miR-638靶向下调MACC1抑制胃癌细胞的恶性进展

目的 探究miR-638在胃癌中的生物学功能和具体分子机制.方法 采用qRT-PCR检测miR-638和MACC1在胃癌细胞中的mRNA表达,Western blot检测MACC1在胃癌细胞中的蛋白表达;双荧光素酶实验验证MACC1和miR-638靶向结合关系;采用CCK8法测定细胞增殖活性;用划痕愈合实验和Transwell实验评价其迁移和侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期分布情况.结果 m i R-638在胃癌细胞中表达下调;过表达m i R-638抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力;MACC1在胃癌细胞中表达显著上调,miR-638靶向抑制MACC1的表达.miR-638是通过靶向下调MACC1抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力.结论 miR-638通过靶向下调MACC1抑制胃癌细胞的发生发展.     

磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1对胃癌细胞生物学行为的影响及相关机制

目的： 探讨磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1(phosphoenolpyruvate carboxykinase 1，PCK1)在胃癌中的表达、与胃癌患者预后的关系及其潜在机制。方法： 利用TCGA数据库、HPA数据库及Oncomine 4.5数据库中胃癌以及癌旁组织的相关数据与图片，分析PCK1表达水平与胃癌患者临床病理学特征和总生存期的关系，采用基因功能富集分析(GSEA)预测PCK1调控胃癌潜在的信号通路。体外细胞学实验采用慢病毒转染胃癌HGC-27和AGS细胞，分别敲低与过表达PCK1，采用细胞功能学实验检测PCK1对胃癌细胞生长、增殖、迁移等影响，同时采用蛋白质免疫印迹检测相关蛋白的表达。结果： 与癌旁组织相比，PCK1在胃癌组织中表达明显上调(P＜0.05)；ROC曲线提示PCK1对胃癌患者预后具有良好的预测效能；通过GSEA富集分析提示原发性免疫缺陷、细胞黏附分子、趋化因子信号通路、全身性红斑狼疮、产生IgA的肠道免疫网络及RIGⅠ样受体信号通路相关的基因集在PCK1基因低表达表型中差异富集；敲低PCK1后，胃癌HGC-27和AGS细胞生长、克隆形成能力、迁移能力显著下降，同时p-AKT(Ser473)、p-mTOR、p-S6和p-4EBP1表达水平明显降低(P＜0.05或P＜0.01)；过表达PCK1则与之作用相反。结论： PCK1在胃癌中呈高表达且与患者预后相关，其可能通过活化AKT mTOR信号通路促进胃癌细胞生长、增殖与迁移。     

Periostin调控AKT信号通路激活胃癌细胞的上皮间质转化

目的：探讨Periostin(POSTN)调控AKT信号通路激活胃癌细胞的上皮间质转化(EMT)的机制。方法：选取胃癌病人的癌旁、原发灶、转移灶以及不同临床分期的原发灶胃癌组织标本,采用POSTN与CD44共同免疫荧光染色。选择人胃癌细胞MGC 803细胞,并分别过表达和敲除POSTN基因,分别添加AKT抑制剂LY294002进行孵育培养,采用RT-qPCR法检测各组细胞的POSTN、CD44和EMT相关基因的表达水平;采用蛋白印迹技术检测各组细胞的POSTN、CD44和EMT相关蛋白的表达水平;采用CCK-8检测各组细胞的增殖水平;采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果：胃癌病人的转移灶中POSTN表达高于原发灶,且原发灶中POSTN表达高于癌旁组织。与MGC 803细胞相比,过表达POSTN基因的胃癌细胞中POSTN、CD44、α-sma、snail、slug、Vimentin表达升高和E-Cadherin表达降低以及增殖活性、迁移和侵袭能力升高;敲除POSTN基因的胃癌细胞中CD44、α-sma、snail、slug、Vimentin表达降低以及E-Cadheri...     

Fbxl10通过PI3K途径促进肺癌细胞增殖和侵袭

目的探讨组蛋白去甲基化酶Fbxl10对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法体外培养肺腺癌细胞株H1299,设空白对照组(Ctrl组),阴性质粒对照组(NC组),过表达组(Fbxl10OE组)和干扰组(siFbxl10组),均采用脂质体法转染至肺腺癌H1299细胞株;分别利用细胞克隆形成实验及MTT实验检测Fbxl10基因对肺腺癌细胞株增殖的影响;细胞划痕实验和Transwell迁移和侵袭实验检测Fbxl10基因对肺腺癌细胞株迁移和侵袭能力的作用;qRT-PCR和蛋白免疫印记实验技术检测转染后肺腺癌细胞株Fbxl10和PI3K的mRNA水平以及相关蛋白的表达情况。结果与NC组比较,在肺腺癌H1299细胞株中过表达Fbxl10,能促进肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05);qRT-PCR结果显示,过表达Fbxl10时,Fbxl10 mRNA与PI3K mRNA的过表达组均高于NC组(P<0.05),蛋白免疫印记实验结果显示,过表达Fbxl10时,Fbxl10蛋白与PI3K蛋白的表达也明显高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Fbxl10过表达能促进肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,机制可能与激活了PI3K信号通路有关。     

染色体驱动蛋白KIF4A对胃癌细胞迁移和转移的影响

目的 前期的研究证实,染色体驱动蛋白KIF4A在胃癌组织中低表达, 过表达KIF4A抑制了胃癌细胞的增殖。本研究进一步研究KIF4A与胃癌细胞迁移与转移的关系,从而为胃癌临床治疗提供新的治疗靶点。方法 应用组织芯片和免疫荧光染色技术研究胃癌及其周围淋巴结组织中KIF4A蛋白分子的表达差异性;利用细胞小分子RNA干扰和Transwell迁移实验,检测KIF4A对细胞迁移运动能力的影响。结果 65%(26/40)的胃癌组织中KIF4A蛋白分子表达水平低于周围的淋巴结组织;KIF4A的表达水平与胃癌组织的TNM分期密切相关;KIF4A蛋白分子的表达随胃癌转移侵袭能力的增强而降低;抑制胃癌细胞内KIF4A蛋白分子的表达明显增强胃癌细胞的迁移运动能力。结论 染色体驱动蛋白分子KIF4A通过抑制胃癌细胞的迁移运动能力参与控制胃癌的临床转移过程。     

miR-3188对胃癌细胞恶性生物学行为的作用及机制研究

目的 探究miR-3188对胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响及其潜在分子机制。方法 通过qRT-PCR法检测正常人胃黏膜细胞(GES-1)及人胃癌细胞系(HGC-27、MGC-803、BGC-823、MKN-45)中miR-3188表达水平,通过生物信息学分析及双荧光素酶报告实验确定NRAGE是否为miR-3188的靶基因,分别将miR-3188 mimic、miR-3188 inhibitor及阴性对照物miR-NC,antimiR-NC转染至胃癌细胞HGC-27中,通过Western blot及qRT-PCR法检测NRAGE蛋白及mRNA表达水平,将miR-3188 mimic, NRAGE过表达质粒(pc-NRAGE)及其阴性对照物miR-NC、pc-control分别或共转染至胃癌细胞HGC-27中,利用CCK-8、流式细胞术、Transwell实验检测各组细胞增殖活性、凋亡率、侵袭及迁移的能力,通过Western blot检测各组细胞上皮-间质转化(EMT)、增殖、凋亡、侵袭及迁移相关蛋白[细胞周期蛋白D 1(CyclinD 1),基质金属蛋白酶9(MMP 9),B-ce...     

miR-155-5p调节Wnt信号通路促进肾透明细胞癌细胞的增殖与转移

目的 研究miR-155-5p和Wnt信号通路在肾透明细胞癌细胞中的作用机制。方法 采用qRT-PCR检测细胞中miR-155-5p的表达。WB检测各细胞中Wnt信号通路相关蛋白磷酸化水平及蛋白表达水平。通过MTT实验、细胞划痕实验、Transwell实验分别检测各细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果 肾透明细胞癌细胞中miR-155-5p的表达明显高于正常细胞。过表达miR-155-5p促进肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭。加入通路蛋白抑制剂后,我们发现其会减弱过表达miR-155-5p对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的促进能力。结论 miR-155-5p和Wnt在调节肾透明细胞癌发生发展中起着关键作用,miR-155-5p可能成为肾透明细胞癌治疗的新靶点。     

miRNA-671上调抑制胃癌细胞增殖与迁移

目的 探索miR-671在胃癌组织和细胞中的表达,并研究其对胃癌细胞增殖和迁移的影响.方法 通过qRT-PCR实验检测miR-671在胃癌组织和细胞中的表达,通过CCK-8实验检测miR-671表达上调对MKN45胃癌细胞增殖,通过划痕和Transwell小室实验检测miR-671表达上调对MKN45胃癌细胞侵袭和迁移的影响.结果 与癌旁正常组织相比,胃癌组织中的miR-671表达明显下调(P＜0.01);与正常人胃黏膜上皮细胞相比,胃癌细胞中的miR-671表达也明显下调(P＜0.01);miR-671表达上调明显抑制MKN45胃癌细胞增殖、迁移和侵袭(P＜0.01).结论 miR-671可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,在胃癌中发挥抑癌基因功能.     

长链非编码RNA SPATA3-AS1在胃癌中的表达及意义

目的: 研究长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)SPATA3-AS1在胃癌患者癌组织和血浆中的表达及临床意义,并进一步探讨其对胃癌细胞株的影响及其潜在机制。方法：采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测80例胃癌及癌旁组织、29例胃癌患者和29例健康者血浆中SPATA3-AS1的表达水平;对胃癌患者SPATA3-AS1表达与其临床病理特征行统计学分析。敲减SPATA3-AS1,分别转染胃癌AGS、HGC-27细胞,采用细胞增殖、克隆形成、Transwell实验及流式细胞术分别检测细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡;采用qRT-PCR检测肿瘤相关基因mRNA的表达水平。结果：SPATA3-AS1在胃癌组织中呈高表达,其表达与淋巴结转移、肿瘤TNM分期、肿瘤浸润深度及肿瘤预后相关;胃癌患者血浆中SPATA3-AS1也呈高表达,其表达与淋巴结转移、肿瘤直径、肿瘤TNM分期呈正相关。血浆中SPATA3-AS1表达水平诊断胃癌ROC曲线下面积为0.788。敲减SPATA3-AS1后,胃癌AGS、HGC-27细胞增殖及移动活力减弱,细胞凋亡能力增强。同时N-钙黏蛋白、Twist1、Snail mRNA表达下调而E-钙黏蛋白mRNA表达上调。结论：SPATA3-AS1在胃癌患者癌组织及血浆中呈高表达并与其预后相关;敲减SPATA3-AS1后胃癌细胞增殖、迁移及侵袭等能力均受到抑制,细胞凋亡增强,可能与对上皮间质转化过程的调控有关。     

PSMA7在胃癌中的表达及对胃癌增殖、侵袭迁移及成瘤能力的影响

目的研究PSMA7在胃癌中的表达及其对胃癌增殖、侵袭迁移及裸鼠皮下成瘤能力的影响。方法收集60例胃癌患者的 癌组织及配对的癌旁组织,应用免疫组化法检测胃癌和配对癌旁组织中PSMA7的表达水平;应用慢病毒转染技术在胃癌细胞 株SGC7901中干扰PSMA7;应用Cell Counting Kit-8（CCK-8）和细胞克隆形成实验检测胃癌细胞增殖能力的变化,Transwell实 验检测胃癌细胞侵袭迁移能力的变化;稳转细胞株构建裸鼠皮下移植瘤模型,研究干扰PSMA7对皮下移植瘤的影响。结果 免疫组化结果显示PSMA7在胃癌组织中的表达水平显著高于其配对的癌旁组织（P<0.05）;在人胃癌细胞株SGC7901中下调 PSMA7表达能够显著抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭迁移能力（P<0.05）;在BALB/c小鼠皮下移植瘤模型中干扰PSMA7的表达能 够明显抑制皮下移植瘤的生长（P<0.05）。结论PSMA7在胃癌组织中高表达,干扰PSMA7抑制胃癌细胞增殖、侵袭迁移及裸 鼠皮下成瘤的能力。     

趋化因子CCL19在结直肠癌中的表达和作用

目的 观察趋化因子CCL19在结直肠癌组织中的表达,探讨其对结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力的影响。 方法 收集确诊为结直肠恶性肿瘤并手术切除患者（n=85）的肿瘤组织及癌旁正常组织,运用实时定量PCR和组织微阵列免疫组化技术检测CCL19的表达水平;以实时定量PCR、蛋白质印迹技术筛选高表达CCL19受体CCR7的人结直肠癌细胞株SW620细胞作为研究对象,并给予重组人CCL19（rh-CCL19）刺激,通过细胞增殖实验、划痕实验、Transwell实验来检测SW620细胞的增殖、迁移和侵袭能力的变化。 结果 结直肠癌组织中的CCL19表达要明显低于癌旁正常组织（P<0.05）,且CCL19表达量与肿瘤大小和浸润深度有关（P<0.01）。在CCR7高表达的SW620细胞中,加入rh-CCL19后,其细胞增殖、迁移及侵袭能力下降（P<0.05）。 结论 CCL19在结直肠癌组织中的表达量低于癌旁正常组织,且与肿瘤大小和浸润深度有关;CCL19可抑制人结直肠癌细胞株SW620细胞增殖、迁移和侵袭能力,提示CCL19具有抑制结直肠癌的作用。     

miRNA-30b对抑制胃癌细胞增殖及侵袭的作用研究

目的研究miRNA-30b在胃癌癌组织中的表达水平及对癌细胞增殖侵袭的影响,探讨miRNA-30b在胃癌中的临床意义及可能的分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miRNA-30b在胃癌及癌旁组织中的表达情况;用miRNA-30b模拟物及抑制物转染人胃癌HGC-27细胞,CCK-8法检测细胞增殖的情况,Transwell 小室法检测细胞侵袭情况,Western blot 检测RAB22A 和USP47 蛋白表达。结果miRNA-30b在胃癌组织中表达水平低于对应癌旁组织（P <0.05）,且miRNA-30b 低表达与胃癌分期及肿瘤大小有关（P <0.05）;与转染阴性对照细胞比较,转染miRNA-30b模拟物的HGC-27细胞增殖水平和侵袭能力均受到抑制（P <0.05）,RAB22A和USP47 蛋白表达水平降低（P <0.05）;而转染miRNA-30b 抑制物的HGC-27细胞增殖水平和侵袭能力则增强（P <0.05）,RAB22A 和USP47 蛋白表达水平升高（P <0.05）。结论miRNA-30b 在胃癌组织中表达下调,且miRNA-30b 可能通过调节RAB22A 和USP47 的表达从而影响胃癌细胞的增殖及侵袭。     

敲低EEFSEC可体外抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨硒代半胱氨酸tRNA特异性真核延伸因子（EEFSEC）对人前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 采用qRT-PCR法检测人正常前列腺细胞系RWPE1和人前列腺癌细胞系22Rv1、LNcap、Vcap、PC-3细胞中EEFSEC mRNA的表达;收集前列腺癌患者的癌组织和癌旁组织,采用Western blot法检测前列腺癌组织中EEFSEC的蛋白表达情况。慢病毒感染22Rv1 细胞,Western blot检测敲低效率;XTT实验检测各组细胞的增殖能力;划痕实验和Transwell实验用来检测细胞迁移能力;Transwell试验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期;qRT-PCR检测敲低EEFSEC后周期相关基因的mRNA水平的变化。结果 与对照组相比,EEFSEC在前列腺癌中高表达（P<0.05）;且EEFSEC高表达导致前列腺癌患者不良预后;感染敲低EEFSEC的慢病毒后,可明显降低22Rv1细胞中EEFSEC的蛋白表达水平;与对照组相比,敲低EEFSEC可显著抑制22Rv1细胞的增殖（P<0.001）,迁移（P<0.001）和侵袭能力（P<0.001）;敲低EEFSEC细胞周期主要阻滞在G0/G1期,qRT-PCR实验显示敲低EEFSEC可明显下调C-myc和CCNB1的表达,上调p15的表达。结论 敲低EEFSEC可能通过降低C-myc表达来抑制前列腺癌细胞22Rv1的增殖、迁移和侵袭能力。     

环状RNA hsa_circ_0079557在胃癌中的表达及其临床意义

目的: 探讨hsa_circ_0079557在胃癌中的表达水平和临床价值。方法： 收集5对胃癌组织及癌旁组织,高通量测序技术检测后结合circbase等数据库中胃癌数据分析,锁定差异表达的部分环状RNA。用qRT-PCR检测62对胃癌标本中hsa_circ_0079557表达,分析其与临床病理特征的关系;检测并分析hsa_circ_0079557在胃癌细胞（SGC-7901、BGC-823、HGC-27和MGC-803）和胃黏膜上皮GES-1细胞、胃癌患者和健康体检者血清中表达差异。siRNA敲减hsa_circ_0079557后,用细胞克隆形成实验、平板划痕实验、细胞周期流式实验分别检测胃癌细胞（HGC-27和MGC-803）增殖和迁移能力及细胞周期改变,蛋白印迹测定细胞周期蛋白依赖激酶3（cyclin dependent kinase 3,CDK3）表达水平。结果： qRT-PCR结果显示,hsa_circ_0079557在胃癌组织中表达水平明显高于癌旁组织,且其表达水平与肿瘤TMN分期相关（P均<0.05）;hsa_circ_0079557在胃癌细胞中表达水平明显高于胃黏膜上皮细胞（P＜0.05）;hsa_circ_0079557在胃癌患者血清中水平明显高于健康体检者（P＜0.05）且术前明显高于术后（P＜0.01）;hsa_circ_0079557敲减后HGC-27和MGC-803细胞增殖、MGC-803细胞迁移能力下降,HGC-27和MGC-803细胞CDK3表达水平下降（P＜0.05）。胃癌细胞株中hsa_circ_0079557敲减使细胞多阻滞于G₀-G₁期。结论： hsa_circ_0079557在胃癌组织中呈高表达,其可作为胃癌潜在的早期诊断及预后生物标志物。     

胃癌中PTPRS的表达及其对胃癌细胞增殖及迁移侵袭能力的影响

目的 探讨受体型酪氨酸磷酸酶S(protein tyrosine phosphatase receptor S,PTPRS)在胃癌中的表达及其与胃癌患者预后的关系,以及PTPRS对胃癌细胞增殖、迁移侵袭能力的影响。方法 利用复旦大学附属中山医院的胃癌标本的石蜡切片,免疫组化染色分析PTPRS在胃癌组织中的表达情况,进一步运用卡方检验及生存分析探索PTPRS与胃癌患者临床病理因素和生存时间的关系;运用CCK-8和平板克隆实验检测PTPRS的表达变化对细胞增殖和克隆形成能力的影响;采用划痕实验和Transwell实验检测PTPRS的表达变化对细胞迁移侵袭能力的影响;采用Western blot检测胃癌细胞中相关蛋白表达情况。结果 对141例胃癌患者癌组织进行了免疫组化染色,显示PTPRS低表达与不良分化及神经浸润密切相关。生存分析显示PTPRS低表达是胃癌患者生存时间缩短的独立危险因素。对10对胃癌患者的癌组织和癌旁组织进行配qPCR检测,发现癌组织与癌旁组织相比PTPRS表达量显著降低。对胃癌细胞系及正常胃黏膜细胞系的qPCR检测显示,与正常胃黏膜细胞系GES-1相比,胃癌细胞系中PTPRS普遍低表达。在SGC7901及HGC27两种细胞系中用慢病毒转染构建PTPRS表达干扰的稳转株,qPCR验证干扰效率。CCK-8实验发现,PTPRS低表达显著促进胃癌细胞的生长,克隆形成实验表明PTPRS低表达显著促进胃癌细胞克隆形成能力,划痕实验和Transwell实验表明PTPRS低表达显著促进胃癌细胞迁移和侵袭能力。对PTPRS干扰的胃癌细胞系进行EMT相关蛋白的检测,发现PTPRS干扰后细胞出现N-cad、ASMA表达增加等表现。结论 PTPRS在胃癌组织中低表达,且与不良预后密切相关。PTPRS低表达可能通过上皮间质转化促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

PFN2在胃癌组织中高表达并促进胃癌细胞的增殖和迁移

目的 研究PFN2作为胃癌新的预后评价指标及作为胃癌治疗全新靶点的潜力。方法 组织层面上,应用免疫组织化学检测100例胃癌组织及其癌旁组织中PFN2蛋白表达水平;根据PFN2表达量,将研究对象分为癌组织中PNF2高表达组（46例）、低表达（48例）组,以及癌旁组织中PFN2高表达组（26例）、低表达（49例）组;采用χ2检验、Spearman相关性以及Kaplan-Meier 生存分析法,分析PFN2蛋白表达水平与患者的临床参数之间关系;细胞功能上,敲低MKN-45细胞中PFN2,将其分为controlsiRNA组与PFN2-siRNA组;过表达MKN-45细胞中PFN2,将其分为control-vector组与PFN2-vector组,选取Transwell实验、CCK-8实验检测PFN2对胃癌MKN-45细胞增殖及迁移影响。结果 在胃癌组织中PFN2蛋白表达高于癌旁组织（P<0.01）;PFN2蛋白的表达水平和胃癌病人的M分期显著正相关（P<0.05）;在胃癌组织中,PFN2表达和VEGFR表达呈正相关关系（P<0.01）;PFN2蛋白高表达的胃癌患者预后更差（P<0.01）,并且是胃癌预后的独立预测因子（P<0.05）;MKN-45细胞中高表达PFN2组较低表达组增殖、迁移能力更强（P<0.001）。结论 PFN2蛋白在胃癌组织中高表达,并促进人胃癌MKN-45细胞的增殖、迁移。     

DAXX在胃癌中的表达定位及其小泛素化修饰对胃癌恶性表型的影响

目的：研究死亡结构域相关蛋白（DAXX）在胃癌中的表达与定位,并探讨小泛素化修饰（SUMO）的DAXX对胃癌细胞恶性表型的影响。方法：生物信息学分析肿瘤基因图谱（TCGA）计划中DAXX在胃癌中的表达与预后;RT-qPCR检测各胃癌细胞系中DAXX的mRNA水平。收集2017 年1月至6 月温州医科大学附属第二医院育英儿童医院胃癌术后患者20 对癌和癌旁组织,免疫组化检测DAXX的表达。CCK-8 和划痕实验分别检测DAXX对细胞增殖和迁移的作用。Western blot检测DAXX的核-浆蛋白分布及其对SUMO-2/3的影响。结果：生物信息学分析显示,DAXX在胃癌中的表达水平高于癌旁组织,但其表达高低对患者生存预后无影响（P =0.52）;免疫组化结果显示胃癌组织DAXX的阳性率高于癌旁,且在细胞核中高表达;RT-qPCR证实胃癌细胞系中DAXX的mRNA表达量升高。CCK-8 和划痕实验提示DAXX明显抑制细胞增殖（P ＜0.05）并促进细胞迁移（P ＜0.01）。Western blot显示DAXX核-浆蛋白分布差异,且存在SUMO-2/3修饰。结论：DAXX在胃癌组织中高表达,且主要定位于细胞核。DAXX可能通过与SUMO-2/3结合,抑制胃癌增殖和促进转移。