肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β在脊髓型颈椎病中的表达及相关性研究

目的:探讨人类颈椎间盘组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）的表达及其与脊髓型颈椎病（CSM）的相关性。方法:提取颈椎前路减压手术治疗的25例病人的颈椎间盘髓核组织,其中CSM 17例（CSM组）,颈椎骨折或骨折合并脱位8例（NC组）。观察颈椎间盘髓核组织结构的改变,检测颈椎间盘髓核组织中TNF-α、IL-1β的水平及TNF-α mRNA和IL-1β mRNA的表达水平。结果:2组年龄差异有统计学意义（P < 0.05）,性别和颈椎位置差异无统计学意义（P > 0.05）;与NC组比较,CSM组颈椎间盘髓核组织中胶原纤维排列紊乱;颈椎间盘髓核组织中TNF-α和IL-1β含量明显升高（P < 0.01）,且TNF-α mRNA和IL-1β mRNA的表达水平明显升高（P < 0.01）。结论:颈椎病病人的椎间盘中TNF-α和IL-1β的表达水平升高,与CSM的发生及发展存在相关性。     

TNF-α/TNFR1在内耳免疫反应中的表达

目的 探讨内耳免疫反应过程TNF-α/TNFR1的表达及作用. 方法 选用雌性白色豚鼠45只,随机分为实验组29只,对照组16只,以钥孔虫戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)全身免疫后,实验组以相同抗原进行内耳免疫,对照组内耳注射等量的磷酸盐缓冲生理盐水(phosphate buffered saline,PBS),分别在内耳免疫术后1、3、5、7和14 d处死动物,取内耳免疫侧耳蜗做石蜡切片.通过免疫组化检测内耳TNF-α的表达,原位杂交检测内耳TNFR1 mRNA的表达.结果 对照组TNF-α蛋白表达阴性.实验组除内耳免疫第1天Corti器、侧壁和螺旋神经节与内耳免疫第3天侧壁外,其余切片都有TNF-α蛋白阳性表达,免疫组织化学染色平均吸光度值均显著高于对照组(均P＜0.01).对照组TNFR1 mRNA表达阴性.实验组除内耳免疫第1、3、5天Corti器外,其余切片均有TNFR1 mRNA阳性表达,TNFR1 mRNA原位杂交染色平均吸光度值均显著高于对照组(均P＜0.01).结论 TNF-α/TNFR1是调节内耳免疫反应的重要细胞因子和信号转导途径之一.     

透骨消痛胶囊含药血清对退变关节软骨细胞表达TNF-α、IL-1β的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养的大鼠退变软骨细胞表达肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定。用10 ng.mL-1IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型。模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24、48、72 h后用TaqMan real-time PCR法检测各组mRNA表达。结果透骨消痛胶囊含药血清组TNF-αmRNA、IL-1βmRNA相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞TNF-α、IL-1β的表达。     

淫羊藿对大鼠退变颈椎间盘内IL1-β、IL-6、TNF-α含量的影响

目的检测大鼠退变颈椎间盘内白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)α含量,探讨淫羊藿防治颈椎病的作用。方法选用6月龄SD大鼠,体重(220±20)g,♀♂不拘,通过切除动物C2-C7棘上韧带、棘间韧带和分离椎旁两侧肌肉,建立颈椎退行性改变动物模型。在1、3月两个时间点摄颈椎X线片,证实模型成立后,分为淫羊藿模型组10只,生理盐水模型组10只,分别喂服淫羊藿水提液和生理盐水2个月,假手术对照组喂服生理盐水。取各组大鼠颈椎间盘用放射免疫分析法分别检测标本中的IL1-β、IL-6和TNF-α的含量。结果生理盐水模型组颈椎间盘组织中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量与假手术对照组相比较明显升高(P<0.01);淫羊藿模型组颈椎间盘组织中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量与生理盐水模型组相比较明显降低(P<0.01)。结论退变椎间盘中释放的细胞因子可加速椎间盘的退变;淫羊藿能下调退变颈椎间盘中细胞因子的含量,其具有阻止炎性反应和减缓椎间盘退变的作用。     

肿瘤坏死因子-α与血沉的相关性研究

目的探讨恶性肿瘤及糖尿病患者血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与血沉(ESR)的关系。方法选取25例恶性肿瘤患者和32例糖尿病患者,采用酶联免疫吸附法(ELISA)分别测定血清TNF-α及可溶性肿瘤坏死因子受体-Ⅰ(sTNFRⅠ)水平。同时采用魏氏法测定血沉值。结果肿瘤患者和糖尿病患者的血清TNF-αs、TNFRⅠ水平及ESR值均显著高于正常对照组(所有P<0.05),且血清TNF-α、sTNFRⅠ水平与ESR值之间均有相关关系(rT=0.645,PT<0.01;rs=0.638,Ps<0.01);ESR值愈大,血清TNF-α、sTNFRⅠ水平愈高。结论在恶性肿瘤及糖尿病疾病中随着ESR值增大,血清TNF-α、sTNFRⅠ水平增高,血清TNF-αs、TNFRⅠ水平与ESR间存在相关关系,TNF-α及sTNFRⅠ可能是导致ESR增快的原因之一。     

TNF-α椎间盘注射对软骨终板β-catenin与Adamts-5表达影响

目的探讨TNF-α椎间盘注射对大鼠软骨终板β-catenin与Adamts-5蛋白表达的影响与意义。方法取SPF级12周龄SD大鼠30只,随机分成空白对照组(A组)、假手术组(B组)、TNF-α椎间盘注射组(C组),每组10只(n=10)。C组大鼠在X线透视下穿刺椎间盘并注射TNF-α25μL(10 ng/μL),B组大鼠椎间盘穿刺成功后注射生理盐水25μL,A组大鼠椎间盘不做任何干预。术后4周采用组织病理学观察软骨终板退变情况,并采用Western-Blot检测软骨终板β-catenin与Adamts-5蛋白表达。结果 HE染色显示C组大鼠椎间盘软骨终板出现明显退行性改变。Western-Blot检测显示C组大鼠椎间盘软骨终板β-catenin与Adamts-5表达均显著上调,与A组及B组相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论 TNF-α椎间盘注射可诱发椎间盘软骨终板退变,同时上调软骨终板β-catenin及Adamts-5表达,提示TNF-α上调β-catenin及Adamts-5表达在软骨终板退变中可能发挥了重要作用。     

肿瘤坏死因子-α作用下椎间盘退变动物模型的建立

目的:制作家兔椎间盘退变（IVDD）的动物模型,研究肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对髓核组织的影响。方法:取健康成年家兔30只,手术暴露L₂~L₆,L_3/4、L_4/5作为实验组,每个椎间盘髓核注射20 ng/μL TNF-α 15 μL;L_5/6作为对照组,每个椎间盘髓核注射15 μL磷酸缓冲盐溶液;L_2/3作为空白组,不做处理。于术后4周、8周、12周行腰椎X线及磁共振（MRI）检查,每次随机检查10只家兔,检查完后处死并取其髓核组织经行免疫组织化学及原位末端标记检查。结果:术后4~12周,X线见实验组椎间隙高度进行性下降,MRI可见实验组椎间隙T2加权像信号逐渐降低;免疫组织化学及TUNEL显示实验组髓核组织内Ⅰ型胶原及细胞凋亡率随之时间推移逐渐增加,Ⅱ型胶原逐渐减少。对照组和空白组差异无统计学意义（P>0.05）。结论:实验成功建立了TNF-α作用下的IVDD动物模型。TNF-α介导的椎间盘术后椎间隙高度丢失,同时TNF-α可诱导椎间盘髓核细胞退变及凋亡。微量注射器的穿刺作用对髓核细胞的退变及凋亡无明显影响。     

突出腰椎间盘组织中IL-1、TNF-α的表达与病程的相关性

目的 研究白细胞介素-1α(interleukin-1α,IL-1α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)在突出腰椎间盘中的表达与病程的相关性,探讨其在腰椎间盘退变、坐骨神经痛发生机制中的作用.方法 用免疫组织化学方法 ,对腰椎间盘突出症56例患者的突出椎间盘组织IL-1α、IL-1β、TNF-α的表达进行检测,依病程长短分为A、B 2组.并取8例正常间盘组织进行对照.结果 A组免疫组织化学阳性率,IL-1α、IL-1β 81.8%(18/22),TNF-α 45.5%(10/22);B组免疫组织化学阳性率, IL-1α、IL-1β 88.2%(30/34),TNF-α 35.3%(12/34);对照组3种因子的免疫组织化学阳性率均为12.5%(1/8).结论白细胞介素-1、TNF-α在突出腰椎间盘组织中的表达与病程无相关性.     

退变椎间盘组织中TNF-α及IL-18的表达及意义

目的:研究TNF-α、IL-18在突出与正常椎间盘组织中的表达,探讨该类细胞因子在椎间盘退变中的作用.方法:用Elisa法对34例椎间盘突出症患者椎间盘组织中TNF-α、IL-18进行检测,并取15例健康成人正常椎间盘用于阴性对照.结果:Elisa法证实突出椎间盘组织中TNF-α含量为82.18±21.91 pg/ml、IL-18含量为45.39±21.23 pg/ml;正常椎间盘组织中TNF-α含量为8.68±0.78 pg/ml、IL-18含量为3.58±2.84 pg/ml,两者差异有统计学意义(P<0.001).结论:TNF-α及IL-18可能在椎间盘退变中发挥关键作用,并在临床对椎间盘突出的治疗和转归预后有重要意义.     

肌皮瓣缺血再灌注期间NO、TNF-α和IL-1β含量变化及意义

目的 :探讨缺血再灌注 (I/R)期间肌皮瓣静脉血浆一氧化氮 (NO)、肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)、白细胞介素 - 1β(IL - 1β)变化规律及其在肌皮瓣I/R损伤发生中的作用。 方法 :湖北雄性白种猪 8头 ,其中实验组及对照组各 4头。制备双侧岛状腹直肌肌皮瓣 ,实验组缺血 8h ,再灌注 4h。采用Griess重氮化反应法及放射免疫分析法检测I/R不同时点肌皮瓣静脉血浆NO、TNF -α及IL - 1β的含量。采用依赖H2 O2 反应产物比色法检测再灌注毕组织髓过氧化酶 (MPO)活性 ,并观察组织病理改变。结果 :再灌注 0 .5 ,1,2h ,实验组NO含量低于对照组 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ,P <0 .0 5 ) ;再灌注 1,2 ,4h ,实验组TNF -α含量高于对照组 (P均 <0 .0 1) ;再灌注 2 ,4h ,实验组IL - 1β含量高于对照组 (P均 <0 .0 1) ;再灌注毕 ,实验组MPO含量高于对照组 (P <0 .0 1)。 结论 :肌皮瓣I/R期间存在局部细胞因子网络失衡 ;内皮源性NO生成减少、促炎性细胞因子TNF -α、IL - 1β释放参与了中性粒细胞介导的I/R损伤。     

七龙天对低氧性肺动脉高压大鼠 IL-1β、TNF-α的影响

目的观察七龙天对低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因-α(TNF-α)的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为6组:正常组、模型组、波生坦组、七龙天低剂量组、七龙天中剂量组、七龙天高剂量组。正常组大鼠置于正常环境中饲养,除正常组外所有实验大鼠均采用常压低氧法制模,从制模第1天始给药,连续3周。在直视下行右心导管术测定肺血流动力学参数,以RT-PCR法检测肺组织中IL-1β、TNF-α的mRNA表达及免疫组织化学技术检测IL-1β、TNF-α在肺小动脉内膜中的蛋白表达。结果七龙天及波生坦组均可明显降低大鼠肺动脉高压,且以七龙天高剂量组效果为佳,疗效呈药物剂量依赖表现。与正常组比较,各组的IL-1β、TNF-α表达水平(包括mRNA及蛋白)均有所增加,尤以模型组、波生坦组呈非常显著性差异(P0.01);与模型组比较,波生坦组无显著性差异(P0.05),七龙天各组可明显下调IL-1β、TNF-α表达水平(P0.01或P0.05),以七龙天高、中剂量组更为显著(P0.01或P0.05)。结论不同剂量七龙天均可降低肺动脉高压,且高剂量七龙天疗效优于波生坦。其降压机制与降低IL-1β及TNF-α表达量有关,但仍可能受其他血管张力因子及血管新生因子影响。     

肿瘤坏死因子和血小板源性生长因子在人膜增生性肾小球肾炎中的表达

目的：探讨肿瘤坏死因子（TNF—α）和血小板源性生长因子-β（PDGF-β）在人膜增生性肾小球肾炎中的表达及其在发病中的作用。方法：采用HE、PAS、PASM、电镜及免疫组织化学SABC染色法对20例人膜增生性肾小球肾炎和10例对照组肾组织进行观察，并经计算机医学图像分析系统进行分析。结果：电镜下，肾炎组肾小球毛细血管明显增厚，且厚薄不均，基底膜内可见电子致密物，脏层细胞足突呈节段性融合。免疫组织化学染色，TNF—α．阳性反应产物在肾小管上皮细胞呈阳性表达，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）；在肾小球呈弱阳性表达。PDGF—β蛋白在肾近曲小管上皮细胞呈阳性表达，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：膜增生性肾小球肾炎时，TNF—α．蛋白和PDGF—β蛋白在肾小球与肾小管表达均有显著增高，提示该两种因子在肾小球肾炎发病中有一定的作用。     

TGF-β1、TNF-α及羟脯胺酸在大鼠放射性肺损伤中的变化及意义

目的:探讨大鼠放射性肺损伤与炎症反应、纤维化改变的相关机制.方法:SD大鼠分为3组:对照组、7.0 Gy放射损伤组、14.4 Gy放射损伤组.其中放射损伤组大鼠麻醉后用60Co治疗机单次照射右全肺;在照射后的1,7,30,90d,取大鼠右肺组织进行HE、Masson染色检查;免疫组化检测肺组织转化生长因子β1(TGF-...     

Electroacupuncture inhibits annulus fibrosis cell apoptosis in vivo via TNF-α-TNFR1-caspase-8 and integrin β1/Akt signaling pathways

ObjectiveTo examine whether electroacupuncture (EA) treatment inhibited cell apoptosis of intervertebral annulus fibrosis (AF) via tumor necrosis factor-α (NF-α-tumor necrosis factor receptor 1 (TNFR1)-caspase-8 and integrin β1/Akt signaling pathways in a rat model of cervical intervertebral disc degeneration caused by unbalanced dynamic and static forces.MethodsThirty-two Sprague-Dawley rats were included in this study, of which 24 rats underwent surgery to induce cervical intervertebral disc degeneration, while eight rats received EA treatment at Dazhui (GV 14). Immunohistochemical staining was used to detect TNF-α, TNFR1, and caspase-8. Apoptosis of AF cells was examined with terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL) staining. The mRNA and protein expression levels of integrin β1 and Akt were evaluated with real-time polymerase chain reaction and western blot analysis, respectively.ResultsTreatment with EA decreased TUNEL-positive AF cells and lowered TNF-α, TNFR1 and caspase-8 positive cells compared with control groups. EA treatment also increased integrin β1 and Akt mRNA and protein levels compared with controls.ConclusionTreatment with EA inhibits AF cell apoptosis through suppression of the TNF-α-TNFR1-caspase-8 signal pathway and increases the expression of integrin β1 and Akt. EA may be a good alternative therapy for treating cervical spondylosis.     

TNF-α对人lrg基因表达的调控

目的：观察TNF-α对脂多糖应答基因（lrg）在人HEK293和U937细胞中表达的影响．方法：正常培养人胚肾细胞（HEK293）和人单核细胞（U937）,用TNF—α（终浓度1×10^6U／L）刺激2h．提取刺激前后HEK293和U937细胞的总蛋白,用纯化后的兔抗人Lrg抗血清作一抗（1：1000）,对TNF—α刺激前后的HEK293和U937细胞进行Western Blot分析．提取刺激前后HEK293和U937细胞的总RNA,用RT—PCR分析TNF-α对lrg在细胞中表达的影响．以B-actin为内参．结果：Western Blot分析显示,用TNF-α刺激2h后,妇在人HEK293和U937细胞内的蛋白含量明显上升;RT—PCR结果显示,用TNF-α刺激2h后,人HEK293和U937细胞内的垤mRNA水平明显上升．结论：TNF-α的刺激增强了人HEK293和U937细胞内lrg的表达,提示lrg可能参与了TNF—α诱导的炎症反应．     

肿瘤坏死因子及其p55型受体在妊娠期高血压中的作用

目的：探讨肿瘤坏死因子α（TNF—α）及其p55型受体（p55TNFR）在正常妊娠及妊娠高血压发病机制中的作用。方法：采用免疫组化法研究12例正常妊娠妇女、43例妊娠高血压患者胎盘组织细胞中TNF—α和p55TNFR的表达。结果：TNF-α和p55 TNFR主要表达在蜕膜细胞、内皮细胞、绒毛间质细胞、细胞滋养细胞、合体滋养细胞。正常妊娠组与妊娠高血压各组TNF—α和p55 TNFR表达的细胞种类问差异无统计意义（P〈0．05）。TNF—α和p55 TNFR在同种细胞中表达的强度随着病情的加重而增加。同一研究组中各细胞TNF—α和p55 TNFR的表达强度不同,TNF—α在蜕膜细胞表达最强,p55 TNFR在蜕膜细胞和内皮细胞表达最强。结论：TNF—α和p55 TNFR在胎盘组织细胞高表达,可直接引起胎盘损伤。TNF-α和p55 TNFR在妊娠高血压的发病中可能起重要的作用。     

HIF-1α和GLUT-1在人体退变腰椎间盘中的表达及意义

目的：研究低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）和葡萄糖转运蛋白-1（glucosetransporter-1,GLUT-1）在人体退变腰椎间盘髓核中的表达及意义。方法：对照组为取自青壮年腰椎爆裂性骨折患者的正常椎间盘髓核组织;实验组取自临床患者退变椎间盘髓核组织,依据术前MRI影像表现分为2组。术中所取标本分别进行免疫组织化学染色及RT-PCR检测,比较3组椎间盘髓核组织中HIF-1α和GLUT-1的表达,并对检测结果进行统计学分析。结果：免疫组织化学结果显示在正常人类腰椎间盘组织中HIF-1α和GLUT-1的表达呈弱阳性,中度退变组中HIF-1α和GLUT-1的表达为阳性,重度退变组中HIF-1α和GLUT-1的表达为强阳性,且随着腰椎间盘组织退变的程度加重其表达也进行性加强（P〈0.01）。 RT-PCR结果显示,HIF-1α和GLUT-1基因存在于人体椎间盘髓核组织中,3组患者差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：HIF-1α和GLUT-1均可能参与了人类腰椎间盘组织的退变过程,二者在人体退变腰椎间盘组织中有相同的增高趋势。可以考虑通过检测HIF-1α和GLUT-1在椎间盘组织中表达来检测腰椎间盘组织退变情况,从而为预防和治疗腰椎间盘退变的提供新思路和切入点。     

内毒素诱导正常人单核细胞活化中CD69、TNF-α、IL-6的表达变化及意义

目的探讨内毒素诱导正常人单核细胞活化时抗原分子CD69、肿瘤坏死因子-α．（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的变化及意义。方法采集10例健康人外周静脉血20ml,经乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝。通过Fi—coll—Hvpaque联合PercoU分离液分离纯化单核细胞后体外培养,设未干预组为对照,实验组予内毒素分别刺激30min、1、2、4h后收集细胞与上清液。通过流式细胞术检测单核细胞表面CD69的阳性细胞百分比,Luminex方法检测上清液中TNF-α、IL-6的浓度。结果分离的单核细胞纯度达95．5％。单核细胞表面CD69的表达率在内毒素刺激2、4h分别为（25．1±1．8）％、（41．7±1．4）％,明显高于对照组[（22．1±1．4）％,P均〈0．05]。上清液中TNF-α在内毒素刺激2、4h分别为（453．6546±163．6168）pg／ml、（1633．7878±528．8399）pg／ml,明显高于对照组[（O．1191±0．2135）pg／m],P均〈0．051。内毒素刺激4h时IL-6为（1464．4510±488．3783）pg／m],明显高于对照组[（0．0539±0．0955）pg/ml,P〈0．051。结论CD69、TNF-α、IL-6的表达上调与内毒素诱导单核细胞的活化密切相关。     

哮喘小鼠模型肺组织、肺泡灌洗液中TNF-α及 IL-12水平比较

目的：观察支气管哮喘小鼠模型肺泡灌洗液（ BALF）中TNF-α,IL-12水平,了解两者的水平及诊断价值。方法40只雌性Balb/C小鼠,随机分成2组：A正常对照组、B支气管哮喘模型组,每组各20只。采用卵蛋白（ OVA）等致敏支气管哮喘模型组;第21天后,哮喘模型组1％卵蛋白溶液雾化吸入,雾化时间共5周,对照组用生理盐水雾化吸入。分别观察两组哮喘发作症状、ELISA检测肺泡灌洗液中TNF-α,IL-12的水平。结果支气管哮喘模型组肺泡灌洗液中TNF-α显著升高,IL-12降低,且IL-12与TNF-α呈密切负相关（ r＝-0．964,P＜0．01）。结论哮喘的发生发展不仅与炎症介质TNF-α的异常释放增多有关,还与内源性的抗炎介质IL-12的释放不足有关,而且IL-12能够抑制TNF-α的合成。     

米诺环素对大鼠脊髓损伤早期TNF-α表达的影响

目的：探讨米诺环素（minocycline）对大鼠脊髓损伤（SCI）早期的保护作用和机制.方法：108只SD大鼠随机分为3组：对照组（A组=36只）、损伤组（B组=36只）和损伤后米诺环素治疗组（C组=36只）,采用改良Allen＇s打击法致伤B组和C组大鼠T8～T11脊髓,对照组不损伤脊髓.治疗组于术后1h腹腔注射米诺环素（90mg/kg）,之后每隔12h给药1次,对照组和损伤组在相同时点腹腔注射相同体积生理盐水.B组和C组于术后2h、6h、12h、24h、48h、72h处死大鼠取损伤段脊髓标本,A组在相应时间点取相应节段脊髓标本,切片后行HE染色组织病理学检查和免疫组织化学检测TNF-α表达.结果：脊髓损伤早期损伤脊髓取材免疫组化镜检后发现A组大鼠脊髓TNF-α呈弱阳性表达;B组和C组伤后2h即有TNF-α表达,12h达到高峰,之后逐渐下降;B组伤后72h TNF-α表达仍较A组高（P＜0.05）,而C组在伤后72h即恢复到对照组水平（P＞0.05）,C组各时间点TNF-α表达均较损伤组低（P＜0.05）.结论：米诺环素可显著降低脊髓损伤早期组织中TNF-α的表达,为其应用于临床治疗急性脊髓损伤提供实验依据.