应用抑制消减杂交（SSH）克隆肺腺癌多药耐药细胞特异表达基因

目的 克隆和筛选肺腺癌多药耐药细胞特异性表达基因。方法 将肺腺癌多药耐药细胞（SPC-A-1/CDDP）作为实验组。肺腺癌细胞（SPC-A-1）作为对照组,应用抑制消减杂交技术,构建实验组特异表达cDNA消减文件;用斑点杂交初步筛选cDNA消减文库后,将获得的阳性克隆进行测序序和同源性分析（Genebank）。结果 建立了一个肺腺癌多药耐药细胞（SPC-A-1/CDPP）特异表达cDNA消减文库,斑点杂交初步筛选显示23个克隆中有SPC-A-1/CDPP特异表达cDNA片断,测序和同源性分析表明2个cDNA片断为新序列,其余cDNA片断与已知基因有96%～100%的同源性。结论 2个新的cDNA序列可能为未知肺腺癌多药耐药相关基因序列;抑制消减杂交是克隆特异表达基因的有效方法。     

人白细胞介素—15cDNA真核表达载体的构建及其在肺癌细胞？…

目的 观察人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ在腺癌细胞内的表达,方法将人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ于ＥｃｏＲⅠ、ＢａｍＨＩ位点正向克隆到逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ构建ＰＬ－ＩＬ－１５－ＳＭ的重组质粒。以Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导将该重组质粒转染到人肺鳞癌细胞（ＰＧ细胞系）和小鼠肺腺癌细胞（ＬＡ７９５细胞系）。经Ｇ４１８条件培养筛选,获得阳性细胞克隆。再经ＣＴＬＬ－２细胞增殖法阳性细胞ＩＬ－１５的表达活性。结果 获得３个ＰＧ     

阿霉素诱导的HCC—9204细胞系凋亡细胞cDNA文库构建及策略

阿霉素诱导的ＨＣＣ┐９２０４细胞系凋亡细胞ｃＤＮＡ文库构建及策略杨帆张晓东王文亮（第四军医大学病理学教研室西安７１００３３）关键词细胞凋亡ｃＤＮＡ文库中图号Ｒ７３细胞凋亡是机体生长发育，细胞分化和病理状态中细＊国家自然科学基金资助项目Ｎｏ．３９４７０...     

两个新维甲酸特异激活表达的cDNA序列的生物学功能测定

两个新维甲酸特异激活表达的ｃＤＮＡ序列的生物学功能测定雷薇黎伯铨吴我们在发现全反式维甲酸（ＲＡ）可引起食管癌细胞系生长抑制及终末分化的基础上，结合ＲＡ作用的分子机制，开辟了一条分离肿瘤抑制基因或促分化基因的新途径，建立了ＲＡ诱导前后的肿瘤细胞系的ｃ...     

人白细胞介素-15cDNA真核表达载体的构建及其在肺癌细胞中的表达

目的观察人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ在腺癌细胞内的表达。方法将人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ于ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ位点正向克隆到逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ,构建ｐＬ－ＩＬ－１５－ＳＮ的重组质粒。以Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导将该重组质粒转染到人肺鳞癌细胞（ＰＧ细胞系）和小鼠肺腺癌细胞（ＬＡ７９５细胞系）。经Ｇ４１８条件培养筛选,获得阳性细胞克隆。再经ＣＴＬＬ－２细胞增殖法测阳性细胞ＩＬ－１５的表达活性。结果获得３个ＰＧ细胞和４个ＬＡ７９５细胞阳性克隆,ＩＬ－１５活性测定显示其表达水平在２４ｈ内分别在１４２～２０１或１３８～１７８Ｕ／（ｍｌ·１０６细胞）。结论ＩＬ－１５ｃＤＮＡ转导的人和小鼠肺癌细胞可表达有生物学活性的ＩＬ－１５。     

维甲酸诱导人肺腺癌细胞基因表达和分化作用的研究

应用１０－５ｍｏｌ／Ｌ全反式维甲酸（ＲＡ）诱导人肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２，观察到：①细胞体外生长速度减慢、堆叠性生长消失、胞浆内出现空泡、细胞逐渐衰老和死亡；②双层软琼脂中细胞集落形成受到明显抑制；③细胞ＤＮＡ合成能力降低；④细胞周期出现向Ｇ１／Ｇ０期移行的特征性动力学改变；⑤细胞分化和凋亡的效应器因子－谷氨酰胺转移酶（ＴＧａｓｅ）基因早期即被激活并持续表达。研究结果表明，ＲＡ通过激活人肺腺癌细胞ＧＬＣ－８２分化相关基因表达进而启动细胞分化。     

维甲酸对人肺腺癌细胞系分化作用的实验研究

为阐明癌症发生的内在机制和探索肿瘤分化治疗与基因治疗的合适途径，作者应用１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ全反式维甲酸诱导人肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２，观察到（１）细胞体外生长速度减慢，堆叠性生长消失，细胞出出现空泡，细胞逐渐衰老和死亡；（２）双层软琼脂中细胞集落形成爱到明显抑制；（３）细胞ＤＮＡ合成能力降低；（４）细胞周期出现向Ｇ１／Ｇ０期移行的特征性动力学改变；（５）细胞分化和凋亡的效应器因子－谷氨酰胺转移酶     

人肺腺癌多药耐药细胞系的建立及其生物学特征

目的 建立人肺腺癌多药耐药细胞系。方法 以顺铂为诱导药物,人肺腺癌细胞系SPC-A-1为诱导对象,采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法,诱导建立人肺腺癌多药耐药细胞系SPC-A-1/CDDP;MTT法测定药物敏感性,透射和扫描电镜观察形态变化,常规染色体检测分析染色体变化。结果 用192d建成人肺腺癌多药耐药细胞系SPC-A-1/CDDP,它对顺铂的耐药指数为11.2,对顺铂、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素、长春新碱和足叶乙甙等药物有不同程度的耐药性,但对羧基喜树碱无耐药性,电镜观察可见SPC0-A-1/CDDP细胞胞核不规则,较大,有丰富的微绒毛。结论 本研究建立了稳定的人肺腺癌多药耐药细胞系（SPC-A-1/CDDP）,可应用于下游实验。     

维甲酸诱导人肺腺细胞基因表达和分化作用的研究

应用１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ全反式维甲酸诱导人肺腺癌细胞ＧＬＣ－８２，观察到：（１）细胞体外生长速度减慢、堆叠性长消失、泡浆内出现空泡、细胞逐渐衰老和死亡。（２）双层软琼脂中细胞集落形成受到明显抑制；（３）细胞ＤＮＡ合成能力降低；（４）细胞周期出现向Ｇ１／Ｇ０期移行的特征动力学改变；（５）细胞分化和凋亡的效应器因子－谷氨酰胺转移酶基因早期被激活并持续表达。研究结果表明，ＲＡ通过激活人肺腺癌细胞ＧＬＣ－     

以PAC和BAC克隆为探针筛选cDNA文库

目的 建立噬菌体Ｐ１衍生的人工染色体（ＰＡＣ）和细菌人工染色体（ＢＡＣ）筛选人正常肝ｃＤＮＡ文库的方法,并期望分离到与肝癌相关的新基因。方法 用位于１７ｐ１３．３肝癌杂合性缺失区内的ＰＡＣ５７９和ＢＡＣ１５２９克隆为探针,以噬菌斑杂交筛选人正常肝ｃＤＮＡ文库,并对分离出的ｃＤＮＡ阳性克隆进行部分测序和计算机序列比较及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析,进一步确定可能与肝癌相关的新基因。结果 以ＰＡＣ５７９为     

9-顺维甲酸对人肺腺癌细胞维甲酸受体转录的影响

目的：观察９－顺维甲酸（９－ｃｉｓ－ＲＡ）处理前后人肺腺癌细胞株ＰＧ和Ａ５４９维甲酸受体（ＲＡＲｓ）及维甲类Ｘ受体　（ＲＸＲｓ）不同时相ｍＲＮＡ转录水平的表达。方法：用ＲＴ－ＰＣＲ相对定量检测人肺腺癌细胞株ＰＧ和Ａ５４９加９－ｃｉｓ－ＲＡ前后ＲＡＲｓ和ＲＸＲｓ　ｍＲＮＡ转录水平。结果：应用９－ｃｉｓ－ＲＡ后，两细胞株的ＲＡＲα和ＲＡＲβ－ｍＲＮＡ转录水平较对照组明显增高，其余受体转录无明显变化。结论：受体ＲＡＲα和ＲＡＲβ可能与９－ｃｉｓ－ＲＡ对两细胞株的生长抑制和诱导凋亡作用有密切关系。     

人肺腺癌细胞系SPC－A_8的建立及生物学特性

１９８９年８月４日，作者以一例肺腺癌手术标本（原发灶）为原代培养材料，建立了能长期稳定传代培养的肺腺癌细胞系ＳＰＣ－Ａ８。类多边形细胞贴壁生长，倍增时间３２．５小时，克隆形成率２３．９％，ＤＮＡ指数（ＤＩ）２．１６，染色体众数在７７～８２范围内，核型为８６．ＸＹ．＋３Ａ，－２Ｂ，＋１１Ｃ，－３Ｄ，＋８Ｅ，＋６Ｆ，＋１０Ｇ，另有５条染色体不能分组。ＳＰＣ－Ａ８细胞的Ｇ６ＰＤ和ＬＤＨ同功酶谱与ＨｅＬａ细胞相同。ＳＰＣ－Ａ８细胞的裸鼠移植瘤呈腺癌结构。以上特征证明ＳＰＣ－Ａ８为人肺腺癌细胞系。     

肺癌细胞核形态测定及DNA定量分析

①目的探讨肺癌细胞核形态参数及ＤＮＡ含量与肿瘤生物学行为的关系。②方法应用图象分析技术对８２例原发性肺癌标本进行细胞核形态和ＤＮＡ原位定量测定。③结果在肺腺癌，癌细胞ＤＮＡ含量、核面积、核周长及核形态因子与肿瘤大小、有无淋巴结转移及病人预后均有明显关系，且肿瘤长径＞３ｃｍ组、淋巴结癌转移组的ＤＮＡ六倍体（６Ｃ）以上病例数，均显著多于肿瘤长径≤３ｃｍ组及淋巴结癌转移阴性组（χ２＝７．８３，５．２５；Ｐ均＜０．０５）；以上指标均与肺鳞癌无关。④结论细胞核形态和ＤＮＡ测定对于估测肺腺癌病人的预后有重要意义；且ＤＮＡ－６Ｃ在划分肺腺癌良恶性方面是一个重要的临界点     

人树突状细胞cDNA质粒文库的构建及其大规模随机测序体系的建立

建立人树突状细胞（ＤＣ）的ｃＤＮＡ文库,通过大规模随机测序克隆免疫新分子。方法：来源于正常人外周血的单核细胞,体外经ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－４培养,扩增出高纯度的ＤＣ,抽取纯化ｍ ＲＮＡ,转录成ｃＤＮＡ,定向插入ｐＳＰＯＲＴ２．０载体,建立人ＤＣ的ｃＤＮＡ 质粒文库;用ＡＢＩ３７７全自动测序仪对该文库进行同源性比较,筛选出代表未知基因ＥＳＴ,然后在ＧＣＧ 软件中进行分析,对重要的未知ＥＳＴ克隆其全长ｃＤＮＡ。结果：所扩增的ＤＣ经流式细胞仪分析高表达ＭＨＣ－Ⅰ,ＭＨＣ－Ⅱ,Ｂ７,ＣＤ１ａ 和ＣＤ８３等表面标志,能强烈刺激同种异体Ｔ淋巴细胞的体外增殖反应;建立的ＤＣｃＤＮＡ 文库９２％ 以上克隆有平均１．６ ｋｂ 大小的插入片段;从所测的１２ ０００余条ＥＳＴ中筛选出代表未知基因的３ ０００余条,克隆到１０９条全长新基因,包括属于细胞因子、细胞因子受体、趋化因子和粘附分子等家族的免疫新分子,部分全长基因已在Ｇｅｎｅｂａｎｋ 中登录。结论：成功建立了人ＤＣ的ｃＤ－ＮＡ 基因文库及其大规模随机测序体系,并克隆到免疫分子。建立人树突状细胞（ＤＣ）的ｃＤＮＡ文库,通过大规模随机测序克隆免疫新分子。方法：来源于正常人外周血的单核细胞,体     

应用重组基底膜侵侵袭技术对人肺腺癌细胞侵袭能力的 …

目的 研究ＲＡＢ５Ａ基因转染后对肺腺癌侵袭能力的影响。方法 采用重组基底膜侵袭实验,观察转染前后的细胞系对基底膜侵袭能力的改变。结果 转染ｐｃＤＮＡ３．１－ＲＡＢ５Ａ正义表达载体ＡＧＹ８３－ａ细胞系基底膜侵袭能力增强,转染ｐｃＤＮＡ８３－ｎｔｉＲＡＢ５Ａ反义ＲＮＡ重组质粒的Ａｎｉｐ９７３细胞系侵袭能力明显减弱。结论 ＲＡＢ５Ａ在人非小细胞肺癌的袭及转移特性的形成中具有重要的作用,ＲＡＢ５Ａ的反义分     

维甲酸与粒-巨噬系集落刺激因子对温热诱导HL-60细胞凋亡的影响

应用温和热处理诱导人急性髓系白血病细胞系ＨＬ－６０细胞发生凋亡，观察到典型的细胞形态学改变和特征性的ＤＮＡ梯型；维甲酸可促使细胞凋亡，而重组人粒－巨噬系集落刺激因子的抑制作用轻微。用斑点杂交法检测温和热处理组及维甲酸加温和热处理组细胞的ｃ－ｍｙｃ基因ｍＲＮＡ表达水平，二者明显低于对照组     

p^53cDNA突变和突变型p^53蛋白表达与大肠癌预后的关系

目的 探讨ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变和突变型ｐ＾５３基因蛋白表达与大肠腺癌预后的关系。方法 ＲＴ－ＳＳＣＰ检测大肠腺癌组织ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变，ＰＡｂ２４０单抗免疫组化检测腺癌组织突变型ｐ＾５３基因蛋白表达，比较两者与大肠腺癌预后的关系。结果 １００例大肠腺癌中，ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变５１例（５１％），突变型ｐ５３基因蛋白高表达７６例（７６％），两者同步阳性４９例：ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变与突     

Dnmt3b cDNA及其在小鼠胚胎组织中选择剪接异构体的克隆

目的 克隆与小鼠胚胎发育相关的新的新的全长ｃＤＮＡ。方法 从小鼠胚胎ｃＤＮＡ文库中筛选出一个新的ＥＳＴ,以８～９ｄ齿小鼠胚胎组织ｍＲＮＡ为模板进行ＲＡＣＥ（ｒａｐｉｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｄｓ）,结合ＰＣＲ筛选ｃＤＮＡ文库,获得共全长ｃＤＮＡ序列后进行序列同源检索、结构分析和功能预测。整合后的ｃＤＮＡ两上物进行ＲＴ－ＰＣＲ,克隆ＰＣＲ产物,并对产物进行全序列测定,验证整     

未知人Na（＋）—K（＋）—Exchanging ATP aseα1亚基基因第一 …

目的 研究人Ｎａ（＋）－Ｋ（＋）－ＥｘｃｈａｎｇｉｎｇＡＴＰａｓｅα１亚单位基因外区约８０￣１３０位氨基酸编码序列的未知基因组结构。方法 采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对人基因组ＤＮＡ及ｃＤＮＡ文库进行扩增,限制性酶切分析扩增产物,并进行荧光测序,对测序结果进行同源性分析及剪接位点的搜索并对得到的核苷酸序列进行分析。结果 人基因组ＤＮＡ和ｃＤＮＡ经扩增后分别得到８３３和１９５ｂｐ两种不同大小的片段     

人脑胶质瘤cDNA文库的构建

作者用异硫氰酸胍－酚－氯仿一步法提取人脑胶质瘤总ＲＮＡ，Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）纤维素亲和层析分离ｐｏｌｙ（Ａ￣＋）ＲＮＡ为模板，合成的ｃＤＮＡ长度为０．２～５ｋｂ。胶质瘤ｃＤＮＡ插入片段克隆到λｇｔ１１载体，所获得的重组子在体外进行包装。该ｃＤＮＡ文库滴度为１．１２×１０￣５，克隆效率为４．８×１０￣３／ｎｇｃＤＮＡ。本文库为研究人脑胶质瘤的基因结构与功能提供了重要基础。