党参总皂苷抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠星形胶质细胞损伤的作用

目的以原代培养的大鼠大脑星形胶质细胞进行缺氧缺糖再给氧处理,观察党参总皂苷对星形胶质细胞损伤的保护作用。方法1 d龄W istar大鼠乳鼠大脑星形胶质细胞原代培养,含连二亚硫酸钠的无糖Earle’s液进行缺氧缺糖处理造模,MTT法测定细胞存活率,Hoechst 33342和PI原位双染法荧光显微镜观察细胞形态学变化和细胞坏死、凋亡率,比色法测定LDH漏出率,评价药效。结果与模型组比较,党参总皂苷Ⅰ、Ⅲ组均能显著提高细胞存活率(P<0.01),党参总皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组均能显著降低细胞坏死率(P<0.01),党参总皂苷各组对细胞凋亡率均无显著影响(P>0.05),但均能显著降低细胞LDH漏出率(P<0.01)。结论党参总皂苷对缺血再灌注损伤后星形胶质细胞的坏死具有显著抑制作用,但对凋亡过程无保护作用,提示党参总皂苷是党参治疗中风病急性期的主要效应成分。     

川芎嗪、参麦注射液对缺氧复氧损伤后鼠脑星形胶质细胞释放一氧化氮的影响

目的：研究川芎嗪和参麦注射液对鼠脑星形胶质细胞缺氧复氧损伤后释放一氧化氮（nitric oxide,NO)的影响及可能机制。方法：培养Wistar乳鼠脑星形胶质细胞，用抗神经胶质纤维酸性蛋白单克隆抗体确认，建立缺氧／复氧模型，NO采用Griess反应法检测。结果：与对照组比较，缺氧复氧损伤后星形胶质细胞NO的释放显著增高，钙拮抗剂川芎嗪对缺氧复氧损伤后NO的过度释放无阻遏作用，而参麦注射液则能抑制O的过度分泌。结论：缺氧复氧损伤后星形胶质细胞释放NO增多可能与诱导型一氧化氮合成酶（iNOS)有关，参麦可能通过抑制NO的过度分泌以对抗缺氧复氧损伤。     

参麦注射液对鼠脑星形胶质细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

观察参麦注射液对培养的鼠脑星形胶质细胞缺氧 /复氧 (H/R)损伤后一氧化氮 (NO)分泌的影响。方法 :培养鼠脑星形胶质细胞 ,以缺氧 /复氧为损伤因素 ,观察培养上清液中NO及乳酸脱氢酶 (LDH)的变化。结果 :H/R损伤后星形胶质细胞NO的分泌显著提高 ,LDH漏出量显著增多 ,参麦注射液能明显抑制H/R状态下星形胶质细胞分泌NO ,并降低LDH的漏出。结论 :在H/R损伤情况下 ,参麦注射液对鼠脑星形胶质细胞具有保护作用 ,其可能机制与其抑制NO分泌和稳定细胞膜有关     

参麦注射液对缺氧／缺糖／复氧诱导神经细胞凋亡的影响

目的：探讨参麦注射液对缺氧／缺糖／复氧诱导神经细胞损伤的影响，阐明参麦注射液治疗缺血性中风急性期的脑保护作用机制。方法：用孕17～18天SD胎鼠的大脑皮层做原代神经细胞培养，制作缺氧／缺糖／复氧致神经细胞损伤模型，采用Annexin V/PI双染色法行流式细胞仪检测，定量分析参麦注射液对神经细胞凋亡和坏死百分率的影响。结果:参麦注射液能降低缺氧／缺糖／复氧原代培养神经细胞的凋亡率和坏死率。结论:参麦注射液治疗急性缺血性中风的疗效机制与提高神经细胞耐缺血缺氧能力，抑制细胞凋亡，减轻坏死有关。     

雌激素对星形胶质细胞缺氧缺糖损伤的影响

目的 研究雌激素对缺氧、缺糖诱导的鼠脑星形胶质细胞(As)损伤和凋亡的影响.方法 原代培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞,并建立缺氧、缺糖诱导的细胞损伤模型;用不同终浓度的雌激素(1～100nmnol/L)预处理星形胶质细胞,以吉姆萨染色观察细胞形态学变化,以四甲基偶氮唑盐(MTT)还原实验检测细胞活力,以乳酸脱氢酶(LDH)漏出率作为细胞损伤指标,以流式细胞术检测凋亡细胞.结果 缺氧、缺糖处理后可引起细胞活力下降,LDH漏出率增高,细胞凋亡率增高.雌激素预处理后,与缺氧、缺糖损伤组相比,细胞活力增高、LDH漏出率降低,同时细胞凋亡率也降低(p＜0.05),最大效应剂量为20nmol/L.结论 雌激素能够减轻缺氧、缺糖诱导的鼠脑星形胶质细胞损伤、降低其凋亡率,并呈一定的剂量依赖关系.     

雌激素对星形胶质细胞缺氧缺糖损伤的影响

目的研究雌激素对缺氧、缺糖诱导的鼠脑星形胶质细胞(As)损伤和凋亡的影响。方法原代培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞,并建立缺氧、缺糖诱导的细胞损伤模型;用不同终浓度的雌激素(1~100nmol/L)预处理星形胶质细胞,以吉姆萨染色观察细胞形态学变化,以四甲基偶氮唑盐(MTT)还原实验检测细胞活力,以乳酸脱氢酶(LDH)漏出率作为细胞损伤指标,以流式细胞术检测凋亡细胞。结果缺氧、缺糖处理后可引起细胞活力下降,LDH漏出率增高,细胞凋亡率增高。雌激素预处理后,与缺氧、缺糖损伤组相比,细胞活力增高、LDH漏出率降低,同时细胞凋亡率也降低(p&lt;0.05),最大效应剂量为20nmol/L。结论雌激素能够减轻缺氧、缺糖诱导的鼠脑星形胶质细胞损伤、降低其凋亡率,并呈一定的剂量依赖关系。     

不同厂家参麦注射液成分含量比较

[目的]测定不同厂家参麦注射液中人参皂苷、糖类的含量及pH值,比较其成分含量。[方法]用HPLC测定三个厂家参麦注射液的指纹图谱,并测定人参皂苷Rg1和Re的总量、Rb1的含量;用酚-硫酸法,以葡萄糖作对照品,酚酞-硫酸作显色剂,在最大吸收波长490nm处测定吸收度来测定其糖含量,以及用pH计测其pH值。[结果]不同厂家参麦注射液指纹图谱、人参皂苷和糖类的含量都有显著差异,而pH差异并不大。[结论]可能由于不同厂家采用的制备工艺、原药材的产地等不同,导致其主要成分含量有较大差异。     

一测多评法在参麦注射液7个成分检测中的应用

目的:应用一测多评法建立同时测定参麦注射液7个成分的HPLC含量测定。方法:以人参皂苷Rg1作内参物,计算人参皂苷Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd的相对校正因子。利用相对校正因子,计算参麦注射液中各成分的含量。比较一测多评法与外标法测定结果的差异,以验证一测多评法的适用性。结果:各成分相对校正因子重现性良好。人参皂苷Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd按一测多评方法与外标法测定结果无显著差异。结论:一测多评法可以作为一种简便准确的质量评价模式用于参麦注射液多种人参皂苷类成分的含量测定。     

人参炔醇对大鼠脑片不同类型损伤的影响

目的评价人参炔醇对代谢障碍、兴奋性氨基酸、氧自由基三种脑片损伤模型的作用.方法通过大鼠皮质和海马脑片孵育技术,建立缺氧缺糖、谷氨酸和过氧化氢三类损伤模型,采用新鲜脑片TTC染色酶标仪比色法,定量考察人参炔醇对不同类损伤的保护作用.结果与对照组相比,缺氧缺糖、谷氨酸和过氧化氢均能明显降低皮质和海马脑片TTC染色OD490值,2~4μmol/L人参炔醇可显著减轻缺氧缺糖及过氧化氢所致的脑片组织损伤(P<0.01),对谷氨酸所致损伤无作用. 3μmol/L cAMP阻断剂RpcAMPS可显著减弱4μmol/L人参炔醇对缺氧缺糖和过氧化氢所致损伤的保护作用.结论人参炔醇能够保护大鼠脑片对缺氧缺糖和过氧化氢所致损伤作用,但对谷氨酸所致损伤无保护作用,其保护活性可能与提高神经细胞内cAMP含量有关.     

rhEPO对缺糖缺氧大鼠星形胶质细胞的保护作用及对其DNA甲基转移酶的影响

目的研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)对氧糖剥夺(OGD)条件下大鼠星形胶质细胞DNA甲基转移酶(DNMT)水平的影响。方法用不同浓度rhEPO与星形胶质细胞在OGD条件下共培养6h,用台盼蓝拒染法测定细胞损伤程度,RT-PCR测定DNMT1、DNMT3A/3BmRNA的表达变化。结果在缺糖缺氧培养组,星形胶质细胞在OGD培养后1h出现死亡并持续加重,至5~6h时死亡率达到高峰;20U/ml rhEPO组和100U/ml rhEPO组细胞死亡率,星形胶质细胞DNMT1、DNMT3A/3BmRNA水平均低于OGD对照组(P<0.05或P<0.001),但不同浓度rhEPO对DNMT3A/3B影响差异无统计学意义(P>0.05)。结论 rhEPO可以对缺糖缺氧培养大鼠星形胶质细胞起到保护作用,其作用机制可能与其改变DNMT1、DNMT3A/3BmRNA水平有关。     

色满卡林对缺氧复氧致心肌细胞损伤的保护作用

目的研究色满卡林（Cromakalim，CRK）对缺氧复氧致大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用，并探讨其机制。方法用原代培养的Sprague—Dawley（SD）大鼠乳鼠心肌细胞建立缺氧2h复氧30min的损伤模型。采用乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒测培养液中LDH的活性；采用黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物岐化酶（SOD）活性；硫代巴比妥酸显色法测定细胞内丙二醛（MDA）含量；AV—PI双标记后应用流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果色满卡林对缺氧复氧造成的心肌细胞损伤有保护作用，表现为可以对抗缺氧复氧引起的LDH活性增加、MDA含量增加、SOD活性下降、凋亡率增加。结论色满卡林对缺氧复氧致培养大鼠乳鼠心肌细胞的损伤具有保护作用，此作用与抑制脂质过氧化、减少心肌细胞凋亡有关。     

参麦注射液对缺氧复氧致鼠大脑皮层神经细胞Bcl-2／Bax蛋白表达的影响

目的 研究参麦注射液对缺氧复氧致鼠大脑皮层神经细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法 取体外原代培养6天的小鼠大脑皮层神经细胞，置于95％N2和5％CO2的缺氧罐中造成神经细胞不同时间的缺氧复氧。用免疫组织化学法显示缺氧复氧不同时间Bcl-2、Bax蛋白的动态表达，并进行了形态学观察。结果 单纯缺氧复氧组缺氧8h复氧18h后，可见部分细胞核固缩，同时伴有染色质凝聚及核碎片出现，呈细胞凋亡的典型核形态特征。参麦注射液处理组，缺氧8h复氧18h后，出现核固缩的细胞数目明显减少，大多数细胞核形态正常；缺氧复氧后，大脑皮层神经细胞Bcl-2表达明显减弱，Bax表达明显增强，参麦注射液处理组与单纯缺氧复氧组相比，Bcl-2表达明显增强，Bax表达明显减弱。结论 参麦注射液对小鼠大脑皮层神经细胞缺氧复氧性损伤具有保护作用，而调控Bcl-2／Bax蛋白表达可能是其重要机制之一。     

星形胶质细胞条件培养液对缺氧损伤神经元的影响

目的分析星形胶质细胞(Ast)与腺苷对缺氧/复氧损伤神经元的保护作用,揭示腺苷对神经系统的保护机制。方法体外培养SD大鼠大脑皮层Ast和海马神经元及大脑皮层神经元,纯化后给予神经元缺氧/复氧处理,收集复氧18 h后的Ast条件培养液(ACM)和腺苷预处理的Ast条件培养液(ACMa),然后用ACM、ACMa及ACM+腺苷(ACM+含100μmol·L-1腺苷的DMEM液)以15的浓度培养缺氧损伤神经元;光镜观察神经元形态学变化,二甲氧唑黄比色法测定细胞活性。结果 ACMa组、ACM+腺苷组及ACM组的神经元缺氧损伤后的细胞形态较模型组得到明显改善,细胞活性较模型组也得到显著提高。不同条件培养液对缺氧/复氧后神经元活性的作用:ACMa>ACM+腺苷>ACM。结论 Ast条件培养液对缺氧/复氧损伤的神经元有重要的保护、修复作用,腺苷可通过Ast间接地保护和修复受损神经元。     

人参总皂甙对急性脑缺血的保护作用

静脉注射人参总皂甙(SPG 100mg/kg),三七总皂甙(SPNG100mg/kg)及单体皂甙 Rb_1(25mg/kg)对大鼠不完全性脑缺血损伤有保护作用,能明显减轻急性脑缺血30min 时,脑电图(EEG)的抑制程度,显著降低血浆中丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CPK)的含量,而人参皂甙单体 Rg_1的作用不明显。表明人参皂甙有保护急性脑缺血作用,其主要成分为人参二醇甙(Rb)。     

黄芪注射液对内皮细胞损伤的保护效应

目的 了解黄芪注射液对内皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法 人脐静脉内皮细胞原代培养，传至3代后，分为3组。对照组：常规培养；低氧复氧组：先低氧处理1h，再复氧1h；药物干预组：在培养液中加入终浓度分别为5、10、20、40、60mg／L的黄芪注射液，12h后进行低氧复氧处理。测定各组细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量，检测内皮细胞台盼蓝摄取率。结果低氧复氧组与对照组比较．细胞培养液中LDH活性、MDA含量及内皮细胞台盼蓝摄取率升高，SOD活性减低，差异均有显著性（F=34．97～129．98，q=14．43～27．11，P〈0．01）。药物干预组与低氧复氧组比较，细胞培养液中LDH活性、MDA含量及内皮细胞台盼蓝摄取率降低，SOD活性升高，差异均有显著性（q=2．91～26．61，P〈0．05、0．01）。黄芪注射液预处理浓度为40mg／L时LDH活性、SOD活性、MDA含量与对照组比较差异无显著性（q=0．49～0．94，P〉0．05）；黄芪注射液预处理浓度60mg／L与40mg／L相比，LDH活性、SOD活性、MDA含量变化均不明显。结论 低氧复氧过程造成内皮细胞脂质过氧化损伤，细胞死亡率增加。黄芪注射液可能通过抗脂质过氧化，对低氧复氧内皮细胞产生保护作用。     

聪圣胶囊对拟缺血再灌注大鼠原代培养皮层神经细胞的保护作用

目的：研究聪圣胶囊对大鼠原代培养皮层神经细胞拟缺血再灌注损伤的影响。方法：采用血清药理学和流式细胞仪的方法，观察聪圣胶囊含药血清对缺糖缺氧（3h）拟缺血再灌注（0，3，6，18h）损伤神经细胞乳酸脱氢酶（LDH）漏出及神经细胞凋亡率的影响。结果：聪圣胶囊含血清（2，4，8g/kg）可抑制缺糖-缺氧3h再灌（0，3，6和18h）引起的神经细胞内LDH的释放。降低缺糖-缺氧3h再灌18h导致的凋亡细胞率。结论：聪圣胶囊可减轻缺血性脑损伤。     

盐酸戊乙奎醚对大鼠缺氧缺糖／复氧复糖海马脑片凋亡相关因子表达的影响

目的研究盐酸戊乙奎醚（penehyclidine hydrochloride,PHC）对大鼠缺氧缺糖／复氧复糖海马脑片的保护作用及机制。方法采用大鼠海马脑片缺氧缺糖／复氧复糖模型;分为正常组、缺氧缺糖／复氧复糖（H／R）组、PHC 2μmol／L（PHC2组）、PHC 10μmol／L（PHC10组）、PHC 50μmol／L（PHC 50组）、Sco 50 μmoL／L（Sco50组）,测量各组LDH释放率,免疫组织化学法测定各组海马CA1区Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达。结果PHC各组LDH释放率均较H／R组下降,以PHC50组效果最好（P〈0．01）。PHC50组Bcl-2阳性细胞的表达和Bcl-2／Bax比值均较H／R组升高,Bax和Caspase-3阳性细胞表达均较H／R组降低（P〈0．01）。Sco50组Bcl-2阳性细胞的表达和Bcl-2／Bax比值也较H／R组升高,Bax和Caspase-3阳性细胞表达均较H／R组降低（P〈0．01）。结论PHC可能通过减少LDH释放和Caspase-3、Bax的表达,增加Bcl-2的表达减轻大鼠缺氧缺糖／复氧复糖海马脑片的损伤。     

三七茎基与须根含量测定方法的研究

目的:建立三七茎基与须根中皂苷的含量测定方法,测定不同药龄和不同月份生育期的广西三七茎基与须根中皂苷的含量.方法:采用RP-HPLC法,Shim pack CLC-ODS柱分离,流动相:乙腈与水梯度洗脱,检测波长203 nm,柱温:室温,流速1.0 ml/min.结果:广西三七茎基与须根中人参皂苷Rg1、Re、Rb1和三七皂苷R1的含量随药龄及月份的变化而变化;所含的Rg1和Rb1的总量均符合<中国药典>2000年版中三七的质量要求.结论:所建立的高效液相色谱法灵敏度高,专属性强,重现性好,能准确、快速的进行含量测定;广西三七茎基和须根中Rg1、Re、Rb1和R1的含量普遍较高,完全可与三七主根一起入药.