Construction of Eukaryotic Expression Vector pBlacz and Its Expression Both in Vitro and In Vivo

（屈伸）（杨仕林）（尤颖健）（刘绍春）（何善述）ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＥｕｋａｒｙｏｔｉｃＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＶｅｃｔｏｒｐＢｌａｃｚａｎｄＩｔｓＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＢｏｔｈｉｎＶｉｔｒｏａｎｄＩｎＶｉｖｏＱＵＳｈｅｎ；ＹＡＮＧＳｈｉｌｉｎ；Ｙ...     

The production of Strains Highly Expressing Human Interleukin-2 cDNA

(张大军)(冯博)(皇甫永穆)ＴｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＳｔｒａｉｎｓＨｉｇｈｌｙＥｘｐｒｅｓｓｉｎｇＨｕｍａｎＩｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２ｃＤＮＡ￥ＺＨＡＮＧＤａ－ｊｕｎ，ＦＥＮＧＢｏ，ＨＵＡＮＧＦＵＹｏｎｇ－ｍｕ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｅｄｉｃａ...     

Investigation on the Purification and Expression of Cell Ⅰ－Hep Ⅱ Recombinant FN Polypeptide in E．Coli

ＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｎｔｈｅＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣｅｌｌⅠ－ＨｅｐⅡＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＦＮＰｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｉｎＥ．ＣｏｌｉＺＨＡＮＧＧｕｉｍｅｉ（张桂梅）；ＦＥＮＧＺｕｏｈｕａ（冯作化）；ＬＩＤｏｎ...     

Correlative Study on the Expression of p53 and DNA Ploidy in Acute Nonlymphocytic Leukemia

ＣｏｒｒｅｌａｔｉｖｅＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐ５３ａｎｄＤＮＡＰｌｏｉｄｙｉｎＡｃｕｔｅＮｏｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃＬｅｕｋｅｍｉａＬＩＮＦｅｎｇ－ｒｕ（林凤茹）；ＹＡＯＥｒ－ｇｕ（姚尔固）；ＺＵＯＬｉａｎ－ｆｕ（左连富）；ＸＵ...     

Study on Platelet-Derived Growth Factor mRNA and Copper-Zinc Superoxide Dismutase mRNA Expression Changes of Aortic Artery Endothelium with Restenosis after Aortic Artery Dilatation Treated with Buyang Huanwu Decoction

Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｐｌａｔｅｌｅｔ－Ｄｅｒｉｖｅｄ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ　ｍＲＮＡ　ａｎｄ　Ｃｏｐｐｅｒ－Ｚｉｎｃ　Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　Ｄｉｓｍｕｔａｓｅ　ｍＲＮＡ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　Ａｏｒｔｉｃ　Ａｒｔｅｒｙ　Ｅｎ...     

Immunohistochemical Analysis of Growth Factor Expression and Localization in Gastric Coronary Vein of Cirrhotic Patients

ＩｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＬｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｉｎＧａｓｔｒｉｃＣｏｒｏｎａｒｙＶｅｉｎｏｆＣｉｒｒｈｏｔｉｃＰａｔｉｅｎｔｓ￥ＹＡＮＧＺｈｅｎ；ＴＩＡＮＬｅｉ；Ｐ...     

The Expression of Exogenous ADA Gene in T－lymphocytes of Children with Recurrent Respiratory Tract infectious Diseases

ＴｈｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＥｘｏｇｅｎｏｕｓＡＤＡＧｅｎｅｉｎＴ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｏｆＣｈｉｌｄｒｅｎｗｉｔｈＲｅｃｕｒｒｅｎｔＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＴｒａｃｔｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓＤｉｓｅａｓｅｓＱＵＳｈｅｎ（屈伸）；ＹＯＵＹｉｎｇｊｉａｎ...     

The Relationship Between Mast Cell Infiltration and the Expression of PCNA and EGFr in Experimental Hepatocellular Carcinoma

（阮幼冰）（武忠弼）ＴｈｅＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐＢｅｔｗｅｅｎＭａｓｔＣｅｌｌＩｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰＣＮＡａｎｄＥＧＦｒｉｎＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＨｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒＣａｒｃｉｎｏｍａｏｆＬｉｖｅｒ...     

Study on the p53 Protein Expression in Gastric Cancer and Precancerous Lesions by Flow Cytometry

Ｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅｐ５３ＰｒｏｔｅｉｎＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＧａｓｔｒｉｃＣａｎｃｅｒａｎｄＰｒｅｃａｎｃｅｒｏｕｓＬｅｓｉｏｎｓｂｙＦｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｒｙＨＡＯＹｉｎｇ（郝莹）；ＺＨＡＮＧＪｉｎｋｕｎ（张锦坤）ＹＩＣｕｉｑｉｏｎｇ（易粹琼）...     

Rapid Isolation of Large Amount of Plasma VLDL and LDL by a Two Step Ultracentrifugation

ＲａｐｉｄＩｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＬａｒｇｅＡｍｏｕｎｔｏｆＰｌａｓｍａＶＬＤＬａｎｄＬＤＬｂｙａＴｗｏＳｔｅｐＵｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎＷＡＮＧＣｈｕｎ－ｂｅｎ（王淳本）；ＦＥＮＧＹｏｕ－ｍｅｉ（冯友梅）；ＺＯＮＧＹｉ－ｑｉａｎｇ（宗义强...     

分枝杆菌穿梭表达质粒的构建及外源基因在分枝杆菌中的稳定表达

卡介苗（ＢＣＧ）是全球应用最广泛的疫苗，也是一种能携带多种致病菌保护性抗原表达的疫苗载体。本研究以ｐＵＣ１９为骨架，分别克隆入ＢＣＧ分泌抗原８５－Ｂ的调节和信号肽序列、Ｎｅｏ基因序列（编码卡那霉素抗性）以及分枝杆菌质粒复制基因，构建成分枝杆菌－大肠杆菌穿梭质粒ｐＢＣＧ－８０００。该重组质粒在分枝杆菌（含ＢＣＧ）、大肠杆菌两个系统中均能稳定复制，并能稳定表达卡那霉素抗性。本研究为把ＢＣＧ和其它分枝杆菌发展成为多价疫苗载体打下了基础。     

Construction of shuttle expression plasmid and stable expression of foreign gene inmycobacteria andE. Coli

Summary By employing the pUC19 as a backbone, the regulatory and signal sequences which encode kanamycin resistance, and mycobacterial plasmid origin of replication (oriM) were cloned into the pUC19. The recombinant E. Coli-mycobacteria shuttle expression plasmid pBCG-8000 was constructed. The pBCG-8000 was able to replicate in both E. Coli and mycobacteria (including BCG) systems, and to confer stable kanamycin resistance upon transformants. The study should facilitate the development of BCG and other mycobacteria into multivalent vaccine vectors. This work was funded from National Science Foundation of China.     

新型大肠杆菌-分枝杆菌穿梭载体的构建及卡那霉素抗性基因表达的研究

用 PCR（polymerase chain reaction）技术克隆了卡介苗（Bacille Calmette-Guerin,BCG）热休克蛋白 65（heat shock Protein 65, hsp65）启动子序列,构建成穿梭载体ME-65。该载体含有分枝杆菌和大肠杆菌的质粒复制基因、BCG的hsp65高效启动子序列以及在分枝杆菌和大肠杆菌中都能表达的卡那霉素抗性基因。将其转化到耻垢分枝杆菌和BCG中均可稳定复制并表达卡那霉素抗性。质粒对宿主菌的生长无明显的影响,未观察到质粒的丢失和突变。该载体具有分子量小、容量大、转化效率高、复制稳定、含有多克隆位点等优点,将外源基因插入到hsp65启动子的下游,可望在BCG中获得高效表达。为BCG和其它分枝杆菌发展成多价重组疫苗开辟了新途径。     

幽门螺杆菌尿素酶基因ureB植物双元表达载体的构建

目的:构建含有人幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)ureB基因的植物表达载体.方法:采用高保真PCR技术从质粒pMED-ureB中扩增出ureB基因,构建质粒pUC18-ureB,再将pUC18-ureB酶切,将ureB基因与质粒pBI121连接.结果:构建的PBI121-ureB经PCR、酶切鉴定和测序分析证明,插...     

质粒载体pUC19在头孢哌酮抗性基因(CPZ~r)克隆中的应用探讨

目的 :研究质粒pUC19是否为头孢哌酮抗性基因 (CPZr)分子克隆的理想载体。方法 :氯化钙法将质粒pUC19转化至工程菌E .coliDH5获得pUC19转化菌 ;采用试管二倍液体稀释法进行pUC19转化菌对 2 5种抗生素的敏感性测定 ;鸟枪法克隆耐药质粒pFC片段到载体pUC19获得含有CPZr 的重组质粒。结果 :pUC19转化菌对氨苄青霉素高度耐药 (MIC >2 5 6 μg/ml) ,对第一代头孢菌素中度耐药 ,对第二代头孢菌素中的头孢孟多耐药 ,而对头孢呋新敏感 ,在第三代头孢菌素中只对头孢哌酮耐药 (MIC ,6 4μg/ml) ,对其他第三代头孢菌素及 β 内酰胺酶抑制剂均高度敏感 ,同时敏感性测定结果还发现pUC19转化菌对氟喹诺酮类和氨基糖甙类抗性素均敏感。pUC19作为载体克隆到含有头孢哌酮抗性基因 (CPZr)的重组质粒少 ,克隆效率低 ,未能达到预期的目标。结论 :pUC19不适合作为CPZr 的克隆载体。     

人Wnt10b基因真核表达载体的构建及表达鉴定

目的：利用基因工程技术构建人Wnt10b基因的pEGFP-N1-Wnt10b真核表达载体,观察其在COS-7细胞中的表达。方法：以pUC19-Wnt10b为模板,PCR扩增人Wnt10b基因的cDNA编码区序列,扩增产物和pEGFP-N1载体双酶切,T4 DNA连接酶连接,构建pEGFP-N1-Wnt10b,酶切和测序鉴定该载体;LipofectamineTM2000将该载体转染入COS-7中,Western blot和免疫细胞化学检测COS-7 Wnt10b蛋白表达。结果：PCR扩增出的人Wnt10b基因cDNA正确克隆到pEGFP-N1载体,成功构建了pEGFP-N1-Wnt10b;将其转染入COS-7,COS-7 Wnt10b蛋白表达明显增高。结论：成功构建了人pEGFP-N1-Wnt10b,这为进一步研究Wnt10b基因功能奠定了前期基础。     

分泌表达人IL-12基因重组卡介苗菌株的构建和筛选

目的 筛选获得分泌表达人白介素12(IL-12)的基因重组卡介苗菌株.方法 采用PCR反应从pORF-h IL-12载体中扩增得到人IL-12基因的完整序列,克隆入大肠杆菌-分枝杆菌(E.coli-BCG)穿梭载体pMV361中,构建含人IL-12基因的重组质粒rpMV-IL-12.将纯化的rpMV-IL-12电穿孔转化卡介苗(BCG),通过卡那霉素抗性筛选、基因组PCR方法进行初步鉴定,再经热休克诱导表达后,分别收集培养上清液和细菌沉淀,进行SDS-PAGE分析,筛选得到IL-12基因重组BCG(rBCG-12).结果 成功构建含人IL-12基因的大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒rpMV-IL-12,测序结果与GenBank收录序列一致,未发生突变.rpMV-IL-12电穿孔转化BCG,经卡那霉素抗性筛选及基因组DNA的IL-12目的 片段PCR扩增筛选得到rBCG-12重组菌.rBCG-12热休克诱导表达后的SDS-PAGE电泳,从培养上清液中检测到相对分子质量为70×103的蛋白质条带,而细菌沉淀中未见到特异性条带.结论 分泌表达人IL-12蛋白的重组BCG菌株构建、筛选成功.     

一株表达延胡索酸水合酶的基因工程菌的构建

应用ＰＣＲ技术从大肠杆菌染色体ＤＮＡ中扩增出了长约１．８ｋｂ的ｆｕｍＡ基因片段，将其插入到ｐＵＣ１９载体中，转化大肠杆菌ＪＭ１０５，最后筛选出一株延胡索酸水合酶高产菌，命名为ＣＰＵ－Ｗ－９２１１，该菌的延胡索酸水合酶活力比ＪＭ１０５提高约６倍。从ＣＰＵ－Ｗ－９２１１里提取的质粒ｐＵＦ５２作为ＰＣＲ扩增的模板，以合成的ｆｕｍＡ基因两侧各长２４个核苷酸的片段为引物，可以扩增出１．８ｋｂ的ｆｕｍＡ片段；用限制性内切酶也可以从ｐＵＦ５２中切出一个接近１．８ｋｂ的插入片段。     

人神经营养因子NT3-cDNA基因的克隆及其真核表达载体的构建

目的：克降人NT3cDNA基因，构建pIRES2-EGFP-NT3。方法：用异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法从人新鲜的肝脏手术标本提取总RNA，并经反转录PCR获得NT3-cDNA。将质粒pUC19双酶切并纯化回收大片段，与纯化后的NT3-cDNA连接构成pUC-NT3-cDNA，转化大肠杆菌XL10，挑选白色克隆作酶切鉴定、测序。将测序正确pUC-NT3-cDNA及pIRES2-EGFP分别双酶切，前者回收774bp的片段并纯化，后者纯化回收大片段，将回收的774bp片段与纯化的大片段连接成pIRES2-EGFP-NT3，转化大肠杆菌XL10，挑选白色克隆作PCR及双酶切鉴定。结果：成功地从人的肝脏组织中克隆了NT3-cDNA，并构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-NT3。结论：重组质粒pIRES2-EGFP-NT3的构建为进一步NT3基因转染致聋豚鼠耳蜗试验奠定了基础。     

嗜肺军团菌热休克蛋白60基因在大肠杆菌中的表达

目的 探讨大肠杆菌中表达嗜肺军团菌的热休克蛋白60（HSP60）的表达。方法 利用聚合酶链式反应（PCR）技术扩增嗜肺军团菌HSP60基因，将其定向插入载体pUC18构建重组原核表达质粒，重组质粒转化到大肠杆菌JM109后IPTG诱导表达。并对其表达产物进行SDS-PAGE和Westem-blotting分析。结果 重组质粒在大肠杆菌中成功表达，可被抗军团菌抗血清识别。结论 HSP60基因可在大肠杆菌中表达。并有免疫原性。