尼莫地平对癫痫大鼠海马Ca^2＋浓度及Ca^2＋/钙调蛋白依赖性蛋白激酶K表达的影响

目的探讨尼莫地平（nimodipin，NIM）对戊四氮（pentylenetetrazol，PrZ）点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离Ca^2＋浓度（[Ca^2＋]）、Ca^2＋／钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ。（calcium／calmodulin—dependent protein kinase Ⅱn，CaMKⅡα）蛋白表达的影响。方法将动物分为正常对照组、PTZ组和NIM＋PTZ组，采用P佗慢性点燃癫痫模型，应用Mor—ris水迷宫观察各组大鼠空间学习记忆能力，运用流式细胞仪检测海马细胞内[Ca^2＋]．变化，Western blot方法测定CaMKⅡα蛋白的表达。结果PTZ组大鼠空间学习记忆能力受损，其海马细胞内[Ca^2＋]．明显升高（P〈0．05），CaMKⅡα蛋白水平较正常对照组减少（P〈0．05）；与PrZ组比较，NIM＋PrZ组大鼠空间学习记忆能力好转，其海马细胞内[Ca^2＋]．下降（P〈0．05），CaMKⅡα蛋白水平升高（P〈0．05）。结论PTZ点燃癫痫大鼠海马存在钙超载及CaMKⅡα的表达异常，由此引起大鼠空间学习记忆能力受损；NIM可以降低细胞内[Ca^2＋]．，提高CaMKⅡα的表达，改善癫痫大鼠的学习记忆能力。     

戊四氮点燃癫痫大鼠海马Ca2+浓度及CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ的表达

目的 探讨戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+] i)、Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶IIα ( calcium / calmodulin-dependent protein kinase IIα, CaMKIIα) mRNA的表达.方法 动物分为正常对照组和PTZ组,采用PTZ慢性点燃癫痫模型,应用Morris水迷宫观察2组大鼠空间学习记忆能力,运用流式细胞仪检测海马细胞内[Ca2+]i浓度变化,反转录多聚酶链反应方法测定海马CaMKIIα mRNA的表达.结果 PTZ组大鼠空间学习记忆能力受损,其海马细胞内[Ca2+]i浓度明显升高(P<0.05),CaMKIIα mRNA表达水平明显降低(P<0.05).结论 PTZ点燃癫痫大鼠海马存在钙超载及CaMKIIα的表达异常,由此引起空间学习记忆受损.     

戊四氮点燃癫痫大鼠海马Ca^2＋浓度及CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ的表达

目的 探讨戊四氮（pentylenetetrazol,PTZ）点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离Ca2＋浓度（[Ca2＋] i）、Ca2＋/钙调蛋白依赖性蛋白激酶IIα （ calcium / calmodulin-dependent protein kinase IIα, CaMKIIα） mRNA的表达.方法 动物分为正常对照组和PTZ组,采用PTZ慢性点燃癫痫模型,应用Morris水迷宫观察2组大鼠空间学习记忆能力,运用流式细胞仪检测海马细胞内[Ca2＋]i浓度变化,反转录多聚酶链反应方法测定海马CaMKIIα mRNA的表达.结果 PTZ组大鼠空间学习记忆能力受损,其海马细胞内[Ca2＋]i浓度明显升高（P〈0.05）,CaMKIIα mRNA表达水平明显降低（P〈0.05）.结论 PTZ点燃癫痫大鼠海马存在钙超载及CaMKIIα的表达异常,由此引起空间学习记忆受损.     

尼莫地平对戊四氮慢性点燃癫癎大鼠学习记忆的影响

目的 探讨尼莫地平(nimodipine,NIM)对戊四氮(Pentylenetetrazole,PTZ)慢性点燃癫癎大鼠学习记忆能力及海马细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+] i)的影响.方法 120只动物随机分为正常对照组(A组)、PTZ单纯致癎组(B组)、NIM1.25 mg/kg干预组(C组),NIM2.5 mg/kg干预组(D组),通过腹腔注射PTZ建立慢性癫癎动物模型并用尼莫地平进行干预,应用Morris水迷宫和Y迷宫观察各组大鼠学习记忆能力的变化,运用流式细胞仪检测海马细胞内[Ca2+] i浓度变化.结果 与B组比较,C组和D组大鼠在水迷宫中的逃避潜伏期[(5.94±1.19)s、(5.69±1.03)s]vs [(7.71±1.30)s]缩短(P ＜0.05),穿越平台区域的次数[(8.58±2.12)次、(7.51±2.05)次 vs (5.73±2.14)次]明显增多(P ＜0.01),在Y迷宫的错误反应次数[(8.75 ± 2.22)次、(8.00 ± 3.16)次 vs (12.75±2.50)次]减少(P ＜0.05), 其海马细胞内[Ca2+] i浓度[(1.32±0.26)、(1.31±0.35) vs (1.94±0.33)]下降(P ＜0.05).结论 NIM腹腔注射可以降低癫癎大鼠海马细胞内[Ca2+] i,减轻钙超载,改善癫癎大鼠的学习记忆能力.     

愈痫灵对致痫大鼠海马神经元CaM和CaMKⅡα表达的影响

目的研究愈痫灵颗粒对致痫大鼠海马组织钙调蛋白(CaM)和钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(CaMKⅡα)表达的影响。方法采用腹腔注射戊四氮(PTZ)造成慢性癫痫大鼠模型,以半定量RT-PCR技术检测不同药物干预后大鼠海马组织CaM和CaMKⅡα的mRNA表达水平;图像自动分析系统进行其吸光度扫描。结果愈痫灵颗粒可降低海马神经元CaMmRNA的表达,升高CaMKⅡαmRNA的表达。结论通过调控Ca2 信号转导途径中的某些靶位点,影响Ca2 -CaM-CaMKⅡα信息链是愈痫灵颗粒抗癫痫的重要途径之一。     

美金刚对戊四氮致痫大鼠空间学习记忆能力及海马ERK1/2mRNA的影响

目的 观察美金刚对戊四氮诱导癫痫大鼠空间学习记忆功能的影响及海马部位细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)mRNA 表达的变化。方法 戊四氮( PTZ)腹腔注射诱导慢性癫痫(CEP) 模型,点燃后腹腔注射美金刚一周,采用Morris水迷宫对大鼠进行行为学检测,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠海马细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)mRNA 表达的变化。结果 癫痫组大鼠空间学习记忆能力受损;美金刚可以改善癫痫大鼠的空间学习能力,美金刚组海马部位ERK1/2mRNA水平较癫痫组有所升高。结论 美金刚可以改善戊四氮诱导癫痫大鼠空间学习能力,其作用机制可能与ERK信号通路有关。     

戊四氮致痫大鼠对学习记忆及海马齿状回PSD-95表达的影响

目的探讨戊四氮(PTZ)点燃癫痫对大鼠空间学习记忆及海马齿状回突触后致密物-95(PSD-95)表达的影响。方法戊四氮腹腔注射点燃慢性癫痫(CEP)模型,采用Morris水迷宫对大鼠进行行为学检测,运用免疫组织化学方法观察海马齿状回PSD-95的表达。结果癫痫组大鼠空间学习记忆能力受损;其海马齿状回PSD-95免疫阳性产物与对照组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论戊四氮点燃癫痫大鼠空间学习记忆受损可能与海马神经元PSD-95的表达减少有关。     

美金刚对戊四氮致痫大鼠空间学习记忆能力的影响及其机制

目的观察美金刚对戊四氮诱导癫痫大鼠空间学习记忆功能的影响及海马部位细胞外信号调节激酶1、2(ERK1、ERK2)mRNA表达的变化。方法戊四氮(PTZ)腹腔注射诱导慢性癫痫(CEP)模型,点燃后腹腔注射美金刚1周,采用Morris水迷宫对大鼠进行行为学检测,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠海马细胞外信号调节激酶1、2(ERK1、ERK2)mRNA表达的变化。结果癫痫组大鼠空间学习记忆能力受损;美金刚可以改善癫痫大鼠的空间学习能力,美金刚组海马部位ERK1/2 mRNA水平较癫痫组有所升高。结论美金刚可以改善戊四氮诱导癫痫大鼠空间学习能力,其作用机制可能与ERK信号通路有关。     

脑发育不同阶段甲醛暴露对大鼠学习记忆能力及海马CA3区CaMKⅡ表达的影响

目的:研究低浓度甲醛吸入对脑发育不同阶段大鼠空间学习记忆能力、生长发育及海马CA3区CaMKⅡ表达的影响.方法:选择生后3 d、14 d、60 d(相当于新生儿期、幼年期、成年期)Wistar大鼠,每年龄段随机分为对照组和染毒组各8只,采用吸入方式染毒(甲醛浓度为0.5 mg/m3),2 h/d,连续28 d;监测大鼠体重,用Morris水迷宫检测其空间学习记忆能力,免疫组织化学方法检测海马CA3区CaMKⅡ表达.结果:所有染毒组大鼠较同龄对照组均出现体重增长落后(P<0.05);新生鼠染毒组和幼年鼠染毒组在Morris水迷宫中定位航行实验逃避潜伏期比同龄对照组明显延长(P<0.05);空间探索试验穿越平台次数也明显少于同龄对照组(P<0.05);免疫组织化学检测海马CA3区CaMKⅡ表达较同龄对照组下降(P<0.05);而成年组除染毒组体重增长落后外,水迷宫逃避潜伏期、穿越平台次数及海马CA3区CaMKⅡ表达两组均无显著性差异(P>0.05).结论:甲醛吸入染毒可能影响Wistar大鼠学习记忆能力,脑发育早期(新生儿期和婴幼儿期) 对甲醛的神经毒性更为敏感;海马CA3区CaMKⅡ表达下降可能是甲醛影响大鼠学习记忆的机制之一.     

戊四氮点燃癫痫大鼠学习记忆改变及海马神经颗粒素的表达变化

目的:探讨戊四氮慢性点燃癫痫对大鼠学习记忆能力的影响及海马神经颗粒素(neurogranin,Ng)的表达变化.方法:采用戊四氮(pentylenetetrazole,PTZ)腹腔注射慢性点燃癫痫(chronic epileptic,CEP)模型,用Morris水迷宫和Y迷宫对大鼠进行学习记忆能力检测,运用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法和Western Blot方法分别测定大鼠海马NgmRNA和蛋白的水平变化.结果:与对照组比较,慢性癫痫发作组大鼠在水迷宫中的逃避潜伏期[(7.7 ±1.3)s vs(4.5 ±1.1)s]延长(P<0.01),穿越平台次数[(5.7 ±2.1)vs(9.2±2.2)]减少(P<0.01),在Y迷宫中的错误反应次数[(12.8±2.5)vs(6.2±3.1)]增多(P<0.05),并伴有海马NgmRNA转录水平[(0.53±0.07)vs(0.74±0.04)]下降(P<0.01)和蛋白表达[(0.61±0.17)vs(0.91±0.23)]减少(P<0.05).结论:戊四氮慢性点燃癫痫大鼠学习记忆能力受损,海马Ng mRNA转录水平下降和蛋白表达减少可能参与了这一过程.     

创伤后应激障碍样行为异常大鼠海马Ca2+/CaM依赖性蛋白激酶表达的研究

目的探讨创伤后应激障碍(PTSD)样行为异常的神经生物学机制.方法以海马惊厥阈下电刺激方法制备PTSD大鼠模型,采用流式细胞仪、荧光标记术及Western 印迹等方法,检测PTSD样行为异常大鼠海马细胞内游离Ca2+含量与钙调素(CaM)相对活性平均通道荧光,以及海马组织总CaM、Ca2+/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱα(CaMKⅡα)与Ⅳ(CaMKⅣ)的表达.结果电刺激停止后24 h大鼠海马细胞内游离钙浓度(nmol/L)增至顶峰(487.34±117.93,P＜0.01),72 h时仍明显增高(289.46±69.45,P＜0.05);游离CaM平均通道荧光则同步降低(24 h时为1.5±0.4,P＜0.01;72 h时为2.5±0.6,P＜0.05);而海马组织总CaM表达于电刺激停止后48 h内明显增多(P＜0.01),CaMKⅡα表达则显著降低(P＜0.01),CaMKⅣ表达于电刺激停止后24 h内明显增高(P＜0.05).结论海马细胞Ca2+-CaM-CaMKIIα/CaMKIV信号途径较长时程调控紊乱,可能是实验动物持续性PTSD样行为异常的重要病理生理基础之一.     

不同剂量盐酸多奈哌齐对慢性癫痫大鼠空间学习记忆功能的影响

目的 探讨盐酸多奈哌齐(donepezil,Done)对戊四氮(pentylenetetrazole,PTZ)点燃慢性癫痫大鼠的认知功能损害的干预作用.方法 90只雄性SD大鼠分为盐水对照组(n=18)和癫痫模型组(n=72),模型组以PTZ腹腔注射(35 mg*kg-1*d-1)21 d造成慢性癫痫大鼠模型后,随机分为:PTZ组,Done 0.3 mg/kg组,Done 1 mg/kg组,Done 3 mg/kg组,4组均继续每日给予PTZ腹腔注射,Done各剂量组给予Done灌胃21d,停药后采用Morris水迷宫和跳台的方法观察PTZ点燃癫痫模型学习记忆功能的改变以及Done的影响作用.结果 PTZ组水迷宫中逃避潜伏期延长(P<0.01),平台象限游泳时间减少(P<0.01),穿越平台次数减少(P<0.05);跳台实验中反应时间延长(P<0.05),步下潜伏期缩短(P<0.05),错误次数增加(P<0.05);Done 0.3 mg/kg组与PTZ组在各项观察中无明显差异,Done 1、3 mg/kg组与PTZ组相比差异明显(P<0.05),但Done 1 mg/kg和3 mg/kg两组间相比无明显差异.结论 PTZ点燃的慢性癫痫大鼠有空间学习记忆能力障碍,Done可部分改善慢性癫痫大鼠在水迷宫和跳台实验中的空间学习能力,明显改善空间记忆能力,且具有一定的量效关系.     

天然抗氧化剂α-硫辛酸对戊四氮点燃大鼠认知功能的保护作用及机制

目的观察α-硫辛酸(ALA)对戊四氮(PTZ)点燃大鼠认知功能的保护作用,并探讨其机制。方法 45只健康成年雄性Sprague Dawley大鼠随机分为对照组、癫痫组和治疗组,每组15只。癫痫组和治疗组大鼠给予PTZ隔日腹腔注射建立PTZ点燃模型,治疗组同时给予ALA腹腔注射,利用Morris水迷宫实验检测动物空间学习、记忆能力,采用比色法检测海马组织中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平,2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFHDA)探针检测脑组织中活性氧自由基(ROS)水平。结果与对照组比较,癫痫组大鼠水迷宫实验中逃避潜伏期显著延长(P<0.05),在目标象限停留时间显著缩短(P<0.05),海马组织中MDA和ROS水平显著增高(P<0.05),GSH水平显著降低(P<0.05);与癫痫组比较,治疗组大鼠ALA治疗后水迷宫实验中逃避潜伏期显著缩短(P<0.05),目标象限停留时间显著延长(P<0.05),海马组织中ROS和MDA水平显著降低(P<0.05),GSH水平显著升高(P<0.05)。结论氧化应激在癫痫发病中有重要作用,ALA抗氧化治疗能减轻脑组织氧化应激损伤,改善癫痫大鼠的认知功能。     

神经生长因子对小鼠海马突触体内[Ca2+]i的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)对小鼠海马突触体内[Ca2+]i水平的影响.方法采用海马内微注射方法,使用荧光指示剂Fura-2/AM检测各组小鼠海马突触体内[Ca2+]i水平.结果1.NGF对青年小鼠海马突触体内[Ca2+]i水平没有显著影响;2.NGF能缓解衰老小鼠海马突触体内[Ca2+]i超载现象;3.NGF也能降底人为海马突触体内[Ca2+];水平.结论NGF通过调节海马突触体内[Ca2+]i的水平来改善衰老动物的学习记忆能力.     

神经生长因子对小鼠海马突触体内[Ca2+]i的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)对小鼠海马突触体内[Ca2+]i水平的影响。方法采用海马内微注射方法,使用荧光指示剂Fura-2／AM检测各组小鼠海马突触体内[Ca2+]i水平。结果1．NGF对青年小鼠海马突触体内[Ca2+]i水平没有显著影响;2．NGF能缓解衰老小鼠海马突触体内[Ca2+]i超载现象;3．NGF也能降底人为海马突触体内[Ca2+];水平。结论NGF通过调节海马突触体内[Ca2+]i的水平来改善衰老动物的学习记忆能力。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化的心肌样细胞内Ca2+和CaMKⅡ的变化

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)体外诱导分化为心肌样细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i)及钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的表达变化.方法取健康SD大鼠骨髓,用5-氮杂胞苷体外诱导培养.取诱导培养2、3、4周的MSCs为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,另取急性分离的心肌细胞为对照组,分别用激光共聚焦技术和Western blot技术检测[Ca2 ]i及CaMKⅡ表达水平.结果经荧光探针结合Ca2 后,用激光共聚焦技术检测发现,随诱导培养时间的延长,[Ca2 ]i逐渐增加;诱导培养4周的MSCs内[Ca2 ]i与对照组比较无显著差异[(100.81±17.64),(100.32±17.10),P＞0.05].各组细胞CaMKⅡ的变化趋势与[Ca2 ]i定量分析结果相似,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照组分别为(322.45±19.43)、(434.43±16.77)、(680.91±20.61)、(682.69±21.03),Ⅲ组与对照组比较P＞0.05.结论大鼠MSCs在体外诱导培养4周后已分化为心肌样细胞,其细胞内游离钙浓度和CaMKⅡ蛋白表达水平与正常心肌细胞相似.     

戊四氮诱发慢性癫痫大鼠学习记忆改变及海马环磷腺苷反应单元结合蛋白的表达

目的探讨戊四氮(PTZ)诱发慢性癫痫大鼠学习记忆能力改变及环磷腺苷反应单元结合蛋白(CREB)表达的变化。方法将20只大鼠随机分为正常对照组和观察组,每组10只,观察组按3.5 m L·kg-1连续腹腔注射10 g·L-1的PTZ 30 d建立慢性癫痫模型,以出现全身强直-阵挛性发作为模型制备成功;正常对照组每日腹腔注射生理盐水3.5 m L·kg-1,连续30 d。2组大鼠进行Y迷宫实验,记录错误反应次数(EN)、全天总反应时间(TRT),观察各组大鼠学习记忆能力;Western blot方法测定大鼠海马组织内磷酸化CREB(P-CREB)133位的丝氨酸残基(Ser133)蛋白表达水平。结果观察组大鼠的EN显著高于正常对照组,观察组大鼠的TRT显著长于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组大鼠海马组织中P-CREB(Ser133)蛋白表达水平较正常对照组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论海马组织内CREB表达水平降低可能是癫痫大鼠学习记忆等认知功能障碍发生的分子机制之一。     

美金刚改善血管性痴呆大鼠认知功能及相关作用机制的研究

目的 研究美金刚对血管性痴呆(VD)大鼠认知功能及海马N-甲基D-天(门)冬氨酸-2B亚基受体(NMDAR-2B)水平、突触后致密物质95(PSD-95)表达和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活性的影响.方法 采用结扎双侧颈总动脉方法制备VD大鼠模型,将144只Wistar大鼠随机分为假手术组、VD模型组(VD组)和美金刚治疗组(美金刚组).于术后4、8、12、16周用Morris水迷宫检测各组大鼠的学习记忆水平,用RT-PCR法检测大鼠海马NMDAR-2B水平,用免疫组织化学法检测PSD-95的表达,用32P掺入法检测大鼠海马CaMK Ⅱ的活性.结果 与假手术组比较,VD模型组大鼠术后各时间点的学习记忆能力均显著下降(均P<0.01);海马NMDAR-2B的水平和PSD-95的表达在术后4周时明显增高(P<0.05或0.01),术后8～16周显著降低(均P<0.01);海马总CaMKⅡ活性术后4周时明显增高(P<0.01),术后8周下降(P>0.05),术后12、16周明显降低(均P<0.01).美金刚组术后4周时上述各项检测结果与假手术组差异无统计学意义,术后8、12周时学习记忆水平、NMDAR-2B水平和PSD-95的表达明显高于VD模型组(P<0.01或0.05);而总CaMKⅡ活性与VD模型组差异无统计学意义.结论 VD发生发展过程中,NMDAR-2B水平、PSD-95的表达和总CaMK Ⅱ活性先过度激活后明显降低,美金刚能拮抗或上调海马NMDAR-2B表达并改善VD大鼠的认知功能,但对CaMKⅡ活性的影响有限.     

PTZ点燃癫痫大鼠海马BMP4的表达研究

目的观察骨形成蛋白4（BMP4）基因在戊四氯（PTZ）点燃癫痫大鼠海马中的表达，并探讨其与癫痫发病机制的关系。方法将40只成年雄性SD大鼠随机分为对照组和实验组。实验组采用PTZ点燃癫痫大鼠，按点燃进程，又随机分为Ⅰ级组、Ⅲ级组、Ⅳ级组和Ⅴ级组。用地高辛标记特异性寡核苷酸探针原位杂交组织化学技术和图像分析技术，观察海马BMP4表达的变化。结果发现应用PTZ点燃后，Ⅱ级以上大鼠海马区BMP4的表达增加。Ⅲ和Ⅳ级大鼠海马CA3及DGBMP4的表达明显高于对照组（P〈0．01）；Ⅴ级大鼠在发作后海马CA3及DGBMP4的表达呈逐渐下降。结论BMP4可能参与了癫痫的发生、发展过程。     

慢性癫痫大鼠认知功能及海马胞外信号调节激酶1/2的变化

目的观察不同痫性发作次数对戊四氮（PTZ）诱导的癫痫大鼠空间学习记忆功能的影响及海马部位细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）mRNA及蛋白水平的变化。方法FIE腹腔注射诱导慢性癫痫模型,点燃后根据痫性发作次数分为不同亚组（痫性发作1次、5次、10次、14次组）,采用Morris水迷宫检测大鼠行为学变化,采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）及免疫印迹Western Blot的方法检测大鼠海马ERK1／2mRNA和蛋白水平的变化。结果癫痫组大鼠空间学习记忆能力受损;痫性发作1次、5次组大鼠海马部位ERK1／2mRNA水平较对照组下降（P〈0．05）,而10次、14次组大鼠海马部位ERK1／2mRNA水平较1次有所升高（P〈0．05）,且高于对照组大鼠水平（P〈0．05）。各组大鼠海马部位总ERK1／2和P—ERK1／2的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论随痫性发作次数增加,癫痫大鼠空间学习能力受损明显,其海马部位ERK1／2mRNA水平存在一个动态变化过程,癫痫后认知功能损害的机制可能与ERK信号通路有关。