碱性成纤维细胞生长因子对骨髓基质细胞增殖与成骨活性的影响

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对骨髓基质细胞的增殖及成骨活性的影响。方法：传代骨髓基质细胞的培养中加入不同浓度的bFGF，行细胞增殖和蛋白含量测定以及碱性磷酸酶的活性检测与钙结节的形成观察。结果：bFGF浓度在0～10ng／ml，蛋白含量及细胞数量随浓度的增高而增多，10ng／ml达到最大，浓度为100ng／ml反有下降。各组ALP活性没有降低，Von Kossa染色均为阳性。结论：bFGF可促进骨髓基质细胞的增殖，并保持骨髓基质细胞成骨的特性。     

体外分离和扩增兔骨髓间质干细胞及其生物学特性研究

目的　探讨体外培养兔骨髓间质干细胞 (MSC)生物学及培养方法 ,为组织工程研究奠定实验基础。方法　选用新西兰大白兔 ,于胫骨近端或股骨抽取骨髓 ,分离 ,扩增骨髓干细胞 ,原代培养后 ,将细胞按 1∶1比例传代培养 ,并用传 1～ 5代细胞按 1× 10 4种植于 96孔板内 ,绘制生长曲线 ,贴壁率 ,并加入不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) ,测其促进MSC的增殖情况。结果　原代骨髓基质细胞生长状态良好 ,传代至第 5代仍保持干细胞形态特点 ,且生长曲线基本相同 ,bFGF可明显促进MSC的增殖 ,呈量效关系。结论　应用本实验方法 ,可无创获取兔MSC ,体外稳定扩增 ,生长速度快 ,表明兔MSC可作为骨 /软骨组织工程的种子细胞。     

血清及细胞因子对人骨髓间质干细胞增殖的影响

目的 :探讨影响体外骨髓间质干细胞增殖的因素。方法 :取胸部外科手术无血液系统疾病病人肋骨 ,采用密度梯度离心法分离单个核细胞 ,以每皿 5× 10 5个的细胞浓度接种 ,9d后 ,瑞士 吉姆萨染色 ,计数集落并进行统计分析。结果 :在 5 %～ 30 %的血清浓度范围内 ,骨髓间质干细胞集落数随血清浓度的升高而增多。bFGF ,IL 1α ,IL 3,IL 6等细胞因子可促进骨髓间质干细胞的增殖。结论 :血清浓度与细胞因子bFGF ,IL 1α ,IL 3,IL 6可促进MSC的增殖     

人骨髓基质干细胞克隆对脐血造血干细胞体外扩增作用的研究

目的：探讨人骨髓基质干细胞的克隆化培养及其对体外造血干细胞扩增的影响。方法：取正常肋骨分离骨髓，制备单个核细胞贴壁培养，约5d后取集落样生长的梭形细胞扩增培养，传代、将分选的脐血造血干／祖细胞接种到克隆培养的人骨髓基质干细胞及其他培养条件液上，比较不同培养条件及不同代次骨髓基质干细胞对造血干／祖细胞扩增能力及集落形成能力的影响。结果：人骨髓基质干细胞能扩增达20代以上，经流式细胞仪检测证实基质干细胞，单纯细胞因子组和细胞因子加基质干细胞组能有效扩增造血细胞，而后者有维持长期造血的作用。结论：该克隆培养方法能有效扩增骨髓基质干细胞，培养的细胞有体外支持长期造血的作用。     

体外培养及成纤维细胞生长因子对骨髓基质细胞生长的影响

目的　研究体外培养及成纤维细胞生长因子对骨髓基质细胞生长的影响。方法　抽取兔骨髓基质细胞体外培养 ,倒置显微镜动态观察 ,从原代培养 (P0 )中观察到细胞集落的形态有明显差异 ,提示骨髓基质细胞是一个由多种细胞组成的混合体。在培养液中加入碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF ,5ng/ml)。 结果　第一代细胞(P1)的生长速度增至对照组的 1.5倍。而未经bFGF处理的细胞活跃增殖能力只能保持 4～ 5代 ,随后即发生退化 ;而经bFGF处理的细胞 ,传 10代以上仍能保持活跃的增殖能力。结论　bFGF能促进骨髓基质细胞增殖并长期保持其生物活性。     

体外培养bFGF,PDGF,TGF-β对兔MSC的ALP活性和增殖的影响

目的　在正常生理与病理状态下成纤维细胞生长因子 (FGF)、血小板源性生长因子 (PDGF) ,转化生长因子 β (TGF - β)三种生长因子调节骨的生长发育 ,影响骨折的愈合过程 ,本研究探索在体外培养条件下该三种因子对新西兰白兔骨髓基质细胞增殖与分化的影响 ,为下一步观察这些因子与其它因子联合应用提供基础研究资料。方法　抽取新西兰白兔股骨上穿刺点骨髓进行体外原代培养 ,分离骨髓基质细胞 (Marrowstromalcells,MSC) ,于第 12d行传代培养 ,以 2× 10 3 个细胞 /孔 ,定量接种于 96孔板中 ,同时按照不同剂量加入上述三种因子 ,分别在培养第 10d时用酶动力法检测碱性磷酸酶活性 ,在培养第 5d细胞近于汇合时用MTT法检测细胞的增殖情况。结果　①随着bFGF剂量增加 ,MSCALP活性呈下降趋势 ,当bFGF浓度超过 10 0ng/ml后OD值波动在 0 0 2 0～ 0 0 0 5之间 ,仅是对照组的 1/ 3弱 (P <0 0 1) ,表明MSCALP活性受到了明显的抑制。MTT结果显示 ,OD值随着bFGF的剂量增加而明显上升 ,最高值 (浓度为 6 0 0ng/ml时 )比对照组高出近一倍 ,表明bFGF明显促进MSC增殖 ,有剂量依赖性 (dose -dependent)但当浓度高于 80 0ng/ml时 ,OD值不高于对照组 ,甚至低于对照组 ,表明较高浓度的bFGF抑制MSC增殖 ;②与对照组比较随     

bFGF基因转染对兔骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

[目的]探讨作为组织工程种子细胞的骨髓间充质干细胞(BMSCs),在体外培养条件下bFGF基因转染对其生物学特性的影响.[方法]穿刺抽取新西兰大白兔胫骨骨髓,采用密度梯度离心法分离BMSCs,在采用贴壁筛选法对分离出的BMSCs进行纯化.将DH-5α菌(含牛bFGF-pcDNA3真核表达载体)扩增,用UNIQ-10柱式质粒小量抽提试剂盒抽提质粒,并对所提取的bFGF-pcDNA3重组表达质粒酶切鉴定.利用脂质体转染bFGF-pcDNA3到BMSCs,G418筛选获得抗性克隆.采用免疫组化、Western blot检测、MTT法检测和流式细胞仪检测转染bFGF的骨髓基质干细胞表达bFGF蛋白、细胞的增殖情况和细胞周期.[结果]密度梯度离心法和贴壁筛选法,获得大量形态均一的BMSCs,部分细胞经成骨诱导培养后,Von kossa染色可见黑色结节.脂质体介导bFGF-pcDNA3重组表达质粒转染BMSCs,经免疫组化和Western blot检测,证实转染细胞确实表达bFGF,并且表达部位在胞浆.转染细胞增值活力加强,生长曲线上移,处于增殖周期的细胞比例加大(P<0.05).[结论]用脂质体转染法能将bFGF-pcDNA3重组真核表达载体成功导人体外培养的BMSCs,筛选得到稳定表达bFGF的BMSCs细胞株,自身表达的bFGF可以促进BMSCs增殖.     

ErbB-3结合蛋白Ebp1基因过表达对人肝癌HepG2细胞生长增殖的影响

[目的]探讨ErbB-3结合蛋白Ebp1基因对肝癌细胞生长增殖的影响.[方法]利用脂质体法将pEGFPC1-Ebp1融合质粒转染到人肝癌细胞HepG2中,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白融合基因的表达并建立稳定表达Ebp1基因细胞系,应用Western blot检测转染后目的蛋白的表达,利用平板克隆集落形成观察细胞生长增殖能力的改变.[结果]在荧光显微镜下可见绿色荧光,Ebp1融合蛋白主要表达于胞质,转染pEGFPC1-Ebp1质粒后HepG2细胞中蛋白明显呈高表达;克隆集落形成实验结果表明,pEGFPC1空载体转染组和未转染细胞组相比较,Ebp1过表达细胞克隆集落形成显著增多.[结论]Ebp1过表达可增强人肝癌HepG2细胞增殖.     

体外定向诱导人骨髓间质干细胞分化为内皮样细胞

[目的]研究人骨髓间质干细胞(hMSC)的生物学特性和体外诱导分化为内皮样细胞的可能.[方法]抽取人胸骨的骨髓,进行hMSC的分离、纯化及培养,进行成骨,成脂鉴定.体外用细胞因子诱导hMSC分化为内皮样细胞,分为A组诱导剂为L-DMEM含有体积分数2%胎牛血清(FCS),50 ng/mL血管内皮生长因子(VEGF);B组诱导剂是L-DMEM含有体积分数2?S,50ng/ml VEGF和2 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),均诱导21 d.用免疫荧光的方法检测是否表达内皮细胞特异性标志物VWF,CD31,VCAM1;透射电镜观察有无内皮细胞特征性超微结构.[结果]来源于人胸骨的hMSC能被诱导成成骨细胞,脂肪细胞.体外诱导后表达内皮细胞特异性标志物,其中B组诱导率高于A组.B组细胞VWF阳性率约80%～90%,A组仅10%;透射电镜显示B组细胞具有内皮细胞特征性超微结构,如W-P小体.[结论]胸骨骨髓来源的人骨髓间质干细胞可以在体外被VEGF和bFGF联合诱导分化为内皮样细胞,诱导率高于单用VEGF.     

骨髓基质细胞体外扩增能力及支持造血的研究

目的 :观察成纤维细胞集落形成单位 (CFU- F)贴壁层的形成、体外传代培养、扩增的情况 ,研究各阶段 (CFU- F)对粒 -单核细胞集落形成单位 (CFU- GM)和红细胞集落形成单位 (CFU- E)生长及细胞因子对造血的支持作用 ,并测定骨髓有核细胞对基质细胞的粘附能力。方法 :利用改进的液体培养法 ,培养骨髓基质细胞并传代 ,利用甲基纤维素半固体培养法 ,培养人骨髓细胞 ,观察 CFU- GM、CFU- E集落数。结果 :人骨髓基质细胞在体外可以传代培养 4代并能扩增 2 8倍 ,其中 F3代对 CFU- GM和 CFU-E的促进增殖作用最强 ,且对骨髓有核细胞的粘附能力最强。结论 :人骨髓基质细胞可体外传代扩增并支持造血细胞生长     

乳糖化和半乳糖基人生长激素的肝靶向性比较研究

为比较乳糖化人生长激素（ｈＧＨ－Ｌ）和半乳糖基人生长激素（ｈＧＨ－Ｇａｌ）的肝靶向性,获得较理想的受体介导肝靶向促生长介素（ＳＯＭ）,以提高人生长激素（ｈＧＨ）治疗侏儒症的效果。作者合成了ｈＧＨ－Ｌ和ｈＧＨ－Ｇａｌ,并以１３１Ｉ或１２５Ｉ标记ｈＧＨ－Ｌ、ｈＧＨ－Ｇａｌ和ｈＧＨ,进行小鼠体内分布实验和家兔显像实验对比研究,以及１３１Ｉ－ｈＧＨ－Ｌ、１３１Ｉ－ｈＧＨ－Ｇａｌ鸡显像和家兔体内竞争结合实验。结果：ｈＧＨ－Ｌ和ｈＧＨ－Ｇａｌ均具有明显的趋肝性,肝最大摄取率分别为６８．８３％～７４．６５％和６８．１６％～７４％,均约为ｈＧＨ的２倍,与肝脏的结合均具有受体介导结合特性。但ｈＧＨ－Ｌ的合成较ｈＧＨ－Ｇａｌ更为简单,而且反应条件温和,原料便宜得多。由此提示ｈＧＨ－Ｌ较ｈＧＨ－Ｇａｌ更可能成为受体介导肝靶向促ＳＯＭ分泌以治疗侏儒症的新药。     

人胚胎时期生长激素对胚胎发育的影响

目的： 探讨不同胎龄人胎垂体生长激素含量对胚胎生长发育的影响。方法： 用双抗体放射免疫分析方法研究３８ 例正常人胎和８ 例无脑儿的血清及垂体生长激素含量。结果： ①在胎２１ 周以前,垂体所含生长激素量逐渐增加,２１ ～２４ 周达高峰,此后呈下降趋势,但仍高于２１ 周以前的水平。②正常人胎血清生长激素含量,有随胎龄增加而上升趋势。③正常胎儿垂体生长激素含量与其身长、体重呈正相关,无脑儿身长、体重与生长激素含量无关。结论： 生长激素虽然在胚胎生长发育中起重要作用,但不是唯一的。本实验为研究人胎生长发育的调控提供了新的资料     

生长激素释放多肽通过与生长激素释放因子不同的受体起作用

用固相法合成了生长激素释放因子(GRF),生长激素释放多肤(GHRP)和生长激素释放抑制因子(GRF-AN,D-Arg2-GRF44),并检测了多肽的生物学活性。结果表明1.GRF和GHRP在体内外均可刺激人垂体生长激素(GH)分泌。2.GRF和GHRP体外灌流时均可刺激牛垂体GH分泌。3.GHRP可促进大鼠生长发育。4.GRF-AN可抑制由GRF兴奋的人和动物垂体GH释放,但有较强的选择性,GRF-AN不抑制由GHRP兴奋的GH释放。表明,GRF和GHRP均可兴奋垂体GH分泌,但二者的机制有本质上的区别。     

宫内发育迟缓儿6月龄免疫功能与追赶生长的队列关系研究

目的 研究宫内发育迟缓（intrauterine growth retardation,IUGR）儿出生后6月免疫功能和追赶生长之间的关系,探讨“发育程序化”途径对机体免疫功能的影响程度。方法 选择2010年3~12月符合纳入和排除标准并且临床均诊断为IUGR的孕晚期孕妇60例,正常对照组孕妇20例。记录妊娠结局,随访出生儿童至6月龄,每月进行系统化的儿童保健,测量体质量、身长,并采用Z评分法评估儿童的生长发育偏离状况。在6月龄时采集外周静脉血,用流式细胞检测技术检测T淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8及B淋巴细胞,免疫比浊法检测IgG、IgM、IgA、C3、C4,分析宫内和宫外的追赶生长情况与免疫功能指标的关系。结果 IUGR组中小于胎龄儿（small for gestational age,SGA）的发生率为27.27%,新生儿并发症的发生率为29.09%。IUGR组新生儿的出生体质量、身长均低于对照组（\P\P\P\P\P>0.05)。结论 宫内和宫外未出现追赶生长的IUGR组婴儿到6月龄时部分免疫功能仍未恢复正常,但“发育程序化”的假说仍需要更大样本量及长期的队列研究证实。     

胎鼠血清胰岛素样生长因子水平改变与宫内生长迟缓的关系研究

目的　观察胎鼠血清胰岛素样生长因子 和 (IGF- 和 IGF- )的变化 ,探讨 IGFs与胎儿宫内发育迟缓 (IUGR)发生的关系。方法　 2 1只 SD孕鼠被随机分为对照组 9只 ,实验组 (IUGR) 12只。实验组于第14天行双侧子宫动、静脉钳夹 2 0分钟以建立胎鼠 IUGR模型。对照组仅行开腹和关腹术。比较两组胎鼠血清 IGFs的浓度及体重、身长和肝、肺、脑及胎盘的重量。结果　实验组血清 IGF- 、 浓度分别为 117.92± 2 6 .5 8ng/ ml和2 33.19± 33.35 ng/ ml,明显低于对照组 (分别为 2 34 .43± 70 .6 5 ng/ m l和 397.74± 2 3.6 9ng/ m l) (P均 <0 .0 1) ,其体重、身长及肝、肺、脑、胎盘组织的重量亦明显低于对照组 (P均 <0 .0 5 )。结论　胎鼠血 IGF- 和 IGF- 水平的降低是 IU GR发生的内在因素之一 ,IGFs在胎儿生长发育中有重要的作用。     

宫内发育迟缓儿身长、体重、头围的追赶比较

目的 研究宫内发育迟缓儿（IUGR）生长发育模式,以指导IUGR的生长保健工作.方法 对本院及复旦大学附属妇产科医院确诊的210名IUGR儿的体重、身长、头围等指标,分别在其0、6、12和24个月时进行随访性调查.结果 成功随访188例,男孩为87例,女孩101例,平均出生体重为2.27 kg,共有102例儿童的出生体重＜2 500 g,占总数的54.25%.其中,早产儿为46例,占24.47%.在出生头2年中,IUGR体重、身长、头围均有追赶生长,尤其是出生后头6～12个月生长速度最快,而头围生长大于身长及体重,女孩生长追赶要早于男孩,但2岁之内除女孩头围外均未达正常水平（P＜0.01）.在2岁之内为生长追赶的良好时间段.结论 证实了IUGR有生长追赶现象.若2岁之前不能给予干预治疗,有一部分IUGR其最终的生长将落后于正常儿.加强孕期营养及提倡母乳喂养是保证IUGR早期发育的关键.     

成纤维细胞生长因子及血管内皮生长因子在喉粘膜上皮中的分布及作用

目的：探讨成纤维细胞生长因子超家族成员（ｂＦＧＦ和ＫＧＦ）及血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）与喉粘膜上皮与间质相互作用的关系．方法：用免疫组化方法和原位杂交方法，分别观察ｂＦＧＦ，ＫＧＦ及ＶＥＧＦ在喉部正常粘膜（Ｎ）和炎症（ＩＦ）中的分布．结果：ｂＦＧＦ和ＫＧＦ的转录仅在Ｎ及ＩＦ的间质中出现，阳性反应位于血管内皮细胞和成纤维细胞，此外巨噬细胞也见阳性反应，上皮细胞均未见阳性表达．而ＶＥＧＦ不仅在上皮细胞中表达，部分血管内皮细胞及慢性炎性细胞亦表达ＶＥＧＦ．在ＩＦ中，ｂＦＧＦ，ＫＧＦ及ＶＥＧＦ的阳性率和反应程度较Ｎ均有所提高．结论：ｂＦＧＦ，ＫＧＦ和ＶＥＧＦ通过自分泌或（和）旁分泌途径促进上皮细胞生长及间质中的血管形成，在上皮与间充质细胞的交互作用中发挥着重要的作用．     

钳夹子宫血管致宫内生长迟缓幼鼠小脑皮层神经生长因子改变的研究

目的　了解宫内发育迟缓 ( IUGR)幼鼠脑发育过程中神经生长因子 ( NGF)在不同阶段的变化 ,探讨 IU GR所致脑损伤的发生机理。方法　采用钳夹孕鼠子宫血管 30分钟的方法建立 IU GR幼鼠动物模型 ,用免疫组化染色检测 IUGR幼鼠出生时及生后第 6天小脑皮层 NGF蛋白变化。结果　 1IUGR幼鼠出生体重较正常对照组降低 16 .1% (小于 2个标准差 ,P<0 .0 0 0 1) ;2 IU GR幼鼠出生时脑重较正常对照组脑重降低 ( P<0 .0 5 ) ;3IU GR幼鼠生后第 6天体重与正常对照组无差异 ( P>0 .0 5 ) ,但脑重仍有差异 ( P<0 .0 5 ) ;4IU GR幼鼠出生时小脑皮层 NGF蛋白较正常对照组降低 ( P<0 .0 0 5 ) ,且在生后第 6天仍有差异 ( P<0 .0 5 ) ,此改变与脑重改变一致。结论　本方法成功建立了 IU GR动物模型 ,且该模型所致 IUGR幼鼠伴有脑发育迟缓。IU GR幼鼠脑发育落后的发生可能与脑内 NGF水平下降有关 ,且 NGF的降低持续时间长 ,影响持久。本研究还发现 :IU GR幼鼠体格发育存在追赶生长 ,而脑发育迟缓不易恢复     

生长相关蛋白43在宫内发育迟缓胎鼠脑组织中表达的研究

目的:探讨生长相关蛋白43(GAP-43)在胎儿宫内发育迟缓(IUGR)鼠脑发育过程中的表达情况.方法:钳夹一侧供应子宫的血管30 min,制成IUGR模型,不钳夹侧为对照组.通过免疫组化方法检测GAP-43在两组鼠脑中顶叶皮质分子层及海马CA1区的表达水平.结果:IUGR组胎鼠大脑顶叶皮质分子层GAP-43的表达水平显著低于对照组(P＜0.05),海马CA1区GAP-43的表达在IUGR组与对照组相比无显著差异.结论:慢性宫内缺血在导致IUGR的同时可引起胎鼠大脑顶叶皮质分子层中GAP-43的表达显著减低,间接反应出IUGR胎鼠有宫内神经系统损伤存在.     

河南省学生生长发育状况

本文为河南省制订学生生长发育标准提供依据。六项形态指标增长速度高峰年龄,城市男生为12岁,女生为11岁。乡村男女学生皆为15岁。男女大部分形态指标有两次交叉,身高、体重的第一次交叉在9～10岁,第二次交叉在12～13岁。六项形态指标城乡学生间有差异,一般城市大于乡村,生长发育水平较1979年有提高,身高平均男生提高1.71cm,女生提高0.88cm。身高、体重超过全国平均水平。