全膝关节磁共振成像积分对膝骨关节炎诊断价值的探讨

目的:探讨全膝关节磁共振成像积分(WORMS)对膝骨关节炎(KOA)患者的诊断价值。方法:回顾性分析2009年11月至2011年1月门诊及住院KOA伴膝关节积液患者70例,男12例,女58例;年龄46～75岁,平均(59.66±9.93)岁。用WOMAC量表进行临床症状评估,用K-L分级及全膝关节磁共振成像积分(WORMS)进行放射学评估,同时应用ELISA法检测患者关节液中COMP及CTX-Ⅱ的浓度。并对上述指标进行相关性分析及多重线性回归分析。结果:WOMAC评分及WORMS分别为(57.50±8.20)和(64.54±16.45)分,CTX-Ⅱ及COMP含量分别为2.42ng/ml和4.56ng/ml。选择WORMS四分位数中轻和严重2组,比较2组COMP差异有统计学意义(Z=2.04,P=0.039),而CTX-Ⅱ差异则无统计学意义(Z=0.79,P=0.427)。相关性分析发现WORMS与WOMAC评分、K-L分级呈正相关(r=0.777,P<0.01;r=0.716,P<0.01),K-L分级与WOMAC评分也呈正相关(r=0.692,P<0.01)。WORMS中关节软骨积分、骨赘积分、滑膜炎积分分别与WOMAC评分、K-L分级及COMP亦呈正相关(r=0.771,P<0.01;r=0.509,P<0.01;r=0.917,P<0.01)。以WOMAC评分为应变量,年龄、性别、K-L分级、WORMS、COMP和CTX-Ⅱ为自变量进行逐步回归(F=20.327,P<0.01),KOA病情主要受WORMS、K-L分级影响(P=0.015,P=0.025)。结论:WORMS对膝骨关节炎的诊断有较高的参考价值。WORMS高时,关节液中COMP含量升高。膝骨关节炎的临床症状主要受WORMS、K-L分级影响。     

如意珍宝片含药血清对大鼠软骨细胞增殖及分化的影响

目的探讨如意珍宝片含药血清对大鼠软骨细胞增殖及分化的影响。方法以如意珍宝片给大鼠灌胃1周后的含药血清干预软骨细胞,观察不同时间点的细胞形态,用蛋白印迹法检测细胞增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达情况。进一步采用10ng／ml浓度的白细胞介素（IL）-1β诱导软骨细胞分化,分为空白血清组,IL-1β诱导＋空白血清组,IL-1β诱导＋含药血清组共3组培养,采用实时定量聚合酶链反应（RT—PCR）检测各组细胞的Sox-9和基质金属蛋白酶13（MMP-13）基因的表达,用蛋白印迹法检测各组细胞的B—catenin蛋白表达情况。结果如意珍宝片含药血清能促进软骨细胞的增殖,提高软骨细胞PCNA蛋白及Sox。9基因表达（P〈0．05）,但对MMP-13基因和β—catenin蛋白表达无明显影响（P〉0．05）。结论如意珍宝片含药血清具有一定的促进软骨细胞增殖,抑制细胞分化的作用。     

蛇床子素对大鼠原代软骨细胞增殖的抑制作用

目的：观察蛇床子素对大鼠软骨细胞增殖的影响。方法：分离出生24h内大鼠的软骨细胞,进行原代培养。细胞扩增至第2代时观察1周内细胞增殖情况,并用细胞免疫荧光法鉴定Ⅱ型前胶原基因（type Ⅱ procollagen gene,Col2a1）的表达。将第2代软骨细胞分为对照组和不同浓度蛇床子素（6．25、12．5、25和50μmol／L）组。药物作用24和48h后,观察细胞增殖情况,蛋白质印迹法和聚合酶链反应法检测增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）和细胞周期素D1（cyclinD1）的表达。结果：第2代原代软骨细胞活力正常,Col2al表达明显。蛇床子素可以抑制软骨细胞的增殖,并随浓度的增加,抑制作用愈明显。蛋白质印迹法和聚合酶链反应法检测发现,随着蛇床子素浓度的增加,软骨细胞中PCNA和cyclinD1的表达下降。结论：蛇床子素可能通过抑制PCNA和cyclinD1的表达发挥抑制软骨细胞增殖的作用。     

一种获取具有旺盛增殖力的大鼠软骨细胞培养方法

目的探讨大鼠软骨细胞的培养方法。方法采用单纯胶原酶消化配合吹打法,从新生(出生24 h内)SD大鼠的膝、肩、肘关节和股骨头处的软骨中提取软骨细胞进行原代培养,在显微镜下观察并对甲苯胺蓝染色、阿利新蓝染色、II型胶原免疫荧光染色和增殖细胞核抗原免疫荧光染色进行鉴定;针对不同批次的实验观察结果,进行一致性检验。结果原代细胞培养第3天即可传代,前3代细胞表型稳定,增殖力良好;第4代开始出现细胞分化的迹象。不同批次实验的一致性检验结果稳定。结论采用单纯胶原酶消化配合吹打法能够在短时间内获取大量纯化且增值能力旺盛的软骨细胞。     

河蚌提取物葡聚糖对软骨细胞Wnt通路的调控作用研究

目的 ：探讨河蚌肉提取物葡聚糖HBP-A（anodonta glucan HBP-A）对体外软骨细胞Wnt通路的调控作用。方法：体外培养大鼠软骨细胞,添加IL-1β（10 ng/ml）诱导分化,分为空白组,IL-1β组,IL-1β＋IWP-2（5μM,Wnt通路抑制剂）组,IL-1β＋HBP-A（0.3 mg/ml）组,IL-1β＋IWP-2＋HBP-A共5组培养,提取各组细胞RNA和蛋白,采用Rt-PCR检测各组细胞Wnt-3a、β-catenin（24、48、72 h）及MMP-13（72 h）的基因表达;采用Western-blot检测β-catenin、MMP-13、Sox-9和Coll-Ⅱ蛋白的表达水平（48 h）。结果：细胞经IL-1β诱导分化,Wnt-3a基因表达升高,β-catenin以及MMP-13基因和蛋白表达升高,Sox-9和Coll-Ⅱ蛋白表达下调。添加HBP-A干预可以抑制IL-1β诱导下软骨细胞Wnt-3a基因的高表达、β-catenin以及MMP-13基因和蛋白的高表达,上调Sox-9和Ⅱ型胶原蛋白的表达。IWP-2和HBP-A合用时,Wnt-3a、β-catenin基因以及β-catenin蛋白表达最低,Sox-9蛋白表达最高。结论：HBP-A可通过降低Wnt/β-catenin信号通路表达,延缓软骨细胞分化,并且可与Wnt抑制剂协同调节Wnt-3a、β-catenin和Sox-9因子的表达。     

骨髓间充质干细胞的培养及向软骨细胞诱导的方法学研究进展

骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)可向软骨分化,具有来源广泛、取材方便、易于培养且无明显自体移植免疫排斥反应等优点,在体外进行定向分化可作为软骨修复的种子细胞.体外分离培养纯度高、活力强、生物特性单一的软骨细胞,对组织工程及细胞的实验至关重要.然而,在骨髓中BMSCs含量极低,体外分离培养诱导方法不一,培养难度大.因此,总结骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化方法,并归纳细胞形态学、表面标志物鉴定及其向软骨细胞方向诱导分化的方法很有必要.     

软骨标志物CTX-Ⅱ在骨关节炎中的应用

骨关节炎(OA)的临床诊断尚缺乏有效的生物学标志物.研究证实标志物Ⅱ型胶原羧基端交联肽(CTX-Ⅱ)是关节软骨降解的特异性指标.CTX-Ⅱ检测可及时反映软骨损伤和退变程度、诊断OA发生、预测OA进展和监测药物治疗效果,从而间接反映OA患者的病情.CTX-Ⅱ的应用主要集中于OA早期,并需联合其他生物学标志物一起检测,以便更准确的反映OA病变,但其检测结果具体临床指导意义还需进一步完善.     

河蚌葡聚糖含药血清对软骨细胞β-catenin及MMP-13基因表达的影响

目的探讨河蚌葡聚糖（HBP—A）治疗骨关节炎大鼠6周后的含药血清对软骨细胞β-catenin和MMP一13基因表达的影响。方法采用6周龄的雄性SD大鼠,随机分为空白组、模型组、西药组和中药组,每组5只。采用ACLT造模方法建立膝骨关节炎模型,造模后采取相应的干预措施,连续灌胃6周后采含药血清。软骨细胞依次用2．5％、5％、10％浓度的HBP—A含药血清进行体外培养,分为空白组、模型组、西药组和中药组。培养48h后观察细胞的形态变化,采用PCR实验检测各组细胞β-catenin和MMP-13基因的表达。结果形态学观察发现10％含药血清明显促进细胞增殖,同时伴发细胞老化凋亡现象。5％浓度含药血清培养的β-catenin、MMP-13基因表达较2．5％增加,差异有统计学意义（P〈0．001）。与空白组比较,2．5％、5％的模型组β-catenin和MMP-13基因表达升高,差异有统计学意义（P〈0．001）。与模型组比较,2．5％、5％浓度的西药组和中药组β-catenin、MMP-13基因表达降低,差异有统计学意义（P〈0．001）。与西药组比较,2．5％、5％浓度的中药组β-catenin、MMP-13基因表达降低,差异有统计学意义（P〈0．001）。结论HBP．A含药血清通过降低β-catenin和MMP．13基因的表达起到保护软骨细胞的作用。     

基于影像表现预测骨关节炎进展

目前常用X线检查评估骨关节炎(OA)进展,MRI可了解OA初期至晚期关节功能丧失阶段进展规律。最新研究表明,MRI检测到的关节结构异常变化,如软骨缺损和骨髓水肿增加,软骨体积和厚度减少,软骨成分改变等可用于评估OA进展。肥胖、肌肉萎缩、关节内外翻、代谢性疾病、炎症和关节疼痛等临床危险因素及软骨损伤、骨髓水肿、半月板病变、滑膜炎等影像学特征等关节结构因素均与OA进展有关。改善这类危险因素,可减缓疾病进展;利用MRI监测疾病进展,发现新的危险因素,并对危险因素进行干预,有助于阻断OA进展。对处于高危险因素人群进行临床试验研究,可减少试验样本量和随访时间,增强临床试验研究效率。该文主要介绍OA进展的最新流行病学和临床研究证据,以及与OA进展相关的危险因素。