黄芪对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎小鼠的治疗作用及机制研究

目的：观察中药黄芪对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎（EAE）小鼠的治疗作用,并探讨其免疫调节机制。方法：建立C57BL／6小鼠EAE模型,通过5级临床症状评分观察黄芪对EAE小鼠的治疗作用;HE染色观察黄芪对EAE小鼠脊髓炎症细胞浸润的影响;CCK-8法检测脾脏髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG）多肽MOG35-55特异性T细胞增殖情况;ELISA法检测脾脏MOG35-55特异性T细胞培养上清液中IFN-γ、TNF—α、IL-17、IL-4的水平。结果：黄芪能够有效抑制EAE小鼠的临床症状,减轻中枢神经系统的炎性反应,抑制MOG35-55特异性T细胞增殖及IFN-γ、TNF-α、IL-17的分泌,促进IL-4的分泌。结论：黄芪能够有效抑制中枢神系统的自身免疫反应,这种作用与其抑制MOG35-55特异性T细胞增殖,减少Th1、Th17型细胞因子分泌,促进Th2型细胞因子分泌相关。     

孕激素对小鼠脾细胞淋球菌感染模型NLRP3炎性体表达及Th17/Treg分化的影响

目的：研究孕激素对小鼠脾细胞淋球菌（Neisseria gonorrhoeae,Ng）感染模型中NLRP3炎性体表达及Th17/Treg分化的影响。方法：体外分离、培养小鼠脾细胞后,分为如下5组：空白对照组、Ng组、Ng+1×10-9 mol/L孕酮组、Ng+1×10-8 mol/L孕酮组、Ng+1×10-7 mol/L孕酮组。培养3 d后收集细胞,采用流式细胞术检测Th17/Treg细胞比例,利用实时荧光定量PCR检测各组细胞NLRP3、Th17/Treg特异性转录因子RORγt、Foxp3 mRNA表达水平,Western blot检测各组细胞NLRP3、Caspase?1p20、RORγt、Foxp3蛋白表达。ELISA法检测脾细胞培养上清中白细胞介素（interleukin,IL）?1β及Th17/Treg相关细胞因子IL?17、转化生长因子（transforming growth facfor,TGF）?β、IL?10水平。结果：脾细胞在淋球菌的刺激下,Th17细胞和Treg细胞比例增多,细胞内NLRP3、Th17/Treg特异性转录因子RORγt、Foxp3 mRNA和蛋白表达水平升高,Caspase?1p20蛋白表达水平升高,细胞培养上清中IL?1β、IL?17、TGF?β、IL?10含量增高（P < 0.01）;加入孕酮预处理后,随着孕酮作用浓度的增高,Th17细胞比例、细胞内NLRP3和RORγt的mRNA和蛋白表达水平、Caspase?1p20蛋白表达水平、细胞培养上清中IL?1β和IL?17含量均明显降低,Treg细胞比例、细胞内Foxp3 mRNA和蛋白表达、细胞培养上清中TGF?β和IL?10含量均明显增高,与Ng组比较差异有统计学意义（P < 0.01）。结论：孕激素可抑制Ng感染诱导的小鼠脾细胞NLRP3表达及Th17细胞分化,促进Ng感染诱导的Treg细胞分化。     

SOCS3基因转染对小鼠CD4＋T h细胞分化及炎症细胞因子表达的影响及机制研究

目的：观察SOCS3基因对小鼠CD4＋Th细胞分化及细胞因子表达的影响。方法分离、培养并转染小鼠CD4＋Th细胞,以植物血凝素（PHA）刺激靶细胞,采用逆转录聚合酶链反应（RT‐PCR）检测相应细胞因子基因表达;蛋白质印迹法（West‐ernblot）检测目的细胞因子蛋白表达。结果与对照组相比较,转染组T‐bet、白细胞介素（IL）‐2、干扰素‐γ（IFN‐γ）、信号转导及转录激活因子（STAT）4、IL‐12Rβ2基因表达明显下调,细胞因子信号抑制物（SOCS）3、GATA‐3、IL‐4、IL‐6、IL‐10、STAT6基因表达明显上调,T‐bet、IL‐2、IFN‐γ、STAT4、IL‐12Rβ2蛋白表达明显下调,SOCS3、GATA‐3、IL‐4、IL‐6、IL‐10、STAT6蛋白表达明显上调,差异均有统计学意义（P＜0．01）。结论SOCS3基因转染可上调小鼠CD4＋Th细胞SOCS3基因表达,下调STAT4活化和磷酸化,抑制Th1细胞分化,并下调炎症细胞因子基因和蛋白表达,同时间接促进Th2细胞分化,并上调相应炎症细胞因子基因和蛋白表达。     

茴香霉素对小鼠T淋巴细胞活性的调节

目的：研究茴香霉素对小鼠T淋巴细胞活性的影响。方法：通过MTT法检测ConA诱导的T淋巴细胞增殖能力;采用ELISA测定小鼠T淋巴细胞IL-2、IL-4及IFN-γ的分泌水平。结果：高、中、低茴香霉素剂量组能够抑制T淋巴细胞的增殖能力（与对照组相比P〈0.05,P〈0.01）;各浓度组茴香霉素对小鼠T淋巴细胞IL-2、IL-4及IFN-γ的分泌水平均有抑制作用（与对照组相比P〈0.05,P〈0.01）。结论：茴香霉素对T细胞的增殖及其活性有明显抑制作用,可能为治疗免疫反应性疾病提供新的策略。     

抑制性寡脱氧核苷酸对小鼠CD4+Th1细胞功能性分化的影响

目的：观察抑制性寡脱氧核苷酸对小鼠脾脏CD4^＋T细胞Th1分化的影响。方法：分离小鼠脾脏淋巴细胞，以免疫磁珠阳性选择法纯化CD4^＋T细胞，以荧光活化细胞分拣术分析其分选纯度，在抗-CD3ε抗体、抗-CD28抗体和IL-12作用下，加入抑制性寡脱氧核苷酸或对照寡脱氧核苷酸培养72h后，用ELISA检测上清IFN-γ和IL-4的分泌，用RT-PCR检测细胞r—bet mRNA的表达。结果：抑制性寡脱氧核苷酸能明显抑制CD4^＋T细胞IFN-γ的分泌，促进IL-4的分泌，同时还抑制T-bet mRNA的表达。结论：在促Th1细胞因子刺激下，抑制性寡脱氧核苷酸对小鼠体外CD4^＋T细胞的功能性分化有作用，既促进Th2分化，又抑制Th1分化。     

黄芪多糖对NOD鼠胰岛细胞因子基因表达的影响

目的　探讨黄芪多糖 (APS)以NOD小鼠 1型糖尿病免疫干预的分子机制。方法　应用RT CPR技术分别检测APS处理组和对照组NOD小鼠所有胰腺组织内 15条细胞因子mRNA的表达水平。结果　与对照组相比 ,APS组IL 1β、IL 2、IL 6、IL 12、TNF α、INF γ、Fas、iNOS的mRNA表达水平明显下调 ,IL 4、IL 5、IL 10、TGF β、Bcl 2、SOD的mRNA表达水平明显上调。结论　APS能纠正NOD小鼠Th1/Th2型细胞 /细胞因子的免疫失衡状态 ,预防或延缓 1型糖尿病的发生     

乙肝后肝硬化患者T辅助细胞亚型的变化

目的：了解乙肝后肝硬化患外周血中CD4^ T辅助细胞（Th)亚型的变化情况。方法：使用细胞因子诱生和ELISA技术检测32例乙肝的肝硬化患和21例对照患外周血单个核细胞（PBMC）分泌的细胞因子IL－2、IFN-γ、IL-4、IL-10及TGFβ值浓度，RT－PCR检测PBMC的IL－2、IFNγ、IL-4、IL-10及TGF－β的mRNA表达水平。结果：乙肝后肝硬化患对照组比较，PBMC休外诱生后的IFN-γ、IL－12分泌水平下降，而IL－4、IL－10分泌水平上升，IFN－γ、IL－122的mRNA表达下降，而IL－4、IL－10的mRNA表达水平升高；TGF-β浓度分泌及其mRNA表达水平明显上升。结论：乙肝后肝硬化患T辅助细胞亚群中Th2较Th1细胞占优，Th3细胞功能增强，从而抑制了机体的细胞免疫，使病毒不能被有效地清除。     

哮喘小鼠脾细胞中粒细胞型髓源性抑制细胞和Th17细胞水平的变化

目的: 探索髓源性抑制细胞（myeloid derived suppressor cells,MDSCs）、Th17及调节性T细胞（Treg）在实验性哮喘小鼠脾脏中的水平。方法: 将6～8周BALB/c雄性小鼠随机分为PBS组和模型组;用卵清蛋白建立哮喘小鼠模型,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清中卵清蛋白特异性的IgE;采用HE染色和PAS染色观察小鼠肺组织的病理变化;用流式细胞术检测脾细胞中Th17、Treg、MDSCs的比例;采用免疫组化观察小鼠肺组织骨髓分化抗原（Gr 1）、白介素17（IL 17）、叉头样转录因子3（Foxp3）的表达水平。结果： 与PBS组相比,模型组小鼠气道炎性细胞增多,黏液分泌增加,血清IgE水平明显增高,脾细胞中Th17细胞的比例增加、Treg细胞比例减少;MDSCs中的粒细胞型亚群（G-MDSCs）的比例增加;同时肺组织中IL-17、Gr-1高表达,Foxp3低表达。结论： G MDSCs、Th17细胞比例增加,Treg细胞比例减少可能参与小鼠哮喘的发病。     

腺病毒介导的"睡美人"转座子与IL-10共表达对NOD小鼠Th17/Treg细胞平衡的影响

目的：观察腺病毒介导的"睡美人"（SB）转座子与白细胞介素10（IL-10）共表达对非肥胖糖尿病（NOD）小鼠脾细胞中Th17/Treg细胞平衡的影响,阐明IL-10对NOD小鼠的可能治疗机制。方法：提取C57BL6小鼠的脾细胞并培养,将脾细胞分为对照组、空载体组和治疗组。对照组脾细胞不做任何处理,空载体组将不含IL-10基因而有转座子序列的腺病毒载体和不含转座酶的腺病毒载体共同感染小鼠脾细胞,治疗组将含有IL-10基因和转座子序列的腺病毒载体以及含有转座酶的腺病毒载体共同感染小鼠脾细胞。感染48 h后RT-PCR法检测各组小鼠脾细胞中IL-10 mRNA表达水平。感染48 h后将上述3组处理的脾细胞分别种植到对照组、空载体组和治疗组NOD小鼠右后腿的腘窝皮下,每组6只小鼠,每周注射1次,共6次。注射结束后4周处死小鼠,ELISA法检测各组NOD小鼠血清中IL-10表达水平;流式细胞术检测各组NOD小鼠脾细胞中CD4+IL-10+、CD4+IFN-γ+、Th17和Treg细胞的比例。结果：与对照组和空载体组比较,治疗组C57BL6小鼠脾细胞中IL-10 mRNA表达水平明显升高（F=72.71,P<0.05）,NOD小鼠血清中IL-10表达水平明显升高（F=8.89,P<0.05）,NOD小鼠脾细胞中CD4+IL-10+细胞和Treg细胞比例明显升高（F=72.09,P<0.05;F=12.98,P<0.05）;但治疗组小鼠脾细胞中Th17细胞比例明显下降（F=6.39,P<0.05）;NOD小鼠脾细胞中CD4+IFN-γ+细胞比例在对照组、空载体组和治疗组之间比较差异无统计学意义（F=2.72,P>0.05）。结论：腺病毒介导的SB转座子与IL-10共表达后可以升高NOD小鼠血清中IL-10表达水平;同时可明显升高NOD小鼠脾细胞中CD4+IL-10+细胞比例,降低Th17细胞比例,升高Treg细胞比例,调控Th1/Th2和Th17/Treg的平衡,对NOD小鼠起到治疗作用。     

哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞数量及功能的改变

目的观察哮喘小鼠脾脏CD^4＋CD2^4＋5’调节性T细胞（简称Treg细胞）数量及功能的改变。方法以屋尘螨提取液复制小鼠哮喘模型后，分离小鼠脾脏CIM’T细胞，采用流式细胞仪检测Treg细胞占CD^4＋T细胞的比例；分离Treg细胞，与屋尘螨提取液共同培养后测定上清液中白细胞介素-4（IL-4）及IL-10的含量；将Treg细胞与CD^4＋T细胞共同培养，观察其对CD^4＋T细胞增殖及IL4、IL-5、γ-干扰素（IFN-γ）分泌的影响。结果哮喘小鼠脾脏Treg细胞占CD^4＋T细胞比例明显下降；与正常组相比，哮喘小鼠脾脏Treg细胞IL-4、IL-10的分泌无明显差异；Treg细胞可显著抑制哮喘小鼠CD^4＋T细胞的增殖，并降低其IL-4的分泌，对IFN-γ的合成分泌无明显作用；使用anti—CD25mAb后，哮喘和正常小鼠Treg细胞的作用均被显著抑制。结论哮喘小鼠Treg细胞功能与正常对照组小鼠无明显区别，但数量显著下降。哮喘发病过程中Th2型反应占优势，与Treg细胞数量减少，对Th2型反应的抑制作用降低有一定关系。     

花姜酮对小鼠CD4+CD25+Treg细胞分化功能的影响及机制

目的：建立小鼠CD4+CD25+Treg细胞的体外诱导及培养方法,同时探讨花姜酮（Zerumbone）对Treg细胞的分化、分泌功能的影响及其机制。方法：从BABL/c小鼠的脾脏分离、纯化CD4+CD62L+T细胞,加入转化生长因子（transforming growth factor,TGF）? β（5 ng/mL）、 白细胞介素（interleukin,IL）?2（30 μg/mL）促进CD4+CD62L+T细胞向Treg细胞分化。Treg细胞被分为5组：正常组、模型对照组、Zerumbone（1 μmol/L）组、Zerumbone（10 μmol/L）组、Zerumbone（30 μmol/L）组。流式细胞术检测各组Treg细胞的比例,酶联免疫吸附试验（enzyme?linked immunosorbent assay,ELISA）方法检测IL?10含量,Foxp3、IL?10 mRNA的表达用实时荧光定量聚合酶链反应（RT?PCR）方法检测。结果：本实验方法使Treg细胞的诱导比例明显升高（P< 0.01）。与模型对照组相比,Zerumbone组的Treg细胞比例呈剂量依赖性升高（P均< 0.05）。IL?10蛋白的表达与模型对照组比较也呈剂量依赖性升高（P均< 0.05）,Foxp3、IL?10 mRNA的表达同样升高（P < 0.05）,其中Zerumbone（30 μmol/L）组升高最明显（P < 0.01）。结论：在体外实验中,Zerumbone可以促进BABL/c小鼠体内的CD4+CD62L+T细胞向Treg细胞分化,并促进IL?10蛋白的表达,其机制可能与诱导CD4+CD25+Treg特异性转录因子Foxp3的表达有关。     

ω-3多不饱和脂肪酸抑制人前列腺癌细胞黏附和侵袭的体外实验研究

目的 观察两种ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 polyunsaturated fatty acid, ω-3 PUFA)二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)对高转移性人前列腺癌细胞PC-3体外黏附和侵袭能力的影响,并探讨其相关分子机制. 方法 MTT法观察EPA和DHA对PC-3细胞增殖的影响;以体外黏附和侵袭实验观察EPA和DHA对肿瘤细胞黏附和侵袭能力的影响;RT-PCR法观察EPA和DHA对与细胞骨架相关的RhoA、Rac1、Rac2和Cdc42基因mRNA表达的影响.结果 EPA及DHA均能抑制PC-3细胞的增殖,并呈剂量效应关系;PC-3细胞以60 μmol/L EPA和DHA分别处理后,体外黏附和侵袭能力均降低,在matrigel基质胶上黏附30、60、90 min和120 min的黏附率均低于对照组(P＜0.05,P＜0.01),侵袭18 h后的抑制率分别为(35.65±7.76)%和(41.32±5.86)%(P＜0.01),RhoA、Rac2和Cdc42基因mRNA表达均不同程度下降.结论 ω-3 PUFA可能通过下调Rho GTP酶mRNA的表达,抑制PC-3细胞体外黏附和侵袭能力.     

ω-3多不饱和脂肪酸对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响

目的 利用人胃癌BGC-823细胞体外培养实验,观察不同含量ω-3多不饱和脂肪酸合成的二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid,EPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoc acid,DHA）对肿瘤细胞凋亡的影响。方法采用MTT法、凋亡形态学检查和流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡情况。结果 30和45mg／L的EPA或DHA可显著降低肿瘤细胞存活率（P＜0.01）。透射电镜可见细胞凋亡现象,流式细胞检测bcl-2和Ga基因蛋白表达明显下降（P＜0.05,P＜0.01）。结论ω-3多不饱和脂肪酸可诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡,细胞增殖受到抑制。     

环孢素与钙通道拮抗药相互作用的临床研究

环孢素(Ciclosporin,CsA)1976年由瑞士山德士药厂首次发现并报告有免疫抑制作用,同年剑桥大学Calne在动物器官移植上应用取得成功,1983年被FDA批准用做肾、肝和心脏移植的抗排异药物.CsA选择性抑制细胞免疫,对胸腺细胞及辅助T细胞(Th细胞)具有很强的抑制作用,包括抑制胸腺因子分泌,阻断胸腺内T细胞成熟和Th细胞分化增殖;抑制抗原刺激T细胞的分化增殖;抑制IL-2、IL-3、IL-4、IFN、TNFα、TNFβ等淋巴因子的分泌从而抑制排异反应.     

哮喘小鼠CD4~ CD25~ 调节性T细胞数量及功能的改变

目的观察哮喘小鼠脾脏CD4 CD25 调节性T细胞(简称Treg细胞)数量及功能的改变。方法以屋尘螨提取液复制小鼠哮喘模型后,分离小鼠脾脏CD4 T细胞,采用流式细胞仪检测Treg细胞占CD4 T细胞的比例;分离Treg细胞,与屋尘螨提取液共同培养后测定上清液中白细胞介素-4(IL-4)及IL-10的含量;将Treg细胞与CD4 T细胞共同培养,观察其对CD4 T细胞增殖及IL-4、IL-5、γ-干扰素(IFN-γ)分泌的影响。结果哮喘小鼠脾脏Treg细胞占CD4 T细胞比例明显下降;与正常组相比,哮喘小鼠脾脏Treg细胞IL-4、IL-10的分泌无明显差异;Treg细胞可显著抑制哮喘小鼠CD4 T细胞的增殖,并降低其IL-4的分泌,对IFN-γ的合成分泌无明显作用;使用anti-CD25 mAb后,哮喘和正常小鼠Treg细胞的作用均被显著抑制。结论哮喘小鼠Treg细胞功能与正常对照组小鼠无明显区别,但数量显著下降。哮喘发病过程中Th2型反应占优势,与Treg细胞数量减少,对Th2型反应的抑制作用降低有一定关系。     

大蒜新素对小鼠脾细胞Th1/Th2类细胞因子表达的影响

目的 :探讨大蒜新素 (即大蒜素注射液 )对正常BALB c小鼠脾细胞Th1 Th2 类细胞因子表达的影响。方法 :BALB c小鼠被随机分成大蒜新素处理组和生理盐水对照组 ,用双抗体夹心ELISA法检测小鼠脾细胞Th1 类细胞因子IL - 2 ,IFN -γ和Th2 类细胞因子IL - 4 ,IL - 10表达水平。结果 :大蒜新素能诱导正常BALB c小鼠脾细胞Th1 类细胞因子IL - 2和IFN -γ的表达显著增加 (P <0 0 1) ,Th2 类细胞因子IL - 10表达明显下降(P <0 0 1) ,而对I- 4的表达无明显影响 (P >0 0 5 )。结论 :大蒜新素明显抑制IL - 10的表达 ,以解除IL - 10对Th1 细胞分化的负性调节作用是其上调Th1 类细胞因子表达 ,增强特异性细胞免疫反应而发挥抗细胞内病原微生物感染效应的机制之一。     

TSA体外抑制Ⅱ型胶原诱导的抗原特异性T细胞增殖

目的：检测TSA对Ⅱ型胶原诱导的T细胞增殖的抑制作用。方法：采用CIA小鼠模型，收集引流淋巴结细胞。MTT法观察不同浓度TSA对T细胞的抑制作用，Annexin-v观察细胞凋亡情况。用Caspase3试剂盒检测Caspase3酶活性。结果：TSA呈时间和剂量依赖性抑制T细胞增殖，经20ng／ml TSA处理后，T细胞凋亡率增高，呈现时间依赖性效应关系。20ng/ml TSA作用T细胞后，实验组与对照组相比Caspase3活性明显升高。结论．TSA可能通过上调Caspase 3活性，诱导细胞凋亡，从而抑制T细胞增殖。     

伊马替尼对正常T淋巴细胞增殖和活性影响的体外研究

目的探讨伊马替尼在体外对正常T淋巴细胞增殖和活性的影响。方法应用免疫磁珠分选人外周血CD3 的T细胞,加入植物血凝素和抗人CD3单克隆抗体体外培养。运用MTT法检测不同浓度的伊马替尼对T细胞增殖的影响;采用ELISA法检测其分泌的细胞因子浓度;同时分别通过流式细胞仪和混合淋巴细胞培养检测T细胞表面免疫活性标志和杀伤活性。结果加伊马替尼组的T细胞增殖活性受到抑制,细胞因子IFNγ分泌减少,表面活性分子CD25和CD69明显减少,其对白血病细胞杀伤活性均不同程度降低,并且该抑制作用有量效依赖关系。结论有效治疗浓度的伊马替尼在体外对T细胞增殖和活性有抑制作用。     

抗细胞间粘附分子-1单克隆抗体对哮喘肺组织T细胞增殖能力的影响

目的：探讨抗细胞间粘附分子－1（ICAM－1）单克隆抗体（单抗）对过敏性小鼠哮喘模型肺组织T淋巴细胞增殖反应和活化状态的影响,方法：应用鸡卵清蛋白致敏和刺激小鼠以复制过敏性哮喘模型,收集肺组织T细胞并以流式细胞仪检测其增殖反应,以及活化后产生白细胞介素－5（IL－5）的能力。结果：哮喘小鼠肺组织T细胞的增殖反应明显增强,肺组织局部所产生的IL－5的水平也显著增高,经抗ICAM－1单抗处理后,T细胞增殖能力显著降低,同时,抗ICAM－1单抗还可以抑制IL－5的产生。结论：抗ICAM－1单抗能够抑制肺组织局部T细胞的增殖以及IL－5的产生。     

Th应答模式在慢性HBV感染与治疗过程中的表现

198 6年发现小鼠CD+ 4 T细胞可根据细胞因子分泌情况的不同分为两个亚群 ,即Th1(Thelpcell,辅助性T细胞 )和Th2亚群 ,自此人们开始了对Th应答模式的研究。 1991年Maggi等[1] 在研究人的体外T细胞克隆时亦发现了Th1和Th2的存在 ,其分泌形式与小鼠大致相似 ,还证明在人体内也存在相同情况[2 ] 。1　Th应答模式在慢性乙肝感染过程中的表现Th1主要分泌IL 2、IFN γ、TNF β等细胞因子 ,从而诱发细胞免疫反应 ,诱导迟发型超敏反应 ;Th2主要产生IL 4、IL 5、IL 6、IL 10、IL 13等细胞因子 ,刺激B细胞增生 ,产生相应抗体 ,诱发体液免…