载脂蛋白A-I半胱氨酸突变体结合脂质后抗炎性能的变化

目的 探讨载脂蛋白A-I半胱氨酸突变体重组高密度脂蛋白抗炎能力.方法 应用脂多糖诱导构建内毒素血症小鼠模型,选取3种半胱氨酸突变体[A-I(S52C)、A-I(K107C)、A-I(R173C)]及野生型载脂蛋白A-I结合二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)构建重组高密度脂蛋白(rHDL52、rHDL107、rHDL173、rHDLwt)注射小鼠作为干预组(每组10只小鼠),以脂多糖组(9只小鼠)、生理盐水组(5只小鼠)作为对照.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测4种重组高密度脂蛋白干预后对肿瘤坏死因子(TNF)α,白细胞介素(IL)1β和IL-6的影响.病理检测各组小鼠肺组织.结果 小鼠注射后24 h,rHDL52组血清中TNF-α和IL-1β明显低于rHDLwt组[(39.66±2.44)pg/ml比(135.28±12.84)pg/ml;(66.83 ±6.24)pg/ml比(82.00±8.19)pg/ml,均P＜0.05].常规病理分析显示,rHDL52比rHDL107、rHDL173及rHDLwt更能够降低炎症细胞的浸润,保护肺器官免受损伤.结论 rHDL52拥有较野生型载脂蛋白更强的抗炎能力.     

载脂蛋白A-I半胱氨酸突变体结合脂质后抗炎性能的变化

目的 探讨载脂蛋白A-I半胱氨酸突变体重组高密度脂蛋白抗炎能力.方法 应用脂多糖诱导构建内毒素血症小鼠模型,选取3种半胱氨酸突变体[A-I(S52C)、A-I(K107C)、A-I(R173C)]及野生型载脂蛋白A-I结合二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)构建重组高密度脂蛋白(rHDL52、rHDL107、rHDL173、rHDLwt)注射小鼠作为干预组(每组10只小鼠),以脂多糖组(9只小鼠)、生理盐水组(5只小鼠)作为对照.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测4种重组高密度脂蛋白干预后对肿瘤坏死因子(TNF)α,白细胞介素(IL)1β和IL-6的影响.病理检测各组小鼠肺组织.结果 小鼠注射后24 h,rHDL52组血清中TNF-α和IL-1β明显低于rHDLwt组[(39.66±2.44)pg/ml比(135.28±12.84)pg/ml;(66.83 ±6.24)pg/ml比(82.00±8.19)pg/ml,均P＜0.05].常规病理分析显示,rHDL52比rHDL107、rHDL173及rHDLwt更能够降低炎症细胞的浸润,保护肺器官免受损伤.结论 rHDL52拥有较野生型载脂蛋白更强的抗炎能力.     

载脂蛋白A-Ⅰ半胱氨酸突变体重组高密度脂蛋白对内毒素血症小鼠的作用

目的 探讨载脂蛋白A-Ⅰ及其半胱氨酸突变体重组高密度脂蛋白(rHDL)的抗炎作用.方法 选择了前期构建的4种载脂蛋白A-Ⅰ半胱氨酸突变体[A-Ⅰ(N74C)、A-Ⅰ(G129C)、A-Ⅰ(K195C)、A-Ⅰ(S228C)]及野生型A-Ⅰ结合二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)构建rHDL(rHDL74、rHDL129、rHDL195、rHDL228、rHDLwt)干预组,用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法验证5种rHDL干预后对肿瘤坏死因子(TNF)-α,白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)的影响.并分别设脂多糖(LPS)组,生理盐水组对照.结果 LPS注射24 h后,rHDL74组比rHDLwt组血清中TNF-α和IL-1β水平更低[TNF-α:(24±3)pg/ml比(135±12)pg/ml、IL-1β(45±5)pg/ml比(82±8)pg/ml,P<0.05]的水平,与LPS组比较只有rHDL74组能降低IL-6水平[(1936±58)pg/ml比(2022±73)pg/ml,P<0.05].同时组织切片HE染色显示,rHDL74组能明显抑制炎症细胞的浸润,肺泡壁的增厚.结论 rHDL74拥有更强的抗炎能力,它可能会成为临床上极具潜力的抗炎药物之一.     

咪唑斯汀对SP诱导小鼠皮肤产生LTB4和IL-5的抑制作用观察

目的观察咪唑斯汀(mizolastine)对P物质(SP)诱导小鼠皮肤产生白三烯B4(LTB4)和白介素5(IL-5)的抑制作用.方法小鼠接受不同浓度咪唑斯汀及对照药物灌胃,30 min后在小鼠背部皮下注射SP,其后取注射部位皮肤制备组织匀浆,以竞争酶联免疫吸附(ELISA)法检测LTB4和IL-5的表达水平.结果咪唑斯汀预处理组小鼠皮肤组织匀浆的LTB4和IL-5水平较生理盐水对照组均有不同程度降低.10 mg/kg咪唑斯汀组小鼠皮肤中的LTB4和IL-5水平[(1.23±0.29)pg/ml和(34.28±11.00)pg/ml]与生理盐水对照组(5.52±1.88 pg/ml和179.62±46.25 pg/ml)及同剂量氯雷他定组[(3.89±1.27)pg/ml和(127.74±43.27)pg/ml]比较均有显著下降(P＜0.05),而与3 mg/kg地塞米松组[(0.76±0.36)pg/ml和(23.82±11.11)pg/ml]比较则无显著性差异(P=0.161,P=0.508).结论咪唑斯汀能够剂量依赖性地抑制SP诱导的小鼠皮肤中LTB4和IL-5的产生,其抗瘙痒效应可能与其抗组胺抗炎的双重机制有关.     

葛根芩连汤降低TNF-α水平改善小鼠溃疡性结肠炎的机制研究

目的 探究葛根芩连汤对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠溃疡性结肠炎(UC)的抗炎作用。方法 34只SPF级C57BL/6小鼠按随机数字表法分为空白组8只、模型组10只、柳氮磺吡啶组(260mg/kg)8只和葛根芩连汤组(390mg/kg)8只。除空白组外,其余各组小鼠自由饮用2.5% DSS建立UC小鼠模型,建模成功后,柳氮磺吡啶组、葛根芩连汤组小鼠每天给予相应药物灌胃,其余组给予等体积(10ml/kg)生理盐水。每天观察小鼠体质量、大便性状、神态等一般情况的变化,并参照疾病活动指数(DAI)表进行评分。实验结束时采集结肠组织标本,采用苏木素-伊红(HE)染色观察各组小鼠结肠组织病理改变进行结肠组织学评分,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)浓度。 结果 与空白组比较,模型组小鼠体质量明显下降,出现腹泻、血便,DAI评分[(1.43±0.47)分比(0.00±0.00)分,P<0.05]、组织学评分[(6.80±3.99)分比(0.00±0.00)分,P<0.05]、血清中IL-1β[(49.14±18.52)pg/mL比(28.7±5.68)pg/mL,P<0.05]和TNF-α[(405.77±82.06)pg/mL比(295.32±60.93)pg/mL,P<0.05]浓度显著上升,结肠明显缩短[(5.40±0.41)cm比(7.07±0.61)cm,P<0.05]。经葛根芩连汤干预后,葛根芩连汤组与模型组相比小鼠体质量、大便情况等明显改善,DAI评分[(1.24±0.92)分比(1.43±0.47)分,P>0.05]、组织学评分[(5.00±4.93)分比(6.80±3.99)分,P>0.05]、血清TNF-α[(362.36±71.37)pg/mL比(405.77±82.06)pg/mL,P<0.05]、IL-1β[(46.73±10.02)pg/mL比(49.14±18.52)pg/mL,P>0.05]浓度降低,结肠组织形态和长度改善[(5.60±0.54)cm比(5.40±0.41)cm,P>0.05],与柳氮磺吡啶组小鼠之间无统计学差异(P>0.05)。 结论 葛根芩连汤能一定程度改善DSS诱导的UC小鼠结肠组织病理情况,其机制可能与下调炎性因子TNF-α的表达有关。     

白介素17对急性肺损伤时肺水肿液清除的影响

目的 探讨白介素17(IL-17)对急性肺损伤(ALI)小鼠肺水清除的影响及可能机制.方法 IL-17基因敲除鼠和野生型C57BL/6鼠各16只,随机各等分为两组(一共4组,每组8只),分别经气道给与磷酸缓冲盐溶液和脂多糖(LPS)干预,给药48 h后处死.比较各组肺湿干质量比(W/D)、支气管肺泡灌洗液中白介素8(IL-8)水平和肺组织钠通道(ENaC)蛋白表达情况.并采用HE染色观察肺组织病理改变,免疫组化法了解肝激酶B1(LKB1)表达差异.结果 与接受LPS干预的野生型鼠比较,IL-17敲除型鼠在接受LPS处理后W/D由9.739±3.3降至5.351±0.56,IL-8由67.50±7.33 pg/mL降至41.00±3.16 pg/mL,差异有统计学意义.病检结果提示IL-17敲除型鼠肺泡腔内水肿液聚集减少,肺损伤评分显著降低.Western blotting和免疫组化结果示接受LPS刺激的IL-17敲除型鼠ENaC表达更多,LKB1丢失相对较少.结论 敲除IL-17不仅可以减轻ALI小鼠肺组织炎症程度,还可以减少ENaC蛋白丢失,促进肺水清除,其保护作用可能与LKB1有关.     

雷尼替丁对哮喘小鼠Th1/Th2功能平衡的影响

目的观察组胺H2受体拮抗剂雷尼替丁对哮喘小鼠T辅助细胞(Th1/Th2)功能性平衡的影响。方法40只BALB/C小鼠分为对照组、哮喘组、雷尼替丁2mg/kg及5mg/kg干预组。检测各组小鼠腹腔巨噬细胞中IL-12及脾单个核细胞(PMNC)中Th1类因子IFN-γ、Th2类因子IL-4的表达并分析雷尼替丁作用下IL-12与IFN-γ变化的相关性。结果对照组与哮喘组IL-12分别为(446.93±20.89,211.21±22.42)pg/ml,差异有显著性(P<0.01);IFN-γ分别为(404.91±11.78,271.58±35.35)pg/ml,差异有显著性(P<0.01);而IL-4分别为(20.30±4.93,48.26±9.39)pg/ml,差异有显著性(P<0.01)。雷尼替丁2mg/kg及5mg/kg组IL-12水平分别为(282.64±21.20,354.00±29.97)pg/ml,与哮喘组比较差异有显著性(P<0.01),IFN-γ分别为(313.25±40.54,364.44±39.79)pg/ml,与哮喘组比较差异有显著性(P<0.05,P<0.01),IL-4分别为(37.70±7.47,27.76±9.63)pg/ml,与哮喘组比较有显著性(P<0.05,P<0.01)。雷尼替丁5mg/kg组细胞因子水平改变较2mg/kg组更明显(P<0.01)。在雷尼替丁组,IL-12水平与IFN-γ成明显正相关(r=0.80,P<0.01)。结论雷尼替丁可增加哮喘小鼠体内巨噬细胞IL-12的分泌,并部分纠正Th1/Th2功能平衡,其作用呈剂量相关性。推测对IL-12的上调作用可能是其影响Th1/Th2功能平衡的重要途径。     

白细胞介素11联合粒细胞集落刺激因子对小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病影响的研究

目的探讨重组白细胞介素11(rhIL-11)联合重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)用于供者对小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病(GVHD)的作用及其机制。方法建立同种异基因骨髓移植急性GVHD模型,以C57BL/6H-2b为供鼠,rhIL-11、rhG-CSF或二者联合应用作为动员剂,BALB/CH-2d受鼠经致死剂量(8·0Gy)照射后随机分为5组,A组为单纯照射组(10只),B组为GVHD对照组(18只),C组为G-CSF移植组(18只),D组为IL-11移植组(18只),E组为联合移植组(18只),在照射后4h移植供鼠骨髓细胞和脾细胞。观察移植后小鼠的生存期和病死率,应用流式细胞仪测定嵌合体形成情况,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测混合淋巴细胞反应,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)等细胞因子的分泌情况,并进行组间比较。结果E组小鼠生存时间明显长于其他各组(B、C、D),差异有统计学意义(P<0·01),30d存活率B、C、D、E组分别是:0、27·3%(3/11)、36·4%(4/11)、63·6%(7/11)。B组小鼠均出现GVHD病理改变,其程度与发生GVHD的时间密切相关,GVHD发生越早,病理改变越重;E组有3只小鼠在移植后20d内发生GVHD,病理程度改变较其他各组轻。与B、C、D组相比,E组移植后14d脾细胞培养上清中IFN-γ水平较低(92pg/ml±14pg/mlvs172pg/ml±31pg/ml、132pg/ml±23pg/ml、117pg/ml±28pg/ml,均P<0·01),IL-4的水平较高(36pg/ml±7pg/mlvs16pg/ml±4pg/ml、26pg/ml±4pg/ml、24pg/ml±4pg/ml,均P<0·05),D、E组肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平相近,但明显低于B、C组(均P<0·01),并且E组对宿主抗原的淋巴细胞增殖均低于B、C、D组(0·22±0·08vs0·87±0·14、0·54±0·21、0·49±0·18,均P<0·01)。结论rhIL-11联合rhG-CSF用于供者能产生协同作用,减轻GVHD,其机制可能与受者体内T细胞向Th2细胞因子极化、炎症介质如TNF-α降低有关。     

TIM-1对哮喘小鼠气道MUC5AC及Th2细胞因子表达的影响

目的 研究T细胞免疫球蛋白-黏蛋白-1(TIM-1)表达对哮喘小鼠气道MUC5AC及Th2细胞因子的作用,探讨气道黏液高分泌的机制。方法 30只健康雌性C57BL/6小鼠,按随机数字表法分为正常组、哮喘组和TIM-1抗体组,每组10只。检测小鼠外周血单个核细胞（PBMCs）TIM-1+细胞比例、气道MUC5AC mRNA表达、肺泡灌洗液（BALF）中IL-13、IL-4、IL-5表达及黏液细胞和细胞内黏液量的改变。结果（1）哮喘组及TIM-1抗体组小鼠外周血PBMCs中TIM-1+ 细胞比例（11.20%,5.11%）均显著高于正常组（0.64%,P<0.05);而TIM-1抗体组明显低于哮喘组（P<0.05）。（2）哮喘及TIM-1抗体小鼠气道黏液细胞MUC5AC mRNA相对表达(17.3±1.4,5.6±0.3)及IL-13[(16.80±0.63) ng/ml,(5.70±0.64)ng/ml]、IL-4[（614.72±117.39）pg/ml,（325.78±86.54）pg/ml]、IL-5[（1681.13±613.55）pg/ml,（513.42±86.87）pg/ml]表达量均显著高于正常组[1, (1.09±0.25)ng/ml,（17.56±3.01）pg/ml,（30.78±9.67）pg/ml ],TIM-1抗体组小鼠上述指标显著低于哮喘组（P<0.05）。（3）气道MUC5AC及IL-13表达与TIM-1+细胞表达均呈正相关,r1=0.946,P1=0.004; r2=0.984,P2=0.000. 结论 哮喘小鼠外周血TIM-1+细胞升高,可致气道黏液过度分泌;抑制TIM-1表达可减少哮喘气道黏液高分泌。调节TIM-1表达有可能成为减少黏液高分泌及治疗哮喘的新途径。     

慢性充血性心力衰竭患者血清细胞因子TNF-α,IL-6,IL-1β及IL-1O的液相芯片检测

目的 应用液相芯片技术探讨慢性充血性心力衰竭(CHF)患者血清细胞因子的变化.方法 采用Luminex液相芯片分析平台测定CHF患者15例,正常对照组15例的血清细胞因子TNF-α,IL-6,IL-1β,IL-10的含量.结果 CHF患者血清TNF-α,IL-6的含量[(10.431±6.510)pg/ml,(3.476±2.180)pg/ml]分别比正常对照组[(5.817±2.354)pg/ml,(1.545±0.594)pg/ml)]增加(P＜0.05),而两组IL-10[(0.619±0.368)pg/ml,(0.628±0.339)pg/ml]、IL-1β[(0.665±0.732)pg/ml,(0.630±0.578)pg/ml)]的含量无明显变化(P＞0.05).结论 CHF患者血清TNF-α,IL-6增高,与心衰的病理机制有关.