三七总皂苷部分逆转黏附诱导的骨髓瘤细胞耐药性

目的：研究三七总皂苷（PNS）对骨髓瘤细胞RPMI8226黏附及黏附诱导耐药的影响．方法：采用MTT法检测PNS和／或阿霉素（Adr）对RPMI8226细胞的毒性作用；荧光染料二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记并流式细胞术检测RPMI8226细胞与纤连蛋白（FN）黏附率．结果：RPMI8226细胞与FN黏附2，12h，其黏附率分别为（55．63±1．56）％，（65．42±2．46）％；经亚细胞毒浓度PNS（50mg／L）预处理后，其黏附率分别降为（33．24±1．29）％，（34．16±1．59）％，处理前后差异有统计学意义（P〈0．05）；FN黏附12h后，瘤细胞对Adr的IC50值为（2．70±0．24）μmol／L，高于BSA对照组（2．03±0．13）μmol／L（P〈0．05），经PNS处理后FN组Adr IC50值降至（1．08±0．09）μmol／L，与BSA对照组（0．82±0．07）μmol／L相比无统计学差异（P〉0．05）．结论：PNS可降低RPMI8226细胞与FN的黏附率，并能部分逆转黏附介导的骨髓瘤耐药．     

冠心病患者血清E-选择素和Ox-LDL的测定及意义

目的：测定血清可溶性E-选择素、氧化性低密度脂蛋白（Ox—LDL）浓度在冠心病患者以及健康人中的变化,探讨血清可溶性E-选择素、Ox—LDL浓度在冠心病患者中的意义以及二者之间在冠心病的发生、发展过程中的关系。方法：选择90例冠心病患者,将其分为急性心肌梗死组（AMI组）、不稳定性心绞痛组（UAP组）、稳定性心绞痛组（SAP组）各30例,正常对照组30例,采用酶联免疫吸附法检测各组血清可溶性E-选择素、Ox—LDL水平,用t检验比较各组间的差异,用直线相关分析二者之间是否具有相关性。结果：外周血中E-选择素和Ox—LDL的浓度在AMI组（67．84±11．08）ug／mL、（0．87±0．15）mg／L,UAP组（63．14±12．51）ug／mL、（0．78±0．16）mg／mL,SAP组（48．57±12．91）ug／mL、（0．65±0．22）mg／L,对照组（35．72±14．65）ug/mL、（0．51±0．21）mg／L;外周血中E-选择素和Ox—LDL的浓度在AMI组、UAP组、SAP组显著高于对照组（P〈0．01）,外周血中E-选择素和Ox—LDL的浓度在AMI组、UAP组显著高于SAP组（P〈0．01）,冠心病患者外周血中E-选择素与Ox—LDL具有明显相关性。结论：冠心病患者血清可溶性E-选择素水平和Ox—LDL水平可反映病情严重程度,对病情的发展具有预见性,可作为冠心病患者的辅。助诊断手段。     

乌司他丁对术后早期移植肾功能恢复的临床观察

目的探讨乌司他丁（TUI）对早期移植肾功能恢复尤其在促进急性肾小管坏死（ATN）恢复中的作用及其机制分析。方法普通尸肾移植患者30例,随机分成A组（用药组,15例）和B组（对照组,15例）。再选取具有急性肾小管坏死（ATN）高危因素的供肾,接受移植的患者共40例,按随机配对原则分成C组（用药组,20例）和D组（对照组,20例）。用药组于围手术期使用UTI,观察术后早期尿量、血肌酐（sCr）、血α1-微球蛋白（α1-MG）、尿α1-MG、IL-8、IL-10。结果A组与B组相比术后尿量增加,其中第2、6、7、9、10天比较差异有统计学意义（均P〈0．05）;A组术后第1、3天血IL-8分别为（93．8±31．5）ng／L及（42．0±24．0）ng／L,显著低于B组（135．0±31．2）ng／L及（178．3±76．4）ng／L,均P〈0．05;A组术后第1、3天尿α1-MG分别为（69．9±32．6）mg／L及（35．3±34．5）mg／L,显著低于B组（91．2±28．4）mg／L及（65．8±33．4）mg／L,P〈0．05。C组术后第7、10天血α1-MG（118．3±41．2）mg／L、（99．5±68．6）mg／L显著低于D组（187．2±55．2）mg／L、（151．3±87．4）mg／L,均P〈0．05;尿α1—MG在术后第7天（39．94-22．3）113g／L及第10天（38．2±20．4）m∥L,亦显著低于D组（67．3±21．6）mg／L及（62．3±29．2）mg／L,均P〈0．05;C组与D组比较术后血IL-8的升高趋势得到抑制,多尿期提前。结论UTI在肾移植术后能起到明显的改善微循环,保护移植肾小管,增加尿量,抑制炎症反应以及促进ATN恢复的作用。     

促酰化蛋白受体C5L2在前脂肪细胞分化过程和脂肪酸负荷下的表达研究

目的 观察3T3-L1前脂细胞分化和游离脂肪酸（FFA）对3T3-L1（前）脂肪细胞C5L2基因和蛋白表达的影响。方法采用逆转录（RT）-PCR和流式细胞仪检测不同分化时段和FFA处理后（前）脂肪细胞C5L2mRNA和蛋白表达。结果 3T3-L1脂肪细胞C512mRNA表达呈分化依赖性增加,而C5L2蛋白表达水平在分化早期显著增强,诱导分化6hC5L2蛋白表达增加了21％（61％±18％VS51％±15％,P〈0．05）;分化12h达高峰,增加了38％（70％±12％VS51％±15％,P〈0．01）;分化3d基本恢复至0d水平。在3T3-L1成熟脂肪细胞,0．5mmol／L和1．0mmol／L油酸分别抑制46％（0．58±0．21 vs 1．08±0．46,P〈0．05）和84％（0．18±0．04VS1．08±0．46,P〈0．05）C5L2 mRNA表达,而0．125mmol／L油酸即能显著下调36％（35％±8％vs54％±7％,P〈0．01）C5L2蛋白表达。低浓度棕榈酸均能明显抑制C5L2mRNA和蛋白的表达,1．0mmol／L时c512mRNA和蛋白表达分别减少了41％（0．57±0．28vs0．97±0．41,P〈0．05）和55％（24％±13％VS54％±7％,P〈0．01）。油酸和棕榈酸对前脂肪细胞C512表达差异无统计学意义。结论促酰化蛋白／C5L2途径参与了脂肪细胞分化的调控过程。C512mRNA和蛋白表达的下调可能参与了油酸和棕榈酸诱导的成熟脂肪细胞胰岛素抵抗的发生。     

RNA干扰对活化的小鼠巨噬细胞肿瘤坏死因子α表达的影响

目的：观察靶向小鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）基因的小干扰RNA（siRNA）在体外对小鼠巨噬细胞系RAW264．7表达TNF-α的抑制作用。方法：采用化学法合成针对TNF-α mRNA不同位点设计的3条siRNA序列（siRNA1～3）和1条带有荧光标记的BLOCK—IT^TM荧光Oligo（修饰的荧光标记的dsRNA,siRNA4）通过脂质体包裹后将其分别转染至小鼠巨噬细胞系RAW264．7,同时设立1个无任何靶基因的siRNA作为阴性对照（siRNA4）。荧光显微镜下观察siRNA的转染效率;用实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附实验（ELISA）法分别检测siRNA对TNF-α的mRNA和蛋白表达的抑制作用。结果：内毒素刺激后6h,巨噬细胞表达TNF-α mRNA和合成分泌的TNF-α量均增加,于9～12h达高峰。利用荧光标记的Oligo观察到siRNA转染效率达72％～80％。siRNA1～4转染巨噬细胞后,siRNA2、3可见内毒素刺激的TNF-α mRNA（0．158±0．030、0．114±0．028）和TNF-α蛋白表达[（1355±348）pg／ml、（817±138）pg／m1]均明显少于未转染组[TNF-α mRNA0．294±0．147,蛋白（2104±32）pg／ml,均P〈0．05],其中siRNA3的抑制率非常显著,达61．2％（P〈0．01）。阴性对照siRNA4对细胞基因及蛋白表达无影响。结论：内毒素可刺激小鼠巨噬细胞TNF-α的合成。化学合成siRNA转染小鼠巨噬细胞能有效抑制TNF-α mRNA及蛋白的表达。     

冠心病患者妊娠相关血浆蛋白A含量与血管内皮功能关系探讨

【目的】探讨冠心病患者血循环妊娠相关血浆蛋白A（PAPP—A）水平与内皮功能的关系。【方法】64例冠心病患者，其中稳定型心绞痛组34例，急性冠脉综合征组30例，分别检测其相关内皮功能，包括肱动脉血流介导的血管舒张反应（FMD）和高敏C-反应蛋白（hs—CRP）、内皮素（ET）、一氧化氮（NO）水平，并用酶联免疫法检测血清PAPP—A。【结果】稳定型心绞痛组患者同急性冠脉综合征组相比PAPP—A[（6×10^-3±5×10^-1U／L与（19×10^-3±13×10^-3）U／L，P〈0．05]、hs-CRP[（0．5±0．3）mg／L与（3．6±2．2）mg／L，P〈0．01]、NO[（57±4）μmol／L与（45±5）μmol／L，P〈0．05]和FMD（6．0％±0．8％与3-3％±1．2％，P〈0．05）的差异有统计学意义。逐步选择多重回归分析，按α=0．10水准，发现PAPP—A与hs—CRP和FMD存在直线关系，Lnhs—CRP的偏相关系数为0．333（95％置信区间：0．138-0．527，P〈0．01），FMD的偏相关系数为-0．623（95％CI：-1．144—0．102，P〈0．051，其中常数项为5．570。高PAPP—A（〉11．094×10^-3U／L）患者hs—CRP明显增高[（5．3±4．2）mg／L与（1．3±0．6）mg／L，P〈0．01），FMD则降低（3.3％±2．4％与6．2％±3．6％，P〈0．05）。【结论】PAPP-A可作为间接评估冠心病患者血管内皮功能的指标之一。     

急性冠脉综合征患者IL-1β与C-反应蛋白的关系

目的检测急性冠脉综合征患者外周血白细胞介素-1β（IL-1β）、C-反应蛋白（CRP）水平的变化。探讨炎性细胞因子IL-1β的表达与分泌在急性冠脉综合征发病机制中的作用。方法选择急性冠脉综合征患者（ACS组）32例，稳定型心绞痛患者（SA组）28例及健康对照组20例，采用酶联免疫吸附法（ELISA）分别测定各组外周血IL-1β的水平，免疫比浊法测定各组CRP的水平，分析ACS组IL-1β与CRP之间的相关性。结果①ACS患者CRP水平[（3．14±0．47）mg／L]高于SA组[（1．44．4-0．40）mg／L，P〈0．01]及对照组[（1．07±0、28）mg／L，P〈0．01]；②患者组IL-1β水平[（222±45）ng／L]高于SA组[（167±3）ng／L，P〈0、01]及对照组[（120±42）ng／L，P〈0．01]；③ACS患者组IL-1β与CRP之间呈正的直线相关，r=0．489，P〈0．01。结论冠状动脉粥样硬化斑块的破裂可能与炎性细胞因子IL-1β表达与分泌有关。     

慢性心力衰竭患者早期肾损害的生化指标分析

目的：观察慢性心力衰竭患者在肾脏损害时各生化指标水平以及左心室射血分数（LWF）变化情况及其与心脏功能的关系，明确各生化指标在心力衰竭早期肾损害的诊断价值。方法：测定31例心力衰竭患者、31例无心力衰竭患者及29例健康对照者血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、尿微量白蛋白（MA）、血清胱抑素C（Cys—c）水平并进行MA与LVEF、Cys—C等相关性分析。结果：Cr、BUN正常的心力衰竭患者Cys—c、MA水平较无心力衰竭的心脏病患者和健康对照者明显升高，Cys—c分别为（1．66±0．21）mg／L、（1．28±0．40）mg／L、（1．03±0．39）mg／L，MA分别为（89．8±58．4）mg/L、（17．5±15．9）mg／L、（11．6±7．9）mg／L。两者比较均P〈0．01；Cys—c与LVEF呈负相关（r=-0．42，P〈0．01）；Cys—C与MA呈正相关（r=0．39，P〈0．01）。结论：无原发性肾脏病变的慢性心力衰竭患者存在早期肾功能异常，主要表现在肾小球滤过功能受损；心力衰竭程度越重，肾功能损害越明显；其中4项生化指标中以Cys—C和MA变化显著，可作为临床观察的主要敏感指标。     

糖尿病足深部感染病人的临床特点及分析

目的回顾性分析249例糖尿病足（DF）深部感染病人的临床特点,并对影响伤口愈合的因素进行相关分析。方法根据病人是否截肢和伤口愈合情况,将249例DF深部感染病人分为未截肢愈合组（A组）,截肢后愈合组（B组）,截肢后未愈合组（c组）,对其临床资料、实验室参数及足部伤口的特征进行比较和分析。结果A组病人为107例,B组病人为114例,C组病人为28例。A组病人年龄低于B组,B组年龄低于c组（59±12）岁、（67±11）岁,（72±9）岁。（P〈0．01）,超敏C反应蛋白（hs—CRP）分别为A组：（18±5）mg／L,B组（13±5）mg／L,C组（7±6）mg／L（P〈0．01）,A组血浆白蛋白高于B、C组分别为（32±7）g／L、（29±5）g／L,（28±3）g,（P〈0．01）。B组比A组病人糖尿病病程更长分别为（17±11）年、（10±6）年（P〈0．05）,B组比A组病人更常见可探及骨质和存在脓性分泌物、坏死、骨暴露及恶臭味、水肿（P〈0．01或P〈0．05）。B组体温[（38．1±1．1）℃,（P〈0．05）],血白细胞计数[（10±3）×10^9／L,P〈0．05）],hs—CRP[（13±5）mg／L,P〈0．05）]均高于C组[（37．4±0．8）℃、（8±2）×10^9／L、（7±6）mg／L]。严重下肢缺血在A、B、c组分别为7％、37％、77％,差异有统计学意义（P〈0．05）。多因素Logistic回归分析,hs-CRP、血白蛋白为创面愈合的保护因素,高龄、脓性分泌物、可探及骨质、骨暴露、水肿、恶臭味、坏死、下肢严重缺血为创面愈合的危险因素。结论所有糖尿病足深部感染病人都需要外科的治疗,即使接受一个糖尿病足多学科团队的综合治疗,仍有部分的病人需要截肢。     

甲氧基异丁基异腈显像在预测恶性淋巴瘤患者耐药中的临床意义

目的 预测恶性淋巴瘤（ML）患者的治疗反应,并判断根据甲氧基异丁基异腈（99^Tc^m-MIBI）显像参数,能否对多药耐药基因（MDR1）及多药耐药相关蛋白（MRP）基因的表达准确进行功能性评估。方法23例经淋巴结活检病理证实的ML患者,在化疗前均进行99^Tc^m-MIBI显像,分别计算早时像（10min）和晚时像（1h）的靶本（T／B）比值以及99^Tc^m-MIBI显影剂的洗脱率（WR％）;采用逆转录（RT）-PCR方法,检测病变淋巴结活体组织标本多药耐药基因MDR-1及MRP mRNA表达水平;在经过6—8个疗程的联合化疗（加或不加局部放疗）后,通过临床和放射学方法对淋巴瘤患者的治疗反应进行评价。结果 MDR1、MRP mRNA同时表达阴性患者组的WR％（16±6）明显低于两者同时阳性表达组（33±5）和两者其一阳性表达组（28±6,均P〈0．01）;两者同时阳性表达组与两者其一阳性表达组之间差异无统计学意义（P=0.26）。MDR1阳性组早时像T／B值、晚时像T／B值和WR％分别为3．0±1．1,2．5±0．8,17±7,MDR1阴性组三值分别为3．4±1．0,2．3±0．7,32±6,MDR1阳性组与阴性组相比,在早时像T／B、晚时像T／B差异均无统计学意义（均P〉0．05）,但WR％比较差异有统计学意义（P〈0．01）;MRP阳性组三值分别为3．1±1．2,2．5±0．8,19±8,MRP阴性组分别为3．3±1．0,2．3±0．7,31±6,MRP阳性与阴性组比较,也仅WR％差异有统计学意义（P=0．003）,而在早时像T／B、晚时像T／B差异均无统计学意义（均P〉0．01）。MDR1表达水平、WR％与治疗反应均有显著相关性（均P〈0．01）;MRP表达水平与治疗反应则无明显相关性（P=0．052）。结论 99^Tc^m-MIBI作为一种无创性影像学检查手段,能够准确反映MDR1、MRP的表达水平和功能状态,并可以预测ML患者的化疗疗效,针对性的采取个体化治疗策略,有益于患者的治疗。     

Enhanced Chemotherapy Sensitivity of Human Colon Cancer Cells to 5-Fluorouracil by siRNA Recombinant Expression Vector Targeting Survivin Gene

Objective To investigate the effects of small interfering RNA （siRNA） recombinant expression vector targeting survivin gene on chemotherapy sensitivity of human colon cancer cells to 5-fluorouracil. Methods siRNA recombinant expression vector targeting survivin gene was constructed and transfected into human colon cancer cell lines LOVO. After 48 hours of transfection, cells were harvested for analysis of survivin mRNA and protein expressions using RT-PCR and Western blot. In addition, after human colon cancer cell lines were treated with Survivin siRNA and/or 5-fluorouracil, MTT assay and flow cytometry were used to analyze cell proliferation and apoptosis. Results Restriction endonuclease analysis confirmed that siRNA recombinant expression vector targeting survivin gene was successfully constructed. Inhibitory ratios of survivin mRNA and protein expressions by Survivin siRNA were 36.33% and 44.65%, respectively. Survivin siRNA combined with 5-fluorouracil significantly increased the cell proliferation inhibitory ratio and apoptosis ratio compared with 5-fluorouracil treatin~ alone （P〈0.05）. Conclusion The siRNA recombinant expression vector targeting survivin gene can inhibit the expression of survivin gene, and enhance chemotherapy sensitivity of human colon cancer cells to 5- fluorouracil.     

ABCE1基因通过RNaseL途径抑制人大细胞肺癌H460细胞凋亡

摘要：目的研究ABCEl基因表达对人大细胞肺癌H460细胞增殖、凋亡的影响并初步探讨其机制。方法体外培养H460细胞,分为A组（转染ABCE1-siRNA-1组）、B组（转染ABCEl-siRNA-2组）、C组（转染空质粒组）以及D组（空白对照组）。将构建好的ABCEl的siRNA（小干扰RNA）载体转染人培养的细胞中,荧光显微镜下观察转染效率,WesternBlot法检测ABCEl蛋白以及RNaseL蛋白的表达,RT—PCR法检测ABCElmRNA的表达,MTT法分析细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果将构建好的载体成功转入了H460细胞,转染后A、B组的细胞活性降低,ABCEl的表达受到阻断俨〈0．01）,RNaseL蛋白含量明显增加（P〈0．01）,细胞的增殖能力明显降低并逐渐凋亡（P〈0．01）。结论ABCEl基因可促使人大细胞肺癌H460细胞增殖并抑制细胞凋亡,其机制是阻断了2-5A／RNaseL细胞通路。     

Survivin干扰RNA载体的构建及其在HEK293细胞中的表达

目的:探索合成survivin siRNA和RNAi载体的构建,及其在HEK293细胞中的表达?方法:分别采用化学合成的针对survivin的siRNA和shRNA载体(pGCsi载体),转染HEK293细胞后观察HEK293细胞中survivin的RNA及蛋白表达?结果:不同序列的siRNA和shRNA转染入HEK293细胞后,survivin的RNA及蛋白表达出现不同程度的下降?结论:化学合成与shRNA载体均可有效抑制HEK293细胞的survivin基因表达,为利用survivin作为靶点治疗胰腺癌等恶性肿瘤提供了技术基础?     

Survivin-siRNA对骨肉瘤MG-63细胞药物敏感性的研究

目的研究特异性Survivin-siRNA转染骨肉瘤MG-63细胞后对骨肉瘤细胞药物敏感性的影响。方法应用两种特异性Survivin-siRNA（Survivin-siRNA,Survivin—siRNA,）转染骨肉瘤MG-63细胞,RT—PCR检测MG-63细胞Survivin-mRNA表达,流式细胞术检测MG-63细胞的凋亡,MTT法检测顺铂、多柔比星对转染前后MG-63细胞的半数抑制浓度（IC50）。结果特异性Survivin-siRNA转染骨肉瘤MG-63细胞24h后SurvivinmRNA表达水平明显抑制;流式细胞术显示转染Survivin-siRNA的MG-63细胞48h后凋亡率明显高于非特异性siRNA组和空白对照组（F=17．32,P〈0．01）;特异性Survivin—siRNA增强了MG-63细胞对多柔比星的敏感性5倍,增强了MG-63细胞对顺铂的敏感性9倍。结论化学合成的Survivin—siRNA能有效抑制Survivin基因在骨肉瘤MG-63细胞中的表达,并提高MG-63细胞对多柔比星、顺铂的敏感性。     

小分子干扰RNA靶向抑制suvivin基因诱导U251细胞凋亡的实验研究

目的 构建靶向survivin基因的小分子干扰RNA（siRNA）表达载体，导入人胶质瘤细胞U251中，研究siRNA靶向抑制survivin基因对U251细胞的凋亡诱导作用。方法根据siRNA设计原则，在survivin全长序列中选取设计含19个核苷酸（19nt）靶序列两条反向重复序列，间以9个核苷酸的茎环序列，两端分别加上对应的酶切位点．形成siRNA的DNA模板并克隆到siRNA表达载体pGenesil-1中，获得靶向抑制survivin基因的siRNA表达载体pGenesil-1／survivin；采用Metafectene转染试剂将干扰质粒导入到胶质瘤细胞U251；分别采用实时荧光定量PCR以及Western bloting从mRNA和蛋白水平检测干扰效果；采用Annexin—V／PI双色标记的流式细胞仪法检测siRNA诱导的细胞凋亡。结果实时荧光定量PCR以及Western blotting显示：survivin基因的mRNA转录水平以及蛋白水平的表达均得到显著抑制：流式细胞仪检测结果显示：survivin基因表达被抑制后，U251细胞凋亡率明显增高。结论靶向survivin基因的重组siRNA干扰载体pGenesi—l／survivin介导的RNAi显著靶向抑制了survivin基因在人胶质瘤细胞U251中的表达，并明显诱导了U251细胞发生凋亡。     

Effect of small interfering RNA targeting survivin gene on biological behaviour of bladder cancer

Background Bladder cancer is the most common type of urinary system tumours. It is frequently associated with genetic mutations that deregulate the cell cycle and render these tumours resistant to apoptosis. Survivin, a newly discovered member inhibitor of apoptosis protein （IAP） family in several human cancers, by inducing cell proliferation and inhibiting apoptosis is frequently activated in bladder cancer. We studied the influence of small interfering RNA （siRNA） targeting survivin on the biological behaviour of bladder cancer cells. Methods A double strand survivin target sequence specific siRNA was designed and synthesized. After transfection of bladder cancer cell line T24 by siRNA/liposome complex with increasing concentrations （50-200 nmol/L）, the transfectant cells were intratumourally injected at different doses （5 μg or 50 μg）. The effects were measured in vitro and in vivo. Results The selected siRNA efficiently down-regulated survivin mRNA expression in a dose and time dependent manner. The maximal effect was achieved at the concentration of 100 nmol/L, at which survivin expression level was down-regulated by 75.91%. The inhibition rate of cell growth was 55.29% （P〈0.01） and the markedly increased apoptotic rate was 45.70% （P〈0.01）. In vivo intratumoural injection of 50 μg siRNA-survivin could notably orevent the growth of bladder cancer （P〈0.01） in xenografted animals. Conclusion The application of siRNA-survivin could markedly inhibit survivin expression in bladder cancer cell line by inducing apoptosis and inhibiting the growth of the tumour. It may become a new gene therapy tool for bladder cancer.     

RNA干扰技术特异性抑制骨肉瘤survivin的表达

目的:体外转录合成survivin siRNA,观察其在骨肉瘤细胞株U2-OS中抑制survivin的表达情况.方法:体外转录合成survivin序列特异性双链RNA(dsRNA),转染U2-OS细胞株中,用RT-PCR和Western blot法检测转染前后survivin基因的mRNA和蛋白的表达,MTF法检测细胞增殖,观察U2-OS细胞生物学特性的改变.结果:转染特异性siRNA的细胞其survivin mRNA及蛋白表达均下调,干涉后细胞的增殖受到抑制.结论:体外转录合成特异性survivin siRNA能有效抑制骨肉瘤细胞株U2-OS中survivin的表达,抑制细胞的增殖,RNA干扰技术为骨肉瘤的治疗提供了一种新策略.     

沉默RRM1可逆转乳腺癌细胞MCF-7/R对紫杉醇的耐药性

目的阐明沉默核苷酸还原酶M1亚基（RRM1）对乳腺癌耐药细胞MCF-7/R逆转耐药的作用。方法通过高浓度紫杉醇诱 导耐药株MCF-7/R;运用Kaplan-Meier Plotter绘制RRM1基因的生存曲线;通过siRNA沉默MCF-7/R细胞中RRM1基因表达, 并用Western blot 和qRT-PCR方法检测蛋白和基因水平的表达,筛选出高效特异的si-RRM1 序列;将该si-RRM1 序列转染 MCF-7/R细胞,筛选得到能稳定抑制RRM1基因表达的细胞株MCF-7/R/siRNA;四甲基偶氮唑盐（MTT）法和5-乙炔基-2’脱氧 尿嘧啶核苷（EdU）染色法检测RRM1沉默后MCF-7/R细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡,并观察周期、凋 亡相关蛋白的变化;构建裸鼠皮下移植瘤模型,观察沉默RRM1后给予紫杉醇治疗对裸鼠体内抑瘤效果的影响。结果生存曲 线分析显示RRM1基因表达与乳腺癌患者的生存率呈负相关（P=0.000）;MCF-7/R细胞中证实RRM1蛋白和mRNA表达水平 较MCF-7细胞均显著升高（P<0.01）;si-RRM1序列筛选中,转染si-RRM1-04组细胞的RRM1蛋白和mRNA表达量降低最为显 著（P<0.001）;沉默RRM1后,MCF-7/R细胞对紫杉醇的敏感性显著增加,细胞晚期凋亡比例明显升高（P<0.001）,同时降低Akt 蛋白的磷酸化并抑制凋亡蛋白Bcl-2 的表达,促进p53 蛋白表达水平的增加（P<0.001）;裸鼠实验显示,与si-NC组相比,沉默 RRM1后给予紫杉醇治疗可显著抑制裸鼠体内肿瘤的生长（P<0.001）。结论沉默RRM1可通过诱导细胞凋亡增加提高MCF- 7/R细胞化疗敏感性,逆转乳腺癌紫杉醇化疗耐药。     

RNA干扰survivin对卵巢癌HO-8910PM细胞周期的影响

目的 探讨RNA干扰survivin基因对卵巢癌HO-8910PM细胞周期的影响.方法 实验分3个组：siR-NA组,采用脂质体法将靶向survivin siRNA荧光真核表达质粒载体pGPU6-GFP-survivin-shRNA转染卵巢癌HO-8910PM细胞;空白对照组,单纯细胞培养;阴性对照组,用表达与survivin序列无同源性的siRNA片段质粒pGPU6-GFP-NC转染细胞.于转染后48 h和72 h,用PI单染法流式细胞术检测各组HO-8910PM细胞周期的变化以及Western blot检测survivin蛋白的表达情况.结果 PI单染流式细胞仪检测细胞周期结果表明,与空白对照组和阴性对照组相比较,2个时间点siRNA组转染后的G0/G1期细胞比例明显增加,而G2/M期细胞比例均下降（P＜ 0.05）;Western blot结果证实,siRNA组的HO-8910PM细胞survivin蛋白的表达量明显下调.结论 导入survivin基因特异性的siRNA可导致卵巢癌HO-8910PM细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞增殖受阻,且细胞sur-vivin蛋白表达量下降.     

靶向survivin反义寡核苷酸对MCF-7乳腺癌细胞系Survivin mRNA及紫杉醇药物敏感性的影响

目的探讨靶向survivin基因的反义寡核苷酸（ASODN）对MCF-7细胞的增殖、凋亡及药物敏感性等生物学行为的影响。 方法采用脂质体介导survivin-ASODN转染MCF-7乳腺癌细胞系，RT-PCR检测survivin mRNA的表达，MTT法检测细胞增殖能力及对药物的敏感性，流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。 结果survivin-ASODN可有效下调survivin表达水平，抑制细胞的生长，并呈时间剂量依赖关系；流式细胞术示，24h反义转染组细胞周期被阻滞于G2/M期，细胞凋亡率增加到15.23%。 紫杉醇作用早期（6h），survivin mRNA 表达增高，利于肿瘤细胞逃避紫杉醇诱导的细胞凋亡，增加肿瘤耐药的机会；反义转染组中细胞早期survivin mRNA表达上调受到抑制，对药物的敏感性增加。 结论survivin基因ASODN转染细胞后，下调survivin的表达，细胞凋亡增加，提高了对药物的敏感性。