广东地区CML患者中HLA-A,B,DRB1的表达与分析

为了调查慢性髓系白血病（CML）患者中HLA—A、B、DRB1基因多态性的表达，探讨HLA与CML之间的可能关联，采用DNA扩增基础上的反向序列特异性寡核苷酸杂交（PCR—RSSO）技术，对广东地区293例CML患者和随机同期采集的406名汉族健康献血者的HLA—A、B、DRB1位点进行基因多态性分型，并对2组间基因频率进行了比对分析。结果显示：CML组HLA—A＊24基因频率为15．53％，显著低于对照组22.09％（RR=0．63，P=0．005），HLA—B＊13基因频率为10．41％，与对照组6．74％相比则显著增高（RR=1.68，P=0.016），HLA—DRB1＊14基因频率为7．51％，与对照组11．89％相比显著降低（RR=0．58，P=0．008）。结论：HLA—A＊24、HLA—DRB1＊14在广东地区CML患者中表达较正常人明显减低，HLA—B＊13在广东地区CML患者中表达较正常人明显升高。HLA—A＊24、HLA—DRB1＊14是否为广东地区CML患者的保护性基因标记及HLA—B＊13是否为其易感性基因标记尚需进一步研究明确．     

三氧化二砷协同肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体抗胃癌细胞的作用及其机制

目的研究三氧化二砷（As2O3）联合肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体（TRAIL）对胃癌细胞生长和凋亡的影响及其机制。方法人胃腺癌细胞株SGC7901以As2O3、rsTRAIL及两者联用处理；用MTT法检测细胞生长；用双染色流式细胞仪检测细胞凋亡；用间接免疫荧光染色结合流式细胞技术检测细胞表面TRAIL R1／DR4和TRAIL R2／DR5分子表达；RT—PCR方法检测TRAIL R1／DR4和TRAIL R2／DR5 mRNA表达。结果As2O3和rsTRAIL在单用或联用时均可以抑制胃癌细胞SGC7901生长，并在一定范围内呈时间、剂量依赖性；联合用药组抑制率显著高于单用As2O3或rsTRAIL组（P〈0．01），金正均方法分析提示两药联用有协同抑制细胞生长效应。As2O3和rsTRAIL在单用或联用时均可以诱导胃癌细胞SGC7901凋亡，联合用药组细胞凋亡率显著高于单用As2O3或rsTRAIL组（P〈0．01）。As2O3单独或联合rsTRAIL作用于SGC7901细胞24h后，死亡受体TRAIL R1／DR4和TRAIL R2／DR5在细胞表面的表达明显上调（P〈0．01），其mRNA表达水平亦相应增加（P〈0．01）。结论As2O3联合rsTRAIL可以协同抑制胃癌细胞SGC7901生长并显著增强两药诱导胃癌细胞凋亡的作用，其机制可能是As2O3增加细胞TRAIL R1／DR4和TRAIL R2／DR5 mRNA表达、上调细胞表面TRAIL死亡受体从而增加胃癌细胞SGC7901对rsTRAIL的敏感性。     

脑梗死患者外周血单个核细胞SOCS-3动态变化及临床意义

目的探讨脑梗死患者外周血单个核细胞（PBMC）中细胞因子信号转导抑制因子-3（SOCS-3）表达规律及其临床意义。方法实时荧光定量PCR法检测脑梗死患者PBMC中SOCS-3mRNA表达，酶联免疫吸附法（ELISA）检测脑梗死患者血样中血浆白介素-6（IL-6）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。记录所有患者发病3d内影像学（CT／MRI）脑梗死体积。观察并记录患者入院48h内及发病三月时的神经功能缺损评分。结果（1）脑梗死患者发病后1-6dPBMC中SOCS-3mRNA表达显著高于对照组（P〈0．05），其表达随时间延长呈下降趋势，至第7、14天时与对照组无显著差异。（2）进展型脑梗死患者发病后第1天PBMC中SOCS-3mRNA表达显著低于完全型脑梗死患者，但较对照组高（P〈0．05）；其血浆中IL-6及TNF-α水平则显著高于完全型脑梗死患者。（3）梗死体积大小不同组患者发病后第1天PBMC中SOCS-3mRNA表达无显著差异（P〈0．05）；血浆中IL-6及TNF-α水平含量高低与梗死体积呈正相关。（4）脑梗死患者发病三月时改良Rankin量表（mRS）评分与发病第l天SOCS．3mRNA表达呈负相关。与血浆IL-6、TNF-α呈正相关。结论脑梗死患者急性期PBMC中SOCS-3参与脑梗死发生、发展的病理生理过程。提示JAK／STAT／SOCS-3这条信号通路可能通过抑制炎症细胞因子的表达从而减轻脑缺血后炎症反应．改善神经功能缺损．成为内源性的神经保护机制之一。     

醛脱氢酶8A1融合蛋白的表达及其多克隆抗体的制备与鉴定

目的:重组表达醛脱氢酶8A1(aldehyde dehydrogenase 8 family member A1,ALDH8A1)蛋白,制备其多克隆抗体,并进行抗体的特异性鉴定,以及蛋白在组织和细胞内的定位。方法:以成人肝cDNA文库为模板,PCR扩增ALDH8A1目的片段,并构建重组表达载体pGEX-4T-1-ALDH8A1和pET-32a-ALDH8A1,经测序鉴定插入载体的DNA片段序列正确后,转化大肠杆菌BL21,诱导表达GST-ALDH8A1和His-AL-DH8A1融合蛋白。经Western blot确定其为目的蛋白后,纯化重组融合蛋白,并以GST-ALDH8A1免疫家兔制备抗人AL-DH8A1多克隆抗体。用His-ALDH8A1包板,ELISA法测定兔抗人ALDH8A1血清效价;Western blot鉴定兔抗人ALDH8A1血清在重组蛋白和天然蛋白中的反应特异性;免疫组化法确定ALDH8A1蛋白在组织和细胞中的定位。结果:成功构建重组表达载体pGEX-4T-1-ALDH8A1和pET-32a-ALDH8A1;获得包涵体形式表达的GST-ALDH8A1和可溶性形式表达的His-ALDH8A1融合蛋白;应用纯化的重组蛋白GST-AL-DH8A1免疫家兔,获得兔抗人ALDH8A1血清,ELISA测定抗血清的效价为1∶256000。Western blot结果显示,制备的AL-DH8A1兔多抗可特异地识别成人肝总蛋白以及293T、A549、HeLa、U937、HepG2细胞总蛋白中一个相对分子质量(Mr)约53000的ALDH8A1天然蛋白,与文献报道的ALDH8A1的Mr一致,表明ALDH8A1在正常肝组织与癌细胞中都有表达。免疫组化结果表明ALDH8A1蛋白定位于人肝癌细胞胞质中。结论:成功制备出兔抗人ALDH8A1多克隆抗体,此抗体可应用于ELISA,Western blot和免疫组化检测,为进一步研究ALDH8A1的功能奠定了基础。     

GFP mRNA在树突状细胞中的转染及其影响因素分析

目的:探讨绿色荧光蛋白(GFP)mRNA在树突状细胞(DC)中的转染及其影响因素。方法:选用gfp报告基因,在体外利用含T7RNA聚合酶的mMESSAGERNA转录试剂盒,合成含有帽子结构的GFPmRNA,通过酵母多聚A聚合酶加尾,制备结构完整的GFPmRNA。与此同时,从人的外周血液中分离单核细胞,并在体外经GM-CSF和IL-4刺激分化为DC。通过转染试剂介导将合成的GFPmRNA转染到DC内并使其表达。采用流式细胞术检测其转染效率和表达水平。结果:体外合成GFPmRNA,经转染试剂介导,实现了gfp基因在DC中的表达。不同的转染试剂、mRNA用量和细胞密度对mRNA的转染效率有较大的影响。采用Transmes-sengerTransfectionKit转染试剂,1μgGFPmRNA在200μLX-VIVO-15无血清培养基中的转染密度为2.5×109/L的DC,可获得较好的转染效果(转染效率达27%以上)。结论:在适当的条件下,通过mRNA转染DC可获得较高的转染效率。     

胸段食管癌5野和7野调强放疗计划的剂量学对比研究

目的 比较胸段食管癌5野调强放疗计划和7野调强放疗计划的靶区和相关危及器官的剂量学差异,为食管癌的放疗计划的设计提供参考。方法 选择2015年7月至2017年2月在安徽医科大学第一附属医院接受调强放疗的30例胸段食管癌患者,患者分别设计5野和7野调强计划,比较2个治疗计划的靶区和危及器官的剂量学差异。结果 7野调强计划的靶区的适形指数和均匀指数均优于5野调强计划（P<0.05）;5野调强计划的左右肺V₅低于7野调强计划,差异有统计学意义（P<0.05）;但5野计划的左肺V₂₀、V₃₀及右肺的V₂₀高于7野计划,差异有统计学意义（P<0.05）。2种放疗计划的脊髓和心脏的剂量学参数差异无统计学意义（P>0.05）。结论 5野调强计划虽然没有7野调强计划的靶区适形度高,但是在减少肺部低剂量照射体积方面更具有优势,可以满足临床上大多数情况的要求。     

猪和鸡不同部位肌组织铜、锌、铁含量分析

猪和鸡不同部位肌组织铜、锌、铁含量分析仲飞，李秀锦，马建军，刘宝利（河北农业技术师范学院，昌黎０６６６００）关键词：猪；鸡；肌组织；微量元素ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅＣｏｎｔｅｎｔｓｏｆＣｏｐｐｅｒ，ＺｉｎｃａｎｄＩｒｏｎｉｎｔｈｅＤｉｆｆｅｒｅｎｔ...     

循证医学背景下案例教学法应用于临床肿瘤学教学的模式构建及效果评价

目的 探讨在循证医学时代,将案例教学法应用于临床肿瘤学教学的模式构建及效果评价。方法 以104名七年制临床医学专业实习生作为研究对象,随机分为对照组和观察组,每组各52名学生。对照组接受传统教学模式即“老师教,学生听”,观察组接受案例教学模式即“老师适当引导,学生自主学习”。结果 观察组学生对专业知识掌握、课堂效果评价、诊疗思维提升、自学能力培养、专业认可度和考试成绩等方面均优于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.001)。结论 在循证医学时代,案例教学法应用于临床肿瘤学教学有助于提升学生的诊疗思维、促进主动学习、提高教学效果。