鼠动脉内皮细胞的培养和鉴定

目的：建立体外培养原代鼠动脉内皮细胞（RAEC）的方法,并对培养的细胞进行鉴定,为研究血管疾病打下基础。方法：组织块法分离RAEC,用含胎牛血清的M199营养液培养。相差显微镜、电镜、免疫组化ABC方法进行鉴定。结果：分离的RAEC体外培养一周左右可成长单层,光镜下为扁平多角形,呈铺路石子状排列。电镜可见内皮细胞特性。免疫染色Ⅳ因子相关抗原阳性。结论：所培养的细胞为RAEC。     

人脐静脉血管内皮细胞培养、冻存、复苏与鉴定

目的：探讨人脐静脉血管内皮细胞（humanumbicicalveinendothelialcell,HUVEC）体外分离、培养、冻存、复苏与鉴定的可靠方法。方法：采用改良的胶原酶灌注消化法对HUVEC进行分离、培养与鉴定,并遵循”慢冻快复”的原则进行冻存与复苏,同时使用Ⅷ因子相关抗原染色法进行鉴定。结果：分离的HUVEC生长良好,细胞总数可达I-3×10^2。Ⅷ因子相关抗原染色鉴定结果为95％以上阳性,冻存后复苏的细胞活性超过90％。结论：HUVEC可以从脐带获得并通过原代培养成为细胞系,获得了人脐静脉血管内皮细胞体外培养、冻存、复苏与鉴定的可靠方法。     

大鼠胎肝干细胞的体外分离、培养与鉴定

目的：体外分离、培养原代大鼠胎肝干细胞(HSCs),并对其生物学特性进行鉴定。方法：采用胶原酶灌注法及剪碎消化法分离大鼠胎肝干细胞，并用含10％优等胎牛血清的H-DMEM培养液培养。利用免疫细胞化学方法在激光共聚焦扫描显微镜下观察该细胞表面抗原的表达情况，进行鉴定。结果：分离的大鼠胎肝干细胞体外培养24 h贴壁，5 d左右可长成单层,光镜下为致密圆形细胞,边缘清楚。8 d后细胞铺展，呈上皮样，表达甲胎蛋白（AFP）抗原、细胞角蛋白（CK）18、细胞角蛋白（CK）19。结论：分离并鉴定为大鼠胎肝干细胞可在体外培养条件下迅速扩增。     

人血管内皮细胞体外培养模型的建立

目的探讨人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)体外原代培养及功能检测的可靠方法。方法采用改良的胶原酶灌注消化法分离HUVEC,用免疫荧光法鉴定细胞纯度;用血清+DMSO冻存HUVEC,用Edu法检测细胞增殖能力,Matrigel体外成管实验检测血管内皮细胞功能。结果培养得到高纯度(99%)、高数量(1×106~3×106)、高质量(增殖与成管能力均良好)的原代细胞。结论建立了分离、培养、保存HUVEC及对其功能检测的可靠方法,为血管新生研究提供了理想的细胞模型和实验思路。     

人脐静脉血管内皮细胞培养、冻存、复苏与鉴定

目的:探讨人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)体外分离、培养、冻存、复苏与鉴定的可靠方法.方法:采用改良的胶原酶灌注消化法对HUVEC体外分离、培养,按慢冻速融原则对第3代细胞进行液氮冻存、复苏.采用免疫组化Ⅷ因子相关抗原染色和活体细胞荧光DiI-Ac-LDL鉴定.结果:分离的原代HUVEC总数平均为1×106个细胞,最多达3×106个细胞;两种鉴定结果HUVEC均为95%以上阳性;冻存后分3批复苏细胞活性均超过90%.结论:成功建立了人脐静脉血管内皮细胞体外培养、冻存、复苏与鉴定方法,获得了足够数目和纯度的血管内皮细胞,保持了细胞的同源同代性.     

脐带血血清在脐静脉内皮细胞培养中的应用

目的通过观察以人脐带血血清为主体的培养体系对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外培养扩增的影响,探讨人脐带血血清替代动物血清用于培养HUVEC的可行性。方法将取来的脐带,分成25 cm的两段(A、B段),均采用胰酶消化法分离HUVEC,分别加入DMEM完全培养液A(含20%的脐带血血清)和B(含20%的胎牛血清、20 ng/mL的血管内皮生长因子),并通过传代进行纯化和扩增培养,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察并绘制细胞生长曲线,用免疫组织化学方法对所得细胞进行鉴定,用流式细胞术检测细胞周期。结果成功建立了以人脐带血血清为主体的培养体系的HUVEC培养扩增的方法,A、B两段脐带HUVEC吸光度无明显差异(P>0.05),免疫组化可见两段HUVEC胞浆中人第Ⅷ因子相关抗原均呈阳性反应,流式细胞术检测结果显示,A段HUVEC S期的细胞约占35.5%,S+G2+M期的细胞约占48.2%活跃于增殖期,而处于G0/G1期的细胞约占58.3%左右,符合其生长特性。结论应用灭活脐带血血清培养体系可成功扩增HUVEC,培养的细胞具有HUVEC的基本特性,脐带血血清可在取脐带的同时获得,方法简便,无需购买,为体外研究血管内皮细胞提供了价廉、易行的实验手段。     

人脐静脉内皮细胞体外培养方法的改进

目的：建立一种能大量分离人脐静脉内皮细胞(HUVEC)且操作方便的体外分离、培养方法。方法：采用胶原酶对HUVEC进行消化，加入内皮细胞生长因子和肝素促其生长，以胰蛋白酶消化贴壁细胞，继续传代培养。细胞鉴定采用形态学观察和免疫荧光法。结果：经相差显微镜观察及Ⅷ因子染色证实培养的细胞是内皮细胞。结论：实验建立的HUVEC培养方法简便，细胞获得量多。     

小鼠神经干细胞中一氧化氮合酶的表达

目的：体外分离、培养和鉴定胎小鼠神经干细胞（NSC）并检测其一氧化氮合酶（NOS）的表达，为进一步阐明NOS在NSC中的作用奠定基础。方法：利用含EGF的条件培养基，从胚胎小鼠大脑皮层中分离并体外培养胎小鼠NSC，在含胎牛血清的培养基中诱导其分化；用充纯氮气的方法造成细胞缺氧，观察缺氧对NOS的诱导作用；免疫组织化学方法检测细胞中nestin,nNOS,eNOS和iNOS的表达。结果：原代培养的细胞具有连续增殖并形成克隆的能力，在含血清的培养基中能分化为神经元及神经胶质细胞样细胞；免疫组化nestin,nNOS和eNOS在一般培养条件下呈阳性表达，而iNOS呈阴性表达，经充氮气缺氧诱导后，iNOS呈阳性表达。结论：成功分离并培养小鼠NSC；发现不同亚型的NOS在NSC不同培养条件下有不同的表达。     

新生大鼠肝干细胞的分离、培养与鉴定

目的体外分离、培养新生大鼠肝干细胞（HSCs）,并对其生物学特性进行鉴定。方法采用剪碎加酶消化法分离新生大鼠肝干细胞,用体积分数10%胎牛血清的H-DMEM培养液培养。以MTT法检测细胞的增殖情况,以RT-PCR检测肝干细胞特异性标记分子的表达。结果分离的新生大鼠肝干细胞体外培养24h已贴壁,3d左右可见克隆形成,呈铺路石样分布,光镜下细胞为方形或多角形,边缘清楚,细胞核及核仁明显,表达细胞角蛋白CK18、CK19、CK8、甲胎蛋白（AFP）等肝干细胞特异性标记分子,低度表达白蛋白。结论成功分离、鉴定出了新生大鼠肝干细胞,并可在体外条件下进行传代扩增培养。     

体外分离培养小鼠胃Cajal间质细胞的实验方法研究

目的对KM小鼠胃Cajal间质细胞进行体外分离、培养,并对其进行鉴定,摸索高效实用的方法,为进一步探索研究Cajal间质细胞的移植、替代治疗及药物实验提供基础.方法以KM株小鼠胃为组织来源,体外分离、培养ICC,并进行细胞传代,光镜下观察其形态,用荧光标记C-Kit特异性抗体标记细胞,进行免疫组化鉴定.结果细胞稳定贴壁后,形成梭形或三角形突起,3 d后可出现长突起,并可逐渐形成网络连接.结论酶解法分离细胞成功,但纯度低,数量不足;体外培养ICC 24 h后逐渐稳定贴壁,3 d以后可形成网络连接,可稳定培养3周以上;传代后细胞正常形态逐渐发生变化,20 d后可逐渐凋亡.