丹皮多糖的相对分子质量对抑制体外非酶糖化反应的影响

目的 探讨丹皮多糖的相对分子质量与其生物活性的关系.方法 运用正交设计方法,以酸浓度、水解温度、水解时间为因素,分别设置4个水平,对PSM2b-A进行降解和结构改造,经快速色谱纯化系统分离,选择相对分子质量适宜的片段,以抑制体外非酶糖化反应(NEG)为模型,进行活性检测.结果 当H2SO4浓度为0.5 mol·L-1时,50℃保温6 h和80℃保温2 h降解得到的2个片段F1和F2都有明显抑制体外NEG反应的作用,抑制率分别达到35.26%和27.56%.且F1的抑制率高于PSM2b和阳性对照氨基胍.结论相对分子质量与PSM2b-A抑制体外NEG活性关系明显,降低PSM2b-A的相对分子质量可以提高其抑制NEG反应的活性.     

转基因西洋参冠瘿组织中多糖的分离和纯化

目的分离纯化转基因西洋参冠瘿组织中多糖组分,为从该转基因材料中寻找重要生物活性前体多糖药物提供科学依据。方法用水醇提取法,以DEAE Sepharose FF和Sephacryl S-100柱色谱进行多糖的分离纯化,采用高效液相色谱测定单糖组成,色谱和光谱学方法鉴定其纯度和化学结构。结果分离得到4个精多糖(PPQ50-1、PPQ50-2、PPQ70-1和PPQ70-2),凝胶色谱法(Sephadex G-200)和旋光法证实了它们为化学均一性多糖;凝胶色谱法测得4种精多糖的相对分子质量分别为4.7×104,2.9×105,7.5×104和1.3×105;对得量较多的PPQ50-2和PPQ70-2进行了结构分析,证明二者均为葡聚糖;并利用NaIO4氧化反应和核磁共振谱等方法对PPQ50-2的化学结构进行了初步的糖基键合分析。结论首次从转基因西洋参冠瘿组织中分离得到4种化学均一性多糖成分,其中PPQ50-2和PPQ70-2均为葡聚糖。     

新月菱形藻胞外多糖的成分及其硫酸酯的制备

目的阐明新月菱形藻胞外多糖(exopolysaccharides of Nitzschia closterium,EPN)的成分、单糖组成及其硫酸酯化条件。方法新月菱形藻胞外多糖以醇沉法从该藻的培养液中制备;DEAE-Sephedex25柱分离,HPLC法测定其质量分数,HPLC测定其相对分子质量;以氯磺酸-吡啶法探索新月菱形藻硫酸酯化反应条件。结果新月菱形藻向胞外分泌3种多糖,相对分子质量分别为EPN11.886×105,EPN21.41×105,EPN31.134×105。3种多糖的单糖组成均为甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖和岩藻糖。甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖和岩藻糖的摩尔比在EPN1为4.3∶1∶5.1∶8.9∶5.6,EPN2为4.2∶7.3∶3.7∶12.8∶3.4,EPN3为3.5∶2.1∶4.3∶4.9∶4.7。3种多糖的硫酸酯化条件基本一致,提高氯磺酸比例和延长反应时间均有利于增加酯化产物的硫酸根、提高取代度和酸酯化反应的产率。结论新月菱形藻胞外多糖为酸性多糖,其硫酸酯化产物多糖硫酸酯可能具有潜在的药理活性。     

仙人掌多糖的分离、纯化及性质研究

目的分离、纯化具有降血糖作用的仙人掌多糖组分。方法经热水提取、乙醇沉淀、DEAE Sepharose fast flow离子交换色谱和Sephadex G系列凝胶滤过色谱纯化得到5种仙人掌多糖组分。醋酸纤维薄膜电泳检测多糖纯度,凝胶色谱测定相对分子质量,高效液相色谱测定糖的组成。结果5种多糖都已达到电泳纯。它们的相对分子质量依次为2.0×103、1.0×106、4.0×103、9.2×105、5.0×103。ODP1由鼠李糖组成,ODP2可能由鼠李糖和葡萄糖组成,ODP4可能由鼠李糖和D-半乳糖组成。ODP3和ODP5分别由鼠李糖和一未知糖组分组成。结论仙人掌多糖的提取没有必要采用脱蛋白、脱色素步骤,本实验所提取的仙人掌多糖是均一的。     

HPGFC-ELSD法测定商陆多糖的重均相对分子质量

目的:测定商陆多糖的重均相对分子质量.方法:将商陆多糖分离纯化,采用HPGFC-ELSD法测定重均相对分子质量分布.测定条件为TSK柱(G 2000 SW,7.5 mm×300 mm);水为流动相,流速1.0 ml/min;漂移管温度40℃;气体(N2)压力2.0×105 Pa.结果:多糖重均相对分子质量的线性范围为10 000～170 000(r=0.973),测得商陆多糖重均相对分子质量约为76 896.4.结论:该法为多糖重均相对分子质量测定提供了简便实用的分析方法.     

膜法分级纯化姬松茸子实体多糖的研究

目的通过微滤和超滤对姬松茸子实体粗多糖分级纯化,获得最佳试验操作条件,考察各级相对分子质量范围内的多糖分布情况及所得制品的纯度。方法使用微滤和不同截留相对分子质量的超滤串联工艺。结果试验按相对分子质量将其分成>3×105、3×105~8×104,8×104~1×104以及<1×1044个级别,所得多糖质量分布比例约为5∶1∶3∶1。试验确定操作条件为室温,操作压力0.08~0.1MPa,微滤和各级超滤分别将各级多糖最高浓缩至45、35和25g/L。在低温下干燥制备的姬松茸多糖制品,质量分数高于70%,多糖总回收率高达83.7%。结论该工艺简单可行,姬松茸子实体多糖相对分子质量主要分布于>3×105和8×104~1×105。     

板蓝根多糖分离纯化及其性质的研究

目的从板蓝根中提取分离水溶性多糖,并分析其理化性质,为板蓝根质量控制与进一步开发利用提供参考。方法主要采用DEAE纤维素离子交换色谱柱,Sephadex G 75凝胶色谱柱分离纯化,应用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)、IR、TLC、UV等方法对板蓝根多糖进行组成结构分析及理化性质研究。结果从板蓝根水溶性多糖中分离纯化得到4种不同的均一多糖组分PS1、PS2、PS3、PS4,色谱分析表明均由单一木糖组成。其中PS1、PS2、PS3、PS4相对分子质量分别为1.2×104、2.6×104、4.2×103、2.5×103。结论4种均一多糖首次从板蓝根中分离得到。     

高效液相法测定血美安胶囊中丹皮酚和芍药甙的含量

目的:用HPLC法测定血美安胶囊中丹皮酚和芍药甙的含量。方法:用75%乙醇提取样品,所得样品溶液同时用于丹皮酚和芍药甙的含量测定。色谱条件:C18色谱柱;丹皮酚测定所用流动相为水∶乙腈∶冰乙酸(60∶40∶3),检测波长为274nm;芍药甙测定所用流动相为甲醇∶水(30∶70),检测波长为230nm。结果:丹皮酚和芍药甙的线性范围分别为0.0344～0.1720g/L和0.0792～0.3960g/L,平均回收率分别为99.9%和99.6%。结论:本方法简便、快捷、重现性好,可用于血美安胶囊中这2种成分的含量测定。     

川芎中多糖的研究

目的研究川芎L igusticum chuanx iong干燥根茎中的多糖组分。方法采用DEAE-纤维素柱色谱和凝胶渗透色谱分离纯化,化学和光谱方法分析其结构特征。结果从川芎水提物中分级得到4个均一多糖组分LCP-1、LCP-2、LCP-3和LCP-4,其相对分子质量分别为3.1×104、5.2×104、9.0×104、3.6×104,四者均为结构复杂的多糖组分。结论首次从川芎中分离得到LCP-1、LCP-2、LCP-3和LCP-4 4种杂多糖。     

天花粉多糖的单糖组成和相对分子质量的测定

目的研究天花粉多糖的单糖组成、相对分子质量(Mr)及其分布。方法天花粉用超声波振荡提取、乙醇沉淀分离出多糖,并用重结晶、色谱柱纯化后,采用气相色谱-质谱(GC-MS)、高效液相色谱(HPLC)分析天花粉多糖的单糖组成,用凝胶渗透色谱(GPC)分析天花粉多糖的Mr及其分布。结果天花粉多糖是由鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成的杂多糖,经色谱柱纯化得到的天花粉多糖与未经纯化的天花粉粗多糖的单糖组成相同,但质量分数有所差别;天花粉多糖的GPC图有两个多糖峰,天花粉粗多糖的两个GPC峰的数均相对分子质量(Mn)分别为1.8×105和1 460,天花粉多糖的两个GPC峰的Mn分别为1.60×105和4 554。结论两种天花粉多糖的Mr及单糖组成的质量分数有区别。     

2-(4-甲氧基苯基)-6-甲氧基苯并噻吩的合成

目的合成目的产物2-（4-甲氧基苯基）-6-甲氧基苯并噻吩。方法以3-甲氧基苯硫酚和对甲氧基-苯乙酮为原料经溴化、烃基化、环合重排排制得目标产物。结果此法操作简便并得到高收率的标题化合物。结论改进的合成路线适合于工业化生产。     

噬菌体表面展示人干扰素-α 2b

目的:建立一种研究人干扰素-α结构与功能的新平台.方法:利用噬菌体表面展示(phage display)技术表达人干扰素-α 2b(hIFN-α 2b)基因.结果:生物活性测定表明,3×108 TU重组噬菌体干扰素的抗病毒活性与5 IU基因工程IFN-α 2a的活性相当,并能被IFN-α单抗中和.结论:hIFN-α 2b在噬菌体表面能正确折叠和功能性表达,即成功地建立了噬菌体展示外源肽(hIFN-α)的技术平台.     

非小细胞肺癌VEGFR-2与XAGE-1b基因表达相关性研究

目的探讨非小细胞肺癌中血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）与肿瘤-睾丸抗原XAGE-1b基因表达的相关性。方法从30例非小细胞肺癌患者肿瘤组织中提取总RNA、RT—PCR反应扩增XAGE-1b基凶、定量RT—PCR检测VEGFR-2表达水平．分析二者表达的相关性以及与临床特征的相关性。结果30例患者中，XAGE-1b表达阳性率为40％，61．1％的腺癌表达XAGE—1b，远高于非腺癌的8．3％（χ2=6．302，P=0．012）。XAGE．1b与VEGFR-2表达水平呈正相关（r=0．546，P=0．002）．XAGE—1b阳性患者的VEGFR-2表达水平偏高。多元回归分析显示，病理类型（比值比0．072，95％可信区间0．007-0．785，P=0．031）和VEGFR．2表达水平（比值比14．765，95％可信区间1．274～171．144，P=0．031）是XAGE-1b表达的影响因素。XAGE-1b表达阳性与阴性、VEGFR．2表达高与低患者的生存时间差异均无统计学意义（Log-rankP=0．416、P=0．384）。结论非小细胞肺癌中VEGFR-2与XAGE-1b基因表达呈正相关．XAGE-1b表达阳性并且VEGFR-2高表达的患者可能是免疫疗法与抗血管生成疗法联合治疗的合适人群。     

黄芪多糖抑制IL-1β表达及改善脓毒症小鼠心功能研究

目的 探讨黄芪多糖对脓毒症小鼠心肌成纤维细胞IL-1β表达水平及心功能的影响。方法 取2~3月龄C57BL/6小鼠,设立对照组。以腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharidi,LPS)建立脓毒症模型,设立脓毒症组和黄芪多糖(astragalus polysaccharides,APS)处理组,6 h后酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠外周血IL-1β蛋白表达,24 h后超声心动图检测小鼠心脏功能。取对照组C57BL/6小鼠,体外分离培养小鼠心肌成纤维细胞,设立对照组、LPS处理组和黄芪多糖低、中、高浓度(1、10、100 mg/L)+LPS处理组。采用ELISA检测细胞上清液中IL-1β,采用免疫印迹法检测Pro-IL-1β及IL-1β蛋白。结果 脓毒症小鼠心脏功能较对照组明显减退(P<0.05),黄芪多糖处理组较未处理的脓毒症小鼠心脏功能明显改善(P<0.05)。脓毒症组外周血IL-1β蛋白较对照组明显升高(P<0.05),黄芪多糖处理组的脓毒症小鼠IL-1β明显降低(P<0.05); LPS或联合三磷酸腺苷(ATP)诱导的心肌成纤维细胞与对照组相比,LPS组(LPS 1 ng/mL)诱导心肌成纤维细胞Pro-IL-1β及IL-1β蛋白明显增加(P<0.05),而黄芪多糖处理组较LPS组相比,Pro-IL-1β及IL-1β蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论 黄芪多糖对脓毒症小鼠心肌成纤维细胞IL-1β蛋白表达有抑制作用,改善脓毒症引起的心脏功能障碍。     

转化生长因子β1基因rs2317130单核苷酸多态性与结核病易感性的关联分析

目的 探究转化生长因子β1（transforming growth factor β1, TGF -β1）基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism, SNP）与结核病易感性的关系,为结核病的诊断和治疗提供更多的参考依据。方法 通过病例-对照（case-control）研究方法,以深圳市第三人民医院1 533例确诊的活动性结核病患者作为病例组（男980例,女553例）,选取同期在该院体检的1 445例人员作为健康对照组。通过飞行时间质谱仪（TOF-MS）检测TGF-β1基因6个SNP位点rs2317130、rs17516265、rs8110090、rs3087453、rs2278422、rs1800469基因型,通过比较两组间SNP等位基因频率差异,初步筛选出与结核病易感性相关联的SNP位点。用结核分枝杆菌标准株H37Rv刺激不同基因型的健康人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMCs）,ELISA检测上清中TGF-β1含量,进一步验证TGF-β1基因SNP位点与结核易感性的关系。结果 在6个SNP位点中发现仅 rs2317130 C>T 位点等位基因频率在活动性结核组和对照组中差异有统计学（P<0.05）,结核病患者rs2317130 C>T位点C等位基因频率显著增高（OR=1.14;95%CI=1.03~1.26;P<0.01）,其他5个SNP等位基因频率在两组之间差异无统计学意义（P>0.05）。此外,ELISA实验结果表明,rs2317130 SNP位点CC纯合子基因型的患者TGF-β1表达量显著高于其他基因型（CT杂合子和TT纯合子基因型）,TGF-β1表达量上调可加速结核病发展,进一步证实rs2317130位点C等位基因为结核易感基因。结论 TGF-β1基因rs2317130 C>T位点与结核易感性相关,其C等位基因为结核易感基因,即携带C等位基因人群患结核风险升高。     

多发性内分泌腺瘤病2b型患者眼部特征分析

目的 研究多发性内分泌腺瘤病2b型患者的眼部表现特征.方法 回顾分析北京协和医院眼科1980年7月至2007年12月3例多发性内分泌腺瘤病2b型患者的临床资料,重点分析其眼部表现特征.结果 在常见的全身表现和眼部表现中,3例患者均有甲状腺髓样癌和角膜神经粗大,2例患者有肾上腺嗜铬细胞瘤、口唇舌黏膜神经瘤、类马方体型、眼睑结节、结膜结节,仅1例患者有虹膜结节.结论 角膜神经粗大是MEN 2b型最常见的眼部表现.     

干扰素α-2b对H22鼠肝癌细胞株体内外抑制作用的研究

目的研究干扰素α-2b对H22鼠肝癌细胞株体内外的抑制作用。方法MTT法测定不同浓度干扰素α-2b对H22鼠肝癌细胞的作用。建立小鼠皮下实体瘤模型,腹腔内分别注射生理盐水、干扰素α-2b、氟尿嘧啶(5-FU)、干扰素α-2b 5-FU,隔天1次,共给药10次,停药1周后处死动物,测量瘤体大小、瘤重,计算抑瘤率,测定微血管密度(MVD)。结果干扰素α-2b对体外培养的H22鼠肝癌细胞无直接抑制作用,但明显抑制实体瘤生长;干扰素α-2b、5-FU、干扰素α-2b 5-FU抑瘤率分别为49.5%、67.4%、74.9%,MVD分别为67±43、134±53、6.3±46。结论干扰素α-2b具有抗血管生成作用,与化疗药物5-FU联用有协同作用。