非小细胞肺癌相关抑癌基因甲基化谱的研究

目的抑癌基因5′-CpG岛甲基化是非小细胞肺癌（non-smallcelllungcancer,NSCLC）中常见的表观遗传学改变,相关研究报道多为单基因位点且结果不一致。为了解我国NSCLC患者相关抑癌基因的甲基化状况,本文中筛选一组NSCLC候选甲基化谱,探讨其在NSCLC发生发展中的意义及用于早期诊断的价值。方法留取78例NSCLC患者术中癌组织,相应正常肺组织及110例I/II期NSCLC、50例肺部良性病变或健康志愿者血浆标本,用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation-specificPCR,MSP）检测20个肺癌相关抑癌基因甲基化状况。结果 12个基因（APC、CDH13、KLK10、DLEC1、RASSF1A、EFEMP1、SFRP1、RARβ、p16INK4A、RUNX3、hMLH1和DAPK）在肿瘤组织中的甲基化高于相应正常组织,尤其是前9个基因（P≤0.001）,8个基因（BRCA1、p14ARF、MGMT、NORE1A、FHIT、CMTM3、LSAMP和OPCML）甲基化程度较低或肿瘤特异性较低。多基因甲基化常见于肿瘤组织,CpG岛甲基子表型（CpGislandmethylatorphenotype,CIMP）阳性见于65.38%（51/78）的NSCLC癌组织而仅见于1.28%（1/78）的正常组织（P〈0.001）。CIMP阳性与临床分期和淋巴结转移（P分别为0.007和0.031）相关。在早期NSCLC患者血浆样本中也检测出癌组织中初步筛选的9个抑癌基因的高甲基化。将APC、RASSF1A、CDH13、KLK10和DLEC15个基因联合检测,对肿瘤诊断的敏感性为83.64%,特异性为74.0%。结论 CIMP阳性是NSCLC肿瘤组织区别于正常组织的重要特征,且与临床分期和淋巴结转移相关。APC、RASSF1A、CDH13、KLK10和DLEC15个抑癌基因甲基化的联合检测可用于NSCLC的辅助诊断。     

同源异形盒A10基因启动子区甲基化及蛋白表达与子宫内膜异位症的关系

目的DNA甲基化在子宫内膜异位症发病机制研究中倍受到学者们关注。文中检测子宫内膜异位症（endometriosis,EM）患者在位和异位内膜组织中同源异形盒A10（homeobox-A10,HOXA10）基因启动子区CpG岛甲基化程度及HOXA10蛋白表达水平,探讨EM与HOXA10基因异常甲基化和蛋白表达的关系及其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）和免疫组织化学法（SP法）检测36例EM患者中异位内膜组织（异位内膜组）、在位内膜组织（在位内膜组）及12例正常对照者子宫内膜组织（对照组）中HOXA10基因启动子区CpG岛甲基化状况和HOXA10蛋白表达情况。结果0）36例EM患者的异位、在位内膜组织中HOXA10基因启动子区CpG岛甲基化率分别为38．9％、25．0％;其甲基化均发生在临床Ⅲ、Ⅳ期;12例正常子宫内膜组织中HOXAIO基因均未发生甲基化;三组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。②EM患者在位、异位内膜HOXA10的表达下降,无明显的分泌中、晚期峰;异位内膜基质HOXA10的表达显著降低,低于对照组正常内膜表达,其差异有统计学意义（P〈0．05）。③异位内膜组织HOXA10的蛋白表达与HOXA10基因启动子甲基化呈负相关,相关系数rs=-0．368。结论EM患者异位内膜组织中存在HOXA10基因启动子区异常甲基化导致基因失活,在EM发生发展过程中起重要作用。     

KLK10基因表达增强能够降低人舌癌细胞的增殖和侵袭能力

目的探讨人组织激肽释放酶10（KLK10）对舌癌Tca8113细胞增殖和侵袭力的影响。方法运用分子生物学技术,构建真
核表达载体pIRES2-EGFP-KLK10,转染Tca8113细胞,分别用RT-PCR、Western blot检测KLK10mRNA及蛋白表达水平。
MTS细胞生长实验检测细胞增殖的变化;Transwell小室细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果pIRES2-EGFP-KLK10
转染Tca8113细胞获得稳定细胞株,与空白对照组及空载体组比较,KLK10mRNA及蛋白表达水平均明显增高,KLK10增强表
达的舌癌细胞增殖和侵袭能力均明显减弱（P<0.05）。结论KLK10表达增强能够降低人舌癌细胞的增殖和侵袭能力。KLK10
基因可能成为肿瘤治疗上有前途的分子靶点。
     

KLK7基因研究进展

KLK7（角化层糜蛋白酶）最先从角化细胞文库分离出,并证明是一种丝氨酸蛋白。KLK7基因是组织激肽释放酶（KLK）基因家族成员之一,编码hk7蛋白,与其他组织激肽释放酶基因有相似的基因及蛋白结构。它主要在角质层上皮细胞中表达,参与皮肤脱屑过程。近来发现它广泛存在于人体组织和体液中,并认为与肿瘤的生长、肿瘤细胞的脱落和转移有关,可作为一种新的癌生物标记物。本文对KLK7基因近年来研究进展作一综述。     

口腔鳞状细胞癌组织中死亡相关蛋白激酶的甲基化及其蛋白的表达

目的：探讨死亡相关蛋白激酶（DAPK）基因的表达、甲基化状态及与口腔鳞状细胞癌（OSCC）的关系,为研究DAPK基因在OSCC组织中表达改变的机制及肿瘤基因治疗方法打下基础。方法：采用甲基特异性PCR和免疫组织化学方法分别检测23例正常口腔黏膜组织和53例OSCC组织中DAPK基因甲基化率、DAPK蛋白表达率。结果：23例正常口腔黏膜组织中无一例检测到DAPK基因启动子区甲基化,53例OSCC患者30例（56.60%）口腔黏膜组织中DAPK基因启动子区完全甲基化,8例（15.09%）DAPK基因部分甲基化,总甲基化率为71.69%（38/53）,与正常口腔黏膜组织甲基化率比较差异有显著性（P<0.01）。在23例（100%）正常口腔黏膜组织中DAPK蛋白表达均呈阳性,53例OSCC患者中36例（67.92%）口腔黏膜组织中DAPK蛋白表达下调,二者比较差异具有显著性（P<0.01）;OSCC患者口腔黏膜组织中DAPK蛋白低表达组DAPK基因甲基化率（32/36,88.89%）高于正常表达组（6/17,35.29%）（P<0.01）。结论：DAPK基因启动子区甲基化是该基因在OSCC组织中表达降低的机制之一,DAPK基因甲基化引起的基因功能静默可能与OSCC的发生有关。     

人类Kallikrein基因家族与肿瘤

人组织型激肽释放酶基因家族（Kallikrein，简称KLK）是丝氨酸蛋白酶家族的一个亚群，近年新的研究发现位于人染色体19q13．3-13．4区域的基因克隆与经典的KLK基因（KLK1-编码hK1或肾／胰腺Kallikrein；KLK2-编码hK2／人腺型Kallikrein；KLK3-编码hK3／前列腺特异性抗原PSA）具有高度的同源性，使得该家族成员扩大到15个，并在GENBANK中首次注册命名。研究发现，除KLK3编码的hK3／PSA外，多种KLK基因家族成员在肿瘤尤其激素依赖性肿瘤中表达异常，并参与肿瘤发生发展的多个环节。本文旨在对近年来KLK基因家族与肿瘤的研究进展作一总结。     

RASSF1A和PCDH10基因与乳腺癌关系的研究进展

RASSF1A和PCH10基因都是抑癌基因,其在正常组织的表达中可以抑制肿瘤细胞的形成。当基因的启动子区域出现异常甲基化时便会出现RASSF1A和PCH10表达下调或者表达缺失的现象,并且这种高甲基化和此抑癌基因失活现象在乳腺癌组织中频繁出现,对乳腺癌的形成有着重要作用。因此对基因高甲基化的检测有助于对乳腺癌的早期诊断,鉴别肿瘤的良恶性,而逆转甲基化则为治疗乳腺癌提供了新的研究思路。     

肺癌RASSF1A基因甲基化与cyclin D1的表达

目的探讨肺癌中RASSFIA基因甲基化与cyclinD1表达对肺癌诊断的意义及RASSF1A基因甲基化与cyclinD1表达两者之间有无相关性。方法甲基化特异性PCR检测33例肺癌及10例癌旁组织中RASSFIA基因启动子区甲基化情况;用免疫组织化学S-P法检测cyclinD1在上述组织中的表达情况。分析两者分别与患者年龄、性别、组织分型的关系及与肿瘤分化间的相关性,同时对RASSFIA基因甲基化与cyclinD1表达间的关系进行分析。结果33例肺癌中有18例（54．5％）显示RASSFIA基因已被甲基化,16例（48．5％）肺癌组织显示为cyclinD1表达阳性;而10例癌旁组织RASSFIA基因未甲基化且cyclinD1免疫组化染色显示为阴性。RASSFIA基因甲基化与年龄、性别、组织分型、分化及cyclinD1表达均无关;而cyclinDl表达与肿瘤的分化具有相关性（r=0．418,P〈0．05）,但与年龄、性别、组织分型无关（P〉0．05）。结论RASSFlA基因甲基化与cyclinD1表达在肺癌的发生中具有重要作用,且cyclinD1表达与肿瘤分化有关,检测cyclinD1表达有助于对肺癌恶性程度作出判断。     

KLK10蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及意义

目的：探讨KLK10蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义。方法：应用免疫组化法检测10例上皮性卵巢良性、12例交界性和45例恶性肿瘤中KLK10蛋白的表达，分析KLK10表达与上皮性卵巢癌临床病理及生存状态的关系。结果：（1）在上皮性卵巢良性、交界性和恶性肿瘤组织中KLK10表达的阳性率分别为10％、58.33％和86．67％，3组间阳性率和阳性级别比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；（2）KLK10表达的阳性率和表达强度在晚期组高于早期组，中低分化组高于高分化组，有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组，生存时间〈5年组高于≥5年组，各组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：（1）KLK10蛋白在上皮性卵巢良性、交界性和恶性肿瘤细胞中表达的阳性率和表达强度呈逐渐升高。（2）KLK10蛋白在上皮性卵巢癌中的表达与临床分期、病理分级、淋巴结转移和5年生存率有关。     

HIC-1基因及其甲基化在肿瘤中的研究

肿瘤高甲基化-1(HIC-1)基因是一种转录抑制因子,研究发现HIC-1基因具有转录抑制、诱导细胞凋亡、阻滞细胞生长等多种功能。HIC-1基因在大部分正常组织中表达,在多种肿瘤细胞中由于其高甲基化而表达低下,并且其甲基化在某些肿瘤的早期阶段,大部分肿瘤的发展及预后中起重要作用。通过逆转基因的甲基化可能为癌症治疗提供一种新的途径。深入研究HIC-1基因及其作用,将为肿瘤的早期诊断和治疗提供帮助。     

食管癌组织RASSF1A的表达及其与基因启动子甲基化的关系

目的探讨RASSF1A表达及其基因启动子甲基化在食管癌发生中的作用。方法取40例食管癌患者肿瘤组织及癌旁组织,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测RASSF1A的mRNA表达,用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测RASSF1A基因启动子的甲基化。结果 RASSF1A mRNA在食管癌组织、癌旁组织表达缺失率分别为77.5%（31/40）、2.5%（1/40）,差异有统计学意义（P〈0.05）。癌旁组织均未发现甲基化,而癌组织中甲基化率为67.5%（27/40）。所有甲基化的食管癌组织RASSF1A mRNA表达缺失。结论食管癌的发生与RASSF1A基因表达缺失有关联,而RASSF1A基因启动子区甲基化是RASSF1A基因表达缺失的原因。     

SOCS-3基因在结肠癌中的表达及甲基化测定

目的通过对细胞因子信号转导抑制因子-3（suppressor of cytokine siganaling-3,SOCS-3）基因在结肠癌和癌旁组织中的表达及其启动子甲基化状态的测定,探讨其与结肠癌发生、发展和转移等的关系。方法收集40例结肠癌患者的肿瘤标本,20例癌旁组织以及10例正常结肠组织．运用甲基化特异性PCR测定SOCS-3基因CpG岛甲基化状态,同时运用实时定量PCR分析SOCS-3基因在结肠癌组织中的表达水平。结果40例结肠癌组织中有34例（85％）存在SOCS-3基因CpG岛的异常甲基化,癌旁组织中为2例（10％）,而正常结肠组织中没有检测到SOCS-3基因呈CpG岛甲基化;结肠癌组织中SOCS-3基因CpG岛甲基化组与无甲基化组相比．其SOCS-3基因的相对表达量明显减少（P〈0．05）,表明SOCS-3基因CpG岛甲基化可导致SOCS-3基因表达降低。与患者临床资料结合分析,发现SOCS-3基因CpG岛甲基化与性别、年龄无关（P〉0．05）,而与肿瘤病理分级和TNM分期有关（P〈0．05）。结论结肠癌中存在SOCS-3基因CpG岛异常甲基化,且因CpG岛的甲基化导致其基因表达降低。SOCS-3基因CpG岛甲基化可能参与了结肠癌的发生、发展和转移。     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷逆转RASSF1A基因甲基化对人乳腺癌MCF-7细胞的影响

目的：探讨启动子甲基化对乳腺癌MCF-7细胞RASSF1A基因的作用及5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）干预对启动子甲基化的影响,为临床治疗乳腺癌奠定理论基础.方法：用1,3,5,7,9μmol/L不同浓度的5-Aza-CdR处理MCF-7乳腺癌细胞株,通过MTT检测5-Aza-CdR对MCF-7乳腺癌细胞株存活率的影响;建立5μmol/L,10μmol/L的浓度梯度流式细胞仪检测5-Aza-CdR对MCF-7乳腺癌细胞株生长周期及凋亡率的影响,MSP（甲基化PCR）检测5-Aza-CdR处理前后RASFF1A抑癌基因的甲基化状态,RT-PCR检测处理前后抑癌基因RASSF1A mRNA表达情况.结果：5-Aza-CdR抑制体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞,诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和细胞周期停滞在G0/G1期,呈浓度依赖性.经5-Aza-CdR处理人乳腺癌MCF-7细胞后,MSP检测RASSF1A基因发生了甲基化,RT-PCR检测RASSF1A mRNA恢复了表达.结论：RASSF1A基因启动子甲基化是导致其失活的主要原因,5-Aza-CdR可以逆转乳腺癌细胞株MCF-7细胞RASSF1A基因启动子甲基化状态,使其重新表达．     

新疆哈萨克族食管鳞癌miR-34a基因甲基化改变及其意义

目的：检测新疆哈萨克族食管癌miR-34a基因甲基化状态,探讨miR-34a基因甲基化与新疆哈萨克族食管癌之间的关系及意义.方法：运用基质辅助激光解析电离时间飞行质谱（MALDI-TOF-MS）技术检测59例新疆哈萨克族食管鳞癌、32癌旁非癌组织及34例正常食管粘膜中miR-34a基因甲基化状态.结果：miR-34a基因在新疆哈萨克族食管鳞癌、癌旁非癌组织中甲基化水平高于正常对照组.结论：新疆哈萨克族食管鳞癌及癌旁miR-34a基因甲基化率高于正常对照组,提示miR-34a基因甲基化可能与新疆哈萨克族食管癌的发生有关.     

大肠癌DAPK、FHIT基因启动子区的甲基化水平研究

目的:评价DAPK、FHIT基因启动子区甲基化状态在大肠癌发生发展中的作用和临床意义。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)检测23例大肠癌及相应癌旁正常组织的DAPK、FHIT基因启动子区甲基化状态。结果:大肠癌组织的DAPK、FHIT基因甲基化率分别为60.86%(14/23)、52.17%(12/23),高于癌旁正常组织的13.04%(3/23)、8.69%(2/23),组间差异均有统计学意义(P<0.05),DAPK、FHIT基因甲基化状态与分化程度、淋巴结转移有显著相关性(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤部位、Dukes分期无相关性(P>0.05)。结论:DAPK基因和FHIT基因启动子区的高甲基化可能与大肠癌的发生、发展、预后有关。     

Runx3基因启动子甲基化及其蛋白表达与喉癌的关系

目的探讨Runx3基因启动子甲基化状态及其蛋白表达与喉癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测55例喉癌组织及癌旁正常黏膜组织中Runx3DNA的表达,并用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测Runx3基因启动子甲基化情况。结果55例喉癌组织标本中Runx3基因蛋白的表达较癌旁正常组织中表达明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;癌旁正常黏膜组织中无Runx3基因启动子的甲基化,喉癌组织中有32例（58.2%）检测到Runx3基因启动子的甲基化,2者比较差异有统计学意义（P〈0.05）;喉癌组织中Runx3基因启动子甲基化及Runx3蛋白的表达与性别、临床分型及分级、有无淋巴结转移均无关（均P〉0.05）;喉癌组织中Runx3基因启动子甲基化与Runx3蛋白表达呈负相关（r=-0.7092,P〈0.01）。结论Runx3基因启动子甲基化是其基因失活的可能机制之一,在喉癌的发生中起重要作用。     

大肠癌FHIT和CHFR基因甲基化状态分析

目的:分析大肠癌组织中FHIT和CHFR基因启动子区甲基化水平及其临床意义。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MSP)技术检测46例大肠癌及癌旁正常组织的FHIT和CHFR基因启动子区甲基化状态。结果:大肠癌组织的FHIT和CHFR基因甲基化率分别为54.35%、49.15%,高于癌旁组织13.04%、8.69%,组间差异均有统计学意义(P<0.05),FHIT和CHFR基因甲基化状态与分化程度、淋巴结转移有显著相关性(P<0.05),与年龄、性别、肿瘤部位、Dukes分期无相关性(P>0.05)。结论:FHIT和CHFR基因启动子区的甲基化可能与大肠癌的发生、发展及预后相关。     

妇科肿瘤术后患者凝血功能变化的临床观察

［摘要］目的　探讨妇科患有肿瘤的患者在经过肿瘤切除术治疗后体内凝血功能的变化．方法　以曲靖市第一人民医院2013年8月至2014年12月收治的128名患有肿瘤的妇科患者为研究对象,将128名肿瘤妇科患者设为实验组,同时又以128名正常女性为对照组,对肿瘤患者在手术前后的血浆凝血酶原时间（ PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、血浆凝血酶时间（TT）、血浆纤维蛋白原含量（ FIB）和D － 二聚体（ D － dimer） 水平以及肿瘤妇科患者与正常女性之间进行监测比较．结果　对比患者血浆凝血酶原时间（ PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、血浆凝血酶时间（TT）、血浆纤维蛋白原含量（FIB）和D － 二聚体（ D － dimer）水平,可以明显发现手术前,实验组患者相较于对照组患者的各项指标都高,在手术完成之后,实验组患者的各项指标相较于实验组患者在手术前的各项指标都低．结论　妇科肿瘤患者在手术之前血浆凝血酶原时间（ PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、血浆凝血酶时间（TT）、血浆纤维蛋白原含量（ FIB）和D － 二聚体（ D － dimer）水平高,妇科患者的凝血功能亢进,患者处于血栓前状态,通过监测患者体内凝血功能的各项指标,可以降低妇科患者在完成手术切除术发生血栓的发生率．     

PCDH10基因在前列腺癌组织中的甲基化测定及临床意义

目的检测PCDH10基因在前列腺癌组织中的甲基化状态,并分析其临床意义。方法应用甲基化特异性PCR（methy—lation—specificPCR,MSP）技术检测PCDH10基因在3株前列腺癌细胞系、1株前列腺上皮细胞、13例前列腺增生组织和40例前列腺癌组织样本中的甲基化情况,同时分析40例前列腺癌患者的临床资料。结果3株前列腺癌细胞系中有2株检出PCDH10基因甲基化;40例前列腺癌样本中24例（60％）检出PCDH10基因甲基化,13例前列腺增生组织中未检出PCDH10基因甲基化。PCDH10基因出现甲基化患者与未出现甲基化患者相比,在年龄、前列腺特异性抗原（prostatespecificantigen,PSA）和临床分期等指标的差异无统计学意义（P〉0．05）,但在Gleason评分的差异存在统计学意义（P〈0．05）。结论PCDH10基因在前列腺癌组织中甲基化程度较高,高Gleason评分的前列腺癌可能具有更高的PCDHl0基因甲基化率,提示PCDH10基因甲基化可能与前列腺癌的发生发展有关。     

WNT10A基因在肾细胞癌中的表达及作用机制研究

目的探讨WNT10A在肾细胞癌(RCC)中的表达及作用机制。方法收集1998年1月-2006年12月诊治的RCC患者284例和良性肾疾病(BRD)患者267例的完整病历资料,各组随机抽取病理样本,RT-PCR法筛选差异表达WNT配体,免疫组化法检测WNT/β-catenin的信号通路蛋白。结果 RT-PCR结果表明,WNT家族中WNT1、WNT2、WNT3A、WNT8A、WNT9A、WNT10A在RCC组中呈高表达,分别高于BRD组2.51、1.85、1.98、2.22、2.30和9.12倍,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化染色结果显示,RCC组WNT10A、β-catenin、c-myc、CyclinD1蛋白表达明显高于BRD组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 WNT10A癌基因通过激活WNT/β-catenin的信号通路在RCC的发生和进展中发挥重要作用。