CD133+ 胶质瘤干细胞化疗耐受机制分析

目的:探讨ABC超家族转运体蛋白在CD133 胶质瘤干细胞多药耐药性中的作用机制.方法:选取30例人脑胶质瘤标本,利用免疫磁珠法分选标本中的CD133 胶质瘤干细胞(悬浮细胞)和CD133-肿瘤细胞(黏附细胞),并进行分选细胞的体外扩增培养、传代与鉴定,应用免疫组化和RT-PCR法分别检测细胞中 MDR1和MRP1的蛋白及其活性表达情况.结果:3例胶质母细胞瘤来源的CD133 细胞能在含血清培养基中形成肿瘤干细胞球,并进行1～3次传代;MDR1与MRP1耐药蛋白在CD133 细胞中高度表达,阳性细胞比例范围分别为18%～67%和23%～73%;MDR1与MRP1在CD133 细胞中的表达活性分别为在CD133-细胞中的16.1倍和19.6倍;多药耐药蛋白的阳性细胞比例和其表达活性与肿瘤的恶性程度呈正相关,而表达阳性率与肿瘤的病理级别无关;MDR1与MRP1在CD133 细胞中的表达有明显的相关性.结论:神经上皮肿瘤中仅有小部分细胞亚型(CD133 胶质瘤干细胞)具有内在耐药性(天然耐药性),而ABC超家族转运体蛋白MDR1与MRP1在CD133 胶质瘤干细胞中的共同过度表达是胶质瘤多药耐药的主要原因之一;CD133 细胞是胶质瘤化疗的关键性治疗标靶.     

神经上皮肿瘤中脑肿瘤干细胞的分离培养和原发性多药耐药机制分析

目的 探讨ABC家族转运体耐药基因MDK1、MRP1和DNA修复酶耐药基因MGMT在脑肿瘤干细胞原发性多药耐药中的作用机制.方法 以CD133为脑肿瘤干细胞特异性标志物,利用免疫磁珠法分离30例人脑神经上皮肿瘤标本中的CD133+与CD133-细胞,并进行CD133+细胞的体外扩增培养,传代与鉴定.应用半定量RT-PCK法检测CD133+与CD133-细胞中耐药蛋白MDR1、MRP1、MGMT的活性表达情况.结果 免疫磁珠法能有效的分选出脑肿瘤干细胞,该类细胞具有异常的增殖能力.MDR1、MRP1与MGMT耐药基因在CD133+细胞中高度表达,并与肿瘤的病理级别正相关,其总体水平分别为CD133-细胞的16.1、19.6及34.0倍.并非所有的脑肿瘤干细胞均有耐药基因的表达,MDR1、MRP1与MGMT的总体阳性表达率分别为76.7%、86.7%t和73.3%.ABC家族转运体耐药基因和DNA修复酶耐药基因在CD133+细胞中的表达有明显的相关性.结论 神经上皮肿瘤中存在一定比例的CD133+脑肿瘤干细胞,免疫磁珠法能有效的分选出CD133+细胞.在异质性肿瘤中仅有小部分亚群细胞(CD133+脑肿瘤干细胞)具有原发耐药性.而ABC家族耐药蛋白和DNA修复酶在脑肿瘤干细胞中的共同过度表达是临床上脑肿瘤多药耐药的主要原因之一,脑肿瘤干细胞是神经上皮肿瘤原发性化疗耐药的根源和关键性治疗标靶.     

缺氧诱导胶质瘤细胞肿瘤干样细胞形成体外初步研究

目的 通过体外研究初步探讨缺氧可以诱导胶质瘤细胞逆分化形成肿瘤干样细胞.方法 ①采用CD133+细胞免疫磁珠分选法分离胶质瘤细胞得到CD133-细胞群.②缺氧处理CD133-细胞48 h后行免疫荧光染色鉴定肿瘤干细胞样标记蛋白(SOX2,OCT-4,KLF-4,Nanog,CD133)表达情况,并分别缺氧处理0、3、6、9、12、24 h及0、12、24、48、72 h行qRT-PCR及Western blot检测.流式细胞术检测胶质瘤细胞缺氧培养后CD133+细胞比例变化,检测时间为缺氧培养1、3、5、7d.③缺氧处理胶质瘤细胞1、3、5、7d后流式分析细胞周期及凋亡改变.结果 ①荧光检测结果表明,肿瘤干细胞样标记蛋白在CD133-胶质瘤细胞缺氧处理48 h后高表达;qRT-PCR及Western blot检测结果表明,缺氧处理胶质瘤细胞可以明显上调肿瘤干细胞样蛋白表达(P＜0.05),其中qRT-PCR显示SOX-2,OCT-4及Nanog最高表达在缺氧后9h,KLF-4及CD133在缺氧后12h表达最高.Westem blot蛋白检测显示OCT-4最高表达在缺氧后12 h,CD133表达最高在缺氧24h后,KLF-4及Nanog最高表达则在缺氧48 h后,SOX-2在缺氧72 h后表达量最高.另外随着缺氧时间的延长,CD133+细胞数比例逐渐升高(P＜0.05).②细胞周期结果提示缺氧处理肿瘤细胞后,Go/G1期延长,G2/M+S缩短(P＜0.05);凋亡结果提示常氧培养组更易凋亡(P＜0.05).结论 缺氧可以诱导CD133-胶质瘤细胞肿瘤干样细胞形成.     

应用组织芯片技术检测结直肠癌中MRP1/CD9的表达

目的:探讨结直肠癌组织中运动相关蛋白-1(MRP1/CD9)的表达及其与肿瘤转移的关系?方法:应用组织芯片和免疫组织化学技术检测244例结直肠癌组织中MRP1/CD9的蛋白表达?结果:MRP1/CD9在结直肠癌组织中阳性率为77.9%,其表达与患者的性别?年龄?浸润深度无关,而与肿瘤的分化程度?Dukes分期?淋巴结转移有关;其中高-中分化组表达高于低分化组;Dukes A+B期表达高于C+D组;无淋巴结转移组表达高于有淋巴转移组,差异均具有统计学意义(P < 0.05)?二元Logistic回归前进法显示:分化程度最先进入方程,是影响MRP1/CD9表达最显著因素?MRP1/CD9表达在单因素时和Dukes分期负相关,但在多因素时被掩盖?结论:MRP1/CD9在结直肠癌组织中的表达缺失与肿瘤的转移密切相关,有望成为判断结直肠癌预后的新标志?     

Notch3、DLL1、CD133在结直肠腺癌中的表达及意义

目的 探讨Notch3、DLL1、CD133在结直肠腺癌中的表达及其临床病理意义.方法 运用免疫组织化学法检测12份正常结直肠黏膜标本、30份结直肠腺瘤组织标本、50份结直肠腺癌组织标本,了解Notch3、DLL1、CD133在不同结直肠组织中的表达情况,分析其与临床病理特征间的关系.结果 Notch3、DLL1、CD133在结直肠腺癌中的阳性表达率分别为64.0％(32/50)、68.0％(34/50)和54.0％(27/50),均明显高于在结直肠腺瘤中的阳性表达率(26.7％、33.3％、36.7％)和正常结直肠组织中的阳性表达率(8.3％、16.7％、8.3％)(P＜0.05).腺瘤组与正常组相比,差异均无统计学意义(P＞0.05).以上指标在结直肠腺癌中的表达与患者年龄、性别、肿瘤发生部位、分化程度、肿瘤大小无关(P＞0.05),均与是否伴淋巴结转移相关,且Notch3和DLL1的表达与Dukes分期相关,此外DLL1的表达与肿瘤浸润深度也相关(P＜0.05).Notch3与CD133的表达呈正相关(r=0.478,P=0.000).结论 在结直肠腺癌组织中Notch3、DLL1、CD133的表达明显高于正常结直肠组织及结直肠腺瘤组织;Notch3可能通过对肿瘤干细胞的调控,影响结直肠癌的发生、发展.     

CD133+细胞在局部晚期结肠癌中的异常表达

目的 探讨CD133+肿瘤细胞对结肠癌患者预后的影响。方法 收集有完整随访资料的104例IIIB期(T3-4N1M0)结肠癌根治术后石蜡包埋组织标本及临床资料,采用免疫组化方法检测癌组织及邻近癌旁相对正常组织中CD133抗原的表达情况,分析其与患者临床特征和预后的关系。结果 肿瘤组织中的CD133+肿瘤细胞比较少见而且分布不均匀。CD133染色见于结肠癌细胞膜的腺腔面及基底,在癌巢"出芽"处及有腺管结构的低分化腺癌也可见CD133染色。生存分析显示CD133及T分期都是IIIB结肠癌的独立预后因素。肿瘤组织中CD133+细胞＜5%的患者5年生存率较高（77.4%）,≥ 5％则为45.2%。CD133的表达与其他临床病理参数均无相关性。结论 CD133+肿瘤细胞是IIIB期结肠癌患者5年生存率的独立预后因素, CD133+肿瘤细胞促进了IIIB期结肠癌的进展。     

U251细胞系中脑肿瘤干细胞耐药性的初步研究

目的 探讨脑肿瘤干细胞对抗肿瘤药物的耐药性及其机制.方法 通过磁珠分选(MACS)将U251细胞中的CD133+与CD133-细胞进行分选,用MTT法和流式细胞技术比较CD133+与CD133-细胞对抗肿瘤药物替尼泊苷(Vm-26)、卡莫司汀(BCNU)和顺铂(DDP)的敏感性、细胞凋亡率及细胞内药物蓄积的差异性,通过RT-PCR检测CD133+与CD133-细胞耐药基因谱的差异.结果 U251细胞系中,CD133+细胞约占5.4%.分选后的CD133+细胞的阳性率可达92.4%,CD133-细胞对抗肿瘤药物替尼泊苷、卡莫司汀和顺铂的敏感性明显高于CD133+细胞;流式细胞仪试验显示,在中等浓度的替尼泊苷作用下,CD133-细胞的凋亡明显,并出现明显的"亚G1峰",而CD133+细胞并未受到明显抑制和杀灭;流式细胞仪检测显示CD133+细胞内的药物蓄积明显低于CD133-细胞;RT-PCR实验显示MDR1、BCRP、MRP、MGMT和Bcl-2表达在CD133+明显高于CD133-细胞.结论 CD133+是U251细胞系中的耐药细胞亚群,高表达ABC转运体,DNA修复和抗凋亡基因可能是CD133+细胞耐药的重要机制.     

脑肿瘤干细胞的分布与肿瘤微血管的相关性

目的 探讨脑肿瘤干细胞(BTSC)标记物CD133、Nestin和血管内皮细胞标记物CD31在脑胶质瘤中的表达.方法 (1)按照世界卫生组织(WHO)2000年的神经系统肿瘤分类分级标准所有标本分为Ⅱ级18例,Ⅲ级23例,Ⅳ级24例,采用免疫组织化学SP法检测CD133和Nestin在65例胶质瘤组织中的表达.(2)采用免疫荧光双染法检测CD133/CD31、Nestin/CD31和CD133/Nestin共表达情况.计算CD133~+肿瘤干细胞、CD133~+血管、Nestin~+肿瘤干细胞和Nestin~+血管所占的百分率,并进行统计学分析.结果 CD133~+肿瘤干细胞或Nestin~+肿瘤干细胞在各级别胶质瘤中均有表达,并且均可表达于血管内皮细胞.低级别组中,在CD133~+肿瘤干细胞或Nestin~+肿瘤干细胞分布的区域可见CD133~+血管或Nestin~+血管分布较少.在高级别组中,该区域则有丰富的CD133~+血管或Nestin~+血管分布,同时可见肿瘤干细胞包绕着血管生长.并且,CD133~+细胞或Nestin~+细胞的百分比与CD133~+血管(r=0.945,P<0.01)或Nestin~+血管(r=0.727,P<0.01)的表达呈正相关.免疫荧光双染可见,CD133~+细胞或Nestin~+细胞均聚集于CD31~+血管周围,并且,CD133~+/CD31~+、Nestin~+/CD31~+细胞共表达于血管内皮细胞.结论 在脑胶质瘤组织中,血管内皮细胞可表达肿瘤干细胞的标记物,因此认为,肿瘤内微血管可能来源于肿瘤干细胞的分化,并且肿瘤干细胞聚集于微血管周围生长呈巢状分布.随着肿瘤病理级别的升高,CD133~+肿瘤干细胞或Nestin~+肿瘤干细胞的百分比与CD133~+血管或Nestin~+血管的表达呈正相关.     

结直肠癌免疫细胞浸润与趋化因子单核细胞趋化蛋白-1表达的关系

目的 研究趋化因子单核细胞趋化蛋白(MCP)-1在结直肠癌中的表达及其与免疫细胞浸润和肿瘤浸润转移的生物学行为的关系.方法通过免疫组织化学方法检测40例结直肠癌标本中MCP-1蛋白的表达以及肿瘤组织中免疫细胞的浸润情况,并分析两者之间的关系.结果结直肠癌组织MCP-1阳性表达率为96％(36/40);浸润的免疫细胞以CD68+的巨噬细胞为最多,其次是CD3+、CD8+和CD4+T细胞;MCP-1的表达率与肿瘤的转移和Dukes'分期呈负相关,与免疫细胞的浸润呈正相关.结论MCP-1在结直肠癌中的表达可以影响肿瘤浸润转移,亦可聚集免疫细胞至肿瘤局部组织发挥其免疫效应.     

胃肠道肿瘤发展过程中细胞竞争作用的研究

目的 研究细胞竞争在临床肿瘤病例发生发展中的作用及可能存在的机制.方法 收集手术切除的胃肠道肿瘤标本中的肿瘤组织细胞、肿瘤旁组织细胞及远离肿瘤的正常组织细胞,应用流式细胞术检测各部位细胞增殖与凋亡率,并用Western blot检测相应部位组织C-myc蛋白的表达水平.用统计学方法分析各组之间的差异.结果 肿瘤组织的细胞增殖水平明显高于瘤旁组织细胞的增殖水平,瘤旁组织细胞的凋亡率高于肿瘤细胞,也高于远处正常组织细胞.肿瘤组织的C-myc蛋白表达水平明显高于瘤旁组织.结论 肿瘤细胞与瘤旁组织的细胞存在细胞竞争,细胞竞争在肿瘤向周围浸润侵犯过程中起到重要作用.     

蛋白质组学在妇科恶性肿瘤研究中的应用

蛋白质组学技术能高通量对比健康和疾病状态时蛋白质表达谱的改变,有效地进行肿瘤标志物的筛选和鉴定,随着蛋白质组学研究方法的建立和发展,蛋白质组学技术在妇科肿瘤标志物的筛选、早期诊断和分类、病情监测、预后判断等方面有着重要意义。现在就蛋白质组学技术在乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌等妇科恶性肿瘤研究中的应用进行综述。     

四县区1373例宫颈病变的临床病理分析

通过对1373例宫颈标本的肉眼形态、临床症状与病理诊断的对比分析,结果宫颈良性病变占77.4％,其中呈糜烂及糜烂伴触血阳性者以糜烂较多见;宫颈光滑、肥大者以炎症为主。恶性病变占22.6％,其中鳞癌占恶性肿瘤的97.7％;年龄在30～49岁,宫颈呈糜烂或糜烂伴触血阳性,临床表现为接触性出血,血性白带或不规则出血者,原位癌多见;年龄在50岁以上,临床表现为绝经后出血,宫颈呈溃疡、肿块者浸润癌的可能性最大。     

试论癌毒瘀滞导致癌瘤发生的理论基础

癌瘤的发生和发展为阴、阳两方面相互作用的结果,即癌毒、瘀滞这两方面共同致病,体内外邪气可化毒,而体内气血津液的失调也可参与癌毒的形成,探讨癌毒、瘀滞和癌瘤形成之间的联系,可为癌瘤形成提供新的理论基础,并为其治疗提供新的思路。     

胃癌细胞株MKN45球体细胞中Sox2的表达研究

目的：检测干细胞相关因子Sox2在胃癌细胞株MKN45悬浮球体细胞中的表达。方法：选择人胃癌细胞株MKN45,在含有表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）及基本的成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）无血清培养液中培养,观察球体形成情况,并检测球体细胞对化疗药物顺铂（cisplatin,DDP）的耐受性;采用RT-PCR与免疫印迹分析检测干细胞相关基因Sox2在球体细胞及原代贴壁细胞两组细胞中的表达差异。结果：胃癌细胞株MKN45在无血清培养条件下能形成悬浮球体,球体细胞中Sox2的相对表达量明显高于原代贴壁细胞（P=0.000）。结论：悬浮球培养法在胃癌细胞株MKN45中培养形成的球体细胞具有肿瘤干细胞特性。该方法是分离和鉴定肿瘤干细胞的实用而有效的方法。     

重组小鼠白介素-33对小鼠实体瘤的抑制作用

为探究重组小鼠白介素-33（mIL-33）对不同类型肿瘤的作用,采用外源性注射mIL-33的方法对荷不同实体瘤的小鼠模型进行药效学研究。本研究发现mIL-33能够显著抑制肝癌、肺癌、胃癌、前列腺癌和结肠癌的生长,但对不同肿瘤抑制作用并不完全一致。较低剂量的mIL-33（10 μg/kg）能显著抑制肝癌、肺癌和胃癌皮下荷瘤小鼠的肿瘤生长;而在前列腺癌和结肠癌皮下荷瘤小鼠模型中,需要较高剂量的mIL-33（90 μg/kg）才能发挥相应的抗肿瘤作用。此外,mIL-33对结肠癌皮下荷瘤的生长抑制作用还与给药时长及肿瘤进展时期相关。研究结果表明,mIL-33能够显著抑制小鼠多种肿瘤的生长,提示IL-33可能是治疗肿瘤的有效靶点。     

甲状腺癌与甲状腺球蛋白抗体的关系研究

目的:探讨血清甲状腺球蛋白、甲状腺球蛋白抗体与分化型甲状腺癌的关系。方法:将我院收治的42例分化型甲状腺癌患者作为研究1组,56例甲状腺良性病变患者作为研究2组,同时选取我院50例门诊体检健康志愿者作为对照组,采用放射免疫分析法检测3组血清甲状腺球蛋白、甲状腺球蛋白抗体表达情况。对研究1组患者进行治疗,观察治疗前后研究1组患者血清甲状腺球蛋白、甲状腺球蛋白抗体的变化。结果:研究1组甲状腺球蛋白阳性表达率及甲状腺球蛋白抗体阳性表达率明显高于研究2组和对照组,数据间差异有统计学意义(P<0.05);研究2组甲状腺球蛋白阳性表达率与对照组无显著差异(P>0.05);治疗后研究1组患者血清甲状腺球蛋白、甲状腺球蛋白抗体水平明显下降,与治疗前相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:甲状腺球蛋白、甲状腺球蛋白抗体可以用于评价分化型甲状腺癌的治疗疗效。     

Coincidence of three solid tumors in a patient with multiple myeloma

Multiple primary cancers (MPC) are specific malignant tumors type,manifesting as more than one primary tumor diagnosed in the same patient,either simultaneously or sequentially.The diagnostic criteria include:the cancer must be clearly malignant as determined by histological evaluation;each cancer must be geographically separate and distinct;and the possibility that the second tumor represents a metastasis should be excluded.1 The mechanism of pathophysiology remains poorly understood but cancer survivors are at increased risk of second cancer.With increased availability of methods with greater sensitivity for screening organs susceptible to cancers,there may be an increase of frequency in the identification of multiple malignities in the coming years.The association of multiple myeloma with solid tumors is rare.In this study,we presented a multiple myeloma case accompanying to lung,colon and gastric cancer.