三维适形调强放疗联合口服阿苯哒唑对新疆大鼠继发性骨棘球蚴病的治疗作用

目的通过观察三维适形调强放疗(IMRT)及IMRT放疗联合阿苯哒唑对新疆大鼠继发性骨棘球蚴的治疗作用,探讨IMRT联合口服阿苯哒唑对新疆大鼠继发性骨棘球蚴病的治疗作用。方法选取成年股骨继发性棘球蚴病大鼠100只并随机分为2组,一组接受20Gy剂量的IMRT,另一组接受20Gy剂量的IMRT及口服阿苯哒唑(100mg/kg.d),3个月后活杀取材,取2组大鼠股骨棘球蚴包囊行HE染色、电镜观察后,TUNEL法定量检测棘球蚴包囊中凋亡的生发层细胞。结果 2组大鼠治疗后光镜、电镜下均可观察到大鼠股骨棘球蚴包囊的损伤,2组大鼠骨棘球蚴包囊中生发层细胞凋亡指数差异无统计学意义(t=0.193,P>0.05)。结论 IMRT对治疗继发性骨棘球蚴包囊有一定作用,阿苯哒唑对新疆大鼠继发性骨棘球蚴的治疗作用不确切。     

放射线对骨包虫的杀灭作用及机制研究：三维适形调强放疗对骨细粒棘球蚴原头节杀灭效果的实验研究

目的 观察三维适形调强放疗（IMRT）对大鼠骨细粒棘球蚴原头节的杀灭效果,探讨IMRT对骨细粒棘球蚴病的治疗有效性。方法 选取双股骨骨细粒棘球蚴病大鼠30只,对30只大鼠左侧骨细粒棘球蚴病区给予总剂量为40Gy的IMRT放疗,于放疗结束3d后,取鼠左、右侧股骨细粒棘球蚴原头节,行伊红染色,检测原头节死亡率;采用酶化学染色法检测原头节琥珀酸脱氢酶（SDH）的活性变化,观察IMRT对大鼠骨细粒棘球蚴的治疗效果。结果 IMRT作用3d后,原头节伊红染色结果 可观察到,经IMRT治疗的大鼠左侧股骨的骨细粒棘球蚴原头节整体结构消失,出现深蓝色着色,原头节死亡率为（51．22±19．34）％,远高于未经IMRT治疗的右侧骨细粒棘球蚴原头节死亡率（3．55±1．97）％,差异有统计学意义（P〈0．05）;原头节的琥珀酸脱氢酶（SDH）检测发现,经IMRT治疗的大鼠左侧股骨的骨细粒棘球蚴原头节的琥珀酸脱氢酶活性较右侧明显减弱,且左侧骨细粒棘球蚴原头节琥珀酸脱氢酶SDH产物的平均光密度数值为（0．7193±0．1145）,远大于右侧的（0．1015±0．0320）,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 IMRT可促进鼠骨细粒棘球蚴原头节的死亡,其作用机制可能是通过改变琥珀酸脱氢酶的活性而实现的。     

IMRT对新疆大鼠继发性骨棘球蚴杀灭效果的实验研究

目的 观察三维适形调强放疗（IMRT）对新疆大鼠继发性骨棘球蚴的杀灭效果,探讨IMRT对骨棘球蚴病的治疗有效性。方法 选取股骨继发性棘球蚴病大鼠50只,对50只大鼠左侧股骨棘球蚴病区给予剂量40Gy的IMRT放疗,于放疗1w后活杀取材,取大鼠左、右股骨棘球蚴包囊后行电镜观察,应用RT—PCR法定量检测骨棘球蚴包囊中凋亡相关基因Caspase-3的表达情况。结果 IMRT作用1w后,电镜下均可观察到接受IMRT治疗的大鼠左侧股骨的骨棘球蚴包囊存在明显的放射损伤,而右侧未出现;RT—PCR法检测发现接受IMRT治疗的大鼠左侧股骨的骨棘球蚴包囊的细胞中凋亡相关基因Caspase-3大量表达,RQ值为（67．39±17．35）,而右侧则极少量表达,RQ值为（1.43±0.53）,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 IMRT可促进新疆大鼠继发性骨棘球蚴包囊细胞的凋亡,其作用机制可能是通过调节凋亡相关蛋白Caspase-3而实现的。     

IMRT对鼠继发性骨棘球蚴杀灭效果及周围神经损伤的实验研究

目的 观察三维适形调强放疗（IMRT）对鼠继发性骨棘球蚴的杀灭效果及周围神经的损伤,探讨IMRT对骨棘球蚴病治疗的有效性及安全性。方法 选取股骨继发性棘球蚴病大鼠50只,对50只大鼠股骨棘球蚴病区给予剂量40Gy的IMRT放疗,于放疗1w后活杀取材,取大鼠股骨棘球蚴包囊,应用Westernblot法定量检测骨棘球蚴包囊中凋亡相关蛋白Caspase-3的表达情况,取相同部位、相同位置的坐骨神经,行HE染色、电镜观察坐骨神经神经元的变化。结果 IMRT作用1w后,Western blot法检测到大鼠股骨棘球蚴包囊的细胞中凋亡相关基因Caspase-3大最表达,坐骨神经神经元结构正常,未受到放射线损伤。结论 IMRT对鼠继发性骨棘球蚴病有很好的治疗效果,而且有很高的安全性。     

三维适形调强放疗治疗新疆骨棘球蚴病大鼠后T淋巴细胞亚群的变化及意义

目的：通过观察三维适形调强放疗（Intensity modulated radiation therapy,IMRT）对新疆大鼠继发性骨棘球蚴进行治疗后大鼠T淋巴细胞亚群的影响,探讨IMRT对骨包虫的杀灭机制是否与射线激发宿主对骨包虫有效的免疫反应有关。方法选取股骨继发性棘球蚴病大鼠50只,随机分为IMRT组及空白对照组各25只,以IMRT方式分别对IMRT组25只大鼠左侧股骨棘球蚴病区给予40 Gy剂量的放疗,于放疗1周后所有大鼠活杀取材,取脾制备细胞悬液,用流式细胞术（FCM）检测CD4^＋/CD8^＋的值。结果 IMRT作用1周后,流式细胞仪检测结果提示,IMRT组大鼠脾淋巴细胞CD4^＋/CD8^＋的值（2.96±1.90）明显高于空白对照组（1.65±1.31）,差异具有统计学意义（t=0.544,P〈0.05）。结论 IMRT可促进新疆大鼠继发性骨棘球蚴的凋亡,其作用机制可能是与射线激发宿主对骨包虫有效的免疫反应有关。     

昆明种小鼠棘球蚴病感染动物模型的建立

目的建立细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病小鼠的动物实验模型。方法4周龄昆明种小鼠60只,分为细粒棘球蚴病组和多房棘球蚴病组（每组20只）,并各设空白对照组（10只）,均雌雄各半。分别腹腔注射人源细粒棘球绦虫原头蚴悬液或鼠源泡球蚴原头蚴混悬液0．2mL（含庆大霉素250IU·mL^-1,原蚴头500个·mL^-1）,空白对照组腹腔注射0．2mL,含庆大霉素250IU·mL^-1,PBS液。通过病检和腹外观察,了解小鼠包囊的生长情况、重量、数量、直径和不育囊率。结果两种包虫病的感染率均为100％。第350天剖杀细粒棘球蚴原头节感染的昆明小鼠,不育囊率为100％,所有细粒棘球蚴包囊内未见原头蚴,雌、雄小鼠体内包囊的直径和数量差别无统计学意义;而第90天剖杀的泡球蚴感染小鼠动物模型不育囊率平均为15％,85％的感染泡球蚴病灶内含原头蚴。雌、雄小鼠体内泡球蚴包囊的体积大小和重量差异有统计学意义（P〈0．01）。结论雌鼠对多房棘球蚴感染比雄鼠更敏感,多房棘球蚴在小鼠体内生长快,适宜保种;雌鼠和雄鼠对细粒棘球蚴的敏感性无明显区别,细粒棘球蚴在小鼠体内生长慢,不宜保种。     

昆明种小鼠棘球蚴病感染动物模型的建立

目的建立细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病小鼠的动物实验模型。方法 4周龄昆明种小鼠60只,分为细粒棘球蚴病组和多房棘球蚴病组(每组20只),并各设空白对照组(10只),均雌雄各半。分别腹腔注射人源细粒棘球绦虫原头蚴悬液或鼠源泡球蚴原头蚴混悬液0.2 mL(含庆大霉素250 IU.mL-1,原蚴头500个.mL-1),空白对照组腹腔注射0.2 mL,含庆大霉素250 IU.mL-1,PBS液。通过病检和腹外观察,了解小鼠包囊的生长情况、重量、数量、直径和不育囊率。结果两种包虫病的感染率均为100%。第350天剖杀细粒棘球蚴原头节感染的昆明小鼠,不育囊率为100%,所有细粒棘球蚴包囊内未见原头蚴,雌、雄小鼠体内包囊的直径和数量差别无统计学意义;而第90天剖杀的泡球蚴感染小鼠动物模型不育囊率平均为15%,85%的感染泡球蚴病灶内含原头蚴。雌、雄小鼠体内泡球蚴包囊的体积大小和重量差异有统计学意义(P<0.01)。结论雌鼠对多房棘球蚴感染比雄鼠更敏感,多房棘球蚴在小鼠体内生长快,适宜保种;雌鼠和雄鼠对细粒棘球蚴的敏感性无明显区别,细粒棘球蚴在小鼠体内生长慢,不宜保种。     

丙硫咪唑对小鼠细粒棘球蚴作用的观察

给已发育成细粒棘球蚴100d的C_(57)BL/6J小鼠经口灌注丙硫咪唑悬液每日200mg/kg,用药8周后解剖观察。用药组小鼠体内细粒棘球蚴的最大直径和总重量均小于对照组,用药组生发组织和角质层病理损伤程度及数量均大于对照组。另给NIH小鼠腹腔接种原头蚴后第三天同法给药4周,可明显降低小鼠对细粒棘球蚴的感染率。实验结果表明丙硫咪唑可抑制细粒棘球蚴发育生长,破坏生发层组织和角质层结构,并且具有预防原头蚴再发育成囊的作用。     

细粒棘球蚴病的实验研究——Ⅵ 细粒棘球蚴生发膜超微结构的观察

细粒棘球蚴的生发膜具有重要的生理功能,因此对棘球蚴生发膜形貌和超微结构的研究受到普遍重视。近年来国外应用透射电子显微镜(简称TEM)对人、牛、羊、猪、马等不同种属的原发感染棘球蚴生发膜进行了一些观察,而有关实验性继发性感染的棘球蚴育囊的超微结构迄今尚未见报导。因此我们应用TEM研究了小鼠细粒棘球蚴育囊的生发膜,观察到一些新的形态结构,现报导如下。     

Nrf2信号通路抑制剂对细粒棘球蚴作用的研究

目的 研究Nrf2信号通路抑制剂DRB对体外培养的细粒棘球蚴原头节活力的影响。方法 从自然感染细粒棘球蚴病的羊肝中获取新鲜细粒棘球蚴原头节,并于RPMI 1640培养基体外培养。实验分为DMSO空白对照组,25 g/L、50 g/L、75 g/L DRB处理组。通过伊红染色,在倒置显微镜下观察原头节活力和形态变化,并绘制生长活力曲线。在扫描电镜下观察原头节超微结构变化。结果 对照组和25 g/L DRB处理组体外作用细粒棘球蚴原头节后,不同时间原头节活力比较,差异无统计学意义（F空白对照组=0.542,P＞0.05;F25 g/L DRB处理组=0.658,P＞0.05）。50 g/L DRB处理组和75 g/L DRB处理组体外作用细粒棘球蚴原头节后,不同时间原头节活力比较,差异均有统计学意义（F50 g/L DRB处理组=6.686,P＜0.01;F75 g/L DRB处理组=10.756,P＜0.01）。随着用药时间的延长和药物浓度的增加,DRB对原头节活力的抑制效果增强,且原头节超微结构发生改变。结论 高浓度的Nrf2抑制剂对体外培养的细粒棘球蚴原头节有抑制作用,并且有一定的浓度和时间依赖性。Nrf2信号通路是抗氧化应激反应的关键因子,对细粒棘球蚴Nrf2信号通路进行研究,可能为治疗细粒棘球蚴病提供一个新思路。     

和厚朴酚对人宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨和厚朴酚抑制人宫颈癌Hela细胞增殖及诱导其凋亡的作用。方法利用MTT检测和厚朴酚在不同浓度和时间下对Hela细胞增殖的影响;用流式细胞术、Hoechst 33258荧光染色和DNA ladder检测和厚朴酚作用下Hela细胞的凋亡。结果MTT结果显示和厚朴酚可明显抑制Hela细胞的增殖,且抑制率存在剂量和时间依赖性;流式结果表明10μg/mL和20μg/mL和厚朴酚作用细胞24h后,凋亡细胞的比例分别为22.5%和62.2%,而对照组为8.7%;和厚朴酚处理过的Hela细胞,经Hoechst33258染色后细胞、细胞核出现明显的凋亡形态学变化,在DNA琼脂糖凝胶上可见特征性的梯状条带。结论和厚朴酚具有抑制Hela细胞增殖和诱导凋亡的作用。     

RNAi技术沉默VEGF-C基因对小鼠4T1细胞生物学行为的影响

目的体外观察siRNA靶向干扰VEGF-C基因对4T1小鼠乳腺癌细胞的生物学行为影响。方法选用HifectinII真核转染试剂将化学修饰的针对小鼠VEGF-C基因的siRNA转染4T1小鼠乳腺癌细胞株,设立空白对照组(只加培养基),脂质体组(每孔加培养基与0.5μL Hifectin II真核转染试剂),SCR组(100 nM),siRNA组(100 nM)。蛋白印迹试验检测转染前后细胞中VEGF-C的蛋白水平表达的变化;半定量RT-PCR检测VEGF-C、Survivin、BCL-2、BAX的mRNA水平表达的变化;MTT比色法检测细胞的增殖;Transwell小室方法检测肿瘤细胞的侵袭性改变;Hochest33258荧光染色观察细胞凋亡。结果转染VEGF-C siRNA 48 h后4T1细胞的VEGF-C基因的mRNA和蛋白水平表达明显降低,空白对照组、脂质体组和siRNA SCR组各指标差异无显著性(P>0.05);4T1细胞生长受到抑制,Transwell小室方法检测肿瘤细胞的侵袭性降低,Hoechst 33258荧光染色显示细胞内可见凋亡小体。结论化学修饰siRNA介导的RNA干扰能下调靶基因VEGF-C的表达并能够促进4T1细胞的凋亡,抑制4T1细胞的增殖与侵袭性。     

哌唑嗪对K562白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究α1受体拮抗剂哌唑嗪在体外对K562白血病细胞系增殖及凋亡的影响。方法：采用四唑盐（MTT）比色实验、集落形成实验为指标观察哌唑嗪对K562细胞增殖作用的影响;采用细胞形态学、Hochset33258荧光染色实验、流式细胞术检测细胞凋亡。结果：哌唑嗪能抑制K562细胞的增殖,这种增殖抑制作用呈剂量依赖关系。在5×10-6mol/L哌唑嗪作用下,K562细胞在形态学上可以看见凋亡细胞;流式细胞术也可检测到凋亡峰。结论：哌唑嗪能抑制K562白血病细胞的增殖,并能诱导其凋亡。     

miR-92a反义寡核苷酸对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-92a反义寡核苷酸(ASO)对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将胃癌细胞SGC-7901和MKN-45分为反义寡核苷酸处理组和无义寡核苷酸对照组,分别转染miR-92a ASO和无义寡核苷酸,同时设未转染空白对照组;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测处理前以及处理48 h后胃癌细胞中miR-92a的表达变化;MTT法检测细胞增殖情况;AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞术和Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡情况。结果 Anti-miR-92a作用48 h后,miR-92a在两种胃癌细胞中的表达均显著下降(P<0.05);细胞增殖受到明显抑制(P<0.05);细胞凋亡率明显增加(P<0.05),荧光染色显示其细胞核呈凋亡细胞的特征样改变。结论以miR-92a为靶标的ASO可以有效抑制胃癌细胞增殖,促进其凋亡。     

模拟IMRT对CNE-2细胞周期及Cyclin D1/Cyclin B1表达的影响

目的 探讨模拟调强放射治疗(IMRT)对人鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE-2)细胞周期及细胞周期素Cyclin D1、Cyclin B1转录水平的影响.方法 CNE-2分为急速照射(ART)组和模拟IMRT组,两组分别给予6MV X线2、4、6和8 Gy 四个剂量点的照射;ART组的照射时间为1～3 min,模拟IMRT组的完成时间为35 min.另设空白对照组,不接受照射,其余条件相同.照射后12 h,流式细胞术分析细胞周期分布,RT-PCR检测细胞周期素Cyclin D1和Cyclin B1的转录水平.结果 在相同剂量点,模拟IMRT组G2期细胞比例均低于ART组,两组G2期细胞比例随照射剂量的增加而逐渐增加.模拟IMRT组与ART组在相同剂量点之间比较,Cyclin D1转录水平的差异均无统计学意义(P均＞0.05);Cyclin B1转录水平的差异均有统计学意义(P均<0.05),且随照射剂量的增加而下降,模拟IMRT组Cyclin B1的表达高于ART组.结论 模拟IMRT照射时间延长对G2期阻滞作用下降,细胞周期素Cyclin B1的表达相对升高.