3种典型海洋微藻的细胞增殖特性研究

目的研究硅藻门的三角褐指藻Phaeodactylum tricornutum、甲藻门的东海原甲藻Prorocentrum donghaiense和金藻门的球形棕囊藻Phaeocystis globosa的细胞增殖情况,为认识其基本生物学特性,推动海洋微藻在医药保健食品行业的应用提供参考。方法选取上述3种海洋微藻为生物材料,以添加f/2营养液的人工海水为培养介质,在植物培养箱中利用三角瓶开展为期2周的一次性培养实验。利用倒置显微镜和血球计数板观测微藻细胞密度,采用最小二乘法拟合法计算微藻日生长速率。结果 3种海洋微藻的细胞生长均经历缓慢期、快速期和平稳期3个阶段;实验结束时,三角褐指藻、东海原甲藻和球形棕囊藻的细胞密度分别约为1.126×107、1.167×107和1.210×107个/mL;其最大生长速率分别出现在第2天(1.11/d)、第4天(1.13/d)和第3天(1.02/d)。结论 3种海洋微藻的细胞增殖具有多样性;它们的最大细胞密度和日生长速率出现的时间或程度均存在一定的差异,提示在进行经济微藻培养生长过程中必须考虑各藻种的细胞增殖特性。     

4株经济海洋微藻细胞生长的实验室研究

目的研究角毛藻Chaetocerossp．、绿色巴夫藻Pavlovaviridis、叉鞭金藻Dirateriainornate和杜氏盐藻Dunaliella salina4株经济海洋微藻的细胞生长特性,为微藻在医药学相关行业的开发与应用提供参考依据。方法采用室内实验方法,以添加f／2营养液的人工海水为培养介质,在植物培养箱中利用三角瓶进行微藻培养试验,测定微藻细胞密度,并计算细胞生长速率。结果4株经济海洋微藻的细胞生长呈现明显的缓慢期、快速期和平稳期阶段。角毛藻、绿色巴夫藻、叉鞭金藻和杜氏盐藻的最大细胞密度有明显差别,分别为6．71×10^6、4．916×10^7、1．225×10^7和4．64×10^6个／mL。对4株微藻在1—5d、5～9d、9～13d和13～17d几个时间段的生长速率进行比较分析,结果表明角毛藻、绿色巴夫藻、叉鞭金藻的生长速率在1～5d阶段最大,分别为0．57、0．48、0．55／d;而杜氏盐藻的生长速率在5～9d阶段最大,为0．68／d。结论实验选用的4株海洋微藻的细胞生长特征存在一定异同,在选育微藻株系开展微藻开发利用研究时应该考虑微藻细胞生长繁殖的差异性。     

不同培养容器和光照对2种微藻生长的影响

目的 研究具药用价值的海洋微藻杜氏盐藻Dunaliella salina和亚心形扁藻Platymonassubcordiformis在不同培养容器以及光照下的细胞生长情况,为促进海洋微藻生物资源的培养保存提供参考.方法 选取杜氏盐藻和亚心形扁藻2种海洋微藻为生物材料,在植物培养箱中分别利用三角瓶和试管,在正常光照和遮光光照条件下开展为期10 d的一次性培养试验,利用倒置显微镜和血球计数板观测微藻细胞密度,统计分析不同培养容器和光照对2种海洋微藻生长影响的作用.结果 在该实验条件下,2种海洋微藻的细胞生长均表现出初期生长缓慢、中期生长快速、后期生长放缓的趋势.杜氏盐藻在三角瓶中正常光照培养条件下的生长最好(504× 104个/mL),其次为在试管中正常光照培养的条件下(364× 104个/mL);亚心型扁藻细胞在三角瓶中正常光照培养的条件下生长最好(227×104个/mL),其次为在三角瓶中遮光处理的条件下(177× 104个/mL).结论 培养容器(三角瓶和试管)和光照(正常光照和遮光)对2种海洋微藻生长的影响均具有统计学意义,在进行微藻生物资源培养和保存时,应充分考虑或利用这2种因素的作用.     

氨的纳氏试剂分光光度法实验探讨

目的:以GBZ/t160.29-2004为标准测定氨的方法中,氨与纳氏试剂反应生成的是黄色沉淀,无法测定其吸光度,进一步研究,发现吸收液的浓度存在问题,需改进.方法:在原吸收液的浓度上,设计几种不同浓度的吸收液,与纳氏试剂反应生成黄色化合物,在420nm波长下测定其吸光度.结果:采用稀释100倍的吸收液反应,测定其吸光度,相关系数r=0.9992,Y=0.01988 0.01529X优于其它稀释倍数的吸收液.结论:GBZ/t160.29-2004中吸收液的浓度有误,将吸收液的浓度改为0.005mo1/L后,结果的稳定性和重现性都很好,所测定氨的样品浓度更具真实性.     

3种具药用价值绿藻的生长特性比较研究

目的比较研究具潜在药用价值的亚心形扁藻Platymonas subcordiformis、眼点拟微绿球藻Nannochloropsis ocutala、海洋小球藻Chlorella vulgaris 3种绿藻门海洋微藻的细胞生长特性,为海洋微藻在医药保健食品行业的应用提供参考依据。方法选取上述3种海洋微藻为生物材料,以添加f/2营养液的人工海水为培养介质,在光照培养箱中利用三角瓶开展一次性培养实验。利用显微镜观测微藻生长14 d内的细胞密度变化情况,采用最小二乘法拟合细胞密度法计算微藻生长速率。结果在实验周期内,3种海洋微藻的细胞生长曲线均呈现出"S"型。在生长平稳期,亚心型扁藻、眼点拟微绿球藻和海洋小球藻的细胞密度分别约为1.30×106、3.50×107和2.45×107个/mL;最大生长速率分别约为0.7/d、0.8/d和1.5/d。结论上述3种具药用价值绿藻的细胞增长经历明显的缓慢期、快速期和平稳期阶段;不同微藻的细胞生长特性差异较大,在进行其高密度培养开发应用时应结合考虑品种特性与收获时期。     

磺酰罗丹明法检测多巴胺能神经细胞的条件

目的探讨磺酰罗丹明B法检测多巴胺能神经细胞的最佳条件.方法采用系列细胞密度梯度、选用多个波长、加用参考波长,以磺酰罗丹明B法检测多巴胺能细胞系Mes23.5细胞数量和活性,分析细胞数量与检测波长及吸光度的关系.结果细胞数量与吸光度呈线性关系,最佳检测波长为540nm.结论磺酰罗丹明B法检测多巴胺能细胞结果可靠,是切实可行的该细胞定量分析和活性检测方法.     

磺酰罗丹明法检测多巴胺能神经细胞的条件

目的探讨磺酰罗丹明B法检测多巴胺能神经细胞的最佳条件。方法采用系列细胞密度梯度、选用多个波长、加用参考波长,以磺酰罗丹明B法检测多巴胺能细胞系Mes23.5细胞数量和活性,分析细胞数量与检测波长及吸光度的关系。结果细胞数量与吸光度呈线性关系,最佳检测波长为540nm。结论磺酰罗丹明B法检测多巴胺能细胞结果可靠,是切实可行的该细胞定量分析和活性检测方法。     

雨生红球藻fachb-712快速繁殖生长的适宜条件

目的 探讨雨生红球藻fachb-712快速繁殖生长的适宜条件.方法 利用分光光度法和显微镜计数法绘制光密度与细胞密度的关系曲线,从不同的pH值、光照强度、接种密度、温度等培养条件入手,对影响雨生红球藻生长的各种主要培养条件进行初步研究.结果 雨生红球藻生长的适宜培养条件为:pH 8.0;光照强度1 klx下连续培养24h;温度24 ℃;接种量1.95×105mL-1.结论 雨生红球藻细胞密度与培养物光密度值满足线性关系,pH 8.0、光照强度1 klx下连续培养24h、温度24 ℃、接种量1.95×105mL-1的培养条件适宜雨生红球藻快速繁殖生长.     

渗出性与漏出性胸腹水鉴别研究

目的比较蛋白区带电泳分析和紫外分光光度扫描鉴别漏出性与渗出性胸腹水效果。方法采用蛋白区带电泳分析和紫外分光光度扫描方法对13例肝硬化的病人的漏出液和32例渗出液标本（包括肺炎12例、肺结核9例、肺部恶性肿瘤11例）进行测定。结果蛋白区带电泳漏出液和渗出液,均能分出典型的Alb、α1、α2β和γ球蛋白五条带,各条带的百分含量差异无统计学意义（P〉0.05）。紫外分光光度扫描在（208±3.5）nm波长下,渗出液的吸收度为1.986±0.162明显高于漏出液的1.505±0.342,在（280±2）nm波长下,渗出液为0.184±0.075,漏出液为0.093±0.059,漏出液与渗出液吸光度比较有差异统计学意义（t=2.485,P=0.027,P〈0.05）。结论蛋白区带电泳方法难于鉴别漏出性和渗出性胸腹水。紫外分光光度扫描208nm波长处的吸光度则可以作为鉴别漏出液和渗出液的一个参考指标。     

藓化饮对体外培养的人口腔黏膜上皮细胞增殖活性的影响

目的 探讨藓化饮对体外培养的人口腔黏膜上皮细胞增殖活性的影响.方法 DispaseⅡ及胰酶消化法原代培养人口腔黏膜上皮细胞,传代后HE染色,光镜下进行形态学观察.免疫组织化学抗角蛋白抗体染色,进行来源鉴定.取第二代培养细胞,随机分为4个实验组和1个对照组.制备藓化饮药液,实验组分别加入经无血清培基稀释为104、105、5×105、106μg/L 4个浓度梯度的藓化饮液继续培养;对照组只加无血清培基继续培养.甲基噻唑基四唑法测定培养细胞的增殖活性.结果 原代培养的人口腔黏膜上皮细胞呈扁平椭圆形或多角形,胞核清晰.细胞抗角蛋白抗体染色阳性.藓化饮在105μg/L浓度下增殖活性吸光度值明显高于其他浓度组和对照组(P＜0.05).而在104μg/L、5×105μg/L、106μg/L浓度下增殖活性吸光度值虽高于对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 使用无血清培养基可成功进行人口腔黏膜上皮细胞原代培养及传代培养.藓化饮在浓度为105μg/L下能明显增强体外培养的人口腔黏膜上皮细胞的增殖活性.