人树突状细胞体外提呈凋亡胆管癌细胞抗原的研究

目的：建立从人外周血诱导扩增树突状细胞（ＤＣ）及其从恨癌细胞提呈抗原的方法。方法：从正常人外周血分离获得单核细胞,加入５０ｎｇ／ｍｌ ｈＧＭ－ＣＳＦ,１０００ｎｇ／ｍｌ ｈＩＬ－４,隔天１次共４次,培养第３天,加入γ射线照射过和胆管癌细胞,再继续体外培养１周后,用树－突状细胞富集柱收集ＤＣ。结果：ＤＣ高表达共刺激分子Ｂ７和ＣＤ１ａ,表面具有典型不规则突起,ＤＣ捕捉凋亡小体、吞噬凋亡小体,负载抗原的     

不同细胞因子对培养人外周血树突状细胞的影响

建立从人外周血分离，纯化，培养，扩增树突状细胞前体的方法，研究细胞因子对ＤＣ体外增殖，分化成熟的影响。方法 人外周血经血细胞分离仪及Ｆｉｃｏｌｌ，ｅｒｃｏｌｌ等不连续密度梯度离心获得的含ＤＣ前体细胞组分用重组人粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子培养或用ＧＭ－ＣＳＦ及白细胞介素－４联合培养；光镜及电镜观察及ＡＢＣ法免疫增减细胞化学染色。     

CD40培养体系的建立及B淋巴细胞的体外培养

采用自行研制成的功能性抗人ＣＤ４０单克隆抗体、转导ＣＤ３２的Ｌ细胞（ＬＣＤ３２）和细胞因子建立体外研究人Ｂ淋巴细胞增殖、生长和分化的ＣＤ４０系统。方法：①流式细胞仪分析ＣＤ４０分子的表达;②在ＣＤ４０激发型单抗（克隆５Ｃ１１）与ＬＣＤ３２共培养中,加入ＩＬ－４及其它细胞因子,组成ＣＤ４０培养系统,观察人扁桃体来源Ｂ细胞的体外生存和增殖等生物学效应。结果：①ＣＤ４０分子表达于人外周血、扁桃体来源的Ｂ细胞及人多发性骨髓瘤（ＭＭ）细胞株ＸＧ２和人Ｂ淋巴瘤细胞株Ｄａｕｄｉ;②用ＣＤ４０激发型单抗（克隆５Ｃ１１和２Ｇ１１）与ＬＣＤ３２细胞联合ＩＬ－４能使静止期Ｂ细胞体外长期生存和增殖。表明用激发型ＣＤ４０单抗５Ｃ１１和２Ｇ１１建立的ＣＤ４０培养体系,能使Ｂ细胞长期生存和增殖,为体外研究Ｂ细胞提供了有效的手段。     

雷公藤多甙和IL—10对人DC内IL—12p40和DC—CK1mRNA转录的影响

目的：研究雷公藤多甙和ＩＬ－１０对ＤＣ内ＩＬ－１２ｐ４０和ＤＣ－ＣＫ１转录的影响。方法：通过ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４和ＴＮＦα体外培养体系,从人外周血单个核细胞中诱导ＤＣ,ＩＬ－１２０ｐ４０和ＤＣ衍生的趋化因子１（ＤＣ－ＣＫ１）转录采用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术。结果：通过ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４和ＴＮＦα体培养体系可以获得成熟功能性ＤＣ,雷公藤多甙和ＩＬ－１０能抑制ＤＣ内ＩＬ－１２ｐ４０     

白血病患者血T淋巴细胞亚群和sIL-2R水平的变化

目的：探讨白血病患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群和可溶性白细胞介素－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）的变化。方法：分别应用单克隆抗体技术和酶联吸附试验检测３１例白血病患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群和ｓＩＬ－２Ｒ水平,并以３５名正常人作对照。结果：白血病患者外周血ＣＤ３＾＋、ＣＤ４＾＋细胞数低于正常人,ＣＤ８＾＋细胞数高于正常人（Ｐ〈０．０１）,ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋比值下降（Ｐ〈０．０１）。血清ｓＩＬ－２Ｒ活性明显高于正     

抗CD3McAb诱导外周血单个核细胞活化增殖的观察

目的：观察抗ＣＤ３ＭｃＡｂ诱导人外周血单个核细胞（ＨＰＢＭＣ）活化增殖过程中的影响因素及抗ＣＤ３ＭｃＡｂ激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ细胞）免疫学特性的变化。方法：采用ＭＴＴ法和苔盼蓝染色法，ＩＬ－２依赖细胞株（ＣＴＬＬ细胞）增殖实验、ＴＮＦ－α（双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法）试剂盒以及间接免疫荧光法检测ＣＤ３ＡＫ细胞的增殖活性，ＩＬ－２，ＴＮＦ－α的产生及ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＩＬ－２Ｒ等的表达。结果：     

Th1／Th2细胞在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用

目的 了解慢性ＨＢＶ感染者外周血单核细胞（ＰＭＢＣ）中ＣＤ４＾＋Ｔ细胞内ＩＬ－４和ＩＦＮ－γ的表达情况,以测定Ｔｈ０／ＴＨ１／Ｔｈ２细胞的百分数,探明Ｔｈ、、Ｔｈ２细胞在慢性ＨＢＶ感染中的作用。方法 常规分离ＰＢＭＣ,在ＰＭＡ,ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ、莫能菌素的刺激下,采用工细胞检测（ＦＡＣＳ）对慢性ＨＢＶ感染者ＰＢＭＣ中ＣＤ４＾＋Ｔ细胞内ＩＬ－４和ＩＦＮ－γ表达进行分析。结果 正常对照组,２．３％～     

不同细胞因子对培养人外周血树突状细胞的影响

目的建立从人外周血分离、纯化、培养、扩增树突状细胞（ＤＣ）前体的方法，研究细胞因子对ＤＣ体外增殖、分化成熟的影响。方法人外周血经血细胞分离仪及Ｆｉｃｏｌ、Ｐｅｒｃｏｌ等不连续密度梯度离心获得的含ＤＣ前体细胞组分用重组人粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子（ｈｒＧＭ－ＣＳＦ）培养或用ＧＭ－ＣＳＦ及白细胞介素－４（ＩＬ－４）联合培养；光镜及电镜观察及ＡＢＣ法免疫细胞化学染色。结果分离的ＤＣ前体经１周左右时间培养，细胞数量可扩增２０～３０倍，纯度达９０％以上，ＧＭ－ＣＳＦ与ＩＬ－４联合培养所得到的ＤＣ数量约为用ＧＭ－ＣＳＦ培养的１．５倍。ＤＣ具有典型的树枝状或裙褶状突起，并表达高水平的ＨＬＡ－ＤＲ，其ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ３的表达均为阴性。结论用ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－４联合作用更能促进ＤＣ的体外扩增及分化。     

恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群与血清sIL—2R水平的相？…

目的：探讨恶性肿瘤患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群与血清ｓＩＬ－２Ｒ水平的关系。方法：采用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法对６５例恶性肿瘤患者及正常人外周血Ｔ淋巴细胞亚群和血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）水平进行检测。结果：恶性肿瘤患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ３、ＣＤ４及ＣＤ４／ＣＤ８比值均显著低于正常人,ＣＤ８与ｓＩＬ－２Ｒ水平则显著高于正常人。经相关分析,Ｔ细胞亚群中ＣＤ３、ＣＤ４及ＣＤ４／ＣＤ８比值     

膀胱癌TIL的体外培养及细胞表型分析

目的：探讨膀胱癌ＴＩＬ的体外培养方法并进行表型分析。方法：采用Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅ等提供的方法分离１例手术切除膀胱癌组织中的ＴＩＬ并进行培养扩增,并用Ｔ细胞亚群单抗试剂分析ＴＩＬ部分膜抗原的表型。结果：该ＴＩＬ体外扩增倍数达到１３５倍,免疫组化分析表明：经ＩＬ－２激活的ＴＩＬ体外培养一定时期后,其ＣＤ＋３细胞数及ＣＤ＋４细胞数／ＣＤ＋８细胞数比值明显上升。结论：膀胱癌ＴＩＬ在体外经ＩＬ－２培养后能大量扩增,ＴＩＬ中以成熟Ｔ细胞（ＣＤ＋３）为主,辅助性Ｔ细胞（ＣＤ＋４）略占优势。     

CD154反义RNA诱导Jurkat细胞的凋亡

目的 探讨CD154反义RNA诱导Jurkat细胞凋亡的作用。方法 应用RT－PCR扩增人CD154膜外段基因，以及T－A克隆技术和亚克隆技术构建CD154反义RNA的真核表达载体，并将其转染入Jurkat细胞中。应用电镜及流式细胞仪（FCM）检测观察Jurkat细胞的凋亡指标。结果 电镜观察CD154反义RNA转染的Jurkat细胞内可见凋亡小体，并且FCM检测显示一明显的凋亡峰。结论 CD154反义RNA可诱导Jurkat细胞凋亡。     

造血细胞生长因子对脐血CD34+细胞短期体外扩增的作用

目的 探讨造血细胞生长因子(HGF)的不同组合对脐血CD34 细胞短期体外扩增的作用．方法 用免疫磁珠法分高纯化脐血CD34 细胞，培养于无血清培养液中。加入不同的细胞因子，于第4，7，10，14天检测CD34 细胞百分率和有核细胞(NC)总数。结果 和对照组相比，各组的NC扩增倍数随着培养时间的延长虽不同程度的增加，干细胞在FL、TPO，GM-CSF、SCF、IL-6、G-CSF、EPO和IL-3等因子作用下，NC扩增倍数在培养第14天达高峰，为328．96倍；而CD34 细胞扩增倍数在培养第7天达最高峰，但在FL、TPO、GM-CSF、SCF，IL-6、G-CSF等因子作用下，CD34 细胞扩增倍数最大，7d后达25．23倍，而后随着培养时间的延长而逐渐下降。结论 脐血CD34 细胞在HGF作用下，扩增时间以7-10d为最佳。     

一氧化氮对人肝癌细胞SMMC-7721和HepG2生长增殖的影响

目的：应用两株人肝癌细胞（SMMC-7721和HepG2）为实验模型，以硝普钠（SNP）为NNO供体，探讨NO对人肝癌细胞生长增殖的影响。方法：应用MTT、荧光染色技术和电子显微技术、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术定性和定量地检测SMMC-7721和HepG2细胞凋亡情况。结果：NO供体SNP能抑制人肝癌细胞SMMC-7721和HepG2的生长增殖，并诱导其凋亡，在一定范围内呈时间-剂量依赖关系，同时也引起细胞坏死；SMMC-7721细胞对NO作用的敏感性较HepG2高。结论：NO可抑制人肝癌细胞生长增殖，诱导细胞凋亡，并引起死亡，且两株细胞对其敏感性不同。     

CD44v6、ki-67在宫颈癌的表达及临床意义

目的：探讨CD44v6、Ki-67在宫颈癌中的表达情况及其临床意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测63例宫颈癌和正常宫颈组织中CD44v6、Ki-67的表达情况并分析其与有关的临床病理因素间的关系。结果：CD44v6的着色部位主要在细胞膜和细胞质;而Ki067主要在胞核。CD44v6在正常宫颈上皮、宫颈原位癌和宫颈浸润癌性表达率显著升高（P＜0．01）。CD44v6阳性表达与宫颈癌的盆腔淋巴结转移、脉管浸润和Ki－67的表达情况有关（P＜0．05）;而与临床分期、分化程度、组织学类型、间质浸润和癌灶大小无关（P＞0．05）。有淋巴结转移、脉管浸润和Ki-67过表达者CD44v6的阳性表达率显著高于无淋巴结转移、脉管浸润和ki－67低表达者。结论：CD44v6的阳性表达可能在宫颈癌的发生发展、淋巴结转移、脉管浸润和癌细胞增殖过程中起着重要的作用,但非唯一决定因素。CD44v6的检测对于了解宫颈癌的生物学行为和判断宫颈癌患者的预后有一定的实用价值。     

人转铁蛋白-甲氨喋呤结合物对人肝细胞、人肝癌细胞体外细胞毒的作用特点

目的 了解人转铁蛋白（Tf）与甲氨喋呤（MTX）结合物（Tf-MTX)对人肝细胞和人肝癌细胞体外细胞毒的特点。方法 采用氧化葡聚糖（Dex)T－40作为中介,联结Tf与MTX制备人转铁蛋白－甲氨喋呤结合物（Tf-MTX),用四甲偶氮唑蓝法与比较结合物对人肝细胞L－02及人肝癌细胞Bel7404的体外杀伤强度。结果 体外细胞毒试验显示,Tf－MTX对人肝细胞L－02作用48h的TC50是对人肝癌细胞Bel7404的3．36倍,而TX对上述细胞作用1h的IC50是Tf-MTX的3．22倍。结论 Tf-MTX对肿瘤 细胞Bel7404的杀伤作用有选择性。     

反义脱氧寡核苷酸诱导HL-60细胞分化及对c-myc基因表达的影响

目的 研究二个针对c-myc基因的反义脱氧寡核苷酸（简称反义核酸）对急性白血病细胞HL－60的分化及基因表达的作用。方法 以人工合成二个硫代寡核苷酸作用于HL－60细胞后,采用流式细胞仪检测c-myc蛋白表达和HL－60细胞分化抗原,RT－PCR方法检测c-myc基因表达,并在光镜下观察以瑞特染色及NBT染色的HL－60细胞形态。结果 经反义核酸作用后,c-myc蛋白的表达有明显下降,与作用浓度与时间相关。急性白血病HL－60细胞出现中,晚幼粒细胞增多,出现CD15增高,HLA－DR及CD34降低是细胞分化的表现。同时RT－PCR分析c-myc基因扩增明显减少。结论 反义核酸对急性白血病细胞HL－60的诱导分化的同时抑制c-myc基因表达。     

胰岛素对NIH3T3细胞生长和Ras-MAPK信号途径的影响

目的 探讨胰岛素激活的Ras-MAPK信号途径对鼠成纤维细胞（NIH3T3细胞）生长的影响。方法 藉四唑蓝比色法（MTT法）和蛋白免疫印迹试验分别观察胰岛素对NIH3T3细胞生长和胞内丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）活性的影响。结果 胰岛素对NIH3T3细胞的促增殖作用呈时间和浓度依赖性，10mU/ml胰岛素对NIH3T3细胞的促增殖作用效果最佳，对NIH3T3细胞作用的EC50是0.2mU/ml(48h);0.14mU/ml(72h)。MAPK在10mU/ml胰岛素刺激1min后即出现酪氨酸磷酸化，10min达到高峰。胰岛素作用10min，MAPK酪氨酸磷酸化程度随浓度增高（0.1,1.0,10mU/ml)而递增。结论 胰岛素对NIH3T3细胞促增殖作用与激活Ras-MAPK信号途径相关。     

人脑神经干细胞的分离培养和鉴定

目的 探讨人脑神经干细胞的分离培养和鉴定方法。方法 采用无血清培养液从人胚胎脑皮质分离和培养神经干细胞，并应用免疫荧光技术进行细胞自我更新能力、巢蛋白表达和多向化潜能的鉴定。结果 鉴定表明从人胚胎脑皮质分离培养的细胞具有神经干细胞的特征，并可在体外增殖，经诱导可分化为神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞。结论 从人胚胎脑皮质成功分离培养了神经干细胞，它是研究细胞诱导分化的良好模型。     

哮喘患儿血清嗜酸性粒细胞阳离子蛋白改变及其意义

目的：评价变应性哮喘患儿血清嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（S-ECP）水平改变及其意义。方法：测定25例哮喘发作期患儿糖皮质激素吸入治疗12周前后，及20例未予糖皮质激素吸入治疗的哮喘缓解期患儿S-ECP水平，并对发作期患儿S-ECP水平变化与血嗜酸性粒细胞计数（B-EOS）、肺功能一秒用力呼气量（FEV1）、一秒用力呼气量比用力肺活量（FEV1/FVC）及症状评分的关系作相关性分析。结果：哮喘发作组治疗后S-ECP水平较治疗前显著降低，与对照组（健康儿童10名）比较差异无显著性；哮喘缓解组S-ECP水平明显高于发作组治疗后，但明显低于发作组治疗前。哮喘发作组治疗前S-ECP水平变化与B-EOS无相关性，与FEV1、FEV1/FVC呈负相关，与症状评分呈正相关。结论：监测S-ECP水平可作为评价哮喘气道炎症程度、病情预后和指导抗炎治疗的有效指标。     

血小板活化与肺原性心脏病的关系

目的 探讨血小板活化与肺原性心脏病（肺心病）的关系。方法 应用单克隆抗体法并在流式细胞仪上对血小板活化分子标志物CD62P、P10进行检测,同时跟踪检测病人血气和呼吸功能,以了解它们之间关系。结果 肺心病病人血小板异常活化,与对照组比较差异有显著性（P＜0．01）;血小板活化程度与PaO2、呼吸功能呈显著负相关。结论 血小板异常活化能加重肺心病病情,应用抑制血小板活化药物和适当抗凝可能有利于肺心病疗效的提高。