siRNA沉默Bmi-1基因表达对宫颈癌细胞增殖的影响

目的探讨siRNA沉默B细胞特异的莫洛尼白血病病毒插入位点1基因(Bmi-1)表达对宫颈癌细胞增殖的影响研究。方法通过脂质体转染siRNA Bmi-1及阴性对照(control)到人宫颈癌Hela细胞,采用Realtime PCR及western blot法检测细胞中Bmi-1的表达。MTT法检测细胞活力,Annexin V-PI流式双染及Hoechst染色检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞周期,western blot法检测细胞中p16,p53,Cyclin D1及Rb的表达。结果与Control组比较,siRNA Bmi-1组细胞中Bmi-1蛋白及mRNA表达量皆显著降低(P0.01),同时细胞活力下降,细胞凋亡率提高(P0.01),细胞周期阻滞在G1期(P0.01),细胞中p16表达量上调(P0.01),p53及Cyclin D1表达量下调(P0.01),Rb磷酸化水平降低(P0.01)。结论 Bmi-1具有抑制宫颈癌Hela细胞增殖的作用,可能与调控细胞周期相关蛋白表达有关。     

Cyclin D1-siRNA促进口腔鳞癌Tca8113细胞凋亡

目的:研究细胞周期蛋白D1(cyclin D1)siRNA对口腔鳞癌细胞Tca8113凋亡的作用。方法:采用cyclin D1-siRNA慢病毒感染Tca8113,qPCR检测cyclin D1表达,MTT检测细胞活性,Annexin-V单染检测细胞凋亡。结果:Cyclin D1-siRNA慢病毒成功抑制Tca8113中cyclin D1mRNA表达。Cyclin D1干扰组细胞活性显著低于阴性病毒组(P<0.01),且细胞凋亡率高于阴性对照组(P<0.01)。结论:Cyclin D1干扰能促进Tca8113凋亡,起到抗肿瘤效应。     

FoxM1通过Wnt/β-catenin信号通路对鼻咽癌细胞5-8F增殖、迁移的影响

目的 探讨FoxM1对鼻咽癌细胞5-8F恶性生物学行为的影响及其可能机制.方法 将化学合成的靶向FoxM1的siRNA转染鼻咽癌细胞5-8F(FoxM1-siRNA组),并设立空白对照组、阴性对照组,采用RT-PCR及Western blot检测FoxM1表达变化.采用MTT法、FCM法、Transwell法分别检测下调FoxM1表达对细胞增殖、周期、凋亡、迁移的影响.Western blot检测下调FoxM1表达后β-catenin、C-Myc、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达变化.结果 转染FoxM1-siRNA的5-8F细胞FoxM1 mRNA和蛋白表达水平降低(P＜0.05).下调FoxM1表达可抑制5-8F细胞增殖(P＜0.05),FoxM1-siRNA组的凋亡率为(22.68±0.67)％,较阴性对照组[(1 1.74±1.36)％]和空白对照组[(10.94±1.52)％]显著增加(P＜0.05),细胞周期阻滞于G0/G1期.FoxM1-siRNA组细胞穿膜数(100.00±10.97)明显低于阴性对照组(246.00±6.66)和空白对照组(233.70±12.41),细胞迁移能力降低(P＜0.05).下调FoxM1的表达可抑制β-catenin细胞核表达,抑制C-Myc、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9总蛋白表达(P＜0.001).结论 FoxM1表达下调抑制鼻咽癌细胞5-8F的增殖,诱导细胞凋亡,降低细胞迁移能力,使细胞周期阻滞于G0/G1期.其机制可能是通过抑制Wnt通路关键蛋白β-catenin细胞核表达从而抑制Wnt 通路活性实现的.     

小分子干扰RNA下调硬脂酰辅酶A去饱和酶-1对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)下调硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法用设计合成的SCD-1 siRNA转染人肝癌细胞HepG2细胞株,转染后细胞分为3组:空白对照组(未做任何处理)、阴性对照组(对照siRNA转染)和SCD-1 siRNA组(SCD-1 siRNA转染)。采用反转录聚合酶链反应检测HepG2细胞SCD-1 mRNA的表达,噻唑蓝法检测HepG2细胞的增殖,用流式细胞术检测SCD-1 siRNA对HepG2细胞凋亡和细胞周期的影响。结果 SCD-1 siRNA组的SCD-1 mRNA表达明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01);转染后24、48、72 h,SCD-1 siRNA组HepG2细胞增殖较空白对照组和阴性对照组明显减慢(P<0.01);SCD-1siRNA组HepG2细胞凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01);SCD-1 siRNA组HepG2细胞在合成前期(G0/G1期)的细胞比例明显高于空白对照组和阴性对照组,在合成期(S期)和合成后期(G2/M期)的细胞比例均明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01)。空白对照组和阴性对照组HepG2细胞在SCD-1 mRNA表达、细胞增殖、细胞凋亡率及细胞周期方面差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 siRNA可通过下调HepG2细胞SCD-1基因的表达,抑制HepG2细胞的增殖,并促进其凋亡。     

siRNA沉默CEACAM1基因对人胶质瘤SHG44细胞生物学行为的作用

目的 探讨CEACAM1基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对胶质瘤SHG44细胞增殖、体外迁移和侵袭能力的影响. 方法 设计并化学合成针对CEACAM1的3对siRNA,脂质体法瞬时转染SHG44细胞.Western blot检测转染后细胞中CEACAM1、β-catenin和Cyclin D1蛋白表达水平变化.CCK-8法检测转染后的细胞增殖情况,流式细胞仪检测转染后细胞周期的变化.通过Transwell小室迁移和侵袭实验,观察下调CEACAM1对SHG44细胞体外迁移和侵袭能力的影响.结果 三组特异性siRNA转染48 h后,Western blot的结果显示,3个siRNA转染组CEACAM1蛋白水平均低于正常对照组和阴性对照组(P＜0.01),以CEACAM1-siRNA3干扰效果最为明显.后续实验表明,与两个对照组相比较,CEACAM1-siRNA组的细胞增殖减慢,β-catenin和Cyclin D1表达水平明显减少(P＜0.05).Transwell小室迁移和侵袭实验表明CEACAM1下调后的SHG44细胞迁移和侵袭能力较正常对照组及阴性对照组明显降低(P＜0.05). 结论 CEACAM 1-siRNA能有效抑制人胶质瘤SHG44细胞CEACAM1蛋白的表达,并抑制细胞增殖,降低细胞的体外迁移及侵袭能力.     

Rab1A siRNA对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的观察Rab1A对宫颈癌He La细胞增殖和凋亡的影响并探讨其分子机制。方法应用siRNA干扰Rab1A基因表达,将He La细胞分为空白对照组、阴性对照组和Rab1A siRNA组,空白对照组不做处理,阴性对照组转染阴性对照siRNA。Rab1A siRNA组转染Rab1A特异性siRNA。MTT比色法分析Rab1A对宫颈癌He La细胞增殖的影响;采用流式细胞仪分析对细胞周期和细胞凋亡的影响;Western blot观察Rab1A siRNA对Cyclin D1、GRP78、Bcl-2和Bax表达的影响。结果与阴性对照组相比,Rab1A siRNA组He La细胞的Rab1A mRNA和蛋白的表达均显著下调;Rab1A siRNA抑制宫颈癌He La细胞增殖;与阴性对照组相比,Rab1A siRNA组He La细胞的S期细胞数量显著减少(P<0.05),G1/G0期细胞数量显著增加(P<0.05),Rab1A siRNA组He La细胞的早期凋亡和晚期凋亡显著增加(P<0.01);Rab1A siRNA组与阴性对照组相比,Cyclin D1和Bcl-2在蛋白水平的表达显著下调(P<0.01),GRP78和Bax在蛋白水平的表达显著上调(P<0.01)。结论 Rab1A通过调控Cyclin D1的表达促进宫颈癌He La细胞增殖,通过调控GRP78、Bcl-2和Bax表达抑制细胞凋亡。     

下调整合素β1对大肠癌细胞的西妥昔单抗化疗敏感性的影响及机制研究

目的:探讨下调整合素β1(ITGB1)对大肠癌细胞的西妥昔单抗化疗敏感性的影响及机制.方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测大肠癌组织与癌旁正常组织中ITGB1的表达.通过小干扰RNA(siRNA)技术下调大肠癌LS174T细胞中ITGB1的表达,将大肠癌LS174T细胞分为空白对照组、NC-siRNA组、ITGB1-siRNA组、西妥昔单抗组、ITGB1-siRNA+西妥昔单抗组,采用CCK-8法检测细胞增值,流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡情况,Western blotting法检测凋亡相关蛋白和Hedgehog通路相关蛋白表达量.结果:大肠癌组织中ITGB1蛋白表达量高于癌旁正常组织(P＜0.05).与空白对照组相比,ITGB1-siRNA组和西妥昔单抗组细胞增值活性降低(P＜0.05),G2/M细胞周期阻滞、细胞凋亡率及Cleaved caspase-3、Bax表达量升高,Bcl-2表达量降低(P＜0.05);与ITGB1-siRNA组和西妥昔单抗组相比,ITGB1-siRNA+西妥昔单抗组细胞增值活性降低(P＜0.05),G2/M细胞周期阻滞、细胞凋亡率及Cleaved caspase-3、Bax表达量升高,Bcl-2表达量降低(P＜0.05).ITGB1-siR-NA组和西妥昔单抗组SHh、Gli1、Ptch1、c-Myc蛋白表达量低于空白对照组(P＜0.05);ITGB1-siRNA+西妥昔单抗组SHh、Gli1、Ptch1、c-Myc蛋白表达量低于ITGB1-siRNA组和西妥昔单抗组(P＜0.05).结论:ITGB1表达下调可增强大肠癌细胞对西妥昔单抗的化疗敏感性,其机制可能与抑制Hedgehog信号通路的活性有关.     

靶向CK2α基因的siRNA对结肠癌HCT116细胞生长抑制作用及其机制

目的：探讨RNA干扰酪蛋白激酶2（CK2α）基因表达后对HCT116细胞生长的抑制作用并阐明其作用机制。方法：针对CK2α的mRNA序列设计CK2α-siRNA序列,将体外培养的HCT116细胞分为正常对照组(未转染)、阴性对照组(转染siRNA)和CK2α-siRNA组(转染CK2α-siRNA),应用Lipofectamine 2000进行转染,利用Western blotting 法检测CK2α、cyclin H、P53和P21蛋白表达水平;应用MTT法检测各组HCT116细胞增殖;采用流式细胞术检测细胞周期时相的分布。结果：与阴性对照组比较,CK2α-siRNA组CK2α和细胞周期蛋白cyclin H的表达水平明显降低（P<0.01）,P53蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）,P21蛋白表达水平则明显升高（
P<0.01）;MTT检测,与阴性对照组比较,转染48和72 h,CK2α-siRNA组细胞存活率明显降低（P<0.01）;流式细胞术分析,与阴性对照组比较,CK2α-siRNA组S期细胞所占比例逐渐减少（P<0.01）,G1期细胞则明显增加（P<0.01）,细胞滞留在G1期。结论：RNA干扰CK2α表达能够抑制HCT116细胞增殖,发生G1期阻滞;其机制可能与RNA干扰CK2α表达后cyclin H表达下调及P53活性恢复有关。     

靶向沉默DEK对肝癌HepG2细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨靶向沉默DEK对肝癌细胞株增殖及细胞周期的影响。方法常规培养人肝癌细胞株HepG2,待细胞生长至90%融合度时分为空白对照组、小分子干扰RNA(siRNA)对照组和DEK siRNA组。空白对照组细胞正常培养,不做任何处理;siRNA对照组和DEK siRNA组细胞分别在LipofectamineTM2000脂质体介导下进行siRNA表达载体和DEK siRNA表达载体转染。应用实时定量聚合酶链反应检测HepG2细胞中DEK mRNA的表达,免疫蛋白印迹法检测HepG2细胞中DEK、Cyclin D1蛋白的表达,四甲基偶氮唑盐法检测HepG2细胞增殖情况,流式细胞术观察细胞周期变化。结果空白对照组、siRNA对照组和DEK siRNA组HepG2细胞中DEK mRNA表达分别为0.826±0.052、0.776±0.051、0.420±0.050,DEK蛋白表达分别为0.691±0.073、0.726±0.061、0.311±0.038,Cyclin D1蛋白表达分别为0.712±0.069、0.780±0.074、0.434±0.039;DEK siRNA组HepG2细胞中DEK mRNA及DEK、Cyclin D1蛋白表达均低于空白对照组和siRNA对照组(P<0.05);空白对照组和siRNA对照组HepG2细胞中DEK mRNA及DEK、Cyclin D1蛋白表达比较差异均无统计学意义(P>0.05)。DEK siRNA组转染后24、48、72、96、120 h时细胞增殖能力均低于空白对照组和siRNA对照组(P<0.05);空白对照组和siRNA对照组各时间点细胞增殖能力比较差异均无统计学意义(P>0.05)。DEK siRNA组G_0+G_1期细胞所占比例高于空白对照组和siRNA对照组(P<0.05);DEK siRNA组S期、G_2+M期细胞所占比例均低于空白对照组和siRNA对照组(P<0.05);空白对照组和siRNA对照组G_0+G_1期、S期、G_2+M期细胞所占比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson相关分析显示,Cyclin D1蛋白表达与DEK mRNA和DEK蛋白表达均呈正相关(r=0.909、0.899,P<0.05)。结论 DEK siRNA可下调HepG2细胞中DEK基因表达,抑制HepG2细胞增殖,改变细胞周期分布,这一过程可能与下调Cyclin D1表达有关。     

Wip-1基因在子宫内膜癌组织中的表达及其与细胞凋亡的关系研究

目的 探讨野生型p53诱导磷酸酶1(Wip-1)基因在子宫内膜癌组织中的表达及与细胞凋亡的关系.方法 选取子宫内膜癌患者68例,子宫内膜不典型增生患者30例,并留取正常子宫内膜组织标本40份.培养子宫内膜癌细胞系ECC-1(ER阳性)和KLE(ER阴性),将细胞分为Wip-1 siRNA组、siRNA对照组和空白对照组.利用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测不同组织及不同转染组细胞中Wip-1基因表达,四甲基噻唑蓝(MTT)比色法检测不同处理组细胞增殖能力,An-nexin V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染色检测不同处理组细胞凋亡及细胞周期.结果 子宫内膜癌组织中Wip-1mRNA表达水平(2.37士0.16)高于子宫内膜不典型增生组织(1.59士0.14)和正常子宫内膜组织(1.14士0.12),且子宫内膜不典型增生组织高于正常子宫内膜组织,差异均有统计学意义(P＜0.01);子宫内膜癌组织中Wip-1 mRNA表达水平与病理分期、病理分级、淋巴结转移、p53有关(P＜0.01);Wip-1 siRNA组ECC-1细胞和KLE细胞在转染后24、48、96 h细胞存活率均低于siR-NA对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);Wip-1 siRNA组ECC-1细胞和KLE细胞Go+G1期比例均高于siR-NA对照组和空白对照组,而S期和G2 +M期比例均低于siRNA对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01);Wip-1siRNA组ECC-1细胞和KLE细胞凋亡率均高于siRNA对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P＜o.05).结论 Wip-1基因参与了子宫内膜癌细胞增殖和凋亡过程.     

转染TRIM29-siRNA对胶质瘤U87MG细胞周期和凋亡的影响

目的：探讨转染三结构域蛋白（TRIM）家族成员三结构域蛋白29（TRIM29）-siRNA对胶质瘤U87MG细胞周期和凋亡的影响,阐明TRIM29在胶质瘤发生发展中的作用。方法：将体外培养的U87MG细胞分为对照组（未转染）、NC-siRNA组（转染阴性对照NC-siRNA）和TRIM29-siRNA组（转染TRIM29-siRNA）,采用实时荧光定量PCR法检测3组U87MG细胞中TRIM29 mRNA表达水平,流式细胞术检测3组不同细胞周期U87MG细胞百分率和凋亡率,Western blotting法检测3组细胞中TRIM29、CyclinD1、P21、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果：3组细胞中TRIM29、CyclinD1、P21、Bcl-2和Bax蛋白表达水平,TRIM29 mRNA表达水平,G₀/G₁期、S期、G₂/M期U87MG细胞百分率及细胞凋亡率比较差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较,NC-siRNA组U87MG细胞中TRIM29 mRNA和TRIM29、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平和G₁/G₀期、S期、G₂/M期U87MG细胞百分率及细胞凋亡率差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组和NC-siRNA组比较,TRIM29-siRNA组U87MG细胞中TRIM29 mRNA和TRIM29、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平以及S期和G₂/M期U87MG细胞百分率均明显降低（P<0.05）,G₀/G₁期U87MG细胞百分率和细胞凋亡率以及P21、Bax蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：转染TRIM29-siRNA可诱导U87MG细胞周期阻滞和凋亡,其作用机制可能与下调CyclinD1、Bcl-2蛋白表达和上调P21、Bax蛋白表达有关。     

周期蛋白D1基因沉默对骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡与增殖的影响

目的 研究周期蛋白D1(Cyclin D1)表达沉默对骨关节炎(OA)软骨细胞的增殖和凋亡的影响。方法 从健康的成年大白鼠分离软骨细胞,并进行人工培养。采用甲苯胺蓝染和Ⅱ型胶原免疫组化筛选软骨细胞。构建表达Cyclin D1-siRNA的质粒。在软骨细胞中通过IL-1 β诱导产生OA模型。软骨细胞被分为:空白控制组,IL-1 β诱导组(OA模型组),IL-1 β诱导实验组(OA实验组,Cyclin D1-siRNA转染),IL-1 β诱导的阴性控制组(OA阴性控制组,阴性转染)。每组细胞培养了24 h、48 h、72 h、96 h,且用细胞计数试剂盒量化细胞增殖。用流式细胞术检测细胞周期与凋亡。用qRT-PCR和Western blotting检测细胞中Cyclin D1、mRNA和蛋白质的表达。结果 细胞增殖测定结果表明,相较于培养了24 h的软骨细胞,72 h和96 h的软骨细胞增殖速度更加显著。和空白控制组相比,培养72 h和96 h的OA模型组、OA实验组和OA阴性控制组的细胞增殖速度显著下降。OA模型组细胞增殖在48 h、72 h和96 h显著低于OA实验组、OA阴性控制组。流式细胞术表明,相比较于空白控制组,OA模型组、OA实验组、OA阴性控制组中细胞凋亡率更高。相比较于OA模型组和OA阴性控制组,OA实验组细胞凋亡率增加。相关Cyclin D1 mRNA和蛋白质表达,在OA实验组中,显著低于空白控制组、OA阴性控制组和OA模型组。结论 Cyclin D1基因表达沉默能够抑制OA软骨细胞的增殖和增强OA软骨细胞的凋亡。      

下调FoxM1通过激活JNK/线粒体通路增加人鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感性

目的 探讨特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA) 沉默转录因子叉头框M1(FoxM1) 对人鼻咽癌HONE-1细胞增殖、凋亡、紫杉醇敏感性的影响及可能的分子机制.方法 采用siRNA靶向沉默鼻咽癌HONE-1细胞FoxM1表达并通过RT-PCR、实时定量PCR、Western blot检测转染后FoxM1的表达水平.siRNA转染后细胞的增殖和对紫杉醇的敏感性采用MTT法检测,流式细胞仪检测细胞周期分布,Annexin V-FITC /PI双染法检测细胞凋亡率.Western blot检测Ki67、CyclinE1、多药耐药基因1(multidrug resistance 1,MDR1) 及c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK) 、p-JNK、 c-Jun、p-c-Jun、凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平.结果 转染后FoxM1 mRNA及蛋白的表达均被下调(P＜0. 01) .siRNA转染组细胞增殖速率减缓(P＜0. 05),Ki67表达降低(P＜0. 05) .siRNA转染组G1期细胞比例增加(P＜0. 01),S期比例减低(P＜0. 05),Cyclin E1低表达(P＜0. 01) .同时, siRNA +紫杉醇组凋亡率明显高于阴性及空白对照+ 紫杉醇组(P＜0. 01) .siRNA转染组细胞MDR1水平下降(P＜0. 05),对紫杉醇的敏感性较两对照组明显增强(P＜0. 01) .siRNA + 紫杉醇组与阴性对照+ 紫杉醇组相比p-JNK1、p-c-Jun、Bax表达上调(P＜0. 01),Bcl-2表达下调(P＜0. 01) .结论 特异性siRNA沉默FoxM1表达可以影响JNK/线粒体通路活性,抑制鼻咽癌HONE-1细胞增殖,促进其凋亡,提高其对紫杉醇的敏感性.     

MBP-1在人食管癌细胞株Ec109细胞增殖、凋亡和侵袭中的作用

目的 探讨癌症-MYC基因(C-myc)启动子结合蛋白1(MBP-1)在人食管癌细胞株Ec109细胞增殖、凋亡和侵袭中的作用.方法 培养人食管癌细胞系Ec109,分为MBP-1模拟物组、siRNA-MBP-1组、阴性对照组和空白对照组,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测各组细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,Transwell检测细胞侵袭能力,Western blot检测与细胞周期相关的C-myc、周期蛋白D1 (Cyclin D1)和周期蛋白E(Cyclin E).结果 与阴性对照组和空白对照组相比,转染MBP-1模拟物可使食管癌细胞Ec109中MBP-1表达上调(P＜0.05),食管癌细胞增殖能力降低,凋亡比例升高,G0/G1期细胞比例降低,侵袭细胞数减少,细胞中C-myc、Cyclin D1和Cyclin E蛋白表达被抑制;沉默MBP-1后,siRNA-MBP-1组食管癌细胞Ec109中MBP-1表达下调,食管癌细胞增殖能力增加,凋亡比例下降,G0/G1期细胞比例升高,侵袭细胞数增加,细胞中C-myc、Cyclin D1和Cyclin E蛋白表达上调.结论 MBP-1与人食管癌细胞株Ec109细胞增殖、凋亡、侵袭能力密切相关,其机制可能与细胞周期异常有关.     

TP53在不明原因复发性流产患者绒毛组织中的表达及其对人滋养层细胞生长的影响

目的：探讨肿瘤蛋白P53（TP53）在不明原因复发性流产（URSA）患者绒毛组织中的表达及其对人滋养层细胞凋亡和迁移的影响,初步阐明其机制。方法：选取40例URSA患者（患者组）和30例实施人工流产健康孕妇（对照组）的绒毛组织,采用RT-PCR和Western blotting法检测绒毛组织中TP53 mRNA及蛋白表达水平。培养人滋养层HTR-8细胞,分为空白对照组、空载体组和TP53-siRNA组,Western blotting法检测转染siRNA后3组细胞中TP53蛋白表达水平。流式细胞术、Transwell小室和Western blotting法分别检测空白对照组和TP53-siRNA组细胞凋亡率、细胞迁移数和细胞中TP53、Cleaved-Caspase3、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果：患者组绒毛组织中TP53 mRNA和蛋白表达水平均明显高于对照组（P<0.01）。TP53-siRNA组细胞中TP53蛋白表达水平明显低于空白对照组（P<0.01）。细胞转染48h后,与空白对照组比较,TP53-siRNA组细胞凋亡率明显降低（P<0.01）,细胞迁移数明显升高（P<0.01）,Cleaved-Caspase3和Bax蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。结论：TP53在URSA患者绒毛组织中呈高表达,沉默人滋养层HTR-8细胞TP53表达能明显促进细胞迁移和抑制细胞凋亡。     

LncRNA-MEG3 对胃癌生物学特性 及铂类化疗敏感性的研究

目的 探讨LncRNA-MEG3 对胃癌增殖、凋亡及顺铂化疗敏感性的影响。方法 以人正 常胃黏膜上皮细胞GES1 作为对照细胞,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胃癌MKN28、 SGC7901、AGS 及BGC823 细胞中LncRNA-MEG3 的表达;将过表达MEG3 的质粒转染BGC823 细胞作为 pcDNA3.1-MEG3 组,转染空白质粒的阴性对照作为pcDNA3.1 组,同时设置Control 组;将BGC823 细胞 分为pcDNA3.1 组、pcDNA3.1-MEG3 组、顺铂组及pcDNA3.1-MEG3+ 顺铂组。qRT-PCR 检测转染48 h 后细胞中LncRNA-MEG3 的表达;pcDNA3.1-MEG3、顺铂单独或共同处理BGC823 细胞,细胞计数试剂 盒法及流式细胞仪分别检测细胞活力及凋亡率;Western blotting 检测STAT3、磷酸化的信号转导与转录因 子3（p-STAT3）、Cyclin D1 和Bcl-2 的表达。结果 胃癌细胞中LncRNA-MEG3 的表达均低于GES1 细胞 （P <0.05）;4 组LncRNA-MEG3 相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）;pcDNA3.1-MEG3 组和顺 铂组Cyclin D1、Bcl-2 及p-STAT3 的蛋白表达低于pcDNA3.1 组（P <0.05）,细胞凋亡率高于pcDNA3.1 组 （P <0.05）。结论 胃癌细胞中LncRNA-MEG3 表达降低,过表达LncRNA-MEG3 可降低胃癌细胞活力并诱 导细胞凋亡,增加顺铂的化疗敏感性,其机制与下调STAT3 信号通路有关。     

ENPP1低表达对口腔鳞癌细胞上皮间质转化的作用及机制

  目的  探讨外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1(ENPP1)低表达对口腔鳞状细胞癌(简称口腔鳞癌)细胞上皮间质转化的作用。  方法  取正常人口腔黏膜上皮细胞系、人口腔鳞癌细胞系CAL-27进行培养、传代,检测ENPP1 mRNA表达。取对数生长期CAL-27细胞进行转染,分为空白组(未处理)、对照组(转染NC-siRNA质粒)及转染组(转染ENPP1-siRNA),检测ENPP1 mRNA、蛋白表达。取对数生长期CAL-27细胞进行转染,分为A组(未转染)、B组(转染NC-siRNA质粒)、C组(转染ENPP1-siRNA质粒+MAPK激动剂)、D组(转染ENPP1-siRNA质粒)、E组(MAPK激动剂),检测CAL-27细胞增殖活性、侵袭细胞数、迁移能力及磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-MAPK)、磷酸化胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达。  结果  各时段吸光度(A)值,D组＜C组＜A组、B组＜E组(均P＜0.05);A组、B组、C组、D组、E组侵袭细胞数分别为(85.23±2.22)个/视野、(85.41±1.59)个/视野、(53.67±2.10)个/视野、(37.39±2.06)个/视野、(111.08±5.20)个/视野,D组＜C组＜A组、B组＜E组(均P＜0.05);划痕宽度百分比,E组＜A组、B组＜C组＜D组(均P＜0.05);p-MAPK、p-ERK1、p-ERK2蛋白相对表达量,D组＜C组＜A组、B组＜E组(均P＜0.05)。  结论  ENPP1低表达可抑制口腔鳞癌细胞上皮间质转化,机制可能与抑制MAPK信号通路有关。      

胃肠道间质细胞瘤p53基因表达与增殖、凋亡及血管形成的关系

目的研究胃肠道间质细胞瘤(GIST)中p53基因表达与增殖、凋亡及血管形成的关系.方法我们研究了86例GIST,采用免疫组织化学法检测p53基因表达,采用胶银及免疫组织化学法检测核仁组成区嗜银蛋白(AgNORs)、增殖细胞核抗原(PCNA)、抗人增殖细胞抗体Ki-67(Ki-67)来反映细胞的增殖,采用原位末端标记法检测细胞凋亡指数(API)来反映细胞的凋亡,采用免疫组织化学法检微血管密度(MVD)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)来反映血管形成.结果 p53阳性、阴性表达组的AgNORs,pCNA和Ki-67表达分别为(5.96±2.05)、(3.35±1.48)(P＜0.01)、(24.14±6.15)、(8.11±3.12)(P＜0.01)、(8.46±2.14)、(2.36±1.12)(P＜0.01);p53阳性、阴性表达组的API分别为(5.74±3.15)、(15.12±7.89)(P＜0.01);p53阳性、阴性表达组的MVD、VEGF表达分别为(19.82±7.15)、(10.78±3.89)(P＜0.01)、68.09%、35.90%(P＜0.01).结论突变型p53基因能够促进GIST增殖、抑制凋亡、增加血管形成,与肿瘤的形成、发生与发展密切相关.     

Kif15调控大鼠星形胶质细胞增殖、细胞周期及凋亡的研究

目的:探讨Kif15调控星形胶质细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响及机制。方法:从出生1 d的大鼠分离出星形胶质细胞,分别用NC-小干扰RANA（siRNA）（NC-siRNA组）、Kif15-siRNA转染细胞（Kif15-siRNA组）,不做任何处理的细胞作为空白对照组（Control组）,48 h后收集细胞,Western blotting检测各组细胞中Kif15的蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率;Western blotting检测增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期素D₁（cyclinD1）、Cleaved caspase3、p38、p-p38蛋白表达情况。结果:转染Kif15-siRNA能显著抑制Kif15的蛋白表达;与对照组及NC-siRNA组比较,Kif15-siRNA组细胞存活率、G₂/M期细胞及PCNA、cyclinD1、p-p38蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、G₁期细胞及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高（P<0.01）,p38蛋白表达在各组细胞间差异无统计学意义（P>0.05）。结论:抑制星形胶质细胞中Kif15的表达,可显著降低细胞的增殖,阻滞细胞于G₁期,促进细胞凋亡,其机制与抑制p38信号通路有关。