RP-HPLC和UV-VIS法测定灵芝不同收获期的多糖肽和灵芝酸

目的 研究灵芝不同栽培方式和不同收获期中多糖肽和灵芝酸A、B的变化,为灵芝规范化栽培及制定产品质量标准提供依据。方法 RP-HPLC测定菌草灵芝和仿野生栽培的灵芝提取物的灵芝酸A、B的变化。色谱柱为XB-C₁₈柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为0.05%磷酸-乙腈（65∶35）,检测波长254 nm,常温,进样量50 μL。以灵芝多糖肽为对照品,采用Folin-酚试剂法,通过紫外-可见吸收光谱法检测菌草灵芝和仿野生栽培灵芝不同收获期提取物的多糖肽。结果 灵芝酸A、B线性范围分别为14.8～371.0和16.4～409.0 μg/mL,平均回收率为95.0%、100.5%,RSD分别为1.18%、3.37%（n＝6）。灵芝多糖肽在100～600 μg/mL与吸光度值呈线性关系,r＝0.999 5,回收率95%～100%。结论 该方法简便、快速,可用于灵芝及其产品中多糖肽和灵芝酸A、B的质量控制。菌草灵芝沸水提取能将多糖肽和灵芝酸分离,既简化了灵芝水、醇提取工艺,又提高经济效益。     

灵芝多糖对多柔比星诱导心肌细胞损伤保护作用的研究

目的:研究灵芝多糖对多柔比星所致心肌损伤的保护作用,探讨多柔比星对心肌细胞损伤的机制.方法:将不同浓度多柔比星(1、2、4、6μmol/L)与H9C2心肌细胞共培养6、12、24h,计算不同作用时间及药物浓度的细胞抑制率;将H9C2心肌细胞与不同质量浓度(0,3.125,6.25,12.5,25mg/L)的灵芝多糖共培养,1h后加入多柔比星,24h后观察细胞形态变化,并计算细胞抑制率;将灵芝多糖与MCF-7,KB,K562共培养24h,1 h后加入多柔比星,48h后计算细胞生长抑制率.结果:2μmoL/L多柔比星与心肌细胞共培养24h的细胞抑制率最高,25mg/L灵芝多糖可明显降低多柔比星诱导的心肌细胞死亡,且不降低药物抗肿瘤作用.结论:灵芝多糖对心肌细胞具有直接保护作用,且不减弱多柔比星抗肿瘤作用.     

灵芝肽多糖的化学研究

从灵芝子实体不提取物中分得２种葡聚糖肽ＧＬＳＰ２及ＧＬＳＰ３，凝胶层及高效液相层析法证明均为单一的多糖均一体，测得分子量分别为１２８００及１４１００。完全酸水解、过碘酸盐氧化、Ｓｍｉｔｈ降解，光谱分析、气相色谱及甲基化分析证明，ＧＬＳＰ２为含有β－（１→３）（１→６）及（１→４）甙键的葡聚糖肽，肽的含量占２６．６％；ＧＬＳＰ３为含有β（１→６）及（１→４）甙键的葡２种葡聚糖肽的糖基与肽键中的丝氨酸     

灵芝多糖的抗氧化作用研究

目的 研究灵芝多糖的抗氧化作用,为灵芝多糖化妆品抗皮肤衰老功效提供科学依据。方法 化学方法评价灵芝多糖的总还原能力、羟基自由基和DPPH自由基清除能力;检测灵芝多糖脂质体过氧化进程中过氧化物和丙二醛（MDA）的产量考察其抗脂质体氧化能力;体外细胞实验考察灵芝多糖对H₂O₂诱导氧化损伤的HaCaT细胞的保护作用;在体实验考察自制灵芝多糖乳液对D-半乳糖亚急性小鼠衰老模型皮肤中超氧化物歧化酶（SOD）活力、MDA和羟脯氨酸（Hyp）含量的影响。结果 灵芝多糖的还原能力和清除2种自由基能力均呈浓度依赖性,而且它能抑制脂质过氧化物生成,60 h灵芝多糖脂质体产生的过氧化物为空白脂质体的九分之一,MDA产量为空白脂质体的三分之一。灵芝多糖在0.312 5~1.25 mg/mL的范围内对H₂O₂氧化损伤的HaCaT细胞有保护作用（P<0.01）,且保护作用随多糖浓度升高而增强。小鼠皮肤涂抹低剂量自制灵芝多糖乳液后,皮肤中SOD活力显著高于模型组（P<0.05）;高剂量涂抹时,MDA含量显著下降,Hyp含量显著升高（P<0.05）,自制灵芝多糖乳液抗氧化能力略优于市售乳液。结论 多层面评价了灵芝多糖的抗氧化活性,初步研制出具有抗衰老功效的灵芝多糖乳液,为灵芝多糖抗衰老化妆品的开发提供研究基础。      

灵芝孢子多糖对荷瘤小鼠的免疫调节作用

目的:研究灵芝孢子多糖对荷艾氏腹水癌(EC)和S180肉瘤小鼠的免疫调节作用。方法:研究灵芝孢子多糖对EC荷瘤小鼠体液免疫功能及网状内皮系统吞噬功能的影响,并采用流式细胞术研究灵芝孢子多糖对S180肉瘤荷瘤小鼠外周血淋巴细胞亚群CD3 CD8 杀伤性T淋巴细胞、CD3 CD4 辅助性T淋巴细胞、CD4 CD25 调节性T淋巴细胞的影响,以及对S180肉瘤荷瘤小鼠自然杀伤细胞(NK细胞)活性的影响。结果:灵芝孢子多糖明显提高EC荷瘤小鼠的血清半数溶血值,并显著提高荷瘤小鼠的廓清指数K及吞噬系数α值。此外灵芝孢子多糖对S180肉瘤荷瘤小鼠外周血杀伤性T淋巴细胞亚群和辅助性T淋巴细胞亚群有一定的增强作用,但对调节性T淋巴细胞亚群并无明显作用。灵芝孢子多糖还可增强S180肉瘤荷瘤小鼠NK细胞的杀伤活性。结论:灵芝孢子多糖可以提高荷艾氏腹水癌和S180肉瘤小鼠的免疫系统功能。     

灵芝多糖的生物活性研究进展

灵芝多糖（Ganoderma lucidum polysaccharides,GLP）存在于灵芝属真菌的菌丝体和子实体中,是灵芝的主要有效成分之一,是由肽多糖、葡聚糖、杂多糖等组成的混合物。葡聚糖中大部分为β葡聚糖,少数为α葡聚糖,而β葡聚糖是其发挥活性的主要成分。GLP药理活性广泛,具有提高机体免疫功能、抗肿瘤、消除机体内自由基、抗辐射、提高肝脏解毒功能等作用。笔拟对灵芝多糖的生物活性研究进行述评。     

灵芝真菌发酵生产灵芝多糖和灵芝酸

提出了灵芝真菌同时高效生产灵芝多糖和灵芝酸的发酵过程。在摇瓶中考察了氮源、接种量、起始葡萄糖浓度和装液量对灵芝细胞生长及灵芝多糖和灵芝酸生产的影响。结果表明 ,酵母膏和蛋白胨复配作为氮源有利于细胞生长。接种量对细胞量有一定影响 ,但是对产物积累量影响更大。在 50 g/ L起始糖浓度下 ,细胞干重达到 1 6.7g/ L,胞内多糖、胞外多糖和灵芝酸分别达 1 .1 9g/ L,0 .854g/ L和 2 1 2 .3mg/ L。考察装液量发现 ,小装液量有利于提高细胞生长速率和产物的生产速率     

灵芝多糖对辐射损伤小鼠的防护作用

目的：辐射可引起多种组织器官的损伤。文中旨在探讨灵芝多糖对受60 Coγ射线损伤小鼠的辐射防护作用,为灵芝多糖的临床应用提供实验依据。方法采用大剂量60 Coγ射线全身照射雌性小鼠,制成放射损伤动物模型。小鼠按随机数字表法分为正常对照组、灌胃对照组、辐射对照组、灵芝多糖高剂量保护组、灵芝多糖低剂量保护组。灵芝多糖保护组小鼠在照射前3 d及照射后,以不同剂量的灵芝多糖连续灌胃14 d。观察受致死剂量60 Coγ射线照射小鼠的30 d存活率及生存时间长短。同时,检测用药后外周血指标、脾指数、血清超氧化物歧化酶（ superoxide dismutase, SOD）活性的变化。结果实验结束时,灵芝多糖组小鼠的30 d生存期[（23．7±6．8）、（28．3±5．9）d]显著高于辐射对照组[（18．3±5．4）d],差异有统计学意义（P＜0．01）;灵芝多糖组小鼠的外周血WBC[（2．89±0．67）×109／L、（2．77±0．72）×109／L]显著高于辐射对照组[（2．54±0．63）×109／L],差异有统计学意义（P＜0．05）,且灵芝多糖组PLT 数[（487．20±165．77）×109／L、（716．36±223．44）×109／L]显著高于辐射对照组[（387．45±154．22）×109／L],差异有统计学意义（P＜0．05）;灵芝多糖高剂量组脾指数显著高于辐射对照组[（0．0054±0．0021） vs （0．0032±0．0007）, P ＜0．05）];灵芝多糖组小鼠的血清 SOD 含量[（401．27±35．26）、（369．02±29．70）U／mL]明显高于辐射对照组[（311．32±23．71）U／mL],差异有统计学意义（P＜0．05）结论灵芝多糖具有较强的抗辐射作用,能显著提高受致死剂量60 Coγ射线照射小鼠的存活率,降低辐射对小鼠外周血WBC和PLT的损伤作用,并提高SOD活性,其具体作用机制有待进一步深入研究。     

灵芝抗衰老机理与活性成分灵芝多糖的化学与构效研究

本文从抗衰老的基础理论出发,经现代基础医学筛选研究,探讨了灵芝多糖的免疫调节作用、促进核酸蛋白质的合成代谢、抗氧自由基活性及延长体外传代细胞的分裂代数的能力等,揭示了灵芝抗衰老的作用机理。从赤芝总多糖中进一步分离鉴定了18个灵芝多糖均一体,其中7个肽多糖、4个葡聚糖、其余为杂多糖。初步证明,肽多糖及含有β(1→3)(1→6)甙键的多糖均一体表现活性较强,可能是决定活性的主要因素。     

灵芝多糖心血管作用研究进展

灵芝多糖对缺血/再灌注器官、血管内皮细胞株ECV304、原代培养的脐静脉血管内皮及乳鼠心肌细胞的氧化损伤具有保护作用。灵芝多糖可改善小鼠2型糖尿病模型的血流动力学指标,改善心肌超微结构;可使2型糖尿病大鼠胸主动脉糖基化终末产物及其受体蛋白表达抑制;还可降低高脂大鼠的血脂。灵芝多糖的心血管作用多数与其抗氧化作用有关,可能与其增加血浆及组织中的抗氧化酶活性,减少脂质氧化代谢产物,清除自由基有关。     

灵芝多糖对小鼠黑素瘤细胞的体外抑制作用

目的：探讨灵芝多糖在体外对小鼠黑素瘤B16F10细胞株的抑制作用。方法：以小鼠黑素瘤B16F10细胞株为研究对象,用MTT法检测灵芝多糖对肿瘤细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞毒作用。结果：经灵芝多糖作用后黑素瘤B16F10细胞增殖活性受抑,细胞死亡增多。结论：灵芝多糖可抑制B16F10细胞的增殖,促进细胞死亡。     

灵芝多糖对2型糖尿病大鼠胰岛损伤的保护作用

目的观察灵芝多糖对2型糖尿病大鼠胰岛损伤的保护作用。方法建立高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素所诱发的2型糖尿病大鼠模型,应用灵芝多糖灌胃治疗10周后,检测大鼠空腹血糖和胰腺中NO、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活性以及丙二醛（MDA）的含量。通过胰腺HE染色和胰岛素免疫组化分析胰岛的病理变化。结果灵芝多糖能降低糖尿病大鼠的空腹血糖,提高胰岛素敏感性,提高血清和胰腺中GSH-Px、SOD和CAT的活性,显著降低NO和MDA含量（均P〈0.05或0.01）;HE染色等形态学检测显示能减轻大鼠胰岛萎缩,增加胰岛B细胞的数目。结论灵芝多糖能减轻2型糖尿病大鼠的胰岛损伤,可能是通过减轻氧化应激水平发挥保护作用的。     

GLPP对Alzheimer样大鼠空间记忆能力和海马超微结构的影响

目的观察GLPP对Alzheimer样大鼠记忆能力和海马超微结构的影响。方法雄性Wistar大鼠60只,随机分为4组,每组15只：正常对照组、模型组、NS组、GLPP组（250mg／kg）;除正常对照组（正常昼夜节律）外,其余各组连续光照（光照度400Lux,24h）,其间GLPP组igGLPP,每天1次;NS组培相同体积的生理盐水,每天1次;光照30d后Morris水迷宫法测试各组大鼠空间记忆能力,透射电镜观察海马线粒体和突触结构的改变。结果模型组大鼠寻台潜伏期明显延长,与正常对照组比较有显著性差异（P〈0．05）;GLPP组寻台潜伏期明显缩短,与模型组比较有显著差异（P〈0．05）;透射电镜结果显示：正常对照组、GLPP组大鼠海马线粒体神经轴突和神经突触基本正常;模型组、NS组大鼠海马线粒体肿胀、结构紊乱,膜结构破坏,嵴模糊、消失;神经髓鞘内神经细丝稀少,神经突触缺失、减少,突触密度降低,突触间隙不清,突触小泡减少。结论GLPP可增强Alzheimer样大鼠空间记忆能力,减轻持续光照对大鼠海马超微结构的破坏。     

灵芝多糖的抑瘤作用及对小鼠免疫系统影响的实验研究

目的:探究分析灵芝多糖的抑制作用及其对小鼠免疫系统的影响. 方法:随机选取95只小鼠并采用瘤细胞建立免疫抑制动物模型,将所选小鼠随机分为48例实验组和47例对照组,实验组小鼠采用灵芝多糖口服液灌注,对照组小鼠给予生理盐水灌注,观察并分析灵芝多糖对小鼠的存活期、抑瘤作用及免疫系统的影响作用. 结果:实验组肿瘤小鼠的生存期明显高于对照组肿瘤小鼠(P<0.05) ,并且实验组小鼠血清中TNF-α、IL-2水平显著提高,其肿瘤细胞NK活性及淋巴细胞增生率也显著高于对照组( P<0.05). 结论:灵芝多糖对小鼠肿瘤无直接抑制作用,其抗肿瘤功效主要是通过机体的免疫系统介导,并且灵芝多糖能够有效延长机体生存期.     

灵芝酸A对人炎性乳腺癌细胞体外增殖和凋亡的影响

目的：探讨灵芝酸A在体外对人炎性乳腺癌SUM149细胞增殖和凋亡的影响,阐明其可能机制。方法：人炎性乳腺癌SUM149细胞分为对照组和不同浓度（0.1、0.5、1.0、5.0和10.0 μmol·L^-1）灵芝酸A组,每组设4个复孔,分别于培养24、48和72h取样本。MTT法检测各组SUM149细胞增殖抑制率,流式细胞术检测各组SUM149细胞凋亡率和细胞周期,免疫细胞化学染色法检测各组SUM149细胞Ki67和Livin蛋白表达水平。结果：MTT法检测,与0.1μmol·L^-1灵芝酸A组比较,其他浓度灵芝酸A组SUM149细胞增殖抑制率明显升高（P<0.05或P<0.01）,并呈浓度和时间依赖性。流式细胞术检测,与对照组比较,不同浓度灵芝酸A组SUM149细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）,并呈浓度和时间依赖性;同时细胞周期发生明显变化,与对照组比较,随着灵芝酸A浓度的增加和作用时间的延长,不同浓度灵芝酸A组G₁期细胞百分率明显增加（P<0.05）,S期细胞百分率减少（P<0.05或P<0.01）。与对照组比较,不同浓度灵芝酸A组细胞中Ki67和Livin蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）。结论：灵芝酸A通过诱导细胞凋亡抑制人炎性乳腺癌SUM149细胞增殖。     

原位纳米测试技术研究灵芝孢子孢壁弹性模量和硬度

采用原位纳米测试技术研究灵芝孢子孢壁的力学性能。进行了试样制备方法的探索,利用原位纳米力学测试与分析系统,分别测试未破壁和机械法破壁的灵芝孢子孢壁的弹性模量和硬度。结果显示:未破壁灵芝孢子的平均弹性模量为2.0 GPa,硬度为0.13 GPa;机械法破壁灵芝孢子的平均弹性模量为4.36 GPa,硬度为0.26 GPa。研究结果为分析孢子的破壁机理提供了必要的参数。     

灵芝孢子粉对PTZ致痫大鼠神经细胞野生型p53表达的影响

目的观察和探讨灵芝孢子粉对戊四氮(PTZ)致痫大鼠海马野生型p53(wtp53)蛋白表达的影响。方法将60只成年SD大鼠随机分为空白对照组,癫痫模型组,灵芝孢子粉用药高、中、低剂量组共5组。癫痫模型组和灵芝孢子粉用药各组大鼠腹腔注射亚惊厥剂量的PTZ35mg/(kg.d),直至达到点燃标准;用药组以灵芝孢子粉灌胃。采用免疫组织化学法检测大鼠海马CA1区wtp53蛋白的免疫反应性。结果大鼠海马CA1区wtp53蛋白表达模型组明显高于对照组(P<0.01);用药高剂量组wtp53蛋白表达明显低于模型组(P<0.05)。结论灵芝孢子粉能明显抑制wtp53蛋白的表达,可能是其对癫痫所致神经细胞凋亡有明显抑制,从而是对脑组织起保护作用的分子机制之一。     

血管基膜衍生多功能肽抗人结肠癌作用研究

目的:研究重组血管基膜衍生多功能肽VBMDMP的抗人结肠癌作用。方法:体外培养人结肠癌细胞系(SW480)细胞和中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-K1)细胞,采用MTT比色法检测重组VBMDMP对SW480细胞选择性抑制增殖作用;胎盼蓝染色细胞计数法检测重组VBMDMP对SW480细胞和CHO-K1细胞生长曲线的影响;人结肠癌(SW480)细胞裸鼠异种移植瘤模型治疗实验观测重组VBMDMP体内抗人结肠癌作用。结果:重组血管基膜衍生多功能肽具有选择性抑制体外培养人结肠癌细胞系SW480细胞增殖和生长作用,呈剂量依赖性。而对CHO-K1细胞的增殖活性影响小。重组血管基膜衍生多功能肽对SW480细胞裸鼠异种移植瘤生长具有显著抑制作用,呈剂量依赖性。1 mg/kg、5 mg/kg和10 mg/kg重组VBMDMP的肿瘤生长抑制率分别为:63%,79%和83%;瘤重抑制率分别为:62%,66%和75%。其中10 mg/kg重组VBMDMP的肿瘤生长抑制率和瘤重抑制率均接近100 mg/kg环磷酰胺(CTX),高于20 mg/kg血管生成抑制剂烟曲霉素衍生物TNP-470。结论:重组血管基膜衍生多功能肽对人结肠癌细胞增殖和生长具有显著抑制作用。