ建立急性癫痫动物模型,并采用免疫组化技术观察海马nNOS的表达变化情况。结果:模型组各时间点nNOS水平较正常组各相应时间点明显升高(P<0.05);模型组nNOS在24h免疫反应阳性神经元AOD值达到最高;艾芬地尔干预组与模型组相比表达下降,各时间点AOD值均存在显著性差异(P<0.05)。结论:PTZ点燃癫痫大鼠海马组织nNOS表达明显增加,提示nNOS可能参与了戊四氮点燃癫痫的形成过程;艾芬地尔明显减少了nNOS阳性细胞的表达,有利于保护癫痫损伤后神经细胞的功能。     

杏仁核点燃大鼠癫痫模型中P-糖蛋白和多药耐药相关蛋白1的动态表达变化

目的:探讨杏仁核点燃大鼠癫痫模型中P-糖蛋白(PGP)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)的动态表达变化.方法:选择40只成年雄性大鼠,随机分为模型组和对照组,各20只.对照组予电极植入,不予刺激;模型组建立杏仁核点燃大鼠癫痫模型.制作2组大鼠的脑组织标本,并进行免疫组织化学染色,计算2组大鼠皮层及海马区域24 h、7 d、30 d时的PGP及MRP1阳性细胞数.采取RT-PCR法检测mRNA表达,比较2组大鼠皮层和海马区域24 h、7 d、30 d的PGP mRNA及MRP1 mRNA表达情况.结果:模型制作成功后24 h、7 d和30 d,模型组大鼠皮层及海马区PGP和MRP1阳性细胞数均高于对照组(P<0.05~P<0.01),PGP mRNA及MRP1 mRNA表达亦均高于对照组(P<0.05~P<0.01);模型组组内比较显示,模型制作成功后30 d的大鼠大脑皮层和海马区 PGP、MRP1阳性细胞数和PGP mRNA及MRP1 mRNA表达均高于24 h(P<0.05);而对照组以上指标在各时间点差异均无统计学意义(P>0.05).结论:在杏仁核点燃模型中,大鼠大脑皮层及海马区的PGP及MRP1表达均增多,且随着时间延长,模型组内表达呈增高趋势.     

亚低温对重型颅脑损伤大鼠脑组织TRPM2、caspase9表达的影响

目的采用改良的Feeney’s自由落体损伤装置建立重型颅脑损伤模型,运用此模型探讨亚低温对重型颅脑损伤后大鼠TRPM2、Caspase-9表达影响。方法 SPF(specific pathogen free)级成年SD(sprague-dawley)雄性大鼠108只,体质量280～340 g。随机分为3组,对照组(即仅钻孔) 36只、颅脑损伤组(TBI组即仅钻孔打击) 36只,颅脑损伤和亚低温组(TBI+MHT组) 36只,各组根据打击后不同时间点,分为6个亚组,分别为打击后6 h、12 h、24 h、48 h、72 h和168 h,每个时间点6只大鼠。损伤后不同时间点分别进行改良大鼠神经功能缺损评分(m NSS),检测TRPM2、Casepase-9的表达。结果 (1)大鼠m NSS评分结果:TBI组及TBI+MHT组在伤后呈先升高后降低的趋势,在24 h时间点达到高峰。(2)免疫组化法结果:TRPM2、Casepase-9的阳性细胞表达随时间的变化而变化,在伤后6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、168 h的各时间点,阳性细胞的表达呈现出先升高后降低的趋势,伤后6 h即有升高,24 h达到高峰,伤后168 h降至最低。TBI+MHT组与TBI组比较各时间点差异有统计学意义(P<0. 05)。结论颅脑损伤后的氧化应激可使TRPM2、Caspase-9表达增加,促使细胞凋亡,加重继发性脑损伤,亚低温治疗均对重型颅脑损伤具有脑保护作用。     

癫痫大鼠海马小胶质细胞的激活特点

目的:研究癫痫大鼠海马小胶质细胞在癫痫持续状态后不同时间点激活的特点。方法:采用锂-匹罗卡品癫痫大鼠及免疫组化方法比较不同时间点OX-42阳性细胞的增殖及形态变化。结果:小胶质细胞在癫痫持续状态(SE)后被激活;OX-42阳性细胞在SE 3～7 d时增加达到一个峰值,7～14 d时细胞的增加处于一个相对稳定状态,而14 d以后增加的OX-42阳性细胞逐渐下降,大约在21 d时细胞数恢复到较先前稍高的水平。结论:癫痫发作后的炎症病理损伤与小胶质细胞的增殖活化密切相关,小胶质细胞的激活是构成癫痫炎症损伤机制的重要环节。     

芎芷地龙汤对偏头痛模型导水管周围灰质c-fos和β-EP蛋白共存表达的影响

目的:研究芎芷地龙汤对偏头痛模型导水管周围灰质c-fos和β-EP蛋白共存表达的影响。方法:健康雄性SD大鼠随机为4组:生理盐水组、模型组、舒马普坦组、中药治疗组。皮下注射NTG注射剂复制实验性偏头痛动物模型,经药物干预后在4h、6h两个时间点取材,采用免疫组化双标染色法测定导水管周围灰质c-fos和β-EP的免疫阳性神经元的兴奋状态及其共存表达情况。结果:模型组c-fos阳性细胞数和β-EP阳性细胞数增多,4h多于6h,两个时间点的阳性细胞数与生理盐水组比较有显著性差异(P<0.01)。中药组和舒马普坦组c-fos阳性细胞数减少,两个时间点的阳性细胞数与模型组比较有显著性差异(P<0.01);中药组β-EP阳性细胞数增多,两个时间点的阳性细胞数与模型组比较有显著性差异(P<0.01);舒马普坦组β-EP阳性细胞数增多,两个时间点的阳性细胞数与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:芎芷地龙汤可以减少由硝酸甘油诱导的致痛物质c-fos的表达,增加抗痛物质β-EP的表达,从而进一步减少三叉神经脊束核神经元的兴奋性,阻止痛觉信息的传递。     

脑源性神经营养因子及其受体TrkB在大鼠新皮质的表达研究

目的:研究脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体TrkB在大鼠大脑皮质时空分布变化。方法:进行免疫组织化学实验,观察BDNF及其受体TrkB在正常大鼠发育期、成年期和老龄期大脑皮质的定位分布及时间变化。结果:生后当天的大脑皮质,即有BDNF阳性神经元出现于Ⅴ层、Ⅵ层,以后Ⅵ层阳性细胞数量增加,Ⅱ~Ⅴ层也有表达。生后20~25d,各层阳性细胞数和染色强度均达高峰。成年后BDNF表达呈递减趋势。老年期,细胞形态发生明显的退行性变化。TrkB生后当天,主要分布于Ⅱ~Ⅴ层,以后逐渐增强。至成年期90d,阳性细胞数和染色强度达高峰。老年期,TrkB阳性细胞呈增龄性减少,Ⅴ层的阳性细胞排列不规则,体积缩小,轮廓僵直,边界不清。结论:大脑皮质BDNF及其受体TrkB的时空表达基本一致。表达高峰为生后20d。老龄期呈增龄性下降,细胞出现退行性变。     

OX-42和Fos蛋白在海人酸致癫大鼠前脑中早期的表达变化

目的:研究大鼠在海人酸(KA)导致癫痫发作早期前脑内小胶质细胞的变化及其与神经元的关系.方法:应用免疫组织化学法单标分别显示前脑内OX-42和Fos蛋白表达的时间规律,并用免疫组织化学双重标记显示OX-42和Fos阳性细胞的相互关系.结果:在KA致大鼠癫痫发作早期(从15 min到360 min),前脑的小胶质细胞OX-42表达阳性,随着存活时间的变化,OX-42的阳性反应经历逐渐升高又降低的过程;反应强弱:120 min组>360 min组>60 min组>30 min组>15 min组.Fos蛋白在神经元和小胶质细胞中均表达阳性,也呈现逐渐升高又降低的变化,但Fos阳性小胶质细胞出现高峰的时间早于Fos阳性神经元,各组间Fos阳性神经元数量差异均有统计学意义(P<0.01).OX-42阳性小胶质细胞和Fos阳性神经元在前脑主要分布于大脑皮层、海马、杏仁核等部位,两者的分布特征基本一致.结论:小胶质细胞可能和神经元一起参与了KA所致癫痫发作早期的变化.     

长时连续作业对大鼠下丘脑及背缝核orexin-A和受体的影响

目的研究长时连续作业对大鼠促觉醒肽orexin- A及受体表达的影响。方法使用长时连续作业动物模型,采用免疫组织化学方法结合图像分析技术测定orexin -A及受体OX1R在下丘脑外侧区,背缝核的变化。结果经过长时连续作业训练后,跑台组与对照组相比,orexin- A阳性细胞在下丘脑外侧区、orexin- A阳性纤维在背缝核及OX1R在背缝核均显著减少。结论长时连续作业可造成促觉醒肽orexin- A和OX1R的表达降低。     

外周躯体组织中三种肽能神经的分布

本文以1例人的截肢和37例 Wistar 大鼠的材料,用免疫组织化学方法观察了外周躯体组织中 SP、VIP、NPY 肽能神经的分布.见3种肽能神经及其终末分支,穿行于外周躯体组织的深浅层各种组织之间.它们一般为细的无髓纤维,呈串珠状,围绕血管分布.SP 和 VIP 肽能神经在皮肤、皮下血管、汗腺和毛囊中广泛分布,而在躯体肌肉中比较稀疏.NPY 免疫反应神经在深筋膜及骨骼中的血管上很多,但在皮下组织中较少.     

Distribution of tyrosine hydroxylase (TH)-like, neuropeptide Y (NPY)-like immunoreactive and acetylcholinesterase (AChE)-positive nerve fibers in the prostate gland of the monkey (Macacus fuscatus)

Nerve fibers containing immunoreactivities for tyrosine hydroxylase (TH) and neuropeptide Y (NPY), and exhibiting acetylcholinesterase (AChE) reactivity were examined by means of histochemical and immunohistochemical methods in the caudal lobe of the prostate in the monkey, Macacus fuscatus. TH-like immunoreactive nerve fibers were distributed abundantly in the interstitium where smooth muscle fiber bundles were rich and scarcely in the paraurethral region where they were rare. NPY-like immunoreactive nerve fibers, less abundant than TH-like immunoreactive nerve fibers, were observed not only in the interstitium but also around the prostatic acini. AChE-positive nerve fibers were much denser around the acini than in the interstitium. Both the NPY-like immunoreactive and the AChE-positive nerve fibers showed an intimate spatial association with the epithelium of the acini. Judging from the distribution pattern of these nerve fibers, the following assumption is possible. Secretion of the prostatic gland as well as the outflow of the prostatic fluid into the urethra induced by contraction of the smooth muscle cells in the interstitium may be controlled by sympathetic adrenergic nerves, while cellular secretion of the acinar epithelium is regulated by parasympathetic cholinergic nerves. The NPY-like immunoreactive nerve fibers around the acini may be non-noradrenergic; they may regulate the cellular secretion by acting on the cholinergic nerves as well as by having a direct effect on the acinar secretory cells.     

Histochemical and immunohistochemical studies on intraepithelial nerve fibers in the ejaculatory duct of the monkey (Macaca fuscatus)

With special attention to intraepithelial nerve supply, the distribution of peripheral nerve fibers in the ejaculatory duct of the monkey (Macaca fuscatus) was examined by histochemical and immunohistochemical methods and conventional transmission electron microscopic (TEM) method. The conventional TEM study has suggested that there are two types of intraepithelial nerve fibers, i.e. cholinergic and peptidergic. Acetylcholinesterase (AChE)-positive nerve fibers which were seen by means of light microscopy (LM) as surrounding the epithelium were revealed to be present intraepithelially by means of TEM examination. Neuropeptide Y (NPY)-like immunoreactive nerve fibers were richly distributed in the ejaculatory duct with a dense plexus spreading just beneath the epithelium. The immunoreactive nerves appeared, in part, to enter the epithelium. Substance P (SP)- and calcitonin gene-related peptide (CGRP)-like immunoreactive nerve fibers were found to be present to a moderate extent in the ejaculatory duct; some of them entered the interior of the epithelium to extend their nerve terminals to its free surface. Neural elements clearly immunoreactive for tyrosine hydroxylase (TH) and vasoactive intestinal peptide (VIP) could not be found in the ejaculatory duct, except for the surroundings of the blood vessels. Possible functional roles of these intraepithelial nerves were discussed on the basis of their distribution pattern.     

降钙素基因相关肽免疫反应神经纤维和肥大细胞在大鼠松果体内的分布

用免疫组织化学ＡＢＣ法，研究了降钙素基因相关肽免疫反应（ＣＧＲＰ－ＩＲ）神经纤维和肥大细胞在大鼠松果体的分布。结果表明，ＣＧＲＰ－ＩＲ阳性反应神经纤维呈串珠状，亦有无膨体的细长阳性神经纤维。它们分布于松果体实质的细胞之间及小动脉、小静脉管壁上和血窦的周围。ＣＧＲＰ－ＩＲ阳性肥大细胞大小不等，呈圆形或卵圆形，主要分布在小动脉周围。     

大鼠肾上腺切除后垂体前叶GAP-43免疫阳性神经纤维的发芽过程

目的　阐明大鼠双侧肾上腺切除后垂体前叶生长相关蛋白 43(GAP- 43)免疫阳性神经纤维表达的量与术后时间点的关系 ,即轴突发芽的时间过程 .方法　免疫组织化学ABC法 .结果　大鼠双侧肾上腺切除术后第 4日垂体前叶GAP- 43阳性表达显著增多 ,第 2周有所下降 ,至第 4周基本降至正常水平 .结论　大鼠在双侧肾上腺切除后 ,垂体前叶出现肽能神经纤维发芽 ,并围绕在腺细胞周围 ,该发芽过程于术后 4～ 7d达到高峰 ,第 2周开始下降 ,第 4周基本结束     

大鼠提睾肌血管肽类免疫反应阳性神经纤维的分布

目的 研究大白鼠提睾肌动脉微循环的神经调节。方法 以免疫组织化学ABC法对大白鼠提睾肌动脉各级分支的CGRP,NPY,SP,5-HT及M-ENK免疫反应阳性纤维的分布进行研究和观察。结果 肽类免疫阳性纤维在提睾肌动脉各级分支均有大量分布,但随着动脉的分支而逐渐减少,阳性纤维和终末呈密集颗粒状、网状和涡旋状排列,在毛细血管性纤维和终末呈密集颗粒状、网状和涡旋状排列,在毛细血管上也能见到阳必纤维和终末的分布,在其分叉处更为显。结论 肽类神经递质可能对提睾肌微循环的生理调节起重要作用。阳性纤维和终末在毛细血管的分布提示神经纤维可直接作用于血管内皮细胞而产生生理效应,肽类神经递质在提睾肌动脉的分布研究为完善和利用大白鼠提睾肌微循环实验动物模型和微循环的神经调节研究打下了一定基础。     

生长相关蛋白免疫反应神经纤维在大鼠垂体前叶的分布

目的：生长相关蛋白（ＧＡＰ－４３）是神经生长再生的一种标志蛋白，研究大鼠垂体前叶ＧＡＰ－４３的阳性分布为进一步研究垂体前叶内神经可塑性创造条件。方法：免疫组织化学ＡＢＣ染色法，结果：在大鼠垂体前叶有一定数量的ＧＡＰ－４３阳性神经纤维，其分布为周边较中央多，两侧较内侧部多。结论：垂体前叶内有ＧＡＰ－４３阳性神经纤维，表明其具有再生发芽的能力。