大黄酚通过激活NLRP3炎症小体诱导胃癌细胞焦亡的机制研究

目的探索大黄酚诱导人胃癌细胞焦亡的作用及其可能的作用机制。方法不同浓度大黄酚（0、5、10 μmol/L）和NLRP3抑制剂、caspase-1抑制剂先后处理人胃癌MKN28细胞,CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术检测细胞焦亡;实时荧光定量PCR检测焦亡、NLRP3炎症小体相关蛋白的mRNA水平;Western blotting检测焦亡、NLRP3炎症小体的蛋白表达水平。结果不同浓度的大黄酚（0、5、10 μmol/L）作用于MKN28细胞后,均降低了细胞存活率（P < 0.01）,并促进了细胞焦亡的发生（P < 0.01）。大黄酚呈剂量依赖性地上调胃癌MKN28细胞中NLRP3、caspase-1和白细胞介素-1β的mRNA以及蛋白表达水平（P < 0.01）。采用caspase-1抑制剂VX-765、NLPR3抑制剂MCC950抑制NLPR3炎症小体表达,可削弱大黄酚对细胞焦亡的诱导作用（P < 0.01）。结论大黄酚抑制人胃癌MKN28细胞增殖、促进LDH释放和caspase-1活性升高,诱导胃癌细胞焦亡,其作用机制与NLRP3/caspase-1通路密切相关。     

新风胶囊含药血清抑制脂多糖诱导的类风湿关节炎大鼠的滑膜成纤维细胞焦亡

目的 观察新风胶囊（XFC）含药血清对脂多糖（LPS）诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（RA-FLS）焦亡的影响及其机制。方法 将20只SD大鼠利用随机数字表法分为2组：空白组和XFC组,XFC组予0.324 mg/g灌胃7 d后制备含药血清。CCK-8法检测XFC含药血清作用于RA-FLS最佳干预浓度和时间。将RA-FLS分为空白组（RA-FLS）、模型组（RA-FLS+5 μg/mLLPS）、MCC950组（RA-FLS+LPS+MCC950）、XFC组（RA-FLS+LPS+XFC含药血清）。CCK-8法检测细胞活性,电镜观察RA-FLS焦亡形态,ELISA检测IL-1β、IL-18浓度,Western blotting和qRT-PCR检测NLRP3、caspase-1、GSDMD的蛋白和mRNA的表达。结果 XFC作用于RA-FLS最佳干预浓度和时间分别为20%和24 h。与空白组相比,模型组细胞活性显著上升（P<0.05）,电镜下可见RA-FLS内形成大量小泡,膜上形成孔隙,胞膜破裂,细胞内容物流出,IL-1β、IL-18浓度和NLRP3、GSDMD、caspase-1mRNA及蛋白表达显著升高（P<0.05或P<0.01）;与模型组相比,XFC含药血清组、MCC950组细胞活性显著下降（P<0.01）,细胞焦亡情况改善,IL-1β、IL-18浓度和NLRP3、GSDMD、caspase-1 蛋白及mRNA表达明显降低（P<0.05、P<0.01）。结论 XFC可能通过NLRP3/GSDMD通路抑制FLS细胞焦亡,下调炎症细胞因子的分泌,减轻关节局部炎症反应而发挥治疗作用。     

同型半胱氨酸通过促进细胞焦亡和上调琥珀酸脱氢酶亚基A诱导神经炎症反应

目的探索同型半胱氨酸(Hcy)是否通过促进细胞焦亡和上调琥珀酸脱氢酶亚基A(SDHA)蛋白表达诱导神经炎症反应。 方法使用不同浓度Hcy(1.25、2.50、5.00 mmol/L)处理小鼠海马神经元细胞系HT22细胞。CCK-8检测细胞活力;免疫荧光法观察细胞形态和焦亡相关蛋白消皮素(GSDMD)与细胞膜的共定位情况;Western blotting检测细胞核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸蛋白水解酶-1前体(pro-Caspase-1)和Caspase-1的活性片段(cleaved-Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、GSDMD和GSDMD的N端结构域(GSDMD-N)等焦亡相关蛋白及SDHA蛋白表达水平。酶联免疫吸附测定法检测炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平。 结果Hcy可显著降低HT22细胞活力,损伤HT22细胞突触,增加GSDMD与细胞膜的共定位和细胞膜破裂程度,上调HT22细胞NLRP3、pro-Caspase-1、cleaved-Caspase-1、ASC、GSDMD和GSDMD-N等焦亡相关蛋白及SDHA蛋白表达水平,并增加IL-1β和IL-18水平。 结论Hcy可诱导神经炎症反应,其机制与其促进细胞焦亡和上调SDHA蛋白表达密切相关。     

黄芪丹参配伍调控ASIC1a/CaMKⅡδ信号抑制酸性微环境中心肌细胞焦亡

  目的  探讨黄芪丹参配伍对乳酸诱导的酸性微环境中心肌细胞焦亡损伤的保护作用及基于酸敏感离子通道1a(ASIC1a)/钙离子-钙调蛋白依赖性激酶Ⅱδ(CaMKⅡδ)信号通路的调控机制。  方法  采用Lactate刺激H9C2心肌细胞建立pH 6.5酸性微环境细胞损伤模型。分为正常对照组、模型组、黄芪丹参提取物(HQ)组、HQ+ASIC激动剂Nocistatin组和ASIC抑制剂NS383阳性药对照组。采用CCK-8法测定心肌细胞活力, 流式细胞术检测心肌细胞凋亡, 免疫荧光检测ASIC1a表达, qPCR分析NLRP3、Caspase-1、IL-1β及GSDMD mRNA表达, Western blot检测ASIC1a、CaMKⅡδ、NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-1、GSDMD及GSDME-N蛋白的表达。  结果  在pH 6.5酸性环境中, 心肌细胞活力显著降低(P < 0.01), 细胞凋亡明显增加(P < 0.01), NLRP3、Caspase-1、IL-1β及GSDMD mRNA表达明显增加(P < 0.01), ASIC1a、CaMKⅡδ、NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-1、GSDMD及GSDME-N蛋白表达明显增加(P < 0.01)。60 μg · mL-1HQ可显著促进pH6.5酸性微环境中心肌细胞活力(P < 0.01), 抑制心肌细胞凋亡(P < 0.01), 下调NLRP3、Caspase-1、IL-1β、GSDMD mRNA和ASIC1a、CaMKⅡδ、NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-1、GSDMD及GSDME-N蛋白表达(P < 0.01)。并且HQ的以上效应可被ASIC激动剂Nocistatin逆转。  结论  黄芪丹参配伍可下调ASIC1a/CaMKⅡδ信号抑制酸性微环境下NLRP3炎症小体介导的心肌细胞焦亡。      

CXC趋化因子配体14对高糖环境中脂肪细胞焦亡的影响

目的探讨CXC趋化因子配体14(CXCL14)对高糖暴露环境中脂肪细胞焦亡的影响。方法利用“鸡尾酒法”诱导3T3-L1细胞分化为成熟脂肪细胞,用5.5 mmol/L低糖(NG)或25 mmol/L高糖(HG)葡萄糖培养基培养脂肪细胞24 h;HG环境下用不同浓度CXCL14处理3T3-L1细胞不同时间。Western blot检测消化道皮肤素(GSDMD)、核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)蛋白、白细胞介素-6(IL-6)蛋白表达水平。实时荧光定量PCR检测GSDMD、NLRP3、白细胞介素-1β(IL-1β) mRNA转录水平。LDH测定试剂盒检测脂肪细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力;Annexin V-FITC荧光检测细胞死亡情况;CCK-8法检测各组细胞增殖活力。结果高糖环境下脂肪细胞焦亡发生率升高,CXCL14处理可提高脂肪细胞增殖活力,但脂肪细胞焦亡相关指标却受到CXCL14浓度梯度的不同影响。50 nmol/L CXCL14处理可降低高糖环境下脂肪细胞GSDMD、NLRP3、IL-1β mRNA以及NLRP3蛋白的表达,下调脂肪细胞LDH活力,减少Annexin V-FITC荧光染色细胞死亡率,但25、100、200 nmol/L CXCL14对其焦亡的指标却呈反向趋势。并且50 nmol/L CXCL14干预后脂肪细胞NLRP3、Caspase-1蛋白随干预时间的延长呈先下降再上升趋势。结论CXCL14对高糖环境中脂肪细胞焦亡的影响与其浓度存在相关性。     

丙泊酚作用NLRP3/ASC/caspase-1通路对肺癌A549细胞焦亡的影响

目的 探讨丙泊酚作用核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/凋亡相关斑点样蛋白（ASC）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)通路对A549细胞焦亡的影响。方法 超低吸附培养法建立肺癌A549细胞三维培养模型,建立模型后采用不同浓度丙泊酚作用肺癌A549细胞,CCK-8法检测丙泊酚对A549细胞增殖的影响;酶联免疫吸附法检测肺癌A549细胞上清炎性细胞因子白细胞介素（IL）-18、IL-1β、IL-6表达水平变化;蛋白免疫印迹法检测各组焦亡相关蛋白NLRP3、ASC、caspase-1、焦孔素蛋白N端（GSDMD-N）、IL-1β表达水平。结果 三维培养下,A549细胞间有聚拢黏附趋势,培养12 h即可清晰观察到细胞球。与空白对照组相比,随着丙泊酚浓度增加,肺癌A549细胞存活率依次降低（P <0.05）;肺癌A549细胞上清炎性细胞因子IL-18、IL-1β、IL-6、焦亡相关蛋白NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD-N、IL-1β表达水平依次增加（P <0.05）。结论 超低吸附培养法成功建立肺癌A549细胞三维培养模型,丙泊酚通过激...     

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3介导细胞焦亡在痛风性关节炎中的作用机制研究

目的:探讨血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化Gasdermin D(GSDMD)蛋白介导的细胞焦亡在痛风性关节炎中的作用及其机制。方法:分别收集40例急性痛风性关节炎患者(试验组)和40例健康体检者(对照组);采用血常规检测仪和全自动生化分析仪检测两组血清中生化指标(肾功、血脂)及白细胞计数(WBC)、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)等炎性指标的含量。采用免疫印迹法检测法(Western blot)分别检测两组外周血单个核细胞中NLRP3、GSDMD、白介素1β(IL-1β)蛋白的表达量。通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组血浆中IL-1β和白介素18(IL-18)的表达量。结果:与对照组相比,试验组中WBC、ESR、CRP水平较高,差异具有统计学意义(均P<0.05);试验组细胞焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD、IL-1β及IL-18表达显著增加(均P<0.05);试验组血尿酸水平、NLRP3、GSDMD与炎性因子(IL-1β及IL-18)表达量呈线性正相关(均P<0.05)。结论:NLRP3可能通过激活的GSDMD蛋白介导的...     

miR-16-5p靶向NLRP1抑制缺氧复氧诱导的BRL-3A细胞焦亡

目的探讨mi R-16-5p对缺氧复氧诱导的大鼠正常肝细胞系BRL-3A焦亡的作用以及作用机制。方法通过细胞缺氧复氧的方法构建肝缺血再灌注损伤(HIRI)的体外模型,通过流式细胞术检测细胞焦亡率;通过荧光实时定量PCR(RT-qPCR)检测mi R-16-5p的表达水平;运用mi R-16-5p mimic在细胞中过表达mi R-16-5p并研究mi R-16-5p对细胞焦亡的影响;通过蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测焦亡相关蛋白caspase1、IL-1β、IL-18的蛋白表达水平;通过生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验预测并鉴定mi R-16-5p与NLRP1的靶向关系;通过过表达和干扰NLRP1,研究NLRP1及mi R-16-5p/NLRP1轴对细胞焦亡的影响。结果与空白对照组相比,模型组焦亡率极显著上升(P0.01),mi R-16-5p表达量显著降低(P0.05)。过表达mi R-16-5p极显著抑制细胞焦亡(P0.01)并抑制焦亡相关蛋白caspase1、IL-1β、IL-18的表达(P0.01或P0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示NLRP1是mi R-16-5p的靶基因,过表达mi R-16-5p显著降低了NLRP1的m RNA和蛋白水平(P0.01或P0.05)。此外,过表达NLRP1逆转了mi R-16-5p对细胞焦亡的抑制作用(P0.01)和对caspase1、IL-1β、IL-18表达的抑制作用(P0.01或P0.05)。结论 MiR-16-5p通过靶向NLRP1来抑制caspase1、IL-1β、IL-18的表达,从而改善缺氧复氧引起的BRL-3A细胞焦亡。     

NLRC4在具核梭杆菌诱导巨噬细胞焦亡中发挥调控作用

目的 探讨具核梭杆菌感染引起巨噬细胞焦亡的作用及机制。方法 巨噬细胞RAW264.7与具核梭杆菌共同培养,设置未感染组和具核梭杆菌感染组（以MOI和感染时间设置梯度）。乳酸脱氢酶和荧光双染检测细胞坏死率;Western blot检测焦亡相关蛋白caspase-1、GSDMD和IL-1β的活化情况;qRT-PCR分析NLRP3、NLRC4、AIM2、NLRP1炎症小体激活情况,采用siRNA敲低可能参与调控的关键分子,分为siRNA敲低组与阴性对照组,比较两组细胞在具核梭杆菌感染时的焦亡和坏死率,验证其调控作用。结果 具核梭杆菌感染组的细胞肿胀破碎、胞内出现空泡,乳酸脱氢酶释放增加,PI阳性细胞数增多,坏死率升高（P<0.05）;Western blot结果显示caspase-1、GSDMD和IL-1β被活化且呈MOI和时间依赖性升高（P<0.05）;qRT-PCR筛选出NLRC4可能参与调控,siRNA敲低NLRC4可抑制具核梭杆菌引起的caspase-1/GSDMD通路的激活,减少细胞坏死率和炎症因子IL-1β的表达（P<0.05）。结论 具核梭杆菌感染能够诱导巨噬细胞RAW264.7经caspase-1/GSDMD信号通路发生焦亡并释放炎症因子,且NLRC4炎症小体发挥关键的调控作用。     

LncRNA MEG3对过氧化氢诱导人晶状体上皮细胞焦亡的机制研究

目的 探讨LncRNA MEG3对过氧化氢诱导人晶状体上皮细胞焦亡的影响。方法 利用CCK-8检测不同浓度下H2O2培养人晶状体上皮细胞活力确定最适浓度。流式细胞术检测在最适浓度下细胞焦亡率、Western-Blot检测caspase-1的表达,qRT-PCR检测LncRNA MEG3的相对表达量。转染HLE-B3细胞沉默LncRNA MEG3,将HLE-B3细胞随机分为空白对照组、siNC组、siMEG3组,CCK-8和流式细胞术分别检测各组细胞活力和焦亡率,Western-Blot检测焦亡相关蛋白caspase-1、N-GSDMD、NLRP3的表达水平,ELISA检测IL-1β的浓度。结果 CCK-8结果显示HLE-B3细胞活力随H2O2浓度上升而下降,最适浓度下人晶状体上皮细胞焦亡率上升、LncRNA MEG3、caspase-1表达上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。敲低MEG3表达后,与对照组相比细胞焦亡率上升,caspase-1、NLRP3、N-GSDMD蛋白表达下调,IL-1β分泌量减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 LncRNA MEG3通过Caspase-1介导的焦亡经典途径参与H2O2诱导人晶状体上皮细胞焦亡过程,敲低MEG3可以抑制人晶状体上皮细胞焦亡。     

NLRP3炎症小体介导单核细胞增生李斯特菌感染小鼠和巨噬细胞的细胞焦亡

目的: 探讨单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes,Lm）感染引起小鼠和巨噬细胞的细胞焦亡作用机制。方法：体内实验,C57B/6小鼠分为Lm组和阴性对照组（NC组）,分别经小鼠尾静脉注射Lm菌液5×104 CFU/鼠和无菌PBS,24 h后取脾脏、肝脏、脑组织,蛋白质印迹法检测焦亡及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（nucleotide binding oligomerization domain like receptor protein 3,NLRP3）炎症小体相关蛋白的表达。体外实验,分Lm组、NC组、LPS+ATP组、Lm+MCC950组和LPS+ATP+MCC950组。以感染复数（multiplicity of infection,MOI）=10 Lm感染THP-1源巨噬细胞,ELISA检测细胞上清液IL-1β,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞焦亡及NLRP3炎症小体mRNA和蛋白的表达,免疫荧光检测Lm感染后凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis associated speck like protein containing a CARD,ASC）斑点及与NLRP3的共定位。结果： Lm感染小鼠和巨噬细胞后,消化道皮肤素D（gasdermin D,GSDMD）蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）,且出现GSDMD蛋白氨基端裂解片段（gasdermin D N-terminal,GSDMD-NT）。Lm感染巨噬细胞1 h、3 h、6 h,NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA水平均明显升高（P<0.05）,且3 h升高最明显。Lm感染小鼠的脾、肝、脑组织NLRP3、pro-caspase-1、pro-IL-1β及裂解片段caspase-1 p20、IL-1β-17蛋白表达量均明显升高（P<0.05）。Lm感染巨噬细胞后IL-1β分泌水平升高,细胞上清液中检测到裂解片段caspase-1 p20、IL 1β 17的分泌,细胞裂解液中NLRP3、pro caspase 1、pro IL 1β蛋白表达升高（P<0.05）,荧光显微镜观察到ASC斑点形成且与NLRP3蛋白存在共定位。加入NLRP3特异性抑制剂MCC950预处理后,巨噬细胞GSDMD NT明显减少（P<0.05）。结论： Lm感染导致的细胞焦亡主要与NLRP3炎症小体的激活有关。     

桑黄酮抑制NLRP3炎症小体活化并缓解感染性休克的作用研究

目的探究桑枝提取物桑黄酮对NLRP3炎症小体活化的影响, 为相关炎性疾病的治疗提供新思路。方法在细胞水平上, 使用Western blotting和ELISA方法, 检测小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDM)和人THP-1细胞在尼日利亚菌素、单钠尿酸盐和腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)3种刺激剂诱导下的半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)和白细胞介素(IL)-1β表达水平。在动物实验中, 构建脂多糖(LPS)诱导的感染性休克模型, 将实验小鼠分为安慰剂组、感染性休克组和桑黄酮干预组, 利用ELISA检测小鼠腹腔灌洗液及血清中IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果在BMDM和THP-1细胞中, 桑黄酮可以抑制尼日利亚菌素、单钠尿酸盐和ATP这3种炎症小体激动剂诱导的Caspase-1和IL-1β的加工和成熟(P < 0.01), 而对非炎症小体相关的细胞因子TNF-α的分泌无影响(P>0.05)。在动物实验中, 发现桑黄酮可以缓解LPS诱导的小鼠感染性休克(P < 0.01), 明显抑制LPS诱导的小鼠血清及腹腔液中IL-1β的表达(P < 0.01), 延长LPS造模后小鼠的存活时间(P < 0.01)。结论桑黄酮作为一种中草药活性成分提取物, 可以在体外和体内抑制NLRP3炎症小体的活化, 为NLRP3相关疾病的治疗提供了实验依据。     

和厚朴酚可体外减轻阿霉素诱导的心肌毒性：基于激活AMPK/Nrf2信号通路抑制细胞焦亡

目的 探讨和厚朴酚（HKL）改善阿霉素（DOX）诱导的H9c2心肌细胞毒性的作用及机制。方法 采用DOX处理H9c2细胞心肌毒性模型,随机分为4组：正常对照组、DOX处理组（DOX）、HKL和DOX共处理组（DOX+HKL）以及HKL、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抑制剂和DOX共处理组（DOX+HKL+AMPK抑制剂）。24 h后观察细胞形态变化,用CCK-8法检测细胞活力,RT-PCR检测炎性因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-1β（IL-1β）的mRNA水平,Western blot检测裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）、细胞色素c和细胞焦亡分子NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Caspase-1）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）以及p-AMPK、红系衍生核因子相关因子2（Nrf2）的表达,免疫荧光染色观察NLRP3和p-AMPK的表达。结果 和正常对照组相比,DOX组H9c2细胞变得肿胀且细胞活力明显降低（P< 0.05）,TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平显著增加（P<0.05）,同时裂解的caspase-3、细胞色素c、NLRP3、Caspase-1和ASC表达增加（P<0.05）,p-AMPK和Nrf2表达降低（P<0.05）,NLRP3荧光染色强度增加,p-AMPK荧光强度降低;和DOX组相比,DOX+HKL组细胞肿胀减轻,细胞活力明显增加（P<0.05）,TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平显著降低（P<0.05）,裂解的caspase-3、细胞色素c、NLRP3、Caspase-1和ASC表达降低（P<0.05）,而p-AMPK和Nrf2表达增加（P<0.05）,另外NLRP3荧光染色强度降低,p-AMPK荧光强度增加;和DOX+HKL组相比,AMPK抑制剂可以逆转HKL对DOX心肌的保护作用。结论 HKL可通过抑制细胞焦亡减轻DOX引起的H9c2心肌细胞毒性损伤,这一作用与激活AMPK调控Nrf2信号有关。     

细胞焦亡在新生儿坏死性小肠结肠炎中的致病作用

目的 探讨细胞焦亡是否参与新生儿坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)发病,并分析其可能的作用机制.方法 将50只新生1d的SD大鼠按随机数字表法分为2组(n=25):正常对照组、坏死性小肠结肠炎新生大鼠组(NEC组).正常对照组与母鼠同笼,不予处理;NEC组采用缺氧、冷刺激及人工喂养的方式建立模型.新生鼠于第1、2、3天固定时间点测量体质量,第4天处死大鼠,HE染色观察回盲部肠组织病理学变化并评分;qPCR检测NLRP3、IL-1β、IL-18基因表达水平;Western blot检测Caspase-1表达及激活情况;ELISA检测肠组织匀浆IL-1β、IL-18水平.结果 与正常对照组相比,NEC组大鼠体质量明显降低,肠上皮损伤明显;NLRP3及IL-1β、IL-18基因表达增高(分别为0.33 ±0.06 vs 1.11 ±0.12,0.40 ±0.15 vs 1.25 ±0.13,1.04 ±0.16 vs 2.35 ±0.17,P ＜0.05);激活的Caspase-1仅在NEC组中表达,且下游炎症因子IL-1β及IL-18水平亦高于正常对照组(分别为300.4 ±76.5 vs 74.4 ±17.5,214.4±28.1 vs 23.9±19.3,P＜0.01).结论 细胞焦亡参与了NEC的发病,其具体机制可能与焦亡发生后IL-1 β、IL-18的水平升高有关.     

以caspase-1介导细胞焦亡筛选治疗糖尿病肾病潜在的中药及单体成分

目的 以caspase-1介导细胞焦亡为基础,筛查并探究中药及单体有效成分治疗糖尿病肾病（DN）的分子机制。方法 利用中药系统药理学分析平台（TCMSP）筛选靶向caspase-1的中药以及活性单体成分,并通过GeneCards数据库检索单体成分潜在的作用基因靶点,运用Cytoscape构建单体化合物-基因靶点网络构图。采用基因本体（GO）功能富集分析和京都基因与基因百科全书（KEGG）通路富集分析,预测中药及其单体的分子作用机制。实验SD大鼠随机分为对照组、糖尿病组（DM）和人参皂苷Rh2药物治疗组（Rh2）。DM组和Rh2组通过腹腔注射链脲佐菌素（STZ）（60 mg/kg）构建DN大鼠,对照组注射等量生理盐水。在造模成功后Rh2组大鼠给予Rh2（20 mg·kg-1·d-1）灌胃12周,对照组和DM组大鼠给予等量生理盐水灌胃。HE染色观察大鼠肾脏形态;Western blot检测焦亡标志蛋白caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18表达;试剂盒检测大鼠血浆IL-1β、IL-18含量以及cathepsin B和cathepsin L活性。结果 人参皂苷Rh2与caspase-1靶点蛋白能够有效分子对接,数据库筛选共涉及14个靶基因,GO功能富集分析共27个条目,其中分子功能（MF）条目4个,细胞组成（CC）条目10个,生物过程（BP）条目13个。KEGG通路富集筛选涉及溶酶体、糖胺聚糖降解、半乳糖代谢和鞘脂代谢通路。DM大鼠造模12周后肾脏出现显著的病理学改变,cleaved-caspase-1、GSDMD-N、IL-1β和IL-18表达显著增加（P<0.05或P<0.01）,血浆IL-1β、IL-18含量显著升高（P<0.01）,cathepsin B、cathepsin L活性显著降低（P<0.01）。与DM组相比,Rh2组大鼠肾脏病变得到显著改善,焦亡标志蛋白（cleaved-caspase-1、GSDMD-N、IL-1β和IL-18）表达显著下调（P<0.05或P<0.01）,血浆IL-1β、IL-18含量显著降低（P<0.01）,cathepsin B和cathepsin L活性显著增加（P<0.05）。结论 人参皂苷Rh2可能通过溶酶体途径抑制caspase-1介导的细胞焦亡进而改善DN肾脏损伤。     

丹参酮ⅡA通过NLRP3炎症体信号通路对小胶质细胞糖氧剥夺/再灌注损伤的保护作用

目的 探讨丹参酮ⅡA对小胶质细胞BV-2糖氧剥夺/再灌注（oxygen-glucose deprivation and reperfusion,OGD/R）损伤的保护作用及其机制。方法 取对数生长期的BV-2细胞OGD 3 h后再灌注4~24 h,采用Western blot筛选细胞内Nod受体蛋白3（NLPR3）表达水平最高的再灌注时间。 将实验组细胞OGD处理3 h后分别加入终质量浓度为0~2.5 μg/mL的丹参酮ⅡA,CCK8法检测细胞存活率,筛选丹参酮ⅡA的最大有效质量浓度。对BV-2细胞OGD 3 h后分别加入0、0.5 、1.0、2.0 μg/mL丹参酮ⅡA,再灌注12 h,Western blot检测BV-2细胞内NLRP3和凋亡蛋白caspase-1的表达水平,ELISA检测BV2细胞白介素（IL）-1β和IL-18的质量浓度。结果 OGD 3 h后,再灌注12 h时NLPR3蛋白表达水平最高。CCK8法显示丹参酮ⅡA最大有效质量浓度为2.0 μg/mL。NLRP3、caspase-1、 IL-1β和IL-18表达均随着丹参酮ⅡA质量浓度的升高而降低。结论 丹参酮ⅡA能抑制OGD/R处理后BV-2细胞内NLRP3炎症体信号通路分子的表达,这可能是其保护OGD/R细胞的分子机制之一。