链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠坐骨神经硫氧还蛋白相互作用蛋白/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体的表达

目的 初步探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体通路在链尿佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠坐骨神经中的作用。方法 采用单次STZ腹腔注射的方法建立糖尿病大鼠模型,取年龄、体重匹配的雄性大鼠作为正常对照组,监测血糖、体重变化,成模后12周应用电子Von Frey仪测定机械痛阈值,处死取坐骨神经进行坚牢蓝染色,采用免疫组织化学及Western blot法检测TXNIP、NLRP3、半胱天冬酶-1和白细胞介素(IL)-1β的表达,ELISA法测定血清中IL-1β、IL-18水平。结果 糖尿病大鼠模型坐骨神经中TXNIP蛋白表达为3.78±0.08,较正常对照组0.99±0.06显著增加(t=26.980,P<0.0001);与正常对照组(0.97±0.05)相比,糖尿病组NLRP3蛋白表达(2.44±0.16)明显升高(t=8.885,P<0.0001);糖尿病组活化的半胱天冬酶-1蛋白表达为4.45±0.19,正常对照组为1.08±0.06,两组差异有统计学意义(t=16.900,P<0.0001)。糖尿病组IL-1β蛋白表达为4.50±0.16,较正常对照组1.19±0.08显著增加(t=18.630,P<0.0001);与正常对照组比较,糖尿病大鼠血清中IL-1β[(110.50±8.80)pg/ml比(17.97±3.18)pg/ml,t=9.892,P<0.0001]、IL-18[(591.70±8.78)pg/ml比(160.70±8.33)pg/ml,t=35.620,P<0.0001]均分泌增多。结论 糖尿病周围神经病变(DPN)的发病机制可能与TXNIP表达增加、NLRP3炎症小体激活以及下游炎症反应有关,该通路可成为DPN治疗的新靶标。     

TXNIP在人肾小管上皮细胞HK-2高糖缺氧复氧损伤中的作用

目的探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)在人肾小管上皮细胞HK-2高糖缺氧复氧损伤中的作用。方法将HK-2细胞随机分为三组(n=6):高糖组(HG组),高糖缺氧复氧组(HHR组),高糖缺氧复氧+TXNIP干扰组(HHR-siRNA组)。采用高糖刺激72 h,缺氧4 h复氧2 h的方法建立高糖缺氧复氧模型。CCK-8和乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞活性,活性氧(ROS)检测细胞氧化应激水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)和Caspase-1,Western blot法检测TXNIP和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白-3(NLRP3)的表达。结果与HG组相比较,HHR组LDH、ROS、IL-1β、Caspase-1、凋亡指数、TXNIP、NLRP3升高,而CCK-8降低,差异有统计学意义(P0.05);与HHR组相比较,HHR-si RNA组LDH、ROS、IL-1β、Caspase-1、凋亡指数、TXNIP、NLRP3降低,而CCK-8升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论 TXNIP在HK-2细胞高糖缺氧复氧损伤中发挥了重要作用,抑制TXNIP可以降低高糖缺氧复氧损伤。     

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性体在2型糖尿病并发冠心病过程中的作用

目的 探究核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎性体在2型糖尿病并发冠心病过程中的作用.方法 选取第三军医大学新桥医院心血管内科的住院患者共130例,分为单纯冠心病组(n=40)、单纯2型糖尿病组(n=20)、2型糖尿病并发冠心病组(n=40)及正常对照组(n=30).分离外周血单个核细胞及血浆.采用RT-qPCR、Western blot分别检测各组外周血单个核细胞中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、半胱天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1) mRNA及蛋白表达情况,ELISA法检测各组血浆中IL-1β含量.结果 单纯冠心病组、单纯2型糖尿病组及2型糖尿病并发冠心病组外周血单个核细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA及蛋白表达水平均较正常对照组显著增高(P＜0.05),其中,2型糖尿病并发冠心病组ASC、Caspase-1 mRNA在外周血单个核细胞中的表达显著高于单纯冠心病组及单纯2型糖尿病组(P＜0.05),而2型糖尿病并发冠心病组NLRP3蛋白在外周血单个核细胞中的表达显著高于单纯冠心病组及单纯2型糖尿病组(P＜0.05).同时,测得单纯冠心病组、单纯2型糖尿病组及2型糖尿病并发冠心病组血浆中IL-1β含量分别为(24.05±1.00)、(22.86±1.66)、(26.85±1.45) ng/L,较正常对照组(12.53±2.79) ng/L均显著升高(P＜0.05),其中,2型糖尿病并发冠心病组血浆中IL-1β含量显著高于单纯冠心病组及单纯2型糖尿病组(P＜0.05).结论 NLRP3炎性体的异常激活可促进2型糖尿病并发冠心病病理过程的发生、发展,其可能成为防治2型糖尿病并发冠心病的新靶点.     

NOD样受体蛋白3炎症小体在老年2型糖尿病微血管病变患者中的表达

目的 探讨NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体在老年2型糖尿病(T2DM)微血管病变患者中的表达情况.方法 120例老年T2DM患者根据是否存在微血管病变分为观察组(74例,有微血管病变)和对照组(46例,无微血管病变),比较两组FBG、餐后血糖、TC、TG、HDL-C、LDL-C、糖化血红蛋白、肌酐、尿酸等生化指标及NLRP3炎症小体、白细胞介素(IL)-1β水平.结果 两组餐后血糖、TC、TG、HDL-C、LDL-C比较,差异无统计学意义(P>0.05),但观察组FBG、糖化血红蛋白、肌酐、尿酸均高于对照组(P<0.05),且NLRP3炎症小体及IL-1β水平均高于对照组(P<0.05).结论 NLRP3炎症小体及其下游炎性因子IL-1β或参与老年2型糖尿病微血管病变.     

NLRP3炎性体在糖尿病肾病肾间质炎症反应中的作用

目的 探讨NLRP3炎性体在糖尿病肾病肾间质炎症反应中的作用。 方法 选择2014年6月-2015年5月浙江省人民医院2型糖尿病肾病患者50例作为糖尿病肾病组,同期肾脏错构瘤手术切除患者50例作为对照组。比较2组患者的临床资料、尿IL-18和尿IL-1β水平、肾小管上皮细胞NLRP3、P2X4、IL-18和IL-1β的表达,分析糖尿病肾病肾间质炎症和肾小管上皮细胞NLRP3、P2X4、IL-18和IL-1β表达的相关性,糖尿病肾病肾小管上皮细胞NLRP3、P2X4免疫组化表达评分和尿IL-18、IL-1β水平的相关性。 结果 糖尿病肾病组的尿蛋白定量、空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白均高于对照组(P<0.05)。糖尿病肾病组尿IL-18和尿IL-1β水平均高于对照组(P<0.05)。糖尿病肾病组肾小管上皮细胞中NLRP3、P2X4、IL-18和IL-1β呈高表达,对照组肾小管上皮细胞中NLRP3、P2X4、IL-18和IL-1β呈低表达或不表达。糖尿病肾病组肾小管上皮细胞NLRP3、P2X4、IL-18和IL-1β的表达评分均明显高于对照组(P<0.05)。糖尿病肾病肾间质炎症和肾小管上皮细胞NLRP3、P2X4、IL-18和IL-1β表达均呈正相关(P<0.05)。糖尿病肾病肾小管上皮细胞NLRP3、P2X4免疫组化表达评分和尿IL-18、IL-1β水平均呈正相关(P<0.05)。 结论 P2X4可能通过激活NLRP3炎性体,调控炎性细胞因子,引起糖尿病肾病肾间质炎症反应。      

NLRP3炎症体与糖尿病并发症的研究进展

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症体包含NLRP3、细胞凋亡相关的斑点样蛋白质和caspase-1前体,可以通过激活胱天蛋白酶caspase-1,促进白细胞介素(IL)1β和IL-18的成熟和分泌,引起炎性反应。糖尿病及其并发症(如动脉粥样硬化、糖尿病肾病)通过高血糖、高胆固醇血症、高尿酸血症等激活NLRP3炎症体,引起IL-1β、IL-18水平升高,诱发炎性反应。目前研究发现,减少对NLRP3炎症体激活的刺激,可以预防和减轻糖尿病并发症,为糖尿病及其并发症的防治开拓了新的空间。     

硫氧还蛋白相互作用蛋白在大鼠急性肾损伤中的作用

目的 探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白（TXNIP）在大鼠急性肾损伤中的作用。方法 16 只雄性Sprague Dawley 大鼠随机分为假手术组（S）,缺血再灌注组（IR）,每组8 只。采用夹闭双侧肾蒂25 min,再灌注48 h 复制大鼠急性肾损伤模型。取大鼠肾脏HE 染色观察病理学结果,血标本测定血尿素氮（BUN）和血肌酐（Scr）水平,比色法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记法检测细胞凋亡指数,Western blot 检测TXNIP 和炎性体3 蛋白（NLRP3）的表达,酶联免疫吸附测定法检测白细胞介素1β（IL-1β）。结果 与S 组比较,IR 组肾小管肿胀,间质水肿,刷状缘丢失,空泡变性坏死;与S 组比较,IR 组BUN,Scr,MDA,TXNIP,NLRP3 及IL-1β 表达增高（P <0.05）,凋亡指数增高（P <0.05）,SOD 活性降低（P <0.05）。结论 TXNIP 可能通过激活NLRP3/IL-1β 炎症通路参与大鼠急性肾损伤。     

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性体的调控机制

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性体是介导人体固有免疫反应的重要蛋白,其可被广泛的外源性和内源性刺激物所激活,并通过胱天蛋白酶1(caspase-1)信号通路调节白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的活化,从而在许多炎症性疾病的发病过程中发挥着重要作用。近年来针对NLRP3炎性体的调控机制做了大量的研究,发现了许多对NLRP3炎性体具有调控作用的物质,这些研究有助于加深对炎症性疾病的认识和治疗。该文对NLRP3炎性体的组成结构、激活和调控机制予以综述。     

雌激素受体GPR30通过TXNIP/NLRP3信号通路减弱氧糖剥夺/复氧诱导的BV-2细胞氧化应激损伤和炎症反应

目的 通过研究雌激素受体G蛋白偶联受体30（G protein-coupled receptor 30，GPR30）对氧糖剥夺/再灌注（oxygen-glucose deprivation and reperfusion，OGD/R）BV-2小胶质细胞的氧化应激损伤和炎症反应的调控作用，探讨其对OGD/R BV-2小胶质细胞的保护作用及其相关机制。方法 取BV-2小胶质细胞ODG 4 h后再灌注2、4、6或12 h。Western blot检测细胞中GPR30的蛋白表达水平。将pcDNA3.1、pcDNA3.1-GPR30、sh-NC、sh-GPR30质粒转染BV-2小胶质细胞，OGD 4 h后再灌注12 h。qRT-PCR检测GPR30 mRNA的表达水平，验证其转染效率，Western blot检测细胞中GPR30、硫氧还蛋白相互作用蛋白（thioredoxin-interactingprotein，TXNIP）、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶剪切体-1（cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-1，cleaved Caspase-1）的蛋白表达水平，ELISA检测细胞中活性氧（reactive oxygen species，ROS）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、白细胞介素-18（interleukin-18，IL-18）水平。结果 GPR30在OGD/R后显著上升，在6 h时达到峰值，而在12 h时与对照组没有显著差异。随后确定OGD处理4 h，复氧12 h的时间点进行后续实验。qRT-PCR验证慢病毒转染成功，与对照组相比，OGD/R组细胞中ROS、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18水平及TXNIP、NLRP3、cleaved-Caspase-1蛋白表达水平显著上升，SOD活性显著下降（P<0.05）；过表达GPR30抑制了ROS、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18水平及TXNIP、NLRP3、cleaved-Caspase-1蛋白表达水平，促进了SOD活性；而干扰GPR30表达发挥了相反的作用。结论 GPR30能抑制 ODG/R处理后BV-2细胞内TXNIP/NLRP3信号通路分子的表达，抑制ODG/R诱导的 BV-2细胞氧化应激损伤和炎症反应，这可能是其保护ODG/R细胞的分子机制之一。     

大鼠原代神经元中依达拉奉对糖氧剥夺损伤的保护及对ROS/TXNIP/NLRP3通路的影响

目的 探讨依达拉奉后处理对神经元糖氧剥夺损伤的保护作用及对活性氧(ROS)/硫氧还蛋内结合蛋白（TXNIP)/NOD样受体相关蛋白3( NOD-like receptor associated protein 3, NLRP3)信号通路的影响。方法 培养新生SD大鼠皮质神经元,经免疫荧光染色鉴定后随机分为神经元组、依达拉奉组、糖氧剥夺组、糖氧剥夺+依达拉奉组4组。各组神经元在完成处理后以CCK-8试剂盒检测神经元活力;以细胞凋亡试剂盒检测神经元凋亡情况;以ELISA试剂盒检测神经元ROS产生情况;以蛋白免疫印迹法检测ROS/TXNIP/NLRP3信号通路相关蛋白的表达水平。结果 神经元缺糖缺氧后细胞活力显著降低,依达拉奉处理后又显著上升,差异有统计学意义（P＜0.01）;糖氧剥夺后,神经元凋亡水平、ROS含量、ROS/TXNIP/NLRP3通路相关IL-1β、TXNIP、IL-18、Caspase-1、ASC和NLRP3蛋白表达水平升高,依达拉奉处理后又显著下降,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 依达拉奉对神经元糖氧剥夺损伤具有保护作用,可能与其对R0S/TXN1P/NLKP3信号通路的抑制有关。     

棕榈酸通过肝细胞氧化应激反应激活炎症小体

目的观察棕榈酸（PA）对肝细胞氧化应激反应及炎症小体产生的影响。方法（1）将正常小鼠肝细胞AML12分别用不同 浓度的棕榈酸（0、0.15、0.25、0.4 mmol/L）处理;（2）将AML12细胞分为空白对照组（control组）、棕榈酸组（PA组）及棕榈酸+N-乙 酰半胱氨酸组（PA+NAC组）并予以相应药物处理。24 h后检测细胞中脂肪沉积情况、细胞总ROS、线粒体来源ROS、NOX4蛋 白表达、NOX4的定位以及炎症小体和IL-1β的表达。结果与control组相比,PA组细胞质中脂滴增加,细胞总ROS（12463.09± 2.72 vs 6691.23±2.45,P=0.00）及线粒体来源ROS含量（64.98±0.94 vs 45.04±0.92,P=0.00）上升,NOX4、NLRP3、ASC、caspase-1 蛋白表达增加,IL-1β表达增加（1603.52±1.32 vs 2629.33±2.57,P=0.00）,且发现线粒体和NOX4在细胞质中存在共定位,而抗氧 化剂NAC除了能使PA诱导的ROS产生减少（7782.15±2.87 vs 5445.6±1.17,P=0.00）,还可使NLRP3、ASC及caspase-1蛋白表 达下降。结论棕榈酸刺激肝细胞后,可以导致脂滴在肝细胞质中大量沉积,亦可以通过线粒体和NOX4途径导致肝细胞氧化 应激反应,并因此促进细胞炎症小体的激活和IL-1β的分泌。     

NLRP3炎症小体及其下游炎症因子在动脉粥样硬化炎症反应中的作用

目的：探讨NLRP3炎症小体及其下游炎症因子在动脉粥样硬化炎症反应中的作用。方法选择氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)作用于人单核细胞系THP-1,经Western blot法检测NLRP3及其下游炎症因子半胱天冬酶-1(Caspase-1)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-18(IL-18)的表达;并采用SiRNA技术下调空白处理组(Blank组)和ox-LDL处理组NLRP3基因表达,分别检测以上指标。结果与空白处理组相比,50 mg/L、100 mg/L、150 mg/L的ox-LDL作用于单核细胞后可促进NLRP3的表达,NLRP3下游的Caspase-1、IL-1β和IL-18表达水平与NLRP3表达一致,表达也均明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。NLRP3小干扰RNA (SC-45469)转染后,Blank组与ox-LDL组的NLRP3及其下游炎症因子Caspase-1、IL-1β和IL-18的表达均有显著下降(P<0.05);而转染后Blank组与ox-LDL组各指标下降率组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 NLRP3炎症小体参与动脉粥样硬化发生发展的过程,其可能通过改变ox-LDL的表达水平,诱发炎症相关因子Caspase-1、IL-1β和IL-18的分泌来调节, NLRP3炎症小体具有成为临床上防治动脉粥样硬化的新靶点的重要潜力。     

NLRP3炎症小体介导血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉血管内皮细胞炎症因子IL-1β的表达

目的研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）NLPR3 炎症小体激活与炎症因子白介素-1β （IL-1β）表达的影响。方法体外培养HUVECs,用AngⅡ的不同浓度和刺激时间刺激HUVECs,找到最适合的AngⅡ刺激浓度 与时间。AngⅡ刺激HUVECs前,预用AngⅡ受体阻断剂氯沙坦阻断AngⅡ作用;NAD（P）H抑制剂DPI或H2O2清除剂CAT降 低胞内活性氧（ROS）含量;用caspase-1抑制剂YVAD阻断caspase-1作用;用NLRP3 siRNA沉默胞内NLRP3表达。运用蛋白 印迹法（western blot）分别检测细胞内NOX4、NLRP3、caspase-1以及IL-1β含量。结果（1）HUVECs在浓度10-9MAngⅡ刺激 12 h后,胞内NOX4、NLRP3、caspase-1以及IL-1β的蛋白表达显著增加;（2）氯沙坦、DPI、CAT、YVAD和NLRP3 siRNA都可减 轻AngⅡ诱导的上述反应。结论AngⅡ通过促进HUVECs活性氧生成,激活NLRP3炎症小体,促进胞内炎症介质IL-1β P17活 性片段生成增加,诱导血管炎症的发生。     

皮肌炎患者外周血CD4~+ T细胞中TGF-β_1、IL-10 mRNA的表达及临床意义

目的:检测活动期皮肌炎(DM)患者外周血CD4+T细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、白介素10(IL-10)的表达以及血清肌酸激酶(CK)含量。初步探讨CD4+T细胞TGF-β1、IL-10在DM发病机制中的作用。方法:收集15例活动期DM患者和15例健康对照者外周血,采用免疫磁珠分离获得CD4+T细胞,通过逆转录聚合酶链法(RT-PCR)检测出各组TGF-β1、IL-10表达水平。观察CD4+T细胞中TGF-β1、IL-10表达与血清CK含量的相关性。结果:活动期DM患者外周血CD4+T细胞中TGF-β1和IL-10表达量显著高于健康对照,血清CK含量与CD4+T细胞TGF-β1表达量呈中度正相关。结论:活动期DM患者外周血CD4+T细胞中TGF-β1和IL-10 mRNA表达显著升高,可能与DM疾病发生有关。     

miR-223靶向NLRP3影响高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT发生的机制

目的:探讨miR-223对高糖诱导的肾小管上皮(renal tubule epithelia,NRK-52E)细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及其机制。方法:将体外培养的NRK-52E细胞分为对照组(5 mmol·L^-1 D-葡萄糖)、高糖组(30 mmol·L^-1 D-葡萄糖)、高糖+模拟物对照组(转染miR-223模拟物对照后,30 mmol·L^-1 D-葡萄糖处理)和高糖+模拟物组(转染miR-223模拟物后,30 mmol·L^-1 D-葡萄糖处理),采用RT-PCR检测各组细胞中miR-223、NLRP3、IL-1β和IL-18 mRNA的表达,Western blot检测NLRP3蛋白和EMT相关蛋白α-SMA、E-cadherin的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-223和NLRP3的靶向关系。另外,构建NLRP3过表达的NRK-52E细胞株,观察NLRP3过表达对miR-223过表达的NRK-52E细胞EMT进展的影响。结果:与对照组比较,高糖刺激后可引起miR-223和E-cadherin蛋白的表达降低,而NLRP3、IL-1β和IL-18 mRNA以及NLRP3、α-SMA蛋白表达升高(P<0.05)。与高糖组比较,转染miR-223模拟物后高糖环境下NRK-52E细胞中miR-223和E-cadherin蛋白的表达水平显著升高,NLRP3、IL-1β和IL-18 mRNA以及NLRP3、α-SMA蛋白的表达水平显著降低(P<0.05);但转染miR-223模拟物阴性对照后对高糖环境下的NRK-52E细胞无显著影响(P>0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实NLRP3是miR-223的靶基因。转染pcDNA3.1-NLRP3过表达质粒成功上调NLRP3表达后,miR-223过表达对EMT进程抑制作用得以部分逆转。结论:miR-223可通过靶向NLRP3抑制高糖诱导的NRK-52E细胞EMT的发生。     

木犀草素抑制ROS/TXNIP/NLRP3信号通路激活对小鼠急性呼吸窘迫综合征的改善作用

探讨木犀草素调控活性氧（ROS）/硫氧还蛋白结合蛋白（TXNIP）/NOD样受体相关蛋白3（NLRP3）信号通路激活对小鼠急性呼吸窘迫综合征（ARDS）的改善作用。     

高糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β的影响

目的：观察高糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β的影响。方法：体外培养人腹膜间皮细胞株第5～10代［HMrSV5,DMEM/F12培养基含10%（体积分数）胎牛血清］,观察1.5%、2.5%、4.25%（质量分数）葡萄糖腹膜透析液（dextrose）及线粒体呼吸链复合酶Ⅰ抑制剂鱼藤酮（rotenone）,线粒体呼吸链复合酶Ⅱ抑制剂噻吩甲酰三氟丙酮（thenoyltrifluoroacetone,TTFA）,线粒体呼吸链复合酶Ⅲ抑制剂抗霉素A（antimycin A）对细胞IL-1β表达的影响（免疫印迹）;通过小RNA干扰技术下调NLRP3的表达,免疫印迹分析4.25%高糖腹膜透析液作用下细胞IL-1β的表达;通过白藜芦醇（resveratrol,RSV）诱导自噬,3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）、自噬相关蛋白5（autophagy related gene 5,ATG5）siRNA、自噬相关蛋白（Beclin1）siRNA抑制自噬,流式细胞仪分析细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）,免疫印迹分析IL 1β的表达。结果：对照组、1.5%高糖腹膜透析液、2.5%高糖腹膜透析液、4.25%高糖腹膜透析液、鱼藤酮（10 μmol/L）、抗霉素A（50 mg/L）、噻吩甲酰三氟丙酮（10 μmol/L）各组细胞上清IL-1β的相对表达依次为0、0.175±0.082、0.418±0.163、2.357±0.288、2.642±0.358、3.271±0.462、0.123±0.091,提示 2.5%高糖腹膜透析液、4.25%高糖腹膜透析液、鱼藤酮、抗霉素A作用细胞IL-1β表达明显升高,应用NLRP3 siRNA可阻断上述效应;此外,对照组、阴性对照siRNA（negative control,NC siRNA）、RSV（50 μmol/L,诱导自噬）、3 MA（10 mmol/L,抑制自噬）、ATG5 siRNA（抑制自噬）、Beclin1 siRNA（抑制自噬）各组总线粒体荧光强度分别为1.76±0.42、1.83±0.55、1.85±0.62、7.36±0.92、5.35±0.77、5.06±0.62,超氧化线粒体荧光强度分别为821.68±95.12、868.15±102.82、723.39±92.56、1 660.08±113.65、1 433.01±107.24、1 562.36±112.88,结合免疫印迹结果,提示抑制自噬可增强线粒体ROS产生和提高IL-1β表达,诱导自噬对ROS、IL-1β无明显影响。结论：长期应用高糖腹膜透析液,腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β持续激活,实时启动自噬可能成为干预NLRP3-IL-1β持续激活、延缓腹膜透析腹腔慢性炎症及腹膜纤维化的治疗靶点。     

丙泊酚对小鼠急性肺损伤NLRP3信号通路的影响

目的分析丙泊酚对脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤的保护作用及对硫氧还蛋白相互作用蛋白（thioredoxin-interacting protein,TXNIP）、核苷酸结合结构域样受体蛋白3（nucleotide-binding domain-like receptor protein 3,NLRP3）表达的影响,探讨丙泊酚肺保护的可能机制。方法ICR小鼠40只,随机分为对照组（腹腔注射pH 7.4磷酸缓冲液）、LPS组（腹腔注射30 mg/kgLPS）、丙泊酚组（静脉注射40 mg/kg丙泊酚）和丙泊酚+LPS组（静脉注射40 mg/kg丙泊酚后20 min腹腔注射30 mg/kg脂多糖）,各10只。分别在光镜下对肺组织进行病理分析,检测MDA含量、SOD活性和肺上皮细胞核内TXNIP和NLRP3表达水平。结果肺组织病理学显示,丙泊酚明显减弱LPS诱发的小鼠急性肺损伤。与对照组比较,LPS组小鼠肺组织MDA含量明显升高,SOD活性明显下降（P < 0.01）,TXNIP、NLRP3 mRNA和蛋白表达均明显上调（P < 0.01）;与LPS组比较,丙泊酚+LPS组MDA含量明显降低,SOD活性明显升高（P < 0.01）,肺组织TXNIP、NLRP3 mRNA和蛋白表达均明显下调（P < 0.01）。结论静脉预注丙泊酚可通过抑制TXNIP、NLRP3 mRNA和蛋白表达水平,有效缓解LPS诱导的急性肺损伤,对肺部组织起到保护作用。