蛇床子素对小鼠胚胎长骨雌激素受体α、β蛋白表达的影响

【目的】研究蛇床子素对小鼠胚胎长骨雌激素受体α（estrogen receptorα,ERα）和骨雌激素受体β（estrogen receptorβ,ERβ）蛋白表达的影响,探讨其作用于骨组织的调控机制。【方法】取16 d胎龄雌性小鼠前肢尺骨,置BGJb培养基中孵育,经不同浓度蛇床子素（1×10^-4、1×10^-5、1×10^-6、1×10^-7mol/L）和雌酚酮（1×10^-6mol/L）作用48 h后,采用免疫组织化学染色方法观察ERα、ERβ在小鼠尺骨骺板静止区、增殖区和肥大区中的定位和表达情况,并通过图像分析系统测定骺板各区免疫反应阳性细胞数和阳性细胞面积。【结果】与对照组相比较,各浓度蛇床子素和雌酚酮组均能显著上调软骨骺板静止区、增殖区和肥大区ERα、ERβ蛋白的表达水平（P〈0.01）。在1×10^-7-1×10^-5mol/L区间内,随着蛇床子素浓度的升高,各区ERα、ERβ蛋白的表达水平显著升高（P〈0.01）。除1×10^-5mol/L组外,其它各浓度蛇床子素对ERα、ERβ蛋白的调控作用明显弱于雌酚酮组（P〈0.05）,1×10^-5mol/L蛇床子素组作用与雌酚酮组无统计学差异。【结论】蛇床子素对骨组织的作用可能与其上调长骨骺板中ERα及ERβ表达有关。     

蛇床子素对骺板TGF-β1及其受体TGF-βRⅡ蛋白表达的影响

【目的】考察蛇床子素对小鼠长骨转化生长因子-β1（transforming growth factorβ,TGF-β1）及其受体TGF-βRⅡ蛋白表达的影响,初步探讨该化合物对骨的作用机制。【方法】取16 d胚胎小鼠前肢尺骨在BGJb培养基中培养48 h,培养基中分别含有1×10^-6mol/L雌酚酮、1×10^-7-1×10^-4mol/L四个不同梯度浓度的蛇床子素。采用免疫组织化学方法测定长骨骺板静止区、增殖区和肥大区TGF-β1和TGF-βRⅡ蛋白。【结果】（1）经不同浓度的蛇床子素和雌酚酮处理后,胎鼠长骨骨总长显著增加。与对照组相比,蛇床子素1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5mol/L和雌酚酮1×10^-6mol/L组有显著性差异（P〈0.01）。蛇床子素1×10^-4mol/L组骨总长有增加的趋势,但无统计学意义（P〉0.05）。（2）与空白对照组,蛇床子素和雌酚酮组骺板各区TGF-β1和TGF-βRⅡ蛋白水平明显上调。当蛇床子素浓度由1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5mol/L逐渐升高时,各区TGF-β1和TGF-βRⅡ蛋白表达升高,而1×10^-4mol/L组各区TGF-β1和TGF-βRⅡ蛋白表达降低。与雌酚酮组相比,蛇床子素组除1×10^-5mol/L组外,其他各组长骨骺板各区TGF-β1和TGF-βRⅡ表达与雌酚酮组相比有统计学意义（P〈0.05）。【结论】（1）蛇床子素能明显促进体外培养胚胎小鼠长骨生长。（2）培养基中加入蛇床子素可上调长骨TGF-β1及其受体TGF-βRⅡ表达,提示可能与其促进体外培养胚胎小鼠长骨生长有关。     

大黄酸-雌酮对大鼠成骨细胞增殖和分化的作用

【目的】研究大黄酸-雌酮（LC-1）对原代培养大鼠成骨细胞增殖和分化的作用。【方法】酶消化法分离培养SD乳鼠颅盖骨成骨细胞；采取MTT法测定细胞增殖，磷酸苯二钠法（pNPP）测定细胞内外碱性磷酸酶（ALP）活性，研究不同浓度LC-1对成骨细胞增殖和分化能力的影响，并与雌酚酮和大黄酸的作用进行比较。【结果】给药3d后，与空白对照组相比：10^-6mol／L LC-1组、10^-7mol／L LC-1组和10^-7mol／L雌酚酮组明显促进成骨细胞增殖和增加细胞内外ALP活性（P〈0．05）；大黄酸抑制成骨细胞增殖，其中10^-6mol／L组有明显差异（P〈0．05），同时有增加细胞ALP活性的趋势，但无统计学差异。【结论】大黄酸-雌酮在体外可以促进成骨细胞增殖和分化。     

蛇床子素对新生大鼠颅骨成骨细胞中OPG、RANKLmRNA表达的影响

目的：研究蛇床子素对新生大鼠颅骨成骨细胞中OPG、RANKLmRNA表达的影响。方法：新生大鼠颅骨成骨细胞分离培养后，取第4代细胞，以5×10^4／mL接种于100cm^2培养瓶中，常规培养3d后，更换为无血清DMEM培养液，细胞饥饿过夜。然后每瓶分别加入含不同浓度蛇床子素的培养液，每浓度4瓶，连续给药48h和72h。每日通过相差显微镜观察细胞的形态、生长状况及治疗组和对照组之间的差别。提取和鉴定成骨细胞总RNA。结果：在培养液中加入不同浓度的蛇床子素培养48h后，1×10^-7mol／L组OPG、OPG／RANKL与对照组比较差异有统计学意义；培养72h后，1×10^-6mol／L组OPG／RANKL、1×10^-7mol／L组OPGmRNA的相对表达量以及OPG／RANKL与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．01，P〈0．05）。结论：蛇床子素能通过OPG—RANKL—RANK系统影响骨重建。     

雌激素对ER阴性的子宫内膜腺癌细胞系JEC增殖的影响

目的探讨不同浓度17-β雌激素（E2）对雌激素受体（ER）阴性的子宫内膜腺癌细胞系JEC的作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察不同浓度（10^-4、10^-5、10^-6、10^-7、10^-8、10^-9、10^-10、10^-11和10^-12 mol／L）E2作用JEC 1d、2d、3d、4d、5d后细胞的增殖活性。结果不同浓度的E2作用JEC细胞1d、2d、3d后，其OD值和对照组相比无明显差异；作用4d、5d后10^-7、10^-8和10^-9 mol／L组OD值和对照组比较有差异，其中10^-7 mol／L组在第5天OD值与对照组比较有显著差异。结论一定浓度的雌激素能促进JEC细胞的增殖。     

鱼藤素对小鼠小胶质细胞BV-2影响的实验研究

目的研究放射增敏剂鱼藤素对小鼠小胶质细胞BV-2的影响。方法 BV-2细胞以5×10^4/mL密度接种到细胞培养板中,加入8个不同浓度鱼藤素干预48 h后测定细胞增殖活力。在加入1×10^-6mol/L鱼藤素后6个时间点上测定细胞增殖活力。1×10^-8mol/L鱼藤素干预48 h,测定上清液中NO水平。结果 5×10^4/mL BV-2细胞以含10%胎牛血清DMEM培养基培养,第48 h达到细胞生长曲线的峰值。在0-1×10^-5mol/L剂量范围内,1×10^-6、1×10^-5mol/L鱼藤素干预48 h后BV-2细胞的增殖活力显著降低;1×10^-6mol/L鱼藤素加入后第24、48、72h等3个时间点上BV-2细胞增殖活力明显降低。1×10^-8mol/L鱼藤素干预48 h后BV-2细胞上清液NO水平提高。结论鱼藤素在一定的浓度时激活小胶质细胞,更高浓度时将导致小胶质细胞损伤甚至死亡。     

阿托伐他汀对骨髓基质细胞增殖及向成骨细胞分化的影响

目的比较不同浓度的阿托伐他汀对小鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化、矿化成骨的影响。方法分别将10^-8、10^-7、10^-6mol／L的阿托伐他汀和空白药物加入传代培养的小鼠骨髓基质细胞，通过细胞形态学观察、细胞增殖率检测、碱性磷酸酶（ALP）检测和钙结节染色，比较药物在成骨细胞分化过程中对细胞增殖和分化的影响。结果阿托伐他汀可以剂量依赖性方式抑制骨髓基质细胞的增殖，10^-7mol／L组和10^-6mol／L组较明显（均P〈0．05）。阿托伐他汀可以提高骨髓基质细胞ALP活性，培养10～22d，10^-7mol／L组和10^-6mol／L组ALP活性高于对照组和10^-8mol／L组（均P〈0．05）。矿化成骨染色显示在培养26d后，10^-6mol／L组染色明显深于其它各组。结论阿托伐他汀可促进骨髓基质细胞来源的成骨细胞的分化，抑制了细胞增殖，促进骨结节钙化。     

五溴联苯醚影响乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的机制探讨

目的:观察环境化合物五溴联苯醚(Penta-brominated dipbenyl ethers,5-BDE)影响人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的分子生物学作用机制.方法:将MCF-7细胞在DMEM培养液中进行常规传代培养.采用MTT比色法观察5-BDE对MCF-7细胞增殖的影响,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和免疫组化方法检测5-BDE对Bcl-2和Bax基因表达的影响.结果:与溶剂对照组相比,在1×(10-8～10-4)mol/L浓度范围内,5-BDE与1×10-8mol/L雌二醇作用类似,可显著促进MCF-7细胞增殖(P<0.05),并表现出良好的剂量-效应和时间-效应关系.RT-PCR及免疫组化结果显示,5-BDE可促进MCF-7细胞Bcl-2和抑制Bax蛋白表达.结论:5-BDE可通过影响细胞增殖和凋亡相关调节基因Bcl-2和Bax表达而调节人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和凋亡作用.     

异丙酚通过上调 miR-520a-3p抑制Wnt/β-catenin信号通路调控乳腺癌细胞

【摘要】目的 探讨异丙酚（PROP）对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的分子机制。方法 将不同浓度的PROP处理乳腺癌MCF-7细胞分为2.5 μmol/L PROP组、5.0 μmol/L PROP组、10.0 μmol/L PROP组和20.0μmol/L PROP组;以不加PROP的为对照组（NC组）;PROP+转染组分为PROP miR-con组、PROP anti-miR-con组、PROP miR-520a-3p组、PROP anti-miR-520a-3p组。MTT法测定MCF-7细胞存活率,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,qRT-PCR检测miR-520a-3p的表达,Western blot检测细胞中Cyclin D1、MMP-2、MMP-9和β-catenin蛋白表达水平。结果 与NC组比较,PROP组可抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭且呈显著的剂量依赖趋势,促进miR-502a-3p的表达,抑制β-catenin蛋白表达;与miR-con组比较,上调miR-520a-3p 可下调Cyclin D1、MMP-2和MMP-9,抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭;与PROP+anti-miR-con组比较,抑制miR-520a-3p表达可部分逆转PROP对MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭及Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin蛋白表达的影响。结论 异丙酚通过上调miR-520a-3p抑制Wnt/β-catenin信号通路,进而抑制MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭。异丙酚对乳腺癌具有潜在抑制作用。     

三氧化二砷对人乳腺癌耐药细胞系MCF-7/BCRP的细胞毒作用

【目的】探讨三氧化二砷(As2O3)对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/BCRP的毒性作用及其作用机制。【方法】MTT法和台月分蓝拒染实验检测As2O3对MCF-7/BCRP细胞的毒性作用;氚-嘧啶核苷掺入法检测As2O3对MCF-7/BCRP细胞的增殖抑制;流式细胞术测定As2O3对MCF-7/BCRP细胞周期和凋亡的影响。【结果】As2O3可显著抑制MCF-7/BCRP细胞生长,呈剂量效应关系(r=0.977,P<0.05),IC50为4.06μmol/L;As2O3可直接诱导细胞死亡,抑制细胞增殖,并使细胞周期阻滞在G2/M期,促进细胞凋亡。【结论】As2O3对MCF-7/BCRP细胞有显著的毒性作用,可直接引起细胞死亡。     

HER2阳性乳腺癌细胞株上清液对树突状细胞表型及功能的影响

目的探讨人HER2阳性乳腺癌细胞对树突状细胞表型及功能的影响。方法分离培养外周血单个核细胞来源的树突状细胞。培养的第5天,实验组HER2’MCF-7细胞的培养上清液孵育24小时,以不加上清液的树突状细胞作为对照组,流式细胞术检测树突状细胞表面标志CDS0、CD86、CD40、CD83和HLA—DR的表达水平,ELISA法检测树突状细胞细胞因子IL-12、TNF—α、IL-6和IL-10的分泌水平。用改良的MTT比色法检测上清液处理的树突状细胞刺激同种异体T细胞增殖的能力和ELISA法检测树突状细胞刺激T细胞分泌细胞因子的能力。结果树突状细胞与HER2’MCF-7细胞的上清液共培养后,树突状细胞表面分子CD80、CD83、CD86及CD40均表达升高,同时伴随着IL-12、TNF-α、IL-6的分泌增加。与对照组相比较,上清液处理的树突状细胞对激活同种异体T细胞增殖和分泌细胞因子的能力明显增强（P〈0．01）。结论HER2’MCF-7细胞能改善树突状细胞的抗原递呈功能和刺激T细胞活化增殖的能力,提示HER2’MCF-7细胞对树突状细胞是免疫刺激作用,对于HER2’的乳腺癌可采用基于树突状细胞疫苗的免疫治疗。     

索拉非尼联合蒽环类化疗药对乳腺癌MCF-7细胞增殖周期的影响

目的探讨索拉非尼联合蒽环类化疗药表阿霉素对乳腺癌MCF-7细胞增殖周期的作用。方法细胞做四甲基偶氮唑盐实验,绘制细胞增殖曲线。实验分为4组：对照组、索拉非尼单药组、表阿霉素单药组、联合组（索拉非尼＋表阿霉素）。用聚酰亚胺染色后,经流式细胞仪检测各组细胞增殖周期的变化。结果细胞增殖曲线可见细胞传代后开始增殖,4~5 d达到峰值,后随着时间的延长,细胞增殖受抑越来越明显。流式细胞仪检测细胞周期结果显示,索拉非尼单药组使MCF-7细胞阻滞于G0/G1期[（62.837±0.511）%]与对照组[（49.250±0.826）%]比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;表阿霉素单药组使细胞阻滞于S期[（24.976±0.409）%],与对照组[（23.473±1.009）%]比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;联合组G0/G1期细胞比率[（64.373±0.429）%]高于对照组及表阿霉素单药组[（50.980±0.403）%],差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论索拉非尼和表阿霉素的联合应用可以使乳腺癌MCF-7细胞明显阻滞于G0/G1,可以为乳腺癌的联合化疗提供一定的理论依据。     

蛇床子素对大鼠原代软骨细胞增殖的抑制作用

目的：观察蛇床子素对大鼠软骨细胞增殖的影响。方法：分离出生24h内大鼠的软骨细胞,进行原代培养。细胞扩增至第2代时观察1周内细胞增殖情况,并用细胞免疫荧光法鉴定Ⅱ型前胶原基因（type Ⅱ procollagen gene,Col2a1）的表达。将第2代软骨细胞分为对照组和不同浓度蛇床子素（6．25、12．5、25和50μmol／L）组。药物作用24和48h后,观察细胞增殖情况,蛋白质印迹法和聚合酶链反应法检测增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）和细胞周期素D1（cyclinD1）的表达。结果：第2代原代软骨细胞活力正常,Col2al表达明显。蛇床子素可以抑制软骨细胞的增殖,并随浓度的增加,抑制作用愈明显。蛋白质印迹法和聚合酶链反应法检测发现,随着蛇床子素浓度的增加,软骨细胞中PCNA和cyclinD1的表达下降。结论：蛇床子素可能通过抑制PCNA和cyclinD1的表达发挥抑制软骨细胞增殖的作用。     

Γ干扰素诱导功能性TrkA的表达激活NGF/TrkA传导通路诱导原代神经母细胞瘤细胞分化的实验研究

目的在骨髓转移的神经母细胞瘤（Neuroblastoma,NB）细胞及人KP-N-RT细胞系中分别应用IFN-γ、NGF及联合应用IFN-γ和NGF作为诱导剂诱导NB细胞分化。方法NB骨髓转移细胞的原代培养以及人KP-N-RT细胞系培养10d。第10天在原代培养细胞及KP-N-RT细胞中应用RT-PCR法检测TrkA表达水平;同时应用Western法和免疫沉降法检测KP-N-RT细胞中TrkA及磷酸化TrkA蛋白表达的不同。结果第10天观察细胞形态学变化,在NB原代培养及KP-N-RT细胞中同时负荷IFN-γ和NGF的细胞表现出比单独负荷IFN-γ或NGF更加显著的形态学分化（P〈0.01）。前者细胞增殖抑制明显（P〈0.01）。在IFN-γ组,TrkAmRNA表达增加,NGF组未见明显改变,联合用药组有明显减少或消失。在KP-N-RT细胞中,在25IU/mLIFN-γ处理的细胞中用NGF刺激5min可致磷酸化TrkA蛋白表达增加。结论IFN-γ通过磷酸化NGF受体激活NGF/TrkA信号传导系统诱导NB细胞的分化,甚至在侵袭性表型的NB中也有相似结果。     

不同方式加热联合甲基莲心碱对耐药乳腺癌MCF一7／Adr细胞r／H2AX及mdr一1／P—gP表达的影响

目的：检测不同模式加热联合甲基莲心碱（neferine,Nef）对耐药乳腺癌MCF一7／Adr细胞的增殖抑制及3,H2AX和mdr一1／P—gp表达的影响。方法：采用MTT法检测金属模块加热、培养基加热、烤箱加热及水浴加热等不同模式加热联合10仙g／mLNef对经阿霉素培养的MCF-7／Adr细胞的增殖抑制,实时定量PCR检测mdr一,mRNA的表达,Western印迹法检测rH2AX及P糖蛋白（P—glycoprotein,P—gP）的表达。结果：42℃及450C不同模式加热组较37℃培养组MCF一7／Adr细胞吸光度值明显下降,mdr一1／P—gP表达下降,rH2AX表达上调（均P〈0．01）。加热联合10μg／mLNef组较单纯热疗组及单纯10斗∥mLNef组MCF~／Adr细胞吸光度值明显下降（均P〈0．01）,mdr一1／P—gP表达下降,rH2AX表达上调（均P〈0．05）。42℃及45℃不同模式加热组比较,水浴加热组P—gp表达下降及rH2AX表达上调最为明显（P〈0．05）。结论：加热能增加阿霉素对MCF一7／Adr细胞的细胞毒性反应,能明显增加McF-7／Adr细胞DNA损伤且随温度升高而加剧：MCF-7／Adr细胞对不同模式的加热反应可能不同;热疗联合Nef能增敏阿霉素的化学治疗效果。     

石决明提取液对晶状体抗氧化能力的影响

目的研究石决明提取液对人晶状体抗氧化能力的影响。方法采用双氧水干预体外培养人晶状体上皮细胞造成氧化损伤模型,同时加入不同浓度的石决明提取液,应用对照实验研究,分成空白对照组、阳性对照组即双氧水组和不同浓度的石决明干预组,于1、3、5天时用CCK-8检测各组人晶状体上皮细胞增殖能力,3天后用化学比色法检测SOD、GSH和MDA的水平。结果不同时间点时各实验组间HLECs增殖能力存在变化,各组间比较差异具有统计学意义（1天时,F=23922．421,P〈0．01;3天时,F=120605．864,P〈0．01;5天时,F=150939．452,P〈0．01）。H：02使细胞的增殖能力降低,石决明提取液使其提高,且在一定的时间和浓度范围内具有依赖性,其中以第3天时0．1％组最佳。双氧水组损伤后,人晶状体上皮细胞中SOD、GSH水平降低而MDA含量增高,石决明组提高了氧化损伤的人晶状体上皮细胞的抗氧化水平,减少脂质过氧化物的升高程度,差异具有统计学意义（SOD：F=983．042,P〈0．01;GSH：F=444．446,P〈0．01;MDA：F=830．523,P〈0．01）。结论石决明提取液可提高人晶状体的抗氧化能力。     

高糖对人腹膜间皮细胞生成活性氧的影响

[目的]研究不同浓度的葡萄糖对人腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cells，HPMCs）生成活性氧的影响。[方法]HPMCs体外培养并进行免疫组化鉴定，取第3代细胞用于实验。分别按照不同的实验要求将细胞分组。不同葡萄糖浓度干预组：①空白对照组；②1．5％葡萄糖组；③2．5％葡萄糖组；④4．25％葡萄糖组。不同作用时间组：①空白对照组；②2．5％葡萄糖组。两组细胞分别培养12、24、48h。应用流式细胞仪检测细胞对氧化剂敏感的2．7-二氢二氯荧光素（2’，7’-dichlorodihydrofluorescein，DCFH）发生氧化所产生的荧光量，从而间接的反映细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）的水平，观察随葡萄糖浓度变化及不同作用时间对人腹膜间皮细胞产生活性氧的影响。[结果]（1）与空白对照组比较，高糖干预人腹膜间皮细胞后，其细胞内平均荧光强度明显升高（P〈0．05），并且随葡萄糖浓度升高而逐渐增高，其中4．25％葡萄糖组最高。（2）与空白对照组比较，随着时间的延长，高糖作用下细胞内平均荧光强度明显升高（P〈0．05），培养48h其水平最高。[结论]高糖可刺激体外培养的人腹膜间皮细胞ROS的生成。