AMPK抑制TGF-β信号通路减轻EMT诱导膀胱癌转移机制研究

目的探讨AMPK抑制TGF-β信号通路减轻EMT诱导膀胱癌转移机制。方法采用Lipofectamine2000介导AMPKα1转染至人膀胱移行上皮癌BIU-87,噻唑蓝(MTT)比色法和AnnexinV-FITC/PI双染法检测shRNA对细胞增殖和凋亡的作用。细胞划痕实验、Transwell小室侵袭实验检测体外细胞迁移和侵袭能力。Western blot检测E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达情况。结果转染后的C4-2 DN细胞生长速度明显慢于未转染的BIU-87细胞及转染空载体的C4-2 E细胞,且在24 h内的细胞凋亡率均明显高于转染空载体的C4-2 E,组间差异具有统计学意义(P0.05)。AMPK抑制TGF-β信号通路能够抑制人膀胱移行上皮癌BIU-87细胞的增殖和侵袭迁移(P0.05)。同时,AMPK抑制TGF-β信号通路下调N-cadherin和Vimentin蛋白水平,上调E-cadherin蛋白表达。结论 AMPK抑制TGF-β信号通路下调N-cadherin和Vimentin蛋白水平,上调E-cadherin蛋白表达,减轻EMT诱导膀胱癌转移。     

Hedgehog通路阻滞剂GANT61对胰腺癌细胞株的抑制作用

目的：探讨Hedgehog信号通路特异性阻滞剂GANT61抑制本通路在胰腺癌细胞株中的表达,观察胰腺癌细胞株增殖、迁移等能力的改变,为胰腺癌的治疗提供基础实验数据。方法：采用多株胰腺癌细胞,半定量RT-PCR法从中检测出Hedgehog通路表达相对活跃的细胞株,采用不同浓度的GANT61处理细胞株后,MTT法检测细胞株增殖活力改变,细胞划痕实验检测细胞迁移能力改变。结果：采用GANT61处理后,随着浓度的增加,胰腺癌细胞株增殖活力下降,迁移能力降低。结论：GANT61可通过抑制Hedgehog信号通路的表达,有效抑制胰腺癌细胞株的增殖、迁移等,为GNAT61药物在临床治疗胰腺癌提供扎实的理论基础。     

乃豆蛋白A通过ERK信号分子对小鼠脾脏细胞表达纤维化蛋白的诱导作用

目的：探讨刀豆蛋白A（ConA）对小鼠脾脏细胞表达纤维化蛋白（FBRS）的诱导作用及可能的分子信号机制。方法：选择雄性BALB／c小鼠,制备小鼠脾脏细胞悬液。采用实时荧光定量PCR检测ConA刺激不同时间脾脏细胞后FBRS的mRNA表达水平,Westernblot检测ConA刺激不同时间后FBRS的蛋白表达水平,以及信号通路阻滞剂对FBRS的蛋白表达的影响和ConA对胞外信号调节激酶（ERK）信号表达的活化作用。结果：ConA能刺激小鼠脾脏细胞FBRS的mRNA和蛋白表达,ERK信号通路阻断剂PD98059可以明显抑制ConA引起的FBRS蛋白表达,且ConA刺激后能够明显活化ERK的表达。结论：ConA可通过活化ERK信号通路,诱导小鼠脾脏细胞FBRS的表达。     

JWA抑制人肝癌细胞的黏附和迁移侵袭潜能

探讨JWA蛋白在人肝癌细胞黏附和迁移侵袭过程中的作用?方法:应用小干扰RNA下调低转移潜能人肝癌细胞株MHCC97L中JWA蛋白表达水平,MTT法检测MHCC97L增殖;应用细胞小室检测MHCC97L在JWA不同蛋白水平时的迁移及侵袭潜能变化;黏附试验检测MHCC97L细胞黏附能力变化?结果:研究发现人肝癌细胞株MHCC97L中的JWA表达水平下降后,肝癌细胞迁移及侵袭能力明显增强,细胞对细胞外基质纤维连接蛋白的黏附力增加?结论:RNA干扰JWA引起肝癌细胞的JWA蛋白表达水平下降,导致肝癌细胞的黏附?迁移及侵袭能力增强,结果提示JWA可能抑制人肝癌细胞侵袭和转移?     

FUT8调控TGF-β1介导的肺成纤维细胞纤维化的机制

目的 探讨α-1,6岩藻糖基转移酶（FUT8）对人胚肺成纤维细胞（MRC-5）增殖、迁移和纤维化的作用及可能机制。方法 将24只C57/BL6小鼠随机分为对照组、博莱霉素组、sh-NC组和sh-FUT8组,应用Masson染色观察肺纤维化情况。细胞实验分别设置对照组：MRC-5正常培养;TGF-β1组：TGF-β1处理MRC-5;si-NC组：si-NC转染MRC-5后TGF-β1处理;si-FUT8组：si-FUT8转染MRC-5后TGF-β1处理;Gal-3组：si-FUT8和pcDNA3.1-Gal转染MRC-5后TGF-β1处理。CCK-8和BrdU方法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;RT-qPCR和Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SM A）、I型胶原蛋白（COLIA1）和细胞外基质纤维连接蛋白（FN）的表达水平。同时,免疫共沉淀检测了FUT8与半乳糖凝集素-3（Gal-3）的作用及沉默FUT8对FAK/Akt信号通路的调节。结果 沉默FUT8显著降低博莱霉素诱导的小鼠肺组织细胞外胶原沉积。沉默FUT8抑制TGF-β1介导的细胞增殖（186.81±6.29 vs 118.09±9.48,P<0.05）和迁移。FUT8缺失下调α-SMA、COLIA1和FN的mRNA和蛋白表达水平（P<0.05）。此外,FUT8可直接与Gal-3作用。沉默FUT8下调Gal-3的表达并抑制FAK/Akt信号通路,过表达Gal-3逆转FUT8对细胞增殖、迁移和纤维化的作用（P<0.05）。结论 FUT8通过调控Gal-3调控TGF-β1介导的MRC-5细胞增殖、迁移和纤维化,FAK/Akt信号通路可能参与了这个过程。     

Syntenin上调FAK磷酸化水平促进人脑胶质瘤细胞迁移的分子机制

目的探讨Syntenin促进人脑胶质瘤细胞迁移的分子机制。方法采用划痕实验和Western blot检测CHG-5、稳定表达人源性Syntenin的CHG-hS细胞在纤维连接蛋白(fibronectin,FN)和多聚赖氨酸(Poly-l-lysine,PL)两种基质表面迁移能力、FAK磷酸化位点及相关信号分子的变化情况;分别在P38MAPK特异性抑制剂SB239063和PI3K特异性抑制剂LY294002处理后,FN基质上CHG-5、CHG-hS细胞迁移能力和下游信号分子JNK和AKT磷酸化水平的改变。结果细胞划痕实验结果显示,CHG-hS细胞在FN表面的运动能力显著高于CHG-5细胞(P<0.05);而在多聚赖氨酸包被的培养板上,CHG-hS细胞的运动能力与CHG-5组细胞表面无显著性差异(P>0.05)。Western blot检测结果显示,FN作用下CHG-hS细胞中FAK Tyr397、FAK Tyr576、FAK Tyr925位点的磷酸化水平随时间延长而逐渐升高(P<0.05),而FAK FAK Tyr861位点的磷酸化水平没有变化(P>0.05);相关信号Src、JNK、AKT的磷酸化水平也随时间延长而升高(P<0.05)。分别采用SB239063和LY294002处理后,伴随着p-JNK和p-AKT的磷酸化水平减弱,CHG-hS迁移能力下降。结论 Syntenin通过与p-Src结合,随后触发FAK Tyr397、FAK Tyr925、FAK Tyr576位点的磷酸化作用,最大程度的激活FAK并上调JNK、AKT等下游信号分子的磷酸化水平,最终通过Syntenin-Src/FAK/MAPK和Syntenin-Src/FAK/PI3K两条通路增强FN相关胶质瘤细胞的迁移能力。     

Molecular mechanism of Syntenin promoting human glioma cell migration though upregulating FAK phosphorylation

目的 探讨Syntenin促进人脑胶质瘤细胞迁移的分子机制.方法 采用划痕实验和Western blot检测CHG-5、稳定表达人源性Syntenin的CHG-hS细胞在纤维连接蛋白(fibronectin,FN)和多聚赖氨酸(Poly-l-lysine,PL)两种基质表面迁移能力、FAK磷酸化位点及相关信号分子的变化情况;分别在P38MAPK特异性抑制剂SB239063和PI3K特异性抑制剂LY294002处理后,FN基质上CHG-5、CHG-hS细胞迁移能力和下游信号分子JNK和AKT磷酸化水平的改变.结果 细胞划痕实验结果显示,CHG-hS细胞在FN表面的运动能力显著高于CHG-5细胞(P＜0.05);而在多聚赖氨酸包被的培养板上,CHG-hS细胞的运动能力与CHG-5组细胞表面无显著性差异(P＞0.05).Western blot检测结果显示,FN作用下CHG-hS细胞中FAK Tyr397、FAK Tyr576、FAK Tyr925位点的磷酸化水平随时间延长而逐渐升高(P＜0.05),而FAK FAK Tyr861位点的磷酸化水平没有变化(P＞0.05);相关信号Src、JNK、AKT的磷酸化水平也随时间延长而升高(P＜0.05).分别采用SB239063和LY294002处理后,伴随着p-JNK和p-AKT的磷酸化水平减弱,CHG-hS迁移能力下降.结论 Syntenin通过与p-Src结合,随后触发FAK Tyr397、FAK Tyr925、FAK Tyr576位点的磷酸化作用,最大程度的激活FAK并上调JNK、AKT等下游信号分子的磷酸化水平,最终通过Syntenin-Src/FAK/MAPK和Syntenin-Src/FAK/PI3K两条通路增强FN相关胶质瘤细胞的迁移能力.     

核外p53通过AMPK/mTOR信号抑制自噬并促进热打击诱导的血管内皮细胞损伤

目的 阐明核外p53通过调控蛋白激酶（AMPK）/雷帕霉素靶体（mTOR）信号通路介导自噬抑制在热打击后血管内皮细胞（VECs）损伤的分子机制。方法 实验分为：对照组、热打击组、热打击组+Compound C组、热打击组+rapamycin组、热打击组+PFT组,并分别使用AMPK抑制剂Compound C、mTOR抑制剂（自噬激活剂）rapamycin、p53线粒体转位抑制剂PFT预处理细胞或C57BL/6小鼠,通过CCK8法检测细胞活力,Western blot观察p53线粒体移位、自噬关键蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1和P62以及AMPK/mTOR信号通路的激活情况,HE染色观察各组小鼠主动内皮血管病理改变,TUNEL染色观察各组小鼠动内皮血管凋亡情况。结果 与对照组相比,热打击后主动脉内皮细胞（MAECs）活力显著下降（P<0.05）,热打击后小鼠主动脉血管内皮细胞肿胀、脱落,内弹力膜断裂,平滑肌排列紊乱,可见大量凋亡细胞;热打击后随着复温时间（0、3、6、9 h）延长,MAECs胞浆中p53表达逐渐减弱,而线粒体p53表达逐渐增强;热打击后（6 h）LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达被抑制,p62蛋白表达增加（P<0.05）;热打击后（6 h）AMPK的磷酸化被抑制,mTOR、4EBP1和p70S6K的磷酸化表达增加（P<0.05）。AMPK抑制剂Compound C明显抑制了热打击后MAECs中LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达,促进了p62蛋白表达,并加重了热打击后小鼠主动脉血管的损伤以及促进了凋亡的增加,而mTOR抑制剂rapamycin均呈现相反作用。p53线粒体转位抑制剂PFT促进了AMPK的磷酸化激活,并抑制mTOR、4EBP1和p70S6K的磷酸化（P<0.05）;使用PFT后促进了LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达,抑制了P62的表达（P<0.05）;使 用PFT后明显提高了MAECs的细胞活力（P<0.05）,也减轻了热打击后小鼠主动脉血管的损伤和凋亡的发生。结论 核外p53主要通过抑制AMPK活性,激活mTOR信号,继而介导细胞自噬抑制,参与热打击诱导的MAECs损伤。     

黏着斑激酶和细胞外信号调节激酶在SACC-LM和SACC-83细胞中的表达及其意义

目的：检测黏着斑激酶(FAK)及细胞外信号调节激酶（ERK）在涎腺腺样囊性癌(SACC)细胞系SACC-LM和SACC-83中的表达,探讨其与SACC肺转移发生的关系。方法：选择停止在G1/S期的SACC-LM和SACC-83细胞,测定其细胞内FAK和ERK酶活力,采用Western blotting方法检测SACC-LM及SACC-83细胞中FAK及ERK蛋白表达,对其结果进行量化分析。结果：FAK及ERK在SACC-LM细胞中的活性均高于SACC-83细胞（P<0.01）,SACC-LM细胞中FAK酶活性与ERK酶活性呈正相关关系(r=0.62,P<0.05)。Western blotting方法检测到在SACC-LM细胞中两种蛋白的表达水平均高于在SACC-83细胞中的表达水平（P<0.05）。结论：FAK及ERK可能参与了SACC的发生发展过程和转移信号转导通路,FAK及ERK蛋白表达变化与SACC的转移行为有关。     

鳖甲煎丸对肝癌细胞中Wnt信号分子β-catenin、GSK-3β及靶基因CD44v6、VEGF的影响

目的通过研究鳖甲煎丸对肝癌细胞HepG2中Wnt信号通路的信号分子及靶基因的影响,探讨鳖甲煎丸抗肝细胞癌转移
侵袭的分子机制。方法使用含鳖甲煎丸药物血清培养肝癌细胞HepG2,48 h后采用Western blotting技术检测Wnt/β-catenin通
路信号分子β-catenin、GSK-3β和磷酸化GSK-3β表达水平,免疫组化技术检测靶基因CD44v6、VEGF的表达情况。结果含鳖甲
煎丸药物血清可以降低肝癌细胞HepG2 中β-catenin 表达水平,下调磷酸化GSK-3β表达水平,明显抑制CD44v6、VEGF的表
达。结论鳖甲煎丸抗肝细胞癌转移侵袭的药理作用可能与其下调肝癌细胞HepG2 中Wnt/β-catenin 信号通路的信号分子
β-catenin及磷酸化GSK-3β的表达水平并有效降低靶基因CD44v6、VEGF的表达水平具有相关性,这可能是鳖甲煎丸抑制肝癌
细胞HepG2的生长、黏附及转移的重要分子机制之一。