幽门螺杆菌cagA蛋白及其疫苗候选抗原对T细胞Fas Ligand介导 …

目的 评价幽门螺杆菌（Ｈｐ）多种功能蛋白致Ｔ细胞凋亡的能力,以探求它们在Ｆａｓ／ＦａｓＬ介导的机体Ｔ细胞耐受中的作用,为Ｈｐ疫苗研制寻求安全有效的免疫原。方法 应用ＪＡＭ技术对ｃａｇＡ阳性Ｈｐ及同源基因突变株、重组尿素酶、粘附素ＨｐａＡ及外膜蛋白Ｈｏｐ２５、３５、３８致Ｔ细胞系凋亡的能力进行了比较;应用流式细胞术对上述因素特别是ｃａｇＡ阳性菌株诱导Ｔ细胞ＦａｓＬ表达的能力进行了检测;应用金属蛋白酶     

FasL反义RNA抑制人T淋巴细胞致凋亡作用的研究

目的：探讨反义RNA抑制活化T淋巴细胞FasL的表达及其对Fas阳性细胞的致凋亡作用。为FasL反义RNA的应用提供实验依据。方法：获得FasL反义RNA重组逆转录病毒，调整感染滴度后转染活化人外周血单个核细胞(HPBMC)。采用流式细胞仪检测转染细胞表面FasL的表达以及对Fas^ IL-60细胞的致凋亡能力。结果：空病毒载体的重复转染上调活化HPBMC FasL的表达，但转染重组病毒能有效抑制活化HPBMC表达：FasL，表达率由13．93％下降至7．19％；FACS检测HL-60细胞的凋亡显示，转染重组病毒使活化：HPBMC对IL-60细胞的致凋亡作用明显下降，凋亡率由33．48％降为17．28％。结论：FasL反义RNA能有效抑制活化淋巴细胞表达FasL及由其介导的凋亡作用，但究竟采用何种载体转录FasL的反义RNA有待研究。     

卡铂和KN-93可抑制胶质瘤和黑色素瘤对Fas介导的细胞凋亡的耐受

目的 研究调控肿瘤细胞对Fas诱导细胞凋亡耐受的分子机制,探求神经胶质瘤和黑色素瘤中能克服FasL或CH-11耐受的机制.方法 检测16个肿瘤细胞株对CH-11诱导的细胞凋亡的敏感性,然后选取2个敏感的和2个耐受的肿瘤细胞株,分析它们的Fas介导的死亡诱导信号复合物(DISC).用CaMKⅡ抑制物KN-93和化疗药物卡铂处理耐受细胞并检测它们对CH-11耐受肿瘤细胞的作用.结果 敏感肿瘤细胞中,细胞凋亡起始的caspase-8向DISC募集,caspase-8在DISC中被激活,产生其活性形式,从而激活死亡信号转导途径下游的效应蛋白酶,如caspase-3和DNA断裂因子45.在CH-11耐受细胞中,DISC中发现了c-FLIP蛋白,从而抑制caspase-8裂解.在耐受细胞中,c-FLIP蛋白表达和磷酸化、CaMKⅡ酶的活性均增高.用KN-93和卡铂对耐受细胞处理,减少了c-FLIP蛋白的表达,抑制c-FLIP的磷酸化,恢复了CH-11的敏感性.结论 KN-93和卡铂抑制肿瘤细胞c-FLIP蛋白表达及磷酸化,修复CH-11诱导的细胞凋亡,可能为恶性肿瘤的治疗提供新组合治疗策略.     

肝癌细胞通过Fas/FasL途径触发T淋巴细胞的凋亡

目的：研究肝癌细胞表面Fas/FasL系统的变化及对其逃避机体免疫监控的影响。方法：采用流式细胞术和RT-PCR检测肝癌细胞株HepG2、Hep3B和PLC/PRF/5Fas和FasL的表达;观察化疗药物争光霉素诱导肝癌细胞FasL表达及FasL表达上调后的肝癌细胞触发淋巴细胞株Jurkat细胞凋亡的作用。结果：HepG2、Hep3B和PLC/PRF/5肝癌细胞株Fas表达均阴性;HepG2 FasL mRNA的表达为阴性,而Hep3B 和PLC/PRF/5FasL mRNA的表达均阳性。经争光霉素（0.6mg/ml）诱导后,上述肝癌细胞Fas的表达无明显变化,而其FasL的表达却增加,与Jurkat细胞混合孵育则触发后发生显性调亡。结论：肝癌细胞可能一方面降低或不表达Fas而对Fas介导的凋亡耐受,另一方面又增强自身FasL的表达以诱发与之接触的T淋巴细胞凋亡,在完成免疫逃避的同时,可对周围的T细胞实施反攻击。     

肾癌FasL表达异常对T淋巴细胞凋亡的影响

目的探讨凋亡相关基因产物FasL蛋白在肾癌中的表达及对T淋巴细胞凋亡的影响.方法采用免疫组织化学方法(VP法)对44例肾癌组织和10例相邻正常肾组织FasL蛋白表达进行检测;TUNEL法检测44例肾癌组织浸润性T淋巴细胞的凋亡;体外培养786-0肾癌细胞株和JurkatT淋巴细胞,流式细胞仪(FCM)检测JurkatT淋巴细胞的凋亡.结果肾癌组织FasL阳性表达率46.5%,高于正常肾组织中FasL的表达(23.2%,P＜0.05);肾癌浸润性T淋巴细胞凋亡率33.1%,和肾癌FasL表达呈正相关(r=0.96,P＜0.01);表达FasL的786-0肾癌细胞株可引起Fas(+)的JurkatT淋巴细胞凋亡.经干扰素-γ(IFN-γ)处理后的786-0细胞株可增强对JurkatT淋巴细胞的细胞毒效应.抗FasL抗体(NOK-1)对Fas介导的凋亡有抑制作用.结论肾癌组织免疫逃避机制之一是通过高表达FasL而引起肾癌浸润性T淋巴细胞凋亡;肾癌组织表达FasL能通过Fas/FasL通路主动杀伤Fas(+)的JurkatT淋巴细胞.     

幽门螺杆菌感染与胃癌Survivin蛋白表达的关系

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染与胃癌组织中Survivin蛋白表达的关系。方法对60例胃癌及其癌旁组织标本应用尿素酶试验法、Warthin-Starry染色法检测Hp,用免疫组化S-P法检测Survivin蛋白的表达水平。结果Hp阳性病人胃癌组织中Survivin蛋白表达率明显高于Hp阴性的胃癌组织(Hc=6.62,P<0.05),癌旁组织中无Survivin蛋白表达。结论Hp感染能上调胃癌组织中Survivin蛋白的表达,从而引起细胞凋亡抑制,可能在胃癌的发生中起一定作用。另外,Hp感染能增强肿瘤的侵袭能力,Survivin蛋白可作为胃癌预后不良的重要指标。     

绒癌中Fas/FasL的表达及其介导的细胞凋亡的意义

目的 研究Fas/FasL在绒毛膜癌细胞中的表达,及绒癌细胞与Jurkat细胞共培养诱导T细胞凋亡的机制.方法 用免疫荧光染色法检测绒癌细胞系Fas/FasL的阳性表达情况,MTT法检测随时间变化绒癌细胞对Jurkat细胞的抑制情况,流式细胞仪检测Jurkat细胞与绒癌细胞共培养24 h、中和抗体NOK-2封闭FasL 24 h Jurkat细胞的凋亡情况,透射电镜观察细胞的凋亡形态.结果 绒癌细胞上均有Fas及FasL的表达,在绒癌细胞上Fas的阳性表达较低,而FasL表达较多(P<0 05).绒癌细胞与Jurkat 细胞共培养可诱导Jurkat 细胞凋亡,绒癌细胞与Jurkat细胞共培养后随着时间的延长Jurkat细胞的凋亡率增加(P<0 05),出现特征性凋亡形态特征.用中和抗体NOK-2 封闭细胞表面FasL 后, Jurkat细胞的凋亡率下降.结论 两种绒癌细胞上均有Fas及Fasl的表达,绒癌细胞能抵抗Fas介导的凋亡,其表面的FasL可抑制T 细胞的免疫功能,Fas/FasL途径是绒癌细胞免疫逃逸的重要机制之一.     

Humanin通过JNK途径减轻Aβ31-35诱导的皮层神经元的凋亡

目的研究JNK信号通路在AAβ31-35诱导神经元凋亡中的作用以及Humanin（HN）的神经保护机制。方法原代培养大鼠皮层神经元随机分为对照组、Aβ31-35组（1h,4h,8h,16h,24h）、抑制剂SP600125组、HN预处理组。应用流式细胞术观察各组神经元凋亡率,应用免疫细胞化学法观察各组磷酸化c—Jun（p-c—Jun）和FasL蛋白表达情况。结果对照组仅有少数神经元发生凋亡;Aβ31-35诱导培养皮层神经元异常凋亡;JNK抑制剂SP600125抑制了Aβ31-35诱导的神经元凋亡;HN（20μmol／L）16h预孵育部分抑制了Aβ31-35的致凋亡作用,各组神经元凋亡率分别为7．43％,32．6％（24h）,8．8％,20．36％。对照组仅有少量p-c—Jun及FasL蛋白的表达;Aβ31-35时间依赖性诱导了p-c—Jun、FasL蛋白的表达;SP600125抑制了Aβ31-35诱导的p-c—Jun、FasL蛋白的表达;20μmol／LHN16h预孵育部分抑制了p-c-Jun及FasL蛋白的表达。结论JNK通路可能参与了Aβ31-35诱导的神经元凋亡过程;HN可在一定程度上阻抑JNK信号通路,减轻Aβ31-35诱导的神经元凋亡。     

膀胱移行细胞癌中Fas、FasL蛋白表达的研究

目的　探讨膀胱移行细胞癌 (BTCC)中凋亡相关基因Fas、FasL蛋白表达。方法　应用免疫组化链酶亲生物素 -过氧化物酶法 (SP法 )检测Fas、FasL蛋白在BTCC中的表达。结果　BTCC中Fas蛋白阳性表达率中病理分级、临床分期、复发有显著性差异 (P <0 .0 5 )。BTCC中FasL蛋白表达率中临床分期、复发有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论　Fas和FasL蛋白表达可以反映BTCC恶性程度、侵袭深度和复发机率 ;Fas具有促凋亡作用 ;FasL则可抑制细胞凋亡。Fas和FasL可能成为预示BTCC生物学行为和预后的标记物。     

幽门螺杆菌cagA基因片段原核表达载体的构建及其cagA基因和CagA蛋白及感染者血清抗体的检测

目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)cagA基因片段的原核表达系统,建立ELISA检测CagA及其抗体,了解表达CagA的Hp菌株(CagA Hp)感染与所致疾病种类的关系.方法:从快速尿素酶试验阳性的156例患者胃黏膜活检标本中分离Hp.采用PCR检测109株Hp cagA基因,并从临床菌株Y06中扩增2 148 bp的cagA基因片段(cagA1).构建cagA1原核表达系统,用SDS-PAGE检查目的重组蛋白(rCagA1)的表达情况,用Western blot和免疫双扩散试验鉴定rCagA1的免疫反应性和抗原性.建立ELISA,检测109株Hp CagA表达和相应患者血清中CagA抗体.分析CagA Hp感染与胃炎和消化性溃疡的关系.结果:80.8%胃黏膜活检标本中分离出Hp(126/156),97.2%的Hp菌株(106/109)cagA基因阳性.与文献报道比较,所克隆的cagA1片段核苷酸和氨基酸序列同源性分别为94.83%和93.30%.所构建的原核表达系统表达的rCagA1量约为细菌总蛋白的30.0%.rCagA1能与Hp全菌抗体发生结合反应,免疫家兔产生双扩散效价为1∶4的抗体.92.6%菌株(101/109)可表达CagA,88.1% 患者(96/109)血清CagA抗体阳性.消化性溃疡标本中CagA Hp菌株分离阳性率(97.9%)高于胃炎标本(88.5%),但无统计学差异(χ2=3.48,P>0.05).结论:本实验构建的原核表达系统表达的rCagA1有良好的免疫反应性和抗原性,建立的ELISA可用于Hp CagA及其抗体的检测,分离的Hp菌株cagA基因携带率和CagA表达率均很高.消化性溃疡和胃炎与其感染的Hp是否表达CagA无明显关系.     

胃粘膜细胞Fas/FasL的表达与幽门螺杆菌感染的关系

目的探讨幽门螺杆菌 (HP)感染引起胃粘膜细胞凋亡的机制。方法根据尿素酶试验和改良Warthin stary银染是否阳性 ,选择HP阳性慢性浅表性胃炎标本 2 3你。HP阴性慢性浅表性胃炎标本 18例。应用免疫组化S -P法检测两组标本Fas/FasL的表达。结果HP阳性阳性浅表性胃炎组胃粘膜细胞Fas阳性表达率显著高于HP阴性组 (P <0 0 1) ,FasL的表达在两组间差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论胃粘膜细胞Fas蛋白过度表达可能是HP感染引起胃粘膜细胞调亡的机制之一。     

口腔鳞癌肿瘤浸润淋巴细胞的Fas/FasL表达

目的研究口腔鳞状细胞癌肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)Fas/FasL的表达及其临床病理学意义。方法采用免疫组织化学方法和脱氧核糖核酸末端转移酶(TDT)介导的原位末端标记(TUNEL)技术,对38例口腔鳞癌TIL的Fas/FasL表达及TIL和癌细胞的凋亡进行检测,观察TIL的Fas/FasL表达与TIL和癌细胞凋亡的关系。结果TIL的Fas和FasL均有广泛的表达,TILFas表达阳性组的TIL凋亡指数(AI)明显高于Fas表达阴性组(P<0.05),TILFasL表达阳性组的癌细胞凋亡指数与FasL表达阴性组差异无显著性(P>0.05)。结论口腔鳞癌TIL的Fas阳性表达与其凋亡有密切关系,而FasL的阳性表达则与癌细胞凋亡无关。癌细胞可能通过Fas凋亡系统诱导TIL的凋亡并通过某种机制逃避TIL的杀伤。     

口腔鳞癌细胞Fas/FasL的表达及对癌细胞凋亡的影响

目的:研究凋亡相关蛋白Fas、FasL在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及对癌细胞凋亡的影响。方法:采用免疫组织化学方法检测10例正常口腔黏膜、38例不同分化程度口腔鳞癌组织Fas、FasL的表达;脱氧核糖核酸末端转移酶介导的原位末端标记(TUNEL)技术,检测鳞癌细胞的凋亡。结果:Fas在正常口腔黏膜中广泛表达,鳞癌组织表达明显下调(P<0.05);FasL在正常口腔黏膜不表达,鳞癌组织表达明显上调(P<0.01);Fas、FasL表达与口腔鳞癌分化程度无关;口腔鳞癌细胞Fas表达阴性组癌细胞凋亡指数(Apop-toticIndex,AI)明显低于Fas表达阳性组(P<0.01),Fas表达阳性组中,随Fas表达的下降,癌细胞AI逐步降低,各组间AI差异有显著性(P<0.01);口腔鳞癌细胞FasL表达阳性组癌细胞AI明显低于FasL表达阴性组(P<0.01);不同程度FasL表达间的癌细胞凋亡指数有差异。结论:口腔鳞癌细胞Fas、FasL的表达与癌细胞的凋亡及肿瘤的形成有密切关系。     

胃型上皮Fas表达的调节：幽门螺杆菌致病的自身免疫机制之一

OBJECTIVE: To investigate the pathogenic mechanism of Helicobacter pylori (H.pylori)-mediated gastric epithelial cell damage. METHODS: Fas expressions in gastric epithelial cell lines and freshly isolated gastric epithelial cells with or without H.pylori infection were evaluated by flow cytometry. The modulation of Fas expression in gastric epithelial cells by H.pylori or by Th1 cytokines present in H.pylori-infected gastric mucosa was assessed in vitro. The function of Fas expressed by the gastric epithelial cells to induce cell apoptosis was determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) after incubation of the cells with anti-Fas antibody. RESULTS: All of the three gastric epithelial cell lines, AGS, N87 and kato-III, expressed detectable Fas protein when examined by flow cytometry. The percentage of positive cells and the amount of Fas protein on cell surface were larger in freshly isolated gastric epithelial cells with H.pylori infection than in uninfected cells (P<0.05). H. pylori alone or in combination with Th1 cytokines (IFN-gamma and TNF-alpha) significantly increased the expression of Fas in gastric epithelial cell lines in vitro. After incubation with IgM anti-Fas mAb, Fas-bearing gastric epithelial cells underwent apoptosis, and this effect of Fas was enhanced by IFN-gamma. CONCLUSION: Th1 cells accumulated in the gastric mucosa during H.pylori infection is involved in the damage of gastric epithelium through the modulation of Fas/Fas ligand interaction.     

Fas/FasL与皮肤肿瘤的相关性研究进展

Fas/FasL均是细胞表面受体。Fas与FasL结合后可以导致细胞凋亡,当机体发生肿瘤时,肿瘤细胞表面Fas表达下调,有时甚至出现FasL的表达,不但削弱了阳性淋巴细胞的攻击能力,而且赋予了肿瘤细胞杀伤免疫细胞的能力,即肿瘤免疫逃逸。这一机制在皮肤肿瘤的发生发展中也有相当重要的作用。     

p38／Fas／FasL对心肌缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的调控作用

目的探讨p38／Fas／FasL对大鼠心肌缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的调控作用。方法SD大鼠20只随机分成2组（假手术组、模型组）,每组10只。结扎冠状动脉左前降支,30min后剪断结扎线制作心肌缺血再灌注模型。对心肌组织进行苏木精一伊红（H—E）染色,观察心肌组织病理变化;免疫印迹（WesternBlotting）检测Fas、Fas配体（FasL）、p38促分裂素原活化蛋白激酶（p38MAPK）以及磷酸化p38MAPK（P—p38MAPK）在缺血再灌注心肌组织中的表达;TdT介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）法检测心肌细胞凋亡模型。结果H—E染色结果显示,模型组心肌纤维变性;Western Blotting结果显示模型组大鼠心肌组织中Fas、FasL、p38MAPK及P—p38MAPK蛋白的表达明显增高;TUNEL结果显示模型组的心肌组织中细胞凋亡明显增多。结论心肌缺血再灌注时Fas、FasL、p38MAPK和P—p3SMAPK表达明显增多,且与细胞凋亡率呈正相关,提示心肌缺血再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡可能是通过激活Fas／FasL／p38MAPK途径实现的。     

Fas和FasL在急性胰腺炎中的共表达及其与凋亡的关系

目的探讨凋亡调控基因Fas、FasL在大鼠急性胰腺炎中的表达及其与腺泡细胞凋亡的关系。方法通过胰胆管内逆行注射不同浓度的牛磺胆酸钠，建立不同严重程度的急性胰腺炎模型，用RT-PCR、免疫组化法检测胰腺组织Fas、FasL mRNA及蛋白的表达，原位末端标记法检测各组大鼠胰腺腺泡细胞凋亡。结果在正常的胰腺腺泡细胞中即存在着Fas、FasL mRNA及蛋白的表达，且呈现共区域化特点，凋亡细胞极少。在炎症程度较轻的胰腺组织，Fas和FasL mRNA的表达水平显著提高．腺泡细胞凋亡指数亦明显提高，随胰腺炎症程度的加重，Fas和FasL mRNA的表达逐渐下降．腺泡细胞凋亡指数亦逐渐下降。结论Fas／FasL系统可能参与了正常胰腺组织的细胞更新和自稳；是介导急性胰腺炎时腺泡细胞凋亡的一个重要途径。     

Factors influencing the expression of Fas and Fas ligand on newborn murine ker atinocytes and fibroblasts

Ｆａｓ (ＣＤ95)ａｎｄＦａｓｌｉｇａｎｄ (ＦａｓＬ) ,ａｓｍｅｍｂｅｒｓｏｆＴＮＦｆａｍｉｌｉｅｓ ,ａｒｅｔｙｐｅⅠａｎｄｔｙｐｅⅡｃｅｌｌｕｌａｒｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎｓ ＦａｓＬｉｎｄｕｃｅｓａｐｏｐｔｏｓｉｓｂｙｂｉｎｄｉｎｇｔｏｉｔｓｒｅｃｅｐｔｏｒＦａｓｏｎｔｈｅｃｅｌｌｓｕｒｆａｃｅ Ｔｈｉｓｐｒｏｃｅｓｓｉｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｖｉｒｕｓ ,ｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓａｎｄｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ…