M2型巨噬细胞来源的外泌体对类风湿关节炎小鼠的作用及其机制研究

目的 探讨M2型巨噬细胞来源的外泌体（M2-Exo）对胶原诱导的类风湿关节炎（RA）小鼠的作用及可能机制。方法 分离提取C57BL/6J小鼠骨髓来源的巨噬细胞（BMDMs）,收集白细胞介素-4（IL-4）诱导的M2型巨噬细胞培养的上清液,用超速离心法分离出M2-Exo。使用透射电子显微镜（TEM）和动态光散射（DLS）观察M2-Exo的形态结构及粒径分布;采用细胞免疫荧光染色及Western blotting法检测M2-Exo处理的M1型巨噬细胞的表面标志物诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶（Arginase）的表达。复制胶原诱导的DBA/1小鼠RA模型,随机分为模型组和M2-Exo组,以正常DBA/1小鼠为对照组。M2-Exo组在首次免疫后第16天及第26天关节腔注射M2-Exo（100 μg/只）,发病全过程监测关节炎病变并评分,于第42天安乐处死小鼠。对3组小鼠左后足拍照并测定厚度;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠关节中促炎症细胞因子白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子ɑ（TNF-ɑ）和白细胞介素-6（IL-6）的表达;采用RT-PCR检测3组小鼠关节中M1型和M2型巨噬细胞的表面标志物iNOS2、CD86、Arginase、CD206 mRNA的相对表达量。结果 M2-Exo为类圆形、有完整的包膜的囊状结构,粒径均值为44.1 nm。M2-Exo处理24 h后的M1型巨噬细胞表达Arginase,不表达iNOS。在RA发病过程中,M2-Exo组小鼠平均关节炎指数（AI）低于模型组（P <0.05）。与模型组比较,模型复制第42天M2-Exo组小鼠的足趾关节红肿不明显,活动障碍程度不高,差异无统计学意义（P >0.05）;M2-Exo组小鼠关节IL-1β、TNF-ɑ和IL-6水平均降低（P <0.05）。M2-Exo组小鼠关节组织中iNOS和CD86 mRNA的相对表达量低于模型组（P <0.05）,而CD206和Arginase mRNA的相对表达量高于模型组（P <0.05）。结论 M2-Exo可能通过重编程炎症M1型巨噬细胞转换为M2型抗炎的巨噬细胞,以缓解RA病情。     

骨髓间充质干细胞外泌体促进大鼠脑微血管内皮细胞的增殖和迁移

  目的  探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchyml stem cells, BMSCs）外泌体正常状态下对大鼠脑微血管内皮细胞的增殖和迁移的影响。  方法  提取大鼠BMSCs并进行鉴定,将其与脑微血管内皮细胞（bEnd.3细胞）通过Transwell小室共培养24 h（BMSCs共培养组）;提取BMSCs外泌体进行鉴定,荧光显微镜下定性观察细胞吞噬外泌体的行为,CCK8 法检测细胞活力选定最佳BMSCs外泌体工作浓度,将其与bEnd.3细胞共培养24 h（BMSCs外泌体共培养组）。另设bEnd.3细胞单独培养组。培养24 h后通过EDU和细胞划痕实验,分别检测以上3组bEnd.3细胞的增殖和迁移能力。  结果  第3代BMSCs表面CD90、CD29为阳性,CD45显示为阴性,可成骨、成脂,表明所提取的BMSCs纯度较高。透射电镜下BMSCs外泌体形态为类圆形,直径在100 nm左右;NTA分析发现BMSCs外泌体的直径分布范围为50～600 nm,其中粒径峰值为150 nm;免疫荧光显示内皮细胞能够吞噬BMSCs外泌体;CCK8显示20 μg/mL外泌体加入对细胞增殖影响达到最佳。EDU检测显示,相较于对照组,BMSCs共培养组、BMSCs外泌体共培养组均可促进bEnd.3细胞的增殖（P<0.05）,且促进增殖的能力相当（P>0.05）。细胞划痕实验示,BMSCs外泌体共培养组细胞的迁移率高于对照组（P<0.05）,但与BMSCs共培养组差异不明显（P>0.05）。  结论  BMSCs外泌体可代替BMSCs,有效促进脑微血管内皮细胞的增殖和迁移,并为卒中后的血管新生提供新的潜在治疗手段。     

经HIV包膜蛋白gp120刺激的T细胞外泌体促进巨噬细胞M2极化

目的：本研究旨在探讨经HIV膜蛋白gp120处理后人T淋巴细胞系（H9）外泌体对巨噬细胞极化的影响。方法：采用CCK8试剂盒检测gp120处理后人T淋巴细胞H9活力；采用ELISA法检测H9细胞上清液中炎症因子水平；通过电镜和Western blot实验鉴定外泌体特征；PHK67染色观察外泌体进入巨噬细胞情况；最后通过ELISA和免疫荧光检测巨噬细胞极化标记物，分析gp120处理后T细胞外泌体对巨噬细胞极化的影响。结果：HIV gp120蛋白抑制人T淋巴细胞H9增殖并促进炎症因子释放。成功提取人T淋巴细胞H9外泌体，电镜下为中间凹陷的膜结构，高表达标记蛋白CD9、CD63、CD81。PHK67染色结果显示H9细胞外泌体可进入巨噬细胞。经gp120处理的H9细胞外泌体可促进巨噬细胞向M2型极化。结论：HIV膜蛋白gp120处理人T淋巴细胞H9分泌的外泌体能够促进巨噬细胞M2极化，可能是gp120在免疫调节中的新机制。     

旋转超滤：一种提取细胞外泌体的新方法

目的 建立一种利用旋转超滤技术从骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）培养上清液中分离外泌体（exosome）的方法。 方法 收集BMSCs细胞培养上清,低速离心去除残余细胞,0.22 μm滤器过滤除去细胞碎片,采用旋转超滤技术提取外泌体。应用透射电子显微镜观察所获外泌体的形态,用蛋白质印迹法检测外泌体标记物CD63、CD9蛋白的表达,用CCK-8试剂盒检测外泌体对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）增殖活性的影响。 结果 使用旋转超滤技术成功分离出BMSCs分泌的外泌体,透射电镜下外泌体为圆形或椭圆形,直径约100 nm,蛋白质免疫印迹法检测结果显示外泌体中有其特异标记物CD63、CD9蛋白的表达。外泌体能够促进HUVECs增殖,并且其促细胞增殖作用随浓度增高而增强。 结论 旋转超滤技术是一种简单有效的提取外泌体的方法。     

ABT-737对M2型TAM来源外泌体处理的卵巢癌细胞SKOV3自噬性凋亡与干性特征的影响

探讨Bcl-2小分子抑制剂ABT-737对经肿瘤相关巨噬细胞（TAM）来源外泌体（Exo）处理的卵巢癌细胞自噬性凋亡及干性特征的作用。 方法 利用佛波酯（PMA）与重组人白细胞介素-4（IL-4）诱导人外周血单核细胞THP-1为M2型TAM，流式细胞术检测细胞表面巨噬细胞相关标志物表达；差速离心法提取外泌体，透射电镜与纳米粒子追踪技术观察外泌体形态及径粒分布，Western blot检测外泌体标志蛋白表达，Dil结合PKH67染色检测TAM来源外泌体被卵巢癌细胞系SKOV3摄取情况；实验分组为对照组、Exo组、Exo+ABT-737组，采用TAM来源外泌体与ABT-737按照分组处理SKOV3细胞，流式细胞术检测细胞凋亡率，双荧光mRFP-GFP-LC3实验检测细胞自噬水平，Western blot检测细胞自噬相关蛋白（LC3-Ⅱ/LC-3Ⅰ、Beclin-1、p62）与凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase3）表达，肿瘤细胞成球实验检测细胞干性，Western blot检测肿瘤干细胞相关蛋白（CD133、OCT4、SOX2）表达。 结果 经PMA与IL-4诱导后，THP-1细胞形态发生改变，M1型巨噬细胞标记物CD86表达比例降低而M2型巨噬细胞标记物CD206表达比例升高（P＜0.05）。分离的颗粒物为球形囊泡，大小均匀，粒径峰值约为140 nm，外泌体标志蛋白Alix、CD63、TSG101表达明显，由此判断成功分离到M2型TAM来源Exo，且其能被SKOV3摄取。与对照组比较，Exo组SKOV3细胞凋亡率减少，GFP与mRFP的荧光斑点减少，细胞内LC3-Ⅱ/LC-3Ⅰ、Beclin-1、Bax及Cleaved-caspase3表达均下调，p62与Bcl-2表达均上调，此外，细胞成球数量增加，CD133、OCT4及SOX2表达均上调，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。与Exo组比较，Exo+ABT-737组SKOV3细胞凋亡率增加，GFP与mRFP的荧光斑点也增加，细胞内LC3-Ⅱ/LC-3Ⅰ、Beclin-1、Bax及Cleaved-caspase3表达均上调，p62与Bcl-2表达均下调，细胞成球数量减少，且CD133、OCT4及SOX2表达均下调，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。 结论 ABT-737 能够在M2型TAM来源外泌体处理的卵巢癌细胞中发挥促自噬性凋亡的作用，并且可以抑制卵巢癌肿瘤干性特征     

骨髓间充质干细胞源性外泌体促进小胶质细胞/巨噬细胞M2极化抑制急性期脑缺血大鼠炎症反应

为探究骨髓间充质干细胞（bone marrow meaenchymal stem cells, BMSCs）源性外泌体（exosomes, Exos）对急性期脑缺血大鼠小胶质细胞/巨噬细胞M1/M2极化的影响,采用超高速离心法分离提取外泌体并鉴定;采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion, MCAO）模型;采用Longa评分和角实验评价大鼠神经功能,2,3,5-氯化三苯基四氮唑（2, 3, 5-triphenyltetrazole chloride, TTC）染色检测大鼠脑梗死体积;采用CD16/32/Iba1、CD206/Iba1免疫荧光双标法检测小胶质细胞/巨噬细胞M1/M2表型;采用RT-qPCR检测大鼠脑缺血周边区CD86、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitricoxide synthase, iNOS）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor, TNF-α）、精氨酸酶1（arginase-1, Arg-1）、白细胞介素-10（interleukin-10, IL-10）和转化生长因子β（transforming growth factor beta, TGF-β）的mRNA表达。实验结果表明,BMSC-Exos减少缺血周边区CD16/32⁺/Iba1⁺阳性细胞数量（P < 0.01）,增加CD206⁺/Iba1⁺阳性细胞数量（P < 0.01）,减少iNOS、CD86和TNF-α的mRNA表达,增加Arg-1、TGF-β和IL-10的mRNA表达（P < 0.05或P < 0.01）。本研究提示BMSC-Exos调控急性期脑缺血大鼠小胶质细胞/巨噬细胞M1/M2极化,减轻神经炎症,改善脑缺血损伤。     

M2巨噬细胞来源的外泌体转运miR-1260b促进胶质母细胞瘤迁移的机制研究

肿瘤相关巨噬细胞浸润肿瘤组织并促进胶质母细胞瘤进展,但作用机制还有待进一步研究。本文以探究M2巨噬细胞通过分泌外泌体影响胶质母细胞瘤迁移能力的机制为目的。采用超高速离心法提取外泌体;采用RNA测序筛选差异表达的miRNA;采用数据库靶点预测miRNA可能的靶蛋白;采用双萤光素酶报告基因实验验证miRNA与靶基因的相互作用;采用裸鼠皮下移植瘤模型检测肿瘤细胞增殖能力。实验结果表明,肿瘤相关巨噬细胞主要是M2巨噬细胞,M2巨噬细胞分泌的外泌体能够促进脑胶质瘤细胞的迁移,其机制与转运miR-1260b且靶向调控AJAP1影响脑胶质瘤细胞的迁移有关,提示巨噬细胞分泌的外泌体通过转运miR-1260b,从而影响胶质母细胞瘤的迁移能力。     

肝癌外泌体LINC ROR对巨噬细胞炎症反应的影响

目的探究肝癌细胞分泌的外泌体中长链非编码RNA（long intergenic non-coding RNA）LINC ROR对巨噬细胞功能的调节作用。方法差速离心分离得到肝癌细胞PLC/PRF/5上清中的外泌体。电镜和纳米颗粒追踪分析仪检测外泌体形态特征和粒径分布。激光共聚焦荧光显微镜观测外泌体与巨噬细胞的空间相对位置。实时荧光定量PCR技术检测LINC ROR 在外泌体中的表达水平。 ELISA法检测巨噬细胞中LINC ROR 小干扰RNA（siRNA）基因沉默后在脂多糖刺激下促炎症因子白细胞介素（IL）-1β的表达水平。结果肝癌细胞分泌的外泌体呈圆状,直径为100 nm左右,同时观测到巨噬细胞能接收肝癌细胞来源的外泌体。相对于正常肝细胞来源的外泌体,肝癌细胞PLC/PRF/5来源的外泌体中高表达LINC ROR。巨噬细胞中LINC ROR基因沉默后,在脂多糖诱导的炎症反应下,巨噬细胞促炎症因子IL-1β的表达水平明显增强。结论肝癌细胞分泌的外泌体中LINC ROR能对邻近巨噬细胞的炎症反应产生调控作用。     

间充质干细胞外泌体作用机制的研究进展

间充质干细胞（MSC）来源于中胚层,具有修复组织损伤的作用。外泌体是细胞分泌的囊泡样物质,与来源细胞功能相似。近年来,间充质干细胞来源外泌体（MSC-exo）受到广泛关注,其生物学特性及作用机制成为研究热点。本文就外泌体特性及间充质干细胞来源外泌体在治疗疾病中作用机制作一综述。     

外泌体在前列腺癌发展和转移中的作用

目的 比较正常人和前列腺患者外周血外泌体的含量,并探究外泌体在前列腺癌发展和转移中的作用。方法 利用离心法收集正常人和前列腺癌患者外周血中外泌体并测定外泌体浓度。应用免疫组织化学技术检测前列腺癌组织和癌周正常组织中CD63 的表达。MTT 和Western blot 检测外泌体对前列腺癌细胞增殖活性和外泌体分泌能力的影响。复制前列腺癌肺转移小鼠模型,并检测前列腺癌患者来源的外泌体对前列腺癌细胞肺转移能力的影响。免疫荧光染色检测肺转移癌组织中CD63 和Ki-67 的表达。结果 前列腺癌患者外泌体含量（27.69±11.66）μg/ml 高于正常人（7.41±5.2）μg/ml（P <0.05）。伴远处转移的前列腺癌患者外周血中外泌体含量（33.40±10.45）μg/ml 高于无远处转移前列腺癌患者（18.17±5.96）μg/ml（P <0.05）。前列腺癌患者外周血外泌体提高前列腺癌细胞的增殖活性和外泌体产量。注射外泌体组裸鼠肺部转移灶数目（16.28±6.94）高于对照组（4.72±2.51）（t =5.265,P =0.000）。结论 外泌体提高前列腺细胞增殖活性,促进前列腺癌细胞分泌外泌体,促进前列腺癌细胞肺转移。     

基于外泌体介导的巨噬细胞极化探讨针刺治疗慢性阻塞性肺疾病的潜在机制

慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease, COPD)以肺结构退行性病变、炎症和纤维化为特征, 是危害人类健康的重要呼吸系统疾病。与服用药物相比, 针刺能够改善呼吸困难, 提高患者的运动耐力以及机体免疫力且副作用较小, 但其作用机制尚不明确。炎症机制在COPD的发生中十分重要, 其中巨噬细胞是重要的炎症参与者，巨噬细胞极化在COPD的发病过程中具有关键作用。外泌体为可由多种细胞分泌的纳米级双层膜囊泡, 能够介导细胞间或器官间通讯, 调节细胞功能或细胞活动。据报道外泌体参与巨噬细胞极化, 具有调节炎症的作用。在影响COPD发生发展的机制研究中, 外泌体作为重要的突破点已受到越来越多的关注。因此主要从外泌体参与巨噬细胞极化角度出发, 阐释COPD的发病机制以及分析针刺通过调控外泌体, 参与巨噬细胞极化, 从而治疗COPD的可行性。      

miR-125a-3p对动脉粥样硬化斑块及M1/M2巨噬细胞、MMP-9和VEGF的影响

  目的   探讨miR-125a-3p对大耳兔动脉粥样硬化斑块形成、M1/M2巨噬细胞、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和血管内皮生长因子（VEGF）的影响。  方法  15只成年雄性健康日本大耳兔,随机分为3组,每组5只,对照组给予普通饲料喂养,动脉粥样硬化模型组给予牛血清白蛋白注射和高胆固醇饲料喂养,miR-125a-3p抑制剂干预组给予动脉粥样硬化兔注射miR-125a-3p干扰慢病毒载体。油红O染色后图像分析法测定斑块面积,免疫组化法测定MMP-9和VEGF,免疫荧光法检测斑块组织中M1标记物CD11c和M2标记物CD206。  结果  与动脉粥样硬化组相比,miR-125a-3p抑制剂组斑块面积百分比显著降低（P < 0.0001）。与对照组相比,动脉粥样硬化组MMP-9（P < 0.001）、VEGF（P < 0.01）和CD11c（P < 0.001）水平显著升高,CD206水平显著降低（P < 0.001）;与动脉粥样硬化组相比,miR-125a-3p抑制剂干预组MMP-9（P < 0.01）、VEGF（P < 0.01）和CD11c（P < 0.001）水平有所降低,CD206水平有所升高（P < 0.001）。  结论  抑制miR-125a-3p可减轻动脉粥样硬化斑块的形成,平衡M1/M2巨噬细胞,降低斑块组织中MMP-9和VEGF的表达,miR-125a-3p可能是治疗不稳定动脉粥样硬化斑块的新靶点。     

视神经鞘直径指导神经胶质瘤手术患者脱水治疗的可行性研究

  目的   探讨超声测量视神经鞘直径（ONSD）对神经胶质瘤手术患者颅高压（ICH）脱水治疗效果的可行性。  方法   选取择期行额部神经胶质瘤切除术的颅高压患者共40例,随机分为2组（n = 20）。在气管插管10 min后,甘露醇组（M组）予20%甘露醇0.5 g/kg在15 min内静脉滴注完毕,对照组（C组）予等量生理盐水在15 min内静脉滴注完毕。测量麻醉诱导前（T0）、气管插管后即刻（T1）、药物开始滴注时（T2）、药物滴注完毕后30 min（T3）、手术结束即刻（T4）、术后24 h（T5）双眼的ONSD值。检测各时刻血清中VEGF-A、MMP-9和ET-1水平。记录打开硬脑膜时的大脑松弛评分（BRS）。  结果   T3、T4、T5时刻,M组患者的ONSD值、血清中VEGF-A 、MMP-9、ET-1的浓度明显低于C组患者（P < 0.05）;M组患者的BRS评分明显低于C组患者（P < 0.05）。  结论   对术前存在颅内高压的神经胶质瘤患者,在视神经鞘直径的指导下提前给予脱水治疗,可有效减轻脑水肿。     

乏氧诱导因子-1α抑制剂YC-1对乏氧脑胶质瘤SHG44细胞株的放射增敏作用

目的探讨乏氧诱导因子1α（HIF-1α）抑制剂YC-1对乏氧脑胶质瘤SHG44细胞株的放射增敏作用及其作用机制。方法选择脑胶质瘤SHG44细胞株,分别在常氧（20%O2）、乏氧（1%O2）12 h和24 h、乏氧＋YC-112 h和24 h这5种不同条件下培养,采用Western blot检测HIF-1α的表达水平;细胞克隆形成实验绘制细胞存活曲线以观察其放射敏感性;利用剂量分割法绘制亚致死性损伤修复曲线以观察其修复能力。结果脑胶质瘤SHG44细胞株在乏氧12 h和24 h与常氧培养相比,HIF-1α的表达水平显著升高,放射敏感性下降,其氧增强比分别为1.22和1.37,进一步统计分析发现其亚致死性损伤修复能力升高,且在间隔8、10、12 h照射时,差异均有统计学意义（均P〈0.05）;而当在乏氧12 h和24 h培养的同时加用YC-1时,HIF-1α的表达水平则显著降低,放射敏感性升高,其增强因子均为1.27,进一步统计分析也发现其亚致死性损伤修复显著降低,且在间隔8、10、12 h照射时,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论 YC-1能明显提高乏氧脑胶质瘤SHG44细胞株的放射敏感性,其机制可能与YC-1能抑制细胞的亚致死性损伤修复能力有关。     

Tiger17促进口腔黏膜成纤维细胞的增殖和迁移

  目的  观察在不同浓度 Tiger17作用于人口腔黏膜成纤维细胞（hOMF）不同时间后对细胞增殖和迁移的影响。  方法  培养hOMF细胞，CCK8和划痕实验检测不同浓度Tiger17作用于hOMF细胞不同时间后细胞增殖和迁移的变化；Western Blot 检测hOMF细胞表达TGF-β1、Erk1/2和p-Erk1/2蛋白的水平。  结果  100 μg/mL和200 μg/mL Tiger17对hOMF的增殖活性在48 h明显高于对照组（P < 0.05）；100 μg/mL Tiger17对hOMF的迁移率在24 h和48 h均明显高于对照组（P < 0.01）；不同浓度的Tiger17作用于hOMF 24 h和48 h后，细胞表达TGF-β1、p-Erk1/2蛋白升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。  结论  Tiger17使hOMF细胞表达TGF-β1、p-Erk1/2升高，促进hOMF细胞的增殖和迁移。     

lncRNA-MIAT对肿瘤相关巨噬细胞M2型极化的作用及其机制

目的 探讨lncRNA-MIAT对肿瘤相关巨噬细胞M2型极化的作用,并阐明其可能的作用机制。 方法 体外培养THP-1细胞,将过表达（LV-MIAT）与下调lncRNA-MIAT表达（LV-shMIAT）的慢病毒颗粒及空载体（LV-Vector）转染入THP-1细胞中,将THP-1细胞诱导活化为巨噬细胞,并采用Transwell共培养体系将活化后的巨噬细胞与骨肉瘤（OS）MG63细胞共培养,将上述共培养体系分为MG63+LV-Vector组（阳性对照组）、MG63+LV-shMIAT组、MG63+LV-MIAT组和IL-4+LV-Vector组。检测各组THP-1细胞中lncRNA-MIAT表达水平,流式细胞术检测各组细胞中M2型巨噬细胞百分率,ELISA法检测各组THP-1细胞上清液中血管内皮生长因子（VEGF）、白细胞介素4（IL-10）和转化生长因子β1（TGF-β1）水平,检测各组HUVEC中血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR2）、Notch1和δ样蛋白4（DLL4）表达水平。取各培养体系中的巨噬细胞与人脐静脉内皮血管细胞（HUVEC）共培养,EDU染色法检测各组HUVEC增殖活力,成管实验检测HUVEC血管形成数。Western blotting法检测各组THP1中Janus激酶1（JAK1）、信号传导及转录激活蛋白6（STAT6）和磷酸化STAT6（p-STAT6）蛋白表达水平,并计算p-STAT6/STAT6比值。构建OS荷瘤小鼠模型,并将36只荷瘤小鼠分为LV-Vector组、LV-shMIAT组和LV-MIAT组（n=12）。检测干扰lncRNA-MIAT表达后各组小鼠肿瘤体积和质量及肿瘤组织中CD163和CD31阳性表达率。 结果 采用慢病毒感染成功建立稳定过表达或下调lncRNA-MIAT的THP-1细胞。与LV-Vector组比较,LV-shMIAT组细胞中lncRNA-MIAT表达水平明显降低（P<0.05）,LV-MIAT组细胞中lncRNA-MIAT表达水平明显升高（P<0.05）。与MG63+LV-Vector组比较,MG63+LV-shMIAT组THP-1细胞中VEGF、IL-10和TGF-β1水平明显降低（P<0.05）,HUVEC中VEGFR2、Notch1和DLL4蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,MG63+LV-MIAT组和IL-4+LV-Vector组THP-1细胞中VEGF、IL-10和TGF-β1水平明显升高（P<0.05或P<0.01）, HUVEC中VEGFR2、Notch1和DLL4蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,M2型巨噬细胞百分率、THP-1细胞中p-STAT6/STAT6比值和JAK1蛋白表达水平升高（P<0.05）;与MG63+sh-MIAT组比较,MG63+LV-MIAT组和IL-4+LV-Vector组THP-1细胞中VEGF水平明显降低（P<0.05）,IL-10和TGF-β1水平明显升高（P<0.05）,HUVEC中VEGFR2、Notch1和DLL4蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）;与MG63+LV-Vector组比较,MG63+LV-shMIAT组HUVEC的增殖活力与血管形成数均明显降低（P<0.05）,MG63+LV-MIAT组和IL-4+LV-Vector组HUVEC的增殖活力与血管形成数均明显升高（P<0.05）。裸鼠体内成瘤实验,与LV-Vector组比较,LV-MIAT组小鼠移植瘤体积和质量明显升高（P<0.05）,肿瘤组织中CD163和CD31阳性表达率明显升高（P<0.05）;LV-shMIAT组小鼠移植瘤体积和质量、肿瘤组织中CD163和CD31阳性表达率均明显降低（P<0.05）。与LV-shMIAT组比较,LV-MIAT组小鼠移植瘤体积和质量明显升高（P<0.05）,肿瘤组织中CD163与CD31阳性表达率明显升高（P<0.05）。 结论 lncRNA MIAT可能通过促进巨噬细胞的M2极化和上调肿瘤组织血管生成,参与调控OS进展。     

皮肌炎患者外周血CD4^＋ T细胞中TGF-β1 mRNA表达及意义

目的：检测活动期皮肌炎（dermatomyositis,DM）患者外周血CD4^＋T细胞中转化生长因子β1（transforminggrowth factor-β1,TGF-β1）以及血清磷酸肌酸激酶（CK）含量。初步探讨CD4^＋T细胞TGF-β1在皮肌炎发病机制中的作用。方法：收集12例活动期皮肌炎患者和12例健康对照者外周血,采用免疫磁珠分离法获得CD4^＋T细胞,通过RT-PCR方法检测出各组TGF-β1表达水平。观察CD4^＋T细胞中TGF-β1表达与CK含量的相关性。结果：活动期皮肌炎患者外周血CD4^＋T细胞中TGF-β1相对表达量为0.751±0.107,显著高于健康对照0.438±0.170（P〈0.05）。CD4^＋T细胞TGF-β1表达量与CK含量呈中度正相关（r=0.67,P〈0.05）。结论：活动性皮肌炎患者外周血CD4^＋T细胞中TGF-β1 mRNA表达显著升高,可能与皮肌炎疾病发生有关。     

芒果苷元对TGF-β1诱导的HK-2细胞EMT的影响

  目的  研究芒果苷元对TGF-β1诱导的HK-2细胞EMT的影响。  方法  MTT法检测各浓度芒果苷元对HK-2细胞活力的影响；用TGF-β1诱导HK-2细胞成EMT模型，并给以芒果苷元干预，在TGF-β1诱导24 h时显微镜下拍照记录细胞形态变化，划痕实验法检测细胞迁移能力，Transwell法检测细胞侵袭能力，Western blot法检测纤连蛋白（fibronectin，FN）和Ⅰ型胶原（collagen type Ⅰ，Col Ⅰ）蛋白表达水平。  结果  （1）芒果苷元（10-9～10-5 mol/L）浓度下HK-2细胞活力均无明显变化（P > 0.05）；（2）与正常组相比，模型组细胞形态变长变梭，迁移和侵袭能力显著增强（P < 0.05，0.01），FN和ColⅠ蛋白表达水平显著上调（P < 0.05，0.01）；与模型组相比，芒果苷元组细胞能维持原来的鹅卵石形，迁移和侵袭能力显著下降（P < 0.05，0.01），FN和ColⅠ蛋白表达水平显著下调（P < 0.05）。  结论  芒果苷元能抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞迁移和侵袭，阻止细胞形态的改变，下调细胞外基质成分FN和ColⅠ的蛋白表达，从而抑制EMT的发展。     

热疗对巨噬细胞M2极化作用及其对肺癌细胞侵袭、迁移影响的体外实验研究

背景　热疗是一种安全的辅助治疗方法,通过抑制肿瘤细胞DNA修复、促进其凋亡、提高机体免疫等作用阻碍其发生、发展。但是,对于热疗是否可以通过干预巨噬细胞间接影响肿瘤细胞的研究并不多。目的　通过体外模拟热疗产生的温热作用,探讨在热疗条件下M2型肿瘤相关巨噬细胞对肺癌细胞（LLC）的调控作用。方法　本研究于2019年6-12月实施。10 000 ng/L的干扰素γ（INF-γ）和100 000 ng/L的脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞48 h成为M1型巨噬细胞,20 000 ng/L 白介素（IL）-4诱导RAW264.7细胞48 h成为M2型巨噬细胞;通过流式细胞术和ELISA法分别检测M1、M2巨噬细胞表面标志抗原CD86、CD206的表达率和细胞因子IL-10、IL-12的分泌水平;采用CCK-8法检测不同热疗温度（41 ℃、42 ℃、43 ℃）干预对M2型巨噬细胞在24 h、48 h和72 h的增殖活性作用;采用实时荧光定量聚合酶链反应法（RT-PCR）检测M0、M2型巨噬细胞及热疗（42 ℃）后M2型巨噬细胞Arg-1、Fizz-1、Ym-1 mRNA相对表达水平;Western blotting法检测M2型巨噬细胞及热疗（42 ℃）后M2型巨噬细胞Arg-1、Fizz-1、Ym-1蛋白相对表达水平;Transwell法检测LLC+M2、LLC+M2+热疗（42 ℃）中LLC的侵袭、迁移能力。结果　IFN-γ和LPS可诱导RAW264.7细胞向M1型极化,IL-4可诱导RAW264.7细胞向M2型转化。流式细胞术检测结果显示,M2型巨噬细胞CD86、CD206的表达率高于M0型巨噬细胞和M1型巨噬细胞（P<0.001）。ELISA法检测结果显示,M2型巨噬细胞IL-10的分泌水平较M0、M1型巨噬细胞高（P<0.001）;M1型巨噬细胞IL-12分泌水平较M0、M2型巨噬细胞高（P<0.001）。CCK-8法检测结果显示,42 ℃时热疗抑制巨噬细胞的能力高于41 ℃及43 ℃时（P<0.001）。RT-PCR检测结果显示,与M0型巨噬细胞相比,M2型巨噬细胞的Ym-1、Arg-1、Fizz-1 mRNA相对表达水平升高（P<0.001）。热疗（42 ℃）后M2型巨噬细胞的Ym-1、Arg-1 mRNA和蛋白相对表达水平降低（P<0.001）。Transwell法检测结果显示,M2型巨噬细胞与LLC共培养后LLC侵袭、迁移数量增加（P<0.001）;热疗（42 ℃）后LLC侵袭、迁移数量减少（P<0.001）。结论　热疗可能通过下调M2型巨噬细胞的Arg-1、Ym-1 mRNA的表达水平从而抑制LLC的侵袭与迁移能力。