选择性Bcl-2抑制剂ABT-199对乳腺癌细胞MDA-MB-231的放疗增敏作用

目的 研究ABT-199 对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的放疗增敏作用,并探讨其作用机制. 方法 取对数期生长的MDA-MB-231细胞分成对照组、药物组、照射组及联合组(照射+ABT-199). 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同剂量单纯照射和ABT-199 分别作用不同时间对MDA-MB-231细胞增殖的影响并计算20%抑制浓度( IC20 );流式细胞术检测 ABT-199 对 MDA-MB-231 细胞周期和凋亡的影响;Caspase活性试剂盒检测细胞 Caspase-3 活性变化;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bcl-xl的表达. 结果ABT-199对MDA-MB-231细胞有增殖抑制作用且有时间和浓度依赖性,随着ABT-199 浓度的升高, MDA-MB-231 细胞发生不同程度的G0/G1 期阻滞. 联合组较照射组细胞凋亡率明显增高(16. 9% vs 84. 5%),Bcl-2表达水平明显下调(P<0. 05),Bcl-xl变化不明显,同时Bax水平和胞内Caspase-3活性增高(P<0. 05). 结论 选择性Bcl-2抑制剂ABT-199可有效抑制人乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖,诱导细胞发生G0/G1 期阻滞及凋亡. IC20浓度的ABT-199 可明显提高MDA-MB-231细胞对放疗的敏感性.     

全反式维甲酸及其衍生物对乳腺癌细胞株MDA-MB-231凋亡的影响

目的：研究全反式维甲酸( ATRA)及其衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯( ATPR)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231体外凋亡的影响。方法不同浓度ATRA及其衍生物ATPR分别处理MDA-MB-231细胞48 h后,Hoechst染色及流式细胞术检测细胞凋亡的变化,RT-PCR检测凋亡蛋白Caspase-3 mRNA水平的变化, Western blot法检测相关凋亡蛋白表达水平的变化。结果与ATRA相比,相同浓度的ATPR能明显促进MDA-MB-231细胞的凋亡,随着浓度的增加,凋亡作用越加显著( P<0．05)。 RT-PCR显示 ATPR作用后Caspase-3 mRNA 水平显著上调( P <0．05)。 Western blot法显示ATPR能下调抗凋亡蛋白Bcl-2、NF-κB、survivin的表达( P<0．05) ,上调促凋亡蛋白Bax、Grim-19、Caspase-3的表达(P<0．05)。结论 ATPR比ATRA更明显地促进人乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡。     

三黄煎剂调节Aurora激酶A促进乳腺癌细胞凋亡的实验研究

目的?探讨三黄煎剂对乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞凋亡的影响及Aurora激酶A（Aurora A）蛋白表达及功能的影响,并探讨其内在机制。方法?采用CCK-8法检测三黄煎剂对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231增殖的影响。AnnexinV-FITC/PI法检测MCF-7、MDA-MB-231细胞凋亡率。q-PCR法检测MCF-7、MDA-MB-231细胞Aurora A、p53的mRNA表达水平。Western Blot法检测MCF-7、MDA-MB-231细胞凋亡相关蛋白的表达及Aurora A蛋白的表达。结果?三黄煎剂对MCF-7、MDA-MB-231细胞增殖抑制率呈浓度梯度依赖增长（P<0.05）,给药48?h疗效好于24?h（P<0.05）,与给药72?h无统计学差异（P>0.05）。三黄煎剂能够诱导MCF-7、MDA-MB-231细胞凋亡,并上调c-PARP、c-Caspase 3、Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达,呈浓度梯度依赖。三黄煎剂能够下调Aurora A蛋白及mRNA的表达、上调p53蛋白及mRNA的表达。结论?三黄煎剂能够通过下调Aurora A蛋白及mRNA的表达,抑制Aurora A的生物活性,抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞增殖,诱导其凋亡。      

CacyBP/SIP基因沉默对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的 观察干扰小RNA(siRNA)介导的Cacy BP/SIP基因沉默对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响。方法 化学合成Cacy BP/SIP基因序列特异性siRNA(Cacy BP/SIP siRNA),采用脂质体法转染siRNA至MDA-MB-231细胞(Cacy BP/SIP siRNA组),MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率。Realtime PCR和Western blotting检测MDA-MB-231细胞内Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白的表达。另设阴性对照组和空白对照组。结果 与阴性对照组和空白对照组比较,Cacy BP/SIP siRNA组MDA-MB-231细胞增殖能力显著下降(P<0.05),细胞凋亡率显著增高(P<0.05)。Caspase-3和Bax mRNA及蛋白表达上调(P<0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白表达下调(P<0.05)。结论 靶向沉默乳腺癌MDA-MB-231细胞中Cacy BP/SIP基因表达后,可以抑制乳腺癌细胞增殖并诱导凋亡,其作用可能通过下调Bcl-2表达,上调Caspase-3和Bax表达发挥诱导细胞凋亡的作用。     

隐丹参酮诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的研究

目的探讨隐丹参酮对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的隐丹参酮处理MDA-MB-231细胞24 h。采用MTT、流式细胞术检测不同浓度隐丹参酮对MDA-MB-231细胞活性、凋亡的影响。采用Western blot检测MDA-MB-231细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达水平。结果与0μmol/L对照组相比,10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L隐丹参酮组MDA-MB-231细胞存活率显著降低,且呈剂量依赖(P0.05)。流式细胞仪检测显示隐丹参酮在20μmol/L浓度时MDA-MB-231细胞凋亡率为(6.34±0.52)%,与对照组(6.09±0.76)%相比无统计学差异(P0.05)。在40μmol/L、80μmol/L浓度时MDA-MB-231细胞凋亡率分别是(18.74±0.65)%、(28.04±3.08)%,与对照组相比有统计学差异(P0.05),且两浓度组之间相比差异亦有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示,与对照组相比,隐丹参酮在40μmol/L、80μmol/L浓度时,MDA-MB-231细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著下调(P0.05),同时,促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达显著增加(P0.05)。结论隐丹参酮可诱导三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡,其机制可能与激活Bax、Caspase-3和抑制Bcl-2等凋亡调控基因有关。     

苦参碱对乳腺癌细胞杀伤作用的体外实验研究

目的 研究苦参碱(matrine)对体外培养的人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响及相关机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的苦参碱对MCF-7细胞增殖的影响;采用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的苦参碱作用于MCF-7细胞后细胞周期分布、凋亡率及Bax,Bcl-2蛋白的表达水平.结果 苦参碱对MCF-7细胞的增殖具有明显的抑制作用,与对照组相比具有显著性差异(P＜0.05),并呈现时间和剂量依赖性;细胞周期被阻滞于G0/G1期;苦参碱能够诱导细胞凋亡,并且上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达.结论 苦参碱可显著抑制MCF-7细胞的增殖,且抑制作用呈剂量和时间依赖性.苦参碱对MCF-7细胞的增殖抑制作用可能与其诱导细胞周期阻滞及凋亡有关,诱导凋亡可能与其上调Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达有关.     

圣草酚通过调控c-Myc/AR轴对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的 探究圣草酚(Eri)对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响及其可能作用机制。方法 采用不同浓度Eri干预MDA-MB-231细胞后,MTT法检测细胞增殖水平;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡水平;Western blot检测细胞中活性半胱天冬酶-3(Cleaved-caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2相关X(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、细胞髓细胞瘤(c-Myc)、雄激素受体(AR)蛋白表达水平;MDA-MB-231细胞转染si-c-Myc,再联合50μmol/L Eri处理,MTT法检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平;qRT-PCR检测细胞中c-Myc mRNA表达水平;Western blot检测细胞中c-Myc和AR蛋白表达水平。结果 Eri可抑制MDA-MB-231细胞增殖活性,并呈现浓度和时间依赖性。不同浓度Eri处理可降低MDA-MB-231细胞克隆形成能力,促进细胞凋亡,上调Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达水平,下调Bcl-2、c-Myc、AR蛋白表达水平。c-Myc基因沉默可抑制MD...     

杉蟾藤成分复方诱导ER(+)人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的实验研究

目的阐明杉蟾藤成分复方对ER(+)人乳腺癌MCF-7细胞的作用机制。方法杉蟾藤成分复方组与阿霉素相对照,采用MTT法观察杉蟾藤成分复方对MCF-7细胞增殖的抑制率;采用高内涵细胞分析系统观察其对MCF-7细胞凋亡和坏死的影响;采用Western blot观察其对MCF-7细胞信号转导通路蛋白ERK、JNK、p38、Bad和凋亡基因相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3表达情况。结果随着药物浓度增高和时间的延长,杉蟾藤成分复方对MCF-7细胞增殖的抑制率也增大;高内涵细胞分析测定其对MCF-7细胞以早期凋亡和细胞核凋亡为主;Western blot提示其能下调p-ERK和Bcl-2蛋白表达,上调p-JNK、p-P38、Bad和Bax蛋白,促进Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白的活化,以Caspase-8最显著。结论杉蟾藤成分复方能抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,通过阻断Ras-Raf-MAPK-ERK激酶系统及调控Bcl-2家族,促细胞早期凋亡和细胞核凋亡。其对细胞凋亡的两条信号通路都有作用,即外源性死亡受体通路和内源性线粒体通路。     

PPARγ激活在蛇葡萄素抑制乳腺癌细胞增殖和诱导凋亡中的作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖激活物受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ)的激活在蛇葡萄素(ampelopsin,AMP)抑制乳腺癌细胞增殖和诱导细胞增殖凋亡中的作用.方法 以不同浓度AMP(20、40、60、80 μmol/L)分别处理人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞24 h后,荧光素酶报告基因法检测AMP对PPARγ的激活作用,CCK-8检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白的表达,Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性.结果 与PPARγ激动剂罗格列酮一样,AMP剂量依赖性地增强报告基因荧光素酶活性,同时显著抑制乳腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡(P＜0.05);Western blot检测结果显示,AMP在显著上调乳腺癌细胞凋亡相关蛋白Bax、PTEN、活化Caspase-3表达的同时下调Bcl4蛋白及Bcl-2/Bax比值;激酶活性检测结果显示,AMP可显著增强Caspase-3激酶活性,以上作用均可被PPARγ特异性拮抗剂GW9662显著削弱.结论 AMP可能是PPARγ的天然激动剂,其通过激活PPARγ信号途径抑制乳腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡.     

槲皮素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的实验研究

目的探讨Que促人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的分子机制。方法用不同浓度的槲皮素处理人乳腺癌MCF-7细胞,用MTT法测定槲皮素对MCF-7细胞增殖的抑制作用,用流式细胞仪检测MCF-7细胞的凋亡水平,用免疫印迹法检测Que处理人乳腺癌MCF-7细胞的Bcl-2和Bax蛋白表达水平的变化。结果 Que能够明显的抑制MCF-7细胞增殖,促进其凋亡;Que处理人乳腺癌MCF-7细胞的Bcl-2蛋白表达水平明显下调,而Bax蛋白表达水平明显上调。结论 Que通过调节Bcl-2和Bax蛋白表达水平促使人乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡。     

番茄红素对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的影响

目的 观察番茄红素对体外培养的雌激素受体阳性(ER )乳腺癌细胞MCF-7和雌激素受体阴性(ER-)乳腺癌细胞MDA-MB-231的存活率、细胞周期及凋亡的影响.方法 采用MTT法和H3-TdR 掺入法观察番茄红素对两种细胞增殖的影响;流式细胞仪观察同步化的细胞经番茄红素作用后细胞周期及凋亡的变化.结果 番茄红素抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖和DNA合成,具有剂量效应关系,随着时间延长,抑制作用增强,最大抑制率分别为52.6%、61.9%.流式细胞仪结果显示,番茄红素作用24 h后,MCF-7、MDA-MB-231细胞周期各相发生变化,G0/G1期细胞增多,而S期和G2/M期细胞减少,同时可诱发MDA-MB-231细胞凋亡.结论 番茄红素通过阻滞MCF-7细胞于G1期而抑制该细胞的增殖,而对MDA-MB-231细胞增殖的抑制除可通过阻滞细胞周期进程外,还与诱导凋亡有关.     

Effect of amlodipine on apoptosis of human breast carcinoma MDA-MB-231 cells

Objective： To elucidate the effects of amlodipine on the proliferation and apoptosis of human breast carcinoma MDA-MB-231 cells. Methods： Light microscopy was used to determine the effects of amlodipine on cell morphology; Flow cytometry was used to quantitate cells undergoing apoptosis; the expression of a cell cycle-related protein, proliferating cell nuclear antigen （PCNA） and an antiapoptosis protein, Bcl-2 were assessed by immunocytochemistry. Results： Amlodipine concentration of 8.25umol/L （1/2 of ICs0） affected the morphology, decreased the expression of PCNA and Bcl-2 and induced apoptosis of human breast carcinoma MDA-MB-231 cells. Conclusion： The effect of amlodipine on the antiproliferation of human breast carcinoma MDA-MB-231 cells is related to inducement of apoptosis, and the decrease of the expression of Bcl-2 and PCNA may be the possible mechanism for proliferation inhibitory and inducement of apoptosis.     

黄芩苷抑制乳腺癌细胞侵袭、迁移与凋亡的机制研究

目的 用黄芩苷干预人乳腺癌细胞株MCF-7,观察黄芩苷对乳腺癌细胞侵袭、迁移与凋亡的影响及其作用机制.方法 实验分为正常组、模型组、黄芩苷组、miR-126组、LNA组、LNA-126组和LNA-126+黄芩苷组.采用RT-PCR检测miR-126、miR-145、miR-100和let-7c的表达水平,MTT法检测细...     

2-脱氧-D-葡萄糖联合羟基喜树碱协同诱导乳腺癌细胞凋亡的作用

  目的  探究2-脱氧-D-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose, 2-DG)联合羟基喜树碱(hydroxycamptothecin, HCPT)对乳腺癌细胞抗肿瘤活性的影响及其机制。  方法  采用2-DG(0、1.25、2.5、5、10、20 mmol/L)、HCPT(0、5、10、20、40 μmol/L)单独作用以及5 mmol/L 2-DG与各浓度HCPT联合作用于乳腺癌细胞MDA-MB-231与MCF-7,使用MTT法检测细胞增殖;溴化丙啶(propidium iodide,PI)检测5 mmol/L 2-DG、10 μmol/L HCPT单独作用以及联合作用对MDA-MB-231细胞的凋亡作用;不同浓度2-DG作用于MDA-MB-231细胞6 h后,测定细胞内ATP含量变化;Western blot检测MDA-MB-231细胞Akt、P-Akt、Bcl-2/Bax、PARP、Caspase-8和Caspase-3蛋白的表达。  结果  5 mmol/L 2-DG与HCPT联合具有协同作用,处理48 h结合指数(CI < 1),合用组凋亡率均高于单用组(P < 0.05), 同时两者合用抑制Akt蛋白的磷酸化以及增加了Caspase-3蛋白的活化,增加了对PARP蛋白的剪切。  结论  2-DG联合HCPT可以协同诱导乳腺癌细胞凋亡,其机制可能是抑制肿瘤细胞能量生成以及抑制Akt蛋白的磷酸化和增强Caspase-3蛋白的活性。     

黄芩苷通过上调miR-126诱导乳腺癌细胞凋亡的机制研究

目的 用黄芩苷干预人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,观察黄芩苷对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制.方法 用qRT-PCR检测miR-126的表达变化,Western-blot检测Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3、p-p38和p53的表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 miR-126在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达比正常乳腺细胞低,黄芩苷干预乳腺癌细胞后miR-126上调最为明显(P<0.05).用miR-126 mimics、miR-126 inhibitors转染乳腺癌细胞,Western-blot显示黄芩苷及miR-126 mimics作用于人乳腺癌细胞后Bcl-2表达水平下降,Caspase-9和Caspase-3的裂解产物、p-p38、p53表达增加,差异有统计学意义(P<0.05).MTT法显示黄芩苷和miR-126均可抑制乳腺癌细胞的增殖,流式细胞术显示黄芩苷与miR-126 mimics促进癌细胞凋亡.结论 黄芩苷可以抑制乳腺癌细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与通过上调miR-126调节凋亡相关基因有关.     

去甲斑蝥素通过诱导自噬体聚集促使乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

探究去甲斑蝥素（norcantharidin,NCTD）对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。采用Western blot实验检测NCTD对MDA-MB-231细胞中凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2、cleaved-PARP/PARP、cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3和MCL-1表达水平的影响;采用Western blot实验检测NCTD对MDA-MB-231细胞中自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I,Parkin和PINK1表达水平的影响;采用流式细胞术检测NCTD对MDA-MB-231细胞线粒体膜电位及线粒体活性氧（reactive oxygen species,ROS）变化情况的影响;采用共聚焦显微镜检测NCTD对表达mCherry-EGFP-LC3的MDA-MB-231细胞自噬流的影响;采用流式细胞术检测NCTD联合使用氯喹（chloroquine,CQ）或3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）后,对MDA-MB-231细胞凋亡情况的影响。实验结果显示,NCTD可显著上调Bax/Bcl-2、cleaved...     

熊果酸对乳腺癌细胞凋亡影响及其机制

目的：探讨熊果酸对乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其机制。方法：体外培养MDAMB-231细胞,用不同浓度的熊果酸处理24、48、72 h,MTT法测定其对MDA-MB-231细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;熊果酸（浓度分别为20、40、80μmol/L）处理MDA-MB-231细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,分光光度计检测Casepase-3、Casepase-9相对活性,western blot法检测p16、p27基因表达情况。结果：熊果酸（浓度10~100μmol/L）能抑制MDA-MB-231细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;熊果酸（浓度分别为20、40、80μmol/L）作用MDA-MB-231细胞48 h后,细胞凋亡率分别为11.5%、21.4%、36.6%,对照组凋亡率仅为2.2%;细胞周期结果显示熊果酸能抑制细胞的G1期行进和G1/S转换,S期细胞比例降低;Casepase-3、Casepase-9的相对活性显著增加;p16、p27的表达升高,呈剂量依赖性。结论：熊果酸能抑制MDA-MB-231细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与上调p16、p27表达阻滞细胞周期并增加细胞Caspase-3、Caspase-9激活线粒体凋亡途径有关。熊果酸是一种前景广阔的抗肿瘤药物。     

抑癌基因LKB1在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的 通过检测新发现的抑癌基因LKB1在乳腺癌中表达情况,探讨其与乳腺癌变的关系及其预后意义。方法 用Western印迹法比较不同乳腺癌细胞株LKB1基因的表达情况,构建LKB1基因表达质粒,转染至该基因低表达的细胞株,研究细胞生长数度及凋亡相关蛋白表达的改变;以Western印迹法检测LKB1基因在121例乳腺癌手术标本中的表达,结合临床病理资料分析该基因在乳腺癌中的临床意义。结果 MDA-MB-435细胞中未能检测到LKB1基因的表达,转染LKB1基因表达质粒后,MDA-MB-435细胞的生长受到明显抑制;细胞周期分析,G1期细胞的比例18．3％增至40．9％;细胞中细胞周期相关因子细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白E的含量下降,而其抑制因子p21的含量升高;单因素分析表明LKB1低表达与高复发率(P=0．002)及总生存率差(P=0．008)显著相关。结论 在LKB1基因缺表达的乳腺癌细胞株MDA-MB-435细胞中,转入并表达该基因能明显抑制其乳腺癌细胞的生长;其作用与p21介导的G1期阻滞有关;LKB1基因低表达与乳腺癌预后差显著相关。