α-胞衬蛋白siRNA对人涎腺导管细胞的影响

目的：观察α‐胞衬（α‐Fodrin）蛋白小干扰RNA（siRNA）对人涎腺导管（HSG）细胞的影响,探讨α‐Fodrin siRNA治疗干燥综合征（SS）的作用。方法实验分对照组、空载体组、α‐Fodrin siRNA1组及α‐Fodrin siRNA2组,将成功构建的10μg α‐Fodrin siRNA1和α‐Fodrin siRNA2表达载体分别采用脂质体法转染 HSG细胞,空载体组 HSG细胞转染等剂量的pGFP‐V‐RS空载体。转染后24、48、72和96 h观察细胞转染效率,实时荧光定量（RT ）‐PCR法检测4组HSG细胞中α‐Fodrin mRNA的表达水平;细胞荧光免疫法检测4组细胞中α‐Fodrin蛋白的表达水平;ELISA法检测4组细胞上清液中IFN‐γ、IL‐10的表达水平。结果转染后48 h HSG细胞转染效率最高;转染后48 hα‐Fodrin siRNA1组和α‐Fodrin siRNA2组 HSG细胞中α‐Fodrin mRNA和蛋白的表达水平明显低于对照组和空载体组（P＜0．05）,且α‐Fodrin siRNA2组中α‐Fodrin mRNA的表达水平低于α‐Fodrin siRNA1组的表达水平（P＜0．05）;α‐Fodrin siRNA1组和α‐Fodrin siRNA2组细胞上清液中IL‐10的水平明显升高,较对照组和空载体组差异有统计学意义（P＜0．05）,α‐Fodrin siRNA1组和α‐Fodrin siRNA2组比较差异无统计学意义（P＞0．05）;α‐Fodrin siRNA1组和α‐Fodrin siRNA2组细胞上清中 IFN‐γ的水平低于对照组和空载体组,但4组之间比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 HSG细胞转染α‐Fodrin siRNA载体后,α‐Fodrin mRNA和蛋白的表达水平下降,同时细胞上清中IL‐10的水平升高、IFN‐γ水平下降,提示α‐Fodrin siRNA可以减轻炎性反应,为SS的治疗提供实验依据。     

siRNA沉默平滑肌细胞Cx43的表达及对细胞增殖的影响

目的通过siRNA介导的RNA干扰技术沉默平滑肌细胞缝隙连接蛋白Cx43的表达，观察其对平滑肌细胞增殖的影响。方法应用阳离子脂质体转染的方法，将化学合成的特异性378siRNA转染平滑肌细胞设为特异性siRNA组，并以转染非特异性siRNA和空白作为对照，半定量RT-PCR法分析转染不同时间（24、48、72、96h）细胞Cx43mRNA表达水平的变化；同时噻唑蓝（MTT）比色法检测平滑肌细胞增殖，观察转染不同浓度（50、100、150、200 nmol／L）378siRNA对细胞增殖的影响。结果半定量RT-PCR结果显示与非特异性siRNA组及空白对照组相比，转染特异性378siRNA后Cx43mRNA表达水平显著地下调并呈时间依赖性特点。MTT结果显示与空白对照组相比，转染低浓度（50nmol／L）378siRNA早期（24、48h）OD值开始降低，但差异无统计学意义（P〉0．05），随着特异性siRNA浓度的升高，0D值显著降低（P〈0．05）。200nmol／L378 siRNA转染72、96h对细胞的增殖抑制率分别为32．51％、42，67％（P〈0．01），并呈浓度依赖性特点；而作为阴性对照的siRNA转染后则无上述作用。结论转染特异性378siRNA可有效沉默平滑肌细胞缝隙连接Cx43mRNA的表达并抑制平滑肌细胞的增殖。     

拓扑异构酶ⅡαRNA小分子干扰片段表达载体的构建与鉴定

目的：构建拓扑异构酶ⅡαRNA小分子干扰片段（TopoⅡαsiRNA）的真核表达载体并进行表达鉴定。方法：（1）根据GeneBank表达序列标签（Esr）数据库设计4对TopoⅡa基因siRNA的小分子片段。（2）采用RT—PCR方法检测细胞中的To—poⅡα表达并确定受试细胞。（3）将最佳沉默siRNA片段克隆到psilencer4．1-CMV-neo载体上,质粒DNA直接测序确定克隆成功。（4）采用脂质体法将TopoⅡa—siRNA DNA转染至受试细胞。并采用有限稀释法和G418加压筛选并培养稳转及对照细胞。（5）分别采用RT—PCR和Western blot方法测定稳转及对照细胞系TopoⅡαmRNA和蛋白表达。结果：（1）SKOV3／DDP细胞中TopoⅡαmRNA表达最高,与其亲本细胞SKOV3相比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）以TopoⅡα-4302siRNA片段沉默TopoⅡαmRNA表达最强（P〈0．01）。（3）重组阳性克隆经测序鉴定证实TopoⅡa-4302siRNA克隆成功。（4）RT—PCR和Western blot检测结果显示转染TopoIIa-4302siRNA质粒DNA后能抑制SKOV3／DDP细胞中的TopoⅡα基因表达。结论：成功构建psilencer4．1-CMV-neo—TopⅡα—siRNA重组表达载体并稳转至SKOV3／DDP细胞系。为下一步探讨TopoⅡα基因在卵巢癌多药耐药中的作用提供了实验基础。     

PDTC对创伤性肺损伤大鼠肺组织TNFα、IL-8含量及其mRNA表达的影响

目的 观察PDTC对创伤后肺组织TNFα、IL－8含量及其mRNA表达的影响。方法 80中大鼠分为创伤组（T组）,PDTC预处理组（P组）及对照组（C组）,利用多功能小型生物撞击机致伤,观测伤后各组0．5、1、2、4、8h肺组织TNFα、IL－8及其mRNA变化。结果 致伤后TNFα、IL－8含量及其mRNA表达明显升高,TNFα在伤后1h达到峰值,IL－8在伤后4h达到峰值;PDTC组TNFα、IL－8含量及其mRNA表达显著低于创伤组（P＜0．01）。结论 PDTC可以通过抑制TNFα、IL－8mRNA表达,减少致炎细胞因子的释放,减轻创伤后全身及肺组织的炎症损害。     

慢病毒载体介导的 shRNA 沉默非肌肉肌球蛋白重链Ⅱ A 对骨髓间充质干细胞旁分泌的影响

目的：观察慢病毒介导 shRNA 沉默非肌肉球蛋白重链ⅡA（MYH9）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）旁分泌功能的影响。方法采用脂质体法将含 MYH9干扰序列的 pHBLV －U6－ZsGreen －Puro（实验组）质粒转染到293T 细胞,以转染 pHBLV －U6－ZsGreen －Puro 空载质粒的细胞为空载组,以正常未转染细胞为对照组,包装产生的病毒液感染 BMSCs。用荧光显微镜观察荧光蛋白表达;以β－actin 为内参,分别用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT －PCR）和免疫印迹（Western blot）检测 MYH9 mRNA 及蛋白表达;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测其培养基上清液中血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、促血管生成素1（ANG －1）和促血管生成素2（ANG －2）的含量。结果成功构建重组质粒 pHBLV －U6－MYH9－ZsGreen －Puro,转染293 T 细胞产生高滴度慢病毒,荧光显微镜下可见被慢病毒感染的 rBMSCs 表达强绿色荧光蛋白,qRT －PCR 和 Western blot结果显示2条慢病毒感染 MYH9 mRNA 表达水平明显下调,显著低于对照组和空载组（P ＜0．05）;沉默 MYH9基因后,实验组的 ANG －1和 bFGF 在增殖末期较对照组和空载组有明显上升（P ＜0．05）,ANG －2和 VEGF 未见明显差异（P ＞0．05）。结论pHBLV －U6－MYH9－ZsGreen －Puro 慢病毒包装质粒转染 BMSCs 后,BMSCs 旁分泌能力未受明显影响。     

siRNA沉默水通道蛋白-4表达及对脑出血后脑水肿损伤的影响

目的探讨siRNA沉默水通道蛋白-4（AQP-4）表达对颅脑损伤（TBI）后创伤性脑水肿的影响。方法90只雄性sD大鼠进行创伤性脑水肿模型制备,随机分为3组,TBI组大鼠不接受任何治疗;AQP-4siRNA组进行siRNA质粒干扰;空载质粒组处理方法同AQP-4siRNA组,但所转质粒不含AQP-4siRNA片段。而后观测大鼠神经功能缺损评分（NIHSS）、脑组织AQP-4mRNA的表达及脑组织含水量。结果治疗后第7、14、21、28天,3组NIHSS均有下降,AQP4siRNA组〈空载质粒组〈TBI组,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。治疗后第1、3、5、7天,TBI组、空载质粒组AQP-4mRNA的持续高表达,而AQP-4siRNA组则明显改善（P〈0．05）。造模后3组大鼠脑组织含水量逐渐增加,第3天达到高峰,而后逐渐下降,TBI组与空载质粒组无明显差异（P〉0．05）,而AQP-4siRNA组低于TBI组、空载质粒组（P〈0．05）。结论通过siRNA沉默AQP-4表达可明显改善TBI后创伤性脑水肿严重程度,缩短脑功能恢复时间。     

小檗碱对小鼠RAW264．7巨噬细胞极化的影响

目的观察小檗碱对脂多糖（LPS）、白细胞介素－4（IL－4）诱导的小鼠RAW264．7细胞极化的影响。方法体外培养小鼠巨噬细胞RAW264．7,模型组和给药组分别加入LPS （终浓度100 ng／mL）或IL－4（终浓度10 ng／mL）,给药组用终浓度20μmol／L的小檗碱分别进行干预,同时空白对照组给予等体积磷酸盐缓冲液（PBS）。采用荧光定量聚合酶链反应检测精氨酸酶－1（ Arg－1）、一氧化氮合酶（ iNOS）、细胞因子信号传导抑制蛋白2（ SOCS2）、细胞因子信号传导抑制蛋白3（SOCS3）的mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测肿瘤坏死因子－α（TNF－α）及IL－10的分泌量。结果小檗碱对LPS刺激的巨噬细胞TNF－α分泌量的增加以及iNOS、 SOCS3 mRNA表达水平的上升均有显著的下调作用（P＜0．05或P＜0．01）;对IL－4刺激的巨噬细胞IL－10分泌量的增加和Arg－1 mRNA表达水平的上升均有显著下调作用（P＜0．05）,而对SOCS2 mRNA的表达无显著影响（P＞0．05）。结论小檗碱能抑制巨噬细胞向M1型极化,亦能抑制巨噬细胞向M2型极化,提示其可能在维持M1／M2动态平衡中发挥调节作用。     

SiRNA靶向沉默成纤维细胞激活蛋白仅对胶质瘤细胞U87增殖的影响

目的：探讨小分子干扰RNA（siRNA）靶向沉默成纤维细胞激活蛋白仅（FAP-α）表达对神经胶质瘤细胞株U87增殖的影响。方法：实验分为空白对照组（Blank组）、阴性对照组（NC组）和siRNA组,通过脂质体将siRNA转染至胶质瘤细胞株U87,使用Westernblot法检测FAP-α基因的蛋白水平,同时检测NC组和siRNA组Bcl-2、caspase-3的表达变化,使用Real-timePCR法检测FAP-α和增殖核抗原（PCNA）的mRNA水平,CCK-8法评价转染后NC组和siRNA组细胞的增殖能力。结果：①转染48h后,siRNA组细胞FAP-α mRNA、蛋白的表达明显低于NC组和Blank组,差异有统计学意义（P〈0．01）,siRNA组较Nc组caspase-3蛋白表达增加（P〈0．05）;Bcl-2蛋白表达明显降低（P〈0．01）,siRNA组较NC组PCNAmRNA表达明显下降（P〈0．01）。②转染后48、72和96hsiRNA组U87细胞吸光度值低于NC组,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：应用siRNA沉默FAP-α基因的表达,可以抑制胶质瘤细胞U87的增殖,诱导胶质瘤细胞的凋亡。     

SOX4基因抑制肝癌细胞增殖与侵袭能力

【摘要】目的 探讨小干扰RNA技术（siRNA）沉默SOX4基因对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响。方法 构建siRNA转染人肝癌细胞株SMMC 7721,按转染质粒区别分为siRNA SOX4组、siRNA NC组,并设立空白对照组。实时荧光定量聚合酶联反应（RT PCR）检测各组细胞SOX4 mRNA,蛋白印迹法（WB）测定SOX4蛋白水平,噻唑蓝法（MTT）测定转染不同时间肝癌细胞增殖能力,流式细胞术测定肝癌细胞凋亡率,Transwell小室实验测定肝癌细胞侵袭能力。结果 转染后siRNA SOX4组SOX4 mRNA相对表达量低于空白对照组和siRNA NC组（P＜005）;转染后siRNA SOX4组SOX4蛋白表达量为低于空白对照组和siRNA NC组（P＜005）;转染不同时间siRNASOX4组细胞增殖活性均低于空白对照组和siRNA NC组（P＜005）;转染后siRNA SOX4组细胞凋亡率高于空白对照组和siRNA NC组（P＜005）;转染后siRNASOX4组穿膜细胞比例低于空白对照组和siRNA NC组（P＜005）。结论 siRNA技术沉默SOX4基因可降低肝癌细胞增殖及侵袭能力,促进癌细胞凋亡。     

沉默c-met基因表达对胃癌肝高转移潜能细胞生物学行为的影响

背景 胃癌肝高转移潜能细胞（XGC9811-L）是本实验组在前期工作中建立的一株具有肝脏高转移潜能的胃癌细胞系,c-met基因在其中高表达。c-met是肝细胞生长因子（HGF）的受体。目的 研究沉默c-met基因表达对XGC9811-L的增殖、侵袭和转移等生物学行为的影响。方法 2014年1-6月,采用细胞转染法将重组质粒pSuppressorRetro-c-met-siRNA导入XGC9811-L,建立稳定转染细胞系,按有无转染和转染目的基因的不同分为未转染组、空载体组、随机序列组和siRNA组。采用荧光定量反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测XGC9811-L中c-met mRNA相对表达水平,Western blotting法检测c-met相对表达水平,通过细胞增殖实验检测各组细胞增殖能力并绘制细胞生长曲线,通过侵袭实验和运动实验计算各组穿膜细胞数。结果 siRNA组c-met mRNA、c-met相对表达水平低于未转染组、空载体组、随机序列组（P＜0.05）。siRNA组第3天、第5天、第6天、第7天细胞增殖能力低于未转染组、空载体组、随机序列组（P＜0.05）。在侵袭实验中,siRNA组穿膜细胞数少于未转染组、空载体组、随机序列组（P＜0.05）。在运动实验中,siRNA组穿膜细胞数少于未转染组、空载体组、随机序列组（P＜0.05）。结论 沉默c-met基因的表达可以抑制XGC9811-L的增殖、侵袭和转移能力,c-met在胃癌肝转移的发生、发展过程中可能起重要作用,抑制c-met基因表达可能会抑制胃癌细胞向肝脏转移。     

膝关节骨关节炎软骨中YKL-40、IL-1β的表达及相关性探讨

目的 研究膝关节骨关节炎(KOA)病患软骨中甲壳质酶(YKL 40)、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达水平,并分析两者相关性.方法 选择该院骨科住院就诊的符合KOA诊断的病患38例,记为观察组.再选择同期因膝关节外伤行膝关节镜检治疗或膝关节骨折内固定手术患者关节软骨30例,记为对照组.根据KOA放射线及关节镜下分级标准,将观察组分为轻度组16例、中度组11例及重度组10例.对比所有病患的YKL 40、IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,同时进行Mankin评分、细胞死亡率的对比.结果 观察组YKL-40、IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平及Mankin评分、细胞死亡率均显著高于对照组,并且观察组中轻度、中度、重度的YKL-40等指标水平呈上升水平(均P＜0.05).并且YKL-40表达水平与IL-1β水平存在显著的正相关(r=0.738,P=0.000).此外,YKL-40表达水平还与IL-6(r=0.819,P=0.000)、TNF-α(r=0.871,P=0.000)表达水平及Mankin评分(r=0.832,P=0.000)、细胞死亡率存(r=0.832,P=0.000)在显著的正相关.结论 KOA病患中YKL-40、IL-1β呈高表达状态,并且两者呈现显著的正相关.     

过表达miR-124a对J774.1细胞中TNF-α和IL-6表达水平及细胞周期的影响

目的：探讨miR-124a对类风湿关节炎（RA）细胞模型小鼠巨噬细胞J774.1细胞中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）表达水平及细胞周期的影响,阐明miR-124a在RA中的作用机制。方法：取对数生长期J774.1细胞,以1×10⁶mL^-1均匀接种于培养皿,每组设3个复孔,当细胞融合度达到60%时进行感染,实验分为miR-124a过表达组（感染miR-124a腺病毒载体）、空载腺病毒组（感染阴性病毒液）和空白对照组（不做任何处理）。ELISA法检测感染48 h后3组细胞上清液中TNF-α和IL-6的表达水平,RT-PCR法检测感染48 h后J774.1细胞中TNF-α和IL-6 mRNA相对表达水平,流式细胞术检测感染48 h后3组细胞细胞周期变化。结果：感染48 h后,与空白对照组和空载腺病毒组比较,miR-124a过表达组细胞上清中TNF-α和IL-6表达水平明显降低（P=0.038,P=0.042;P=0.043,P=0.044）,miR-124a过表达组细胞中TNF-α和IL-6 mRNA表达水平明显降低（P=0.001,P=0.002;P=0.001,P=0.003）,G₁期细胞百分率明显升高（P=0.01）,S期和G₂期细胞百分率明显降低（P<0.01）。结论：miR-124a感染小鼠巨噬细胞J774.1后可使细胞的炎性因子表达水平下降,抑制细胞增殖,miR-124a有望成为RA治疗的新靶点。     

青藤碱对细菌内毒素刺激的小鼠及巨噬细胞嘌呤受体A2A、P2X_7表达的影响

【目的】探讨青藤碱(sinomenine,SIN)对细菌内毒素(LPS)刺激的小鼠内毒素血症模型及巨噬细胞RAW264.7细胞炎症模型嘌呤受体A2A、P2X7表达的影响。【方法】选用BALB/c小鼠设空白对照组,模型组,青藤碱组(剂量分别为40、80、160 mg/kg),青藤碱组给予腹腔注射青藤碱30 min后,模型组和青藤碱组给予腹腔注射LPS(剂量为15 mg/kg)建立内毒素血症小鼠模型,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝脏、脾脏嘌呤受体A2A、P2X7的表达。RAW264.7细胞设空白组、LPS组、青藤碱组,青藤碱组给予青藤碱(300μmol/L)干预2 h后,LPS组和青藤碱组均给予LPS(剂量为100 ng/m L),继续培养8 h后,采用ELISA法检测上清TNF-α分泌量,RT-PCR法检测细胞P2X7、A2A m RNA表达。【结果】在LPS刺激下,小鼠血清TNF-α和IL-6水平显著上升,肝脏、脾脏组织中嘌呤受体A2A、P2X7的表达显著升高,青藤碱能下调TNF-α和IL-6水平,并抑制A2A、P2X7的表达(均P0.05);体外LPS刺激下,RAW264.7细胞分泌TNF-α增加,A2A、P2X7的表达增加,青藤碱可抑制TNF-α的分泌,并下调P2X7的表达(均P0.05),但对A2A的表达有促进作用。【结论】青藤碱对LPS刺激的小鼠肝脏、脾脏及体外巨噬细胞中嘌呤受体P2X7的表达增加均表现抑制作用,而对不同组织细胞中A2A表达的影响不同,相关机制有待深入。     

甘草酸二铵对脊髓缺血再灌注损伤后IL-4/IL-8/TNF-α表达的影响

目的初步探讨甘草酸二铵（Diammonium Glycyrrhizinate,DG）对脊髓缺血再灌注损伤后脊髓组织中炎性细胞因子IL-4、IL-8、TNF-α表达的影响。方法雄性SD大鼠90只,随机分为空白对照组、阴性对照组、DG干预组三组,通过外科手术法造成大鼠腰段脊髓的缺血再灌注损伤,组织匀浆后采用ELISA检测IL-4、IL-8、TNF-α的表达。结果与阴性对照组比较：空白对照组IL-4在24、72、168h有统计学意义（P〈0.05）,DG干预组IL-4在3、24h时间段有统计学意义（P〈0.05）;阴性对照组IL-8各时间段均有统计学意义（P〈0.05）;DG干预组IL-824、72h时间段有统计学意义（P〈0.05）;空白对照组TNF-α各时间段均有统计学意义（P〈0.05）;DG干预组TNF-α全部时间段均有统计学意义（P〈0.05）。结论脊髓缺血再灌注损伤后IL-4、IL-8、TNF-α的表达明显发生变化,DG可能通过影响IL-4、IL-8、TNF-α的表达发挥保护作用。     

混合游离脂肪酸对大鼠肺微血管内皮细胞Toll样受体4表达的影响及其介导的炎症反应机制

目的研究混合游离脂肪酸（FFA）对大鼠肺微血管内皮细胞（RRPMVECs）Toll样受体4（TLR4）的激活作用及其介导的链式炎症反应机制。方法以不同浓度的FFA处理体外培养的RPMVECs,Westernblotting检测TLR4蛋白的表达。用干扰小RNA（siRNA）转染体外培养的RPMVECs（TLR4 siRNA组和杂序siRNA组）,设立阴性对照组。分别用0．1mmol／LFFA、10ng／mL脂多糖（LPS）和5ng／mL肿瘤坏死因子-α（TNF-α）处理各组细胞,以未加药细胞作为相应的空白组。Real-TimePCR检测TLR4mRNA和NF-κB抑制蛋白激酶β（IKKβ）mRNA的表达,Westernblotting检测磷酸化核因子κB抑制因子（p-IκBα）和核因子κB（NF-κB）的表达,ELISA法检测细胞培养上清液中炎症因子白介素-1β（IL-1β）的表达。结果RPMVECs的TLR4蛋白相对表达量在0．1mmol／LFFA处理后显著增高（P〈0．05）,并随FFA浓度的升高而增加。在杂序siRNA和阴性对照组,TLR4mRNA的相对表达量在LPS和FFA处理后显著升高（P〈0．05）,TNF-α处理无明显变化;而在TLR4干扰组,3种处理后TLR4mRNA的表达均无显著变化。在杂序siRNA和阴性对照组,3种方式处理后RPMVECs的IKKβmRNA、p-IκBα及IL-1β的相对表达量均显著升高（P〈0．05）,而TLR4siRNA干扰抑制了其在FFA和LPS处理组的表达,但对TNF-α组无抑制作用。结论FFA通过TLR4／IKKβ／NF-κB信号通路介导RPMVECs的炎症反应。     

炎性标志物检测对冠心病患者病情评价的临床意义

目的探讨血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)检测对冠心病患者病情评估的临床意义。方法检测78例冠心病患者入院前及经皮冠状动脉介入术(PCI)治疗3个月后血清hs-CRP、TNF-α和IL-8水平,包括急性心肌梗死(AMI)15例,不稳定型心绞痛(UAP)36例,稳定型心绞痛(SAP)27例,并与45名健康人(对照组)作对比。结果治疗前AMI和UAP患者血清hs-CRP、TNF-α和IL-8明显高于对照组(P均<0.01),且TNF-α和IL-8与hs-CRP呈正相关关系(r=0.932、r=0.956、r=0.897、r=0.873,P<均0.01);SAP患者血清hs-CRP水平较对照组升高(P<0.01),TNF-α、IL-8水平与对照组无明显差异(P>0.05)。抗炎治疗3个月后冠心病患者整体血清hs-CRP、TNF-α和IL-8水平明显下降(P<0.01),较对照组无明显差异(P>0.05)。结论检测冠心病患者血清hs-CRP、TNF-α和IL-8对冠心病的诊断、治疗、预后预测有一定的临床意义。     

MMP-9 过表达对骨肉瘤143B 细胞 侵袭与迁移能力的影响

目的 研究MMP-9 过表达对成骨肉瘤143B 细胞侵袭与迁移能力的影响。方法 通过慢病毒介导 MMP-9 过表达载体转染骨肉瘤143B 细胞,实验分为3 组：实验组（转染pLV-Puro MMP-9 过表达序列）、 对照组（转染pLV-Puro MMP-9-NC 序列）、空白组（PBS）;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检 测MMP-9 和VEGF mRNA 的表达;Western blot 法检测MMP-9 和VEGF 蛋白的表达;Transwell 小室侵袭 实验检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 实验组MMP-9 和VEGF 的mRNA 和蛋 白表达量较对照组和空白组上调（P < 0.05）;实验组穿过人工基底膜细胞数高于对照组和空白组（P < 0.05）; 实验组划痕愈合率高于对照组和空白组（P <0.05）。结论 慢病毒介导MMP-9 过表达通过作用于VEGF 靶 基因,抑制成骨肉瘤143B 细胞侵袭及迁移能力。     

HR-HPV感染患者微量元素与阴道微环境中细胞因子的相关性研究

目的探究高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染患者的血清微量元素与阴道微环境中细胞因子的相关性。方法选取2017年1月至2019年5月新乡市中心医院收治的66例感染HR-HPV宫颈病变患者,根据临床诊断分为宫颈上皮内瘤(CIN)Ⅰ组20例[平均年龄(43.02±8.43)岁]、CINⅡ~Ⅲ组25例[平均年龄(42.17±9.62)岁]及宫颈癌组21例[平均年龄(45.17±8.89)岁]。择取同期该院体检的20例健康女性作为对照组[平均年龄(47.33±7.81)岁]。采用酶联免疫吸附法检测阴道微环境中γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)水平。采用电子耦合-等离子体原子发射光谱仪检测血清中锌、硒、铁、锰、钴等微量元素。结果①对照组血清中锌、硒水平>CINⅠ组>CINⅡ~Ⅲ组>宫颈癌组(P<0.05)。②4组阴道微环境中细胞因子IFN-γ、TGF-β、IL-10、TNF-α水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。③血清锌含量与阴道中IFN-γ、TNF-α水平呈正相关(r=0.573和0.612,P=0.007和0.009);而与阴道中IL-10、TGF-β水平呈负相关(r=-0.193和-0.416,P=0.002和0.003)。结论HR-HPV感染患者血清微量元素锌显著降低,其与疾病发生、发展及病程中免疫反应密切相关。     

shRNA靶向干扰PRDXⅢ对人胶质瘤细胞株U251的影响

目的探讨PeroxiredoxinsⅢ(PRDXⅢ)基因对人胶质瘤细胞株U251体外增殖和凋亡的影响。方法将U251细胞分为空白对照组、空载体转染组、无关序列转染组和干扰组。利用脂质体将PRDXⅢ干扰片段转染胶质瘤细胞株U251,RT-PCR及Western blot检测转染后PRDXⅢmRNA及蛋白的表达水平,流式细胞仪(FCM)、DNA ladder、PI染色检测转染后细胞的凋亡状况,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测转染后U251细胞的生长抑制率。结果转染后干扰组PRDXⅢmRNA及蛋白的表达水平明显降低,抑制率分别为76.0%和63.9%。DNA ladder显示干扰组出现明显梯形电泳条带。PI染色结果显示干扰组细胞核的染色质高度浓染色,部分细胞核裂解为碎块。空白对照组、空载体转染组、无关序列转染组和干扰组细胞凋亡率分别为(2.26±0.64)%、(2.68±0.74)%、(3.54±0.62)%和(35.90±4.85)%,干扰组细胞凋亡率明显高于其他各组(P=0.00)。干扰组U251细胞生长抑制率为44.40%。结论 PRDXⅢ靶向干扰能够显著抑制U251细胞株增殖,增加其凋亡。     

SIRPα-GFP真核表达载体构建及其在HEK293T细胞中的表达

目的：构建信号调节蛋白α-绿色荧光蛋白（SIRPα-GFP）真核表达载体,转染HEK293T细胞获得稳定表达SIRPα-GFP融合蛋白的细胞系,研究SIRPα-GFP融合蛋白在HEK293T细胞的膜定位。方法：将SIRPα质粒和带有GFP的表达载体分别用限制性内切酶MluⅠ和SgfⅠ进行双酶切,将SIRPα基因克隆到pLenti-GFP载体中,构建pLenti-SIRPα-GFP质粒;将pLenti-SIRPα-GFP质粒转化DH5α大肠杆菌感受态细胞,对重组质粒pLenti-SIRPα-GFP进行DNA测序;采用Lipofectamine 3000转染试剂将pLenti-SIRPα-GFP质粒转染到HEK293T细胞中,通过荧光显微镜观察SIRPα-GFP在稳定转染HEK293T细胞中的表达,采用Western blotting法检测HEK293T细胞中SIRPα-GFP融合蛋白的表达。结果：酶切鉴定和DNA测序,重组质粒pLenti-SIRPα-GFP构建成功。荧光显微镜检测,SIRPα-GFP融合蛋白在HEK293T细胞膜上表达。Western blotting法检测,SIRPα蛋白在pLenti-SIRPα-GFP质粒转染的HEK293T细胞中成功表达。结论：成功构建了pLenti-SIRPα-GFP质粒。通过在HEK293T细胞中转染pLenti-SIRPα-GFP质粒,成功制备了稳定表达SIRPα-GFP的细胞系。SIRPα-GFP蛋白定位于HEK293T细胞的细胞膜上。