磺酰罗丹明法检测多巴胺能神经细胞的条件

目的探讨磺酰罗丹明B法检测多巴胺能神经细胞的最佳条件.方法采用系列细胞密度梯度、选用多个波长、加用参考波长,以磺酰罗丹明B法检测多巴胺能细胞系Mes23.5细胞数量和活性,分析细胞数量与检测波长及吸光度的关系.结果细胞数量与吸光度呈线性关系,最佳检测波长为540nm.结论磺酰罗丹明B法检测多巴胺能细胞结果可靠,是切实可行的该细胞定量分析和活性检测方法.     

黄芩素对人子宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用

目的:探讨黄芩素对人子宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用及可能机制。方法:采用磺酰罗丹明B(SRB)法检测黄芩素对HeLa细胞生长的抑制作用;Hoechst 33258荧光染色法观察黄芩素对HeLa细胞凋亡的诱导作用;比色法测定黄芩素对HeLa细胞内caspase-3活性的影响。结果:不同浓度黄芩素作用24、36、48h后均可抑制HeLa细胞生长(P<0.05~P<0.01);黄芩素作用24h后,HeLa细胞凋亡率增加(P<0.01),细胞内caspase-3活性增强(P<0.05~P<0.01)。结论:黄芩素能抑制HeLa细胞生长,其机制可能与诱导细胞凋亡及增强caspase-3活性有关。     

环化小檗碱类似物A55的抗肿瘤活性及其机制研究

目的研究环化小檗碱衍生物（CBBR）A55的抗肿瘤活性及其初步抗肿瘤机制。方法利用磺酰罗丹明B（SRB）法来检测化合物的抑瘤率和半数抑制浓度（IC50）,采用流式细胞分析法来检测细胞周期分布,采用拓扑异构酶抑制实验来检测A55对拓扑异构酶I活性的抑制,采用Hochest和Westernblot实验来检测细胞凋亡以及与细胞DNA断裂修复和凋亡相关的蛋白。结果化合物A55具有较强的抗肿瘤活性,主要是通过抑制拓扑异构酶I的活性来引起DNA断裂,使细胞阻滞在s期并启动凋亡来抑制细胞增殖。结论环化小檗碱新型衍生物A55是一类结构新颖,抑瘤率强,值得进一步开发的新型化合物。     

紫外-可见分光光度法测定可溶微针贴片中罗丹明B的含量

目的建立可溶微针贴片中罗丹明B的含量测定方法。方法采用紫外-可见分光光度法,配制一系列浓度的罗丹明B溶液,在554 nm处测定其相应的吸光度,采用最小二乘法绘制标准曲线。考察方法的专属性、线性、精密度、加样回收率、检测限、重复性及稳定性。结果罗丹明B浓度在1.04~10.40 μg/mL范围内,与其吸光度呈良好的线性关系（r=0.999 5）;该方法的专属性、线性、精密度、加样回收率、检测限、重复性及稳定性均符合要求。结论紫外-可见分光光度法可用来测定可溶微针贴片中罗丹明B的含量,且方法简单、准确、可靠。     

显性负突变hTERT在TSA诱导Hela细胞凋亡中的作用

目的通过转染显性负突变hTERT探讨其在TSA诱导宫颈癌细胞株Hela凋亡中的作用。方法PCR-TRAP-ELISA法检测转染显性负突变,野生型hTERT和对照质粒以后Hela细胞的端粒酶活性。磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法检测细胞生长率;AnnexinⅤ/PI法检测各组转染细胞在TSA作用下的早期凋亡。结果转染显性负突变hTERT的Hela细胞的端粒酶活性显著低于对照组,2μmol/LTSA作用对照细胞Hela-puro、Hela-DNhTERT和Hela-WThTERT细胞,Hela-DNhTERT相对于Hela-puro生长率差异明显,Hela-DNhTERT细胞凋亡率明显高于Hela-WThTERT和Hela-puro组。结论转染DNhTERT对TSA诱导的Hela细胞凋亡具有协同作用。     

德育哲学视野下实习医学生社会主义核心价值观教育探析

目的：探讨灵芝三萜组分（GLE）增强紫杉醇（PTX）诱导人表皮生长因子受体2阳性（HER2＋）乳腺癌细胞凋亡的作用和机制。方法磺酰罗丹明B（SRB）法和台盼蓝染色计数法检测细胞增殖活性。CompuSyn软件分析药物相互作用。免疫印迹法检测蛋白表达。采用人乳腺癌细胞裸鼠移植瘤模型研究体内抗肿瘤作用。结果体外实验表明,GLE与PTX协同抑制SKBR‐3细胞的增殖和诱导细胞凋亡,并协同诱导细胞凋亡相关蛋白的表达和阻断HER2信号通路的传导。体内动物实验表明,GLE增强 PTX抗 HER2＋乳腺癌的作用。结论GLE 与PTX 在体内外对HER2＋乳腺癌SKBR‐3细胞具有协同抑制作用。     

三角褐指藻在多波长下藻液吸光度与细胞密度的关系研究

目的研究具潜在药用价值的三角褐指藻Phaeodactylum tricornutum在不同波长下,其藻液吸光度与细胞密度的关系。方法取对数生长后期的三角褐指藻藻液进行梯度稀释,利用显微镜观测微藻细胞密度,利用分光光度计分别测定藻液在8个波长下的吸光度,分析各波长下微藻细胞密度与吸光度的相关性。结果 6个稀释梯度下的细胞密度分别为923×104、453×104、207×104、94×104、47×104、22×104个/mL;不同波长下藻液吸光度有差别。8个波长下,细胞密度与吸光度均存在显著性相关关系,在680、663、420和450 nm波长处相关系数r值较大,分别为0.999 0、0.998 1、0.997 2和0.996 3。结论利用吸光度法检测三角褐指藻细胞生长是一种快速、简便、可行的方法;本试验条件下,在680、663、420和450 nm波长处测定三角褐指藻藻液的吸光度较为适宜。     

内皮素受体拮抗剂C2010对内皮细胞系ECV304增殖和凋亡的影响

目的观察内皮素受体拮抗剂C2010对内皮细胞系ECV304的作用,为进一步探讨其抗肿瘤作用提供依据。方法磺酰罗丹明B(SRB)方法评估内皮素受体拮抗剂C2010对内皮细胞系ECV304增殖的抑制作用;用流式细胞仪检测其对细胞凋亡的影响。结果 C2010在204、0μg/mL给药48 h后对ECV304细胞增殖有剂量依赖的显著抑制作用,抑制率分别为12.67%、43.32%,并能使ECV304细胞凋亡数量增加。结论 C2010对内皮细胞ECV304有抑制增殖作用和诱导凋亡作用。     

MTT比色法的改良及其在LAK细胞活性检测中的应用

目的：改良四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法,并用来检测淋巴因子激化的杀伤细胞（LAK细胞）活性。方法：在MTT代谢产物甲瓒DMSO溶解后的最佳吸光度测定及效靶细胞不同孵育时间的比较等方面进行研究。结果：MTT代谢产物甲瓒DMSO溶解后的最佳吸光度为510nm,效靶细胞最佳孵育时间为4h。结论：改良的MTT比色法优于常规的MTT比色法。     

蛋白酶体功能障碍对多巴胺能PC12细胞的特异性损伤

目的探讨蛋白酶体抑制剂lactacystin对多巴胺能PC12细胞的特异性损伤。方法不同浓度的lactacystin(1、5、10、15和20μmol/L)分别处理多巴胺能PC12细胞和胶质瘤U251细胞24 h,MTT法检测细胞活力;50μmol/L的lactacystin处理U251细胞24 h,MTT法检测细胞活力;10、20μmol/L lactacystin处理PC12细胞,W estern B lot检测细胞内多泛素化蛋白含量;单胺氧化酶B抑制剂selegiline(500μmol/L)和特异性酪氨酸羟化酶抑制剂-αMT(1 mmol/L)提前4 h预处理PC12细胞,再与10μmol/Llactacystin共同作用24 h,MTT法检测细胞活力,W estern B lot检测多泛素化蛋白含量。结果Lactacystin呈剂量依赖性损伤多巴胺能PC12细胞,其对胶质瘤U251细胞无毒性作用,而且其毒性与细胞内多泛素化蛋白生成增加相关。用以增加细胞内多巴胺含量的selegiline和用以减少细胞内多巴胺含量的α-MT都导致lactacystin毒性增强。结论蛋白酶体功能障碍特异性损伤多巴胺能细胞,而其特征性的神经递质多巴胺在其易感性中的作用复杂。     

原儿茶酸防护百草枯致胎鼠中脑细胞损伤实验研究

目的观察原儿茶酸（PCA）对百草枯（PQ）所致胎鼠中脑神经细胞损伤的保护作用。方法取胚胎大鼠进行中脑神经细胞分离培养,随机分为空白对照组、阳性对照组、PQ组及PCA高、低浓度组（100μmol/L和50μmol/L）,分别给予神经生长因子（NGF）、PQ和PCA进行配组干预,接种第6天除空白对照组,另四组均加入PQ终浓度为800μmol/L。接种第7天观察细胞生长状况。四唑盐（MTT）比色法检测神经细胞活性,抗酪氨酸羟化酶（TH）免疫荧光染色法测定多巴胺（DA）能神经元数量;TH免疫荧光染色比较各组阳性神经元数目及细胞核、轴突的变化情况。结果与空白对照组、阳性对照组、PCA组比较,PQ组细胞核固缩、破裂,细胞凋亡率升高;PCA高、低浓度预处理后,细胞存活率增加（P〈0.05）,细胞轴突损伤减少,细胞凋亡率降低,且具有量-效关系。结论 PCA对PQ诱导的中脑神经细胞凋亡具有抑制作用,该作用有浓度依赖性,提示PCA对胎鼠中脑神经细胞及DA能神经元有一定的保护作用。     

GDNF和IL-1β体外诱导中脑神经干细胞分化的实验研究

目的探索胶质源性神经营养因子（GDNF）和白细胞介素1β（IL-1β）在体外诱导小鼠胚胎中脑神经干细胞（M-NSCs）分化成多巴胺能神经元的培养方法,为M-NSCs移植治疗帕金森病（PD）提供实验依据。方法在有血清条件下体外培养鼠胚M-NSCs,予以GDNF和IL-1β作诱导分化。TH免疫细胞化学鉴定,流式细胞术检测TH阳性神经元的百分率。结果实验组促进M-NSCs分化为TH阳性神经元的比例：A组为13.53%,B组为9.66%,C组为16.22%,D组（对照组）仅3.46%,有显著性差异（P〈0.01）。结论 GDNF和IL-1β可明显促进M-NSCs分化成多巴胺能神经元。     

13-取代小檗碱衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究

目的通过在小檗碱的13位上引入不同取代基,探讨13-取代小檗碱衍生物的体外抗肿瘤活性构效关系,并对其抗肿瘤作用机制开展初步研究。方法以小檗碱为起始原料,13-烷基小檗碱（3a-3j）可经选择性还原后与脂肪醛反应而制备;13-取代苄基小檗碱（3k-3n）可经碱性条件下丙酮加成后与取代溴苄反应而制备。采用磺酰罗丹明B（SRB）法和流式细胞仪分别检测化合物的肿瘤细胞活性及周期的影响。结果设计合成了14个目标化合物,其中7个为全新化合物,其结构经1H-NMR和高分辨质谱确证。所有目标物的抗肿瘤活性均强于小檗碱,其中3h对人肝癌HepG2细胞和白血病细胞HL60的IC50分别达到了0.08μg/mL和0.06μg/mL。初步构效关系研究表明：13位烷基取代衍生物活性明显优于13位苄基取代衍生物;13位烷基链长度适中时活性最好。初步作用机制显示：3h可将肿瘤细胞周期阻滞于G2/M期,使细胞增殖受阻,达到抗肿瘤效果。结论 13-取代小檗碱具有发展成为一类新型抗肿瘤药物的潜力。     

人胚胎脊髓神经干细胞生长及分化过程中BDNF的作用研究

目的研究脑源性神经营养因子对人胚胎脊髓神经干细胞生长和分化的影响。方法孕20周水囊引产胎儿标本经家属同意捐赠,分离培养脊髓神经干细胞,分为正常对照组、BDNF蛋白组、BDNF抗体封闭组,计数神经球数目并以MTT法检测细胞活力,免疫组织化学检测NeuN和GFAP的表达情况并进行计数。结果与对照组相比,BDNF蛋白组神经球数目或MTT值均无明显变化,BDNF抗体封闭组的神经球数目和MTT值有明显减少(P<0.05);BDNF蛋白组NeuN阳性细胞数明显多于对照组(P<0.05),GFAP阳性细胞数与对照组相比有明显减少(P<0.05),BDNF抗体封闭组NeuN或GFAP阳性细胞数均少于对照组(P<0.05)。结论外源性BDNF可促进人胚胎脊髓神经干细胞向神经元样细胞分化;内源性BDNF在人胚胎脊髓神经干细胞的增殖分化过程中发挥重要作用。     

6-OHDA induces cycle reentry and apoptosis of PC12 cells through activation of ERK1/2 signaling pathway

This study investigated the effect and mechanism of cell cycle reentry induced by 6-hydrodopamine （6-OHDA） in PC12 cells. By using neural differentiated PC12 cells treated with 6-OHDA, the apoptosis model of dopaminergic neurons was established. Cell viability was measured by MTT. Cell apoptosis and the distribution of cell cycle were assessed by flow cytometry. Western blot was used to detect the activation of extracellular regulator kinasel/2 （ERK1/2） pathway and the phosphorylation of retinoblastoma protein （RB）. Our results showed that after PC12 cells were treated wtih 6-OHDA, the viability of PC12 cells was declined in a concentration-dependent manner. Flow cytornetry revealed that 6-OHDA could increase the apoptosis ratio of PC12 cells in a time-dependent manner. The percentage of ceils in G0/G1 phase of cell cycle was decreased and that in S phase and G2/M phase increased. Simultaneously, ERK1/2 pathway was activated and phosphorylated RB increased. It was concluded that 6-OHDA could induce cell cycle reentry of dopaminergic neurons through the activation of ERK1/2 pathway and RB phosphorylation. The aberrant cell cycle reentry contributes to the apoptosis of dopaminergic neurons.     

MiR-9在人神经胶质瘤中调节CBX7的表达

目的检测CBX7在人神经胶质瘤中的表达,研究人神经胶质瘤中异常表达的microRNA对CBX7的可能调控作用。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测2例正常脑组织、9例胶质瘤组织和3株胶质瘤细胞系中CBX7mRNA和蛋白水平的表达变化。结合Miranda和改良的机器学习法预测调控CBX7的miRNA。采用real-time PCR检测上述组织和细胞系中miR-9的表达,然后在细胞中过表达或敲低miR-9,结合荧光素酶实验和Western blot检测miR-9对CBX7表达的影响。采用MTT实验和流式细胞术分析miR-9敲低后对T98G细胞生长的影响。结果在胶质瘤组织和细胞系中,CBX7的mRNA水平改变不明显,而蛋白水平却明显下调。生物信息学预测CBX7可能受包括miR-9在内的多个miRNAs调控。与正常组织相比,miR-9在胶质瘤中表达明显增高。在293ET细胞中,过表达miR-9能抑制CBX7-3UTR报告基因活性。在T98G细胞中,敲低miR-9可增加CBX7-3UTR报告基因活性,对内源性CBX7的mRNA水平无明显影响,但使CBX7蛋白表达增加。敲低miR-9后,T98G存活细胞数增加,而且G1期细胞数比对照组明显减少。结论由于受到miR-9转录后水平的抑制,CBX7在人神经胶质瘤中表达下调甚至缺失。     

6-OHDA Induces Cycle Reentry and Apoetosis of PC12 Cells through Activation of ERK1/2 Signaling Pathway

This study investigated the effect and mechanism of cell cycle reentry induced by 6-hydrodopamine (6-OHDA) in PCI2 cells.By using neural differentiated PCI2 cells treated with 6-OHDA,the apoptosis model of dopaminergic neurons was established.Cell viability was measured by MTT.Cell apoptosis and the distribution of cell cycle were assessed by flow cytometry.Western blot was used to detect the activation of extracellular regulator kinasel/2 (ERK1/2) pathway and the phosphorylation of retinoblastoma protein (RB).Our results showed that after PC12 cells were treated wtih 6-OHDA,the viability of PC12 cells was declined in a concentration-dependent manner.Flow cytometry revealed that 6-OHDA could increase the apoptosis ratio of PC12 cells in a time-dependent manner.The percentage of cells in G0/G1 phase of cell cycle was decreased and that in S phase and G2/M phase increased.Simultaneously,ERK1/2 pathway was activated and phos- phorylated RB increased.It was concluded that 6-OHDA could induce cell cycle reentry of dopa-minergic neurons through the activation of ERK1/2 pathway and RB phosphorylation.The aberrant cell cycle reentry contributes to the apoptosis of dopaminergic neurons.     

乌苯美司诱导肾癌细胞死亡的作用及机制

目的 观察乌苯美司对肾癌细胞增殖及死亡的影响并探讨其可能机制。方法 利用WST-8细胞增殖实验及细胞生长曲线检测乌苯美司对肾癌细胞增殖能力的影响;LDH释放实验检测乌苯美司对肾癌细胞死亡的影响;酶活性测定法及Western blotting研究乌苯美司诱导肾癌细胞APN活性及表达;Western blotting及免疫组化染色观察乌苯美司的作用靶点氨肽酶N(APN)/CD13在肾癌组织及正常组织中的表达。结果 乌苯美司不能降低肾癌细胞中APN的表达但是可以抑制其活性;乌苯美司可抑制肾癌细胞增殖及活力,诱导细胞自噬性死亡。结论 乌苯美司可抑制肾癌细胞增殖,并可通过诱导自噬引发肾癌细胞死亡。