前列腺癌人源性异种移植裸鼠模型的建立与治疗

目的建立前列腺癌人源性异种移植(patient-derived xenograft,PDX)模型,评价不同治疗方案的抗肿瘤效果。方法将人新鲜的前列腺癌手术标本与基质胶混合后移植入补充有外源性雄激素的裸鼠皮下,连续监测肿瘤生长,评估其保真度并连续传代;将荷瘤鼠分为四组:多西他赛组、去势组、多西他赛联合去势组以及对照组,治疗期间测量肿瘤体积及小鼠体重变化,治疗结束后,检测血清中总前列腺特异性抗原(total prostate specific antigen,tPSA)浓度及组织病理学变化,评估治疗效果。结果成功建立了前列腺癌PDX模型,包括激素敏感型(D17225)和去势抵抗型(C40019)肿瘤,病理学分析发现移植瘤较好的保持了患者原发瘤的主要特征;病理组织学及血清tPSA检测发现多西他赛组及多西他赛联合去势组在D17225模型中显示出良好的治疗效果,且后者抑瘤效果更为明显。结论成功建立了前列腺癌PDX模型并稳定传代,多西他赛单药或联合去势处理对激素敏感型(D17225)前列腺癌PDX模型具有显著治疗效果。     

裸小鼠人喉癌移植瘤模型LC-91活体骨髓细胞SCE及染色体畸变的检测

人体肿瘤在裸小鼠体内的移植研究，已有大量报道，但人喉癌在裸小鼠体内建立稳定的移植瘤模型，国内外报道极少。王太一等将一例人喉癌移植于BALB／c裸小鼠后，成功地建立了定名为LC-91的移植瘤模型。为了探讨该模型的细胞遗传学特征，我们进行了活体骨髓细胞姊妹染色单体交换(SCE)及染色体数目畸变的检测。     

人胰腺癌细胞CFPAC-1裸小鼠原位移植瘤模型的建立

目的:建立人胰腺癌裸小鼠原位移植瘤模型,并对其生物学特性进行研究.方法:将人胰腺癌细胞CFPAC-1接种于裸鼠皮下,并将皮下肿瘤组织原位移植于裸鼠胰腺,比较两种移植瘤的生长及转移情况.结果:胰腺癌皮下移植瘤模型与胰腺癌原位移植瘤模型的体内成瘤率、生长情况及形态学上均无显著差异.皮下移植瘤模型呈局限性生长,无一例发生远处转移;原位移植瘤模型远处转移率高达87.5%,发生75.0%腹膜转移,37.5%肝转移,12.5%肺转移,37.5%淋巴结转移,并保持分泌CA19-9的特性.结论:人胰腺癌裸小鼠原位种植瘤模型明显优于皮下移植瘤模型,较好地模拟了人胰腺癌自然生长和局部浸润及远处转移过程,是胰腺癌体内研究理想的动物模型.     

瘤内注射β干扰素基因转染的人骨髓间充质干细胞对前列腺癌皮下移植瘤的治疗作用

目的 观察人β干扰素(IFN-β)基因修饰的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)治疗人前列腺癌皮下移植瘤的作用.方法 构建人IFN-β基因腺病毒表达载体Ad-IFN-β,体外转染hMSCs,使用4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记表达IFN-β的hMSCs(IFN-β -hMSCs).应用人前列腺癌细胞株PC-3异种皮下种植建立前列腺癌动物模型,IFN-β-hMSCs瘤内注射入小鼠模型体内,收集肿瘤和肝、肺、脾、肾等脏器作冰冻切片和石蜡切片,荧光显微镜下观察肿瘤及各脏器中]FN-β -hMSCs的分布情况,记录IFN-β -hMSCs瘤内注射后荷瘤小鼠肿瘤大小及生存期.结果 瘤内注射IFN-β -hMSCs后14 d,前列腺癌组织冰冻切片和石蜡切片中均可见DAPI标记的IFN-β -hMSCs,而肝、肺、脾、肾等脏器的切片中均未见IFN-β -hMSCs的存在.瘤内注射IFN-β -hMSCs可延长荷瘤鼠的生存期,抑制肿瘤的生长,实验组与对照组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IFN-β -hMSCs在体内能够抑制前列腺癌移植瘤的生长,延长荷瘤鼠的生存期.     

人胃癌SGC7901/VCR裸鼠移植瘤模型的建立及耐药性检测

目的建立人胃癌SGC7901/VCR裸鼠移植瘤模型,并检测其多药耐药性,为进行肿瘤多药耐药逆转剂的筛选和体内实验研究奠定基础。方法采用皮下接种法建立裸鼠移植瘤模型;观察裸鼠生长状况;移植瘤生长情况;进行瘤重及瘤体积比较;移植瘤P-gp耐药蛋白表达;原代培养细胞,检测移植瘤模型多药耐药性。结果人胃癌SGC7901/VCR裸鼠移植瘤组织病理学检查为低分化腺癌,移植瘤组织原代细胞培养后,P-gp表达强阳性+++,具有多药耐药性,模型建立成功。结论成功建立了人胃癌SGC7901/VCR裸鼠多药耐药移植瘤模型,为胃癌耐药研究提供了较理想的动物模型。     

NS398对前列腺癌细胞PC-3小鼠体内致瘤性的抑制作用

目的探讨环氧化酶-2抑制剂NS398对前列腺癌细胞PC-3小鼠体内致瘤性的抑制作用及其机制。方法16只雄性裸小鼠建立负载前列腺癌细胞PC-3模型并随机分成2组,每组8只。对照组每只小鼠给予生理盐水0.2 mL,NS398治疗组每只小鼠给予NS398 3 mg.kg-1体质量,2组均腹腔注射,每周3次,共5周(15次)。测量裸鼠体质量、移植瘤的体积、瘤质量及抑瘤率,移植瘤组织标本进行HE染色观察形态学变化,应用免疫组织化学方法检测其微血管密度。结果治疗后NS398治疗组肿瘤质量明显低于对照组(P<0.01),而2组小鼠平均荷瘤体质量比较差异无统计学意义(P>0.05);NS398对小鼠前列腺癌的瘤质量抑制率为63.06%;NS398治疗组微血管密度值明显低于对照组(P<0.05)。结论NS398对前列腺癌PC-3移植瘤生长有抑制作用,可能与其抑制肿瘤新生血管生成有关。     

SCID鼠人宫颈癌组织模型的建立及其生物学特性初探

目的研究人原代宫颈癌组织在SCID鼠体内成瘤性及生物学特性。方法接种人宫颈癌组织于SCID鼠皮下,以建立人宫颈癌SCID鼠模型,观察荷瘤鼠成瘤、一般特性和移植瘤生长,组织学特性,检测肿瘤组织,外周血和肝、脾等脏器HPVDNA表达情况。结果成瘤率为100%,移植瘤生长以局部浸润为主,未见转移瘤。组织学检查所有移植瘤与种植前肿瘤组织病理检查一致,HPVDNA呈阳性,亚型与所种植人宫颈癌组织HPV亚型一致,而外周血与肝、脾等脏器HPVDNA呈阴性。结论初步建立SCID鼠人宫颈癌组织模型,其较好的模拟了人宫颈癌的生物学特性,为进一步探讨宫颈癌的发病机制及鉴定治疗的新方法提供了一个理想的动物模型。     

小鼠结肠癌高转移模型体内筛选和建立

目的采用体内筛选的方法建立小鼠结肠癌高转移模型,为系统研究结肠癌转移机制和临床结肠癌治疗提供动物模型。方法先将C26小鼠结肠癌移植于T、B、NK免疫细胞缺陷的NOD-SCID小鼠皮下,并在首代筛选过程中切除皮下瘤,延长小鼠寿命以获得明显转移灶,然后通过皮下移植→肺转移→皮下移植→肺转移的体内循环筛选方法建立高转移模型。以建立成功的高转移模型为瘤源,在BALB/c小鼠体内以相同的方法继续筛选,同时进行肿瘤的生长和转移情况观察、病理组织学、超微结构、细胞增殖周期和异倍体的观察。结果NOD-SCID小鼠筛选5代后肺转移达100%。但筛选后的肿瘤组织皮下移植到BALB/c小鼠体内时,肿瘤的转移程度有所下降,又经BALB/c小鼠体内4代筛选,肿瘤的移植成瘤率、肺转移率均为100%。病理组织学、超微结构观察、细胞增殖周期和异倍体等结果表明与原结肠癌生物学特性相似。结论作者建立的肺转移率100%、转移特性稳定、直观性好、操作简便的小鼠结肠癌高移植模型,为探讨结肠癌转移的生物学机制和抗转移治疗提供了理想的动物模型。     

人子宫内膜癌SCID鼠皮下移植瘤模型的建立及其生物学特性初探

目的建立人子宫内膜癌SCID鼠模型,为子宫内膜癌的体内实验及临床研究提供合适的动物实验模型。方法分别选择低分化与高分化子宫内膜癌组织标本移植于SCID鼠皮下,原代移植瘤形成后进行鼠间传代,对移植瘤进行相关的生物学检测。结果成功建立3只原代人子宫内膜癌SCID鼠皮下移植瘤模型,其中低分化组织成瘤2只,中分化组织成瘤1只,原代移植成功率为37.5%,自第五代后,移植瘤的传代成功率为100.0%。病理组织学证实:连续传代的移植瘤仍保持原癌组织病理形态特点及人类肿瘤的特点。在子宫内膜癌SCID鼠皮下移植瘤模型中,100.0%移植瘤模型雌激素受体表达为阳性,33.3%孕激素受体表达为阳性,与有关文献报道一致。结论成功建立了人子宫内膜癌SCID鼠皮下移植瘤模型,移植瘤保持了原子宫内膜癌生物学特征,为人类子宫内膜癌的体内实验及临床研究提供了较理想的动物模型。     

肿瘤患者来源的异种移植(PDX)模型

将患者新鲜肿瘤组织移植于免疫缺陷小鼠建立的患者来源异种移植(patient-derived xenograft,PDX)模型较好地保持了原发肿瘤的遗传特性和异质性,在肿瘤的个体化治疗研究中具有独特的优势。常用PDX模型的移植方法主要有皮下移植、肾包膜移植和原位移植。移植瘤的溯源方法包括组织形态学比较、肿瘤特异性标志物分析、短片段重复序列分型和测序分析。在PDX模型研究中,需要重点关注影响模型成功率的因素、人源化问题、淋巴瘤的发生和药物评价中治疗策略的选择。虽然从目前临床数据来看,基于PDX模型的个体化治疗还没有显示出实质性疗效,仍处于临床验证阶段,但PDX模型的建立和应用为肿瘤学研究,特别是肿瘤的个体化治疗提供了良好的实验平台。我们在强调PDX模型个体化的同时,要善于应用共性思维,开展基于PDX模型基因组学的肿瘤靶向药物筛选。     

肾包膜下种植建立人前列腺癌异种移植动物模型

目的 采用肾包膜下种植方案建立人前列腺癌异种移植动物模型.方法 15只SCID雄鼠按随机表分组法随机分为3组,每组5只.应用组织重组技术,将人前列腺癌新鲜组织和新出生BALB/c雄鼠精囊间质(SVM)在体外重组,显微外科条件下种植于SCID鼠肾包膜下,4周后观察肿瘤种植率并称重、计算体积.检测血清前列腺特异性抗原(PSA)值.用细胞角蛋白(CK)8/18、波形蛋白(vimentin)单克隆抗体特异标记人前列腺上皮和基质成纤维细胞,用P63单克隆抗体标记上皮基底膜证实其是否为前列腺癌组织.另将人前列腺癌新鲜组织单独种植于SCID鼠肾包膜下作为对照.结果 15只SCID鼠78只次组织种植中无一只死亡.4周后,重组种植组成瘤率为100%(39/39),单独种植组为94.1%(37/39),差异无统计学意义(P＞0.05).新生瘤体为实体状、不规则、黄/白色,隆出肾脏表面和(或)嵌入肾实质.重组种植组瘤体生长旺盛,单独种植组瘤体较为平坦,肿瘤大小及重量在两组间差异有统计学意义[(9.7±3.1)mm3比(6.8±2.0)mm3;(12.1±3.6)μg比(8.2±2.2)μg,均P＜0.01].重组种植组血清PSA值高于单独种植组,但两组间差异无统计学意义(P＞0.05).CK8/18、vimentin单抗标记证实新生瘤体为人源性前列腺组织,P63单抗标记显示上皮基底膜消失证实为前列腺癌.结论 肾包膜下种植可高效率建立人前列腺癌异种移植动物模型.本模型含有肿瘤基质成分,可为体内研究前列腺癌发病和病程演变中间质-上皮细胞相互作用提供技术平台.     

兔VX2肺癌模型的建立及MR观察

目的:探讨肺内注入肿瘤组织块悬液建立兔VX2肺癌模型的方法。方法:在MSCT引导下将VX2肿瘤组织块悬液注入12只中国大耳白兔右肺下叶内,利用MR扫描观察肿瘤生长和胸腔内转移情况,同时观察动物的一般情况。结果:建立的兔VX2肺癌模型组织学表现与荷瘤种兔相同,接种成功率为100%,胸壁种植率为8.3%,实验动物从接种到MR扫描发现肿瘤生长的时间为(7.0±1.5)d,从发现肿瘤生长到出现右侧胸腔积液间隔(8.0±1.6)d;接种后12只中国大耳白兔自然存活时间为(27.0±4.7)d。结论:采用肿瘤组织块悬液肺内注入法建立兔VX2肺癌模型方法简便,接种成功率高,是建立兔VX2肺癌模型的理想方法;MR DWI用于实验动物的影像学观察准确、无创,值得动物实验采用。     

小鼠不同部位体内前列腺癌骨转移模型的建立及方法改进

目的：构建并改进前列腺癌（prostate cancer,PCa）体内股骨及脊柱转移动物模型,为不同部位的PCa骨转移的诊治及骨应力改变的研究提供工具。方法: 将不同浓度的PCa细胞(RM-1)注射到小鼠(C57BL/6)股骨骨髓腔和腰椎内,观察记录小鼠活动变化、成瘤情况,测定瘤体大小及记录存活时间。取模型的双侧股骨组织,进行影像学检查后测算灰度值(骨密度), 并行组织病理学检查,确定建模情况及成瘤类型。结果:各细胞浓度梯度小鼠均成瘤,各股骨转移模型的肿瘤发生时间、生长速度同组间无差别（P>0.05）,病理学检测结果证实所有股骨骨髓腔和腰椎内PCa骨转移模型构建成功,且较低RM-1细胞浓度构建的PCa骨转移动物模型生存时间较前期构建的动物模型明显延长（约1倍,至少2周）。结论: 成功用同一PCa细胞株构建了不同部位（四肢骨和中轴骨）的PCa骨转移体内动物模型,经股骨骨髓腔穿刺注射肿瘤细胞建立PCa骨转移动物模型成瘤率高,肿瘤生长迅速,且可稳定复制,为进一步PCa骨转移的骨应力改变及防治的研究提供平台。     

免疫缺陷小鼠平台上的人肿瘤异种移植研究进展

免疫缺陷小鼠是研究肿瘤理想的动物模型,它的免疫系统部分缺陷,对体外移植物排斥较低的特点使其成为人类肿瘤移植的最佳选择。目前各类肿瘤的动物模型已相继建立,并运用于药物敏感性评价、抗肿瘤新药物临床前试验等研究。本文就人肿瘤异种移植动物模型的建立及应用予以综述。     

微流控芯片在肿瘤仿生模型构建中的应用

微流控芯片是一种在微米尺度下对流体进行精确操控的新技术,已被证明是对哺乳动物细胞及其微环境进行操控的理想平台.本文拟围绕肿瘤转移过程中的一些关键环节,对微流控芯片在肿瘤仿生模型构建中的应用作一综述.目前,基于微流控芯片技术构建的肿瘤仿生模型主要包括:肿瘤原发灶模型、肿瘤细胞诱导血管新生模型、肿瘤细胞内渗模型、肿瘤细胞外渗模型、肿瘤多器官转移模型等.相对于传统的体外研究方法,这些仿生模型很大程度上再现了体内的肿瘤微环境,逐渐成为肿瘤研究极重要的平台.     

细胞及瘤块种植人前列腺癌裸鼠皮下移植瘤模型的比较

目的 比较细胞悬液法及瘤块法种植裸鼠前列腺癌皮下移植瘤,以期获得使瘤体生长最快,质量最佳的种植方式.方法 采用细胞悬液及瘤块两种方式种植PC-3细胞人前列腺癌皮下移植瘤,比较两种种植方法所种植的移植瘤的成瘤率、成瘤潜伏期、瘤体形态以及移植瘤的中心坏死灶,同时对两种方法种植的皮下移植瘤进行常规病理学检查.本研究同时观察了PC-3细胞悬液浓度对于种植皮下移植瘤成瘤的影响.结果 两种方式种植的移植瘤的成瘤率差异无统计学意义,采用瘤块种植的移植瘤生长较细胞种植稍快,瘤体形态各异,较容易发生中心性坏死;细胞悬液组成瘤稍慢,瘤体较规则,多呈圆形或椭圆形,发生中心性坏死较晚,而且随着细胞浓度增高,其成瘤潜伏期明显缩短.结论 通过比较发现细胞悬液种植皮下移植瘤较瘤块种植更有优势,而且采用较高浓度细胞悬液种植可以有效缩短成瘤潜伏期,是一种较为理想的种植方式.     

SAC重组腺相关病毒载体的构建及其对前列腺癌CAM移植瘤的抑制作用

目的 构建携带NT4-SAC-HA2-TAT融合基因的重组腺相关病毒载体,并感染前列腺癌鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)移植瘤,观察目的基因前列腺凋亡反应基因 4(par-4)选择性癌细胞凋亡结构域(SAC)的表达及其对CAM移植瘤的生长抑制作用。方法 利用磷酸钙共沉淀法将包装质粒pAAV/Ad、腺病毒辅助质粒pFG140及重组穿梭质粒pSSCMV/NT4-SAC-HA2-TAT共转染293细胞,制备重组腺相关病毒(rAAV), 斑点杂交法检测病毒滴度。取孵育9d龄健康鸡胚,CAM接种前列腺癌细胞系PC 3细胞,建立前列腺癌的CAM移植瘤模型,接种3d后挑选成瘤鸡胚随机分为3组：空白对照组(PBS),空病毒组(AAV)和重组病毒组(rAAV),观察瘤体生长情况,上述处理4d后测量比较不同组移植瘤体积,并切片染色病理检查。免疫荧光法检测移植瘤中SAC融合肽的表达。结果 酶切鉴定结果证实成功构建pSSCMV/NT4-SAC-HA2-TAT, 斑点杂交法检测重组病毒滴度约为3.34×1010～3.34×1011cfu/mL。免疫荧光法证实SAC融合肽表达。移植瘤能在CAM上生长,可见瘤周围丰富毛细血管汇集,rAAV组瘤体显著缩小,病理HE染色可见瘤细胞局限及侵袭抑制。结论 成功构建SAC重组腺相关病毒载体并感染前列腺癌CAM移植瘤,重组病毒表达分泌的SAC融合肽对前列腺癌CAM移植瘤具有诱导细胞凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭性增殖等作用。     

裸鼠前列腺癌PC-3M细胞移植瘤模型的建立及其Her-2／neu蛋白免疫组化检测

目的观察人前列腺癌细胞株PC-3M中Her-2／neu蛋白表达情况。建立人前列腺癌PC-3M细胞裸鼠移植瘤模型,观察肿瘤组织形态并检测肿瘤细胞中Her-2／neu蛋白的表达。方法培养PC-3M细胞,制作细胞蜡块。将前列腺癌PC-3M细胞接种于裸鼠颈背部皮下,成瘤后切除肿块作石蜡切片苏木精-伊红染色观察肿瘤形态,肿块及PC-3M细胞蜡块均行免疫组化染色检测Her-2／neu蛋白的表达。结果细胞蜡块免疫组化示PC-3M细胞表达Her-2／neu蛋白。裸鼠接种PC-3M细胞后成瘤率达100％,苏木精-伊红染色检查示分化差的恶性肿瘤形态,免疫组化染色示肿瘤细胞表达Her-2／neu蛋白。结论人前列腺癌PC-3M细胞接种裸鼠成瘤率高,移植瘤模型保留了肿瘤的生物学特性及表达Her-2／neu蛋白免疫表型,为研究Her-2／neu蛋白在前列腺癌中的作用提供了较好的动物模型。     

兔VX2肺癌模型的建立及MSCT观察

目的：探讨肺内注入组织块悬液建立兔VX2肺癌模型的方法。方法：将VX2肿瘤组织块悬液注入12只中国大耳白兔右肺下叶内。利用CT扫描观察肿瘤生长和胸腔内转移情况,同时观察动物的一般情况。结果：建立的兔VX2肺癌模型组织学表现与荷瘤种兔相同。接种成功率为100%,胸壁种植率为8.3%,实验动物自接种到CT扫描发现肿瘤生长的时间为（7±1.5）d,从发现肿瘤生长到出现右侧胸腔积液间隔（8±1.6）d。12只中国大耳白兔自然存活时间为（27±4.7）d。结论：采用组织块悬液肺内注入法建立兔VX2肺癌模型方法简便,接种成功率高,是建立兔VX2肺癌模型的理想方法。     

血管基膜衍生多功能肽选择性抑制人肺癌细胞增殖

目的:观察重组血管基膜衍生多功能肽(Vascular basement membrane derived multifunctional peptide,VBM-DMP)对人肺癌细胞增殖的选择性抑制作用。方法:体外培养人肺癌(A549)细胞、人胚肺二倍体成纤维细胞(KMB-17),采用MTT比色法测定重组VBMDMP对A549细胞增殖的选择性抑制作用;台盼蓝染色细胞计数法观察重组VBMDMP对A549细胞和KMB-17细胞生长曲线的影响;采用人肺癌(A549)细胞裸鼠异种移植瘤模型治疗实验,评价重组VBMDMP治疗人肺癌的有效性。结果:体外实验结果表明重组VBMDMP能选择性抑制人肺癌(A549)细胞的增殖和生长,呈剂量依赖性,而对KMB-17细胞的增殖活性影响小;重组VBMDMP显著抑制人肺癌(A549)细胞裸鼠异种移植瘤的生长,呈剂量依赖性趋势。1 mg/kg和5 mg/kg重组VBMDMP的肿瘤生长抑制率分别是42%和74%,瘤重抑制率分别42%和77%,其中5mg/kg重组VBMDMP的肿瘤生长抑制率和瘤重抑制率均高于环磷酰胺(CTX100 mg/kg)、血管生成抑制剂烟曲霉素衍生物TNP-470(20 mg/kg)。结论:重组VBMDMP对人肺癌细胞(A549)的增殖和生长具有显著抑制作用,是一种选择性高,抗肿瘤作用强的新型抗肿瘤基因工程候选药物。