我国小型猪品系资源状况初浅分析

小型猪正逐渐成为生命科学研究中的重要实验动物。我国具有独特和丰富的小型猪资源,我国小型猪品系或资源涉及资源品系、封闭群、近交培育品系等。本文就我国的小型猪品系资源状况进行了介绍和初步分析。     

小型猪葡萄糖转运子4外显子4a的基因多态性分析

目的 分析我国特有的3个小型猪品系巴马小型猪、中国农大小型猪、五指山小型猪葡萄糖转运子4基因外显子4a的单核苷酸多态性(SNPs)分布特点,为我国小型猪在糖尿病和代谢性疾病研究中提供基础资料.方法 以3个品系小型猪基因组DNA 为模板,应用特异性引物进行PCR扩增,扩增产物纯化测序,进行BLAST比对分析.结果 在小型猪GLUT-4基因外显子4a上有2个SNP位点:SNP1: GCT→GCC(Ala133 Ala),3个品系均发生了变化,均为纯合突变,其突变率为(22/22, 100%).SNP2: GGC→GGT(Gly146 Gly),巴马小型猪突变率为(6/6, 100%),均为纯合突变;五指山小型猪突变率为(6/6, 100%),均为纯合突变;中国农大小型猪突变率为(10/10, 100%),其中包括6例纯合突变(6/10, 60%)和4例杂合突变( 4/10, 40%).结论 SNPs1,在所有测定的小型猪品系中检出,这可能是所测小型猪的共有特征.SNPs2可能是小型猪品系之间的差异.     

我国小型猪品系胰岛素受体底物1基因外显子1的多态性分析

目的 探讨我国特有的三个小型猪品系-中国农大小型猪、五指山小型猪、广西巴马小型猪胰岛素受体底物1基因多态性分布,为这些小型猪在代谢性疾病和2型糖尿病研究中的应用提供基础资料.方法 提取三个品系小型猪血液基因组DNA,针对胰岛素受体底物1基因外显子1的部分序列进行PCR扩增,对产物进行鉴定和测序,分析基因多态性.结果 在所扩增的片段中共检测出2个SNPs,第2 853位,T转换为C;第2 870位,C颠换为G,导致第956位的氨基酸由丙氨酸(A1a)变为甘氨酸(Gly).结论 本实验检测出的两个SNPs均发生在中国农大小型猪中,所检测的五指山小型猪和广西巴马小型猪未发现SNPs,这可能是因为小型猪品系之间存在遗传差异所致.     

长途运输应激对两种品系五指山小型猪自主神经功能的影响

目的 观察长途运输应激对两种品系五指山小型猪自主神经功能的影响. 方法 基于无创遥测技术,监测清醒自由活动状态下经21 h长途运输应激后和2个月恢复后,两种品系五指山小型猪心电图（ECG）和活动的改变,并用HRV分析评价其自主神经功能状况. 结果 （1）小型猪对照组具有明显的昼夜节律变化,白天以交感神经活动为主,晚上以副交感神经活动为主,且Black品系RRI、RMSSD、STV、VLF、LF和LF/HF比值均显著低于white品系（P〈0.05,P〈0.01）,而HR、LTv、TP和HF均显著高于White品系（P〈0.05,P〈0.01）;（2）与对照组比,长途运输应激后.小型猪RRI、SDNN、RMSSD、STV、LTV、TP、vLF、LF和LF/HF比值均明显降低（P〈0.01）,HR和HF增加（P〈0.05,P〈0.01）,且Black品系LTS组RRI、RMSSD、STV、VLF、LF和LF/HF比值均显著低于white品系LTS组（P＜0.05,P〈0.01）,而HR、LIV、TP和HF均显著高于White品系LTS组（P〈0.05,P〈0.01）;（3）长途运输应激小型猪的活动、心率及其HRV时域和频域指标均具有显著的相关性（P〈0.05,P〈0.01）. 结论 长途运输应激能使不同品系五指山小型猪的自主神经活动产生明显的差异,且Black品系五指山小型猪更易受长途运输应激的损害;另外,交感神经活动的降低可能是导致运输应激致小型猪生物学功能发生改变的主要原因之一.     

三个品系小型猪正常心电图的比较

目的建立清醒状态记录小型猪心电图的方法，并对3个品系小型猪6个导联心电图进行分析比较。方法选用4月龄广西巴马猪7头、5月龄五指山小型猪6头、中国农大小型猪10头，清醒状态下吊床保定，测定Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、aVR、aVL和aVF6个导联的心电图。结果3个品系小型猪心电图的波形与人相似，心率较快，在3个品系之间差别不明显，存在偶发性窦性心率不齐。广西巴马猪、五指山小型猪和中国农大小型猪的P-R间期分别介于0．08—0．10s、0．08—0．11s和0．08—0．11s；QRS波群分别介于0．04—0．06s,0．04—0．07s和0．04～0．05s。3个品系小型猪均有清晰的S-T段，偏移小于1mm。结论本研究获得了3个品系小型猪清醒状态时的心电图基本数据，经比较，3个品系之间无明显差异。     

小型猪胰淀素基因的多态性分析

目的 探讨我国3个特有的小型猪品系,巴马小型猪,五指山小型猪,中国农大小型猪胰淀素(IAP P)基因多态性分布,为我国小型猪在2型糖尿病及代谢性疾病研究中的应用提供基础资料. 方法提取3个品系小型猪血液基因组DNA,针对IAPP基因外显子3～内含子 3的部分序列进行PCR扩增,产物鉴定、测序,统计分析基因多态.结果 在所扩增的片段中共检测出2个SNPs位点,SNPs1:43G→A,位于外显子上,未引起的氨基酸的改变,突变发生在五指山猪(G/A杂合突变为16.7%,A纯合突变为83.3%)和中国农大猪 (G/A杂合突变 60%,A纯合突变为20%两个品系中. SNPs2:214C→T,位于内含子上,发生在五指山猪(T/C杂合突变为16.7%,T纯合突变为83.3%)和中国农大猪(T/C杂合突变为20%,T纯合突变为60%)两个品系中.结论 在IAPP基因外显子3～内含子3的部分扩增序列中发现了2个SNPs位点,在3个品系小型猪中的分布不同.     

三个品系小型猪PPAR-γ基因外显子1的多态性分析

目的 分析三个品系小型猪即巴马小型猪、五指山小型猪,中国农大小型猪过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)基因外显子1单核苷酸多态性(SNPS)分布特点,为我国小型猪在糖尿病和代谢性疾病的研究中提供基础资料.方法 提取三个品系小型猪血液基因组DNA,以基因组DNA为模板,应用多聚合酶链式反应(PCR)技术在合成的特异性引物引导下扩增,将PCR产物纯化,然后进行测序,再将测序结果 在NCBI中进行BLAST比对分析.结果 在PPAR-γ基因外显子1中存在一个单核苷酸突变,密码子ATG→GTG,这一单核苷酸的突变导致该基因第59位氨基酸由甲硫氨酸(Met)变为缬氨酸(Val).三个品系小型猪PPAR-γ基因多态情况为:广西巴马猪4/6例发生突变,突变率为66.6%,其中2例纯合突变和2例杂合突变:五指山猪6/6例发生突变,突变率为100%,均为纯合突变;中国农大猪4/10例发生突变,突变率为40%,均为杂合突变.结论 PPAR-γ基因突变情况在三个品系小型猪中存在差异,表明小型猪的品种不同多态情况不同.     

中国3种特有小型猪品系脂联素受体1基因外显子5的多态性分析

目的探讨我国三个特有的小型猪品系-中国农大小型猪，五指山小型猪，广西巴马小型猪脂联素受体1基因多态性分布，为这些小型猪在代谢性疾病和2型糖尿病研究中的应用提供基础资料。方法提取三个品系小型猪血液基因组DNA，针对脂联素受体1基因外显子5～内含子5的部分序列进行PCR扩增，对产物进行鉴定和测序，分析基因多态性。结果在所扩增的片段中共检测出5个sNPs——sNP1：G138A，发生在所有的小型猪品系中，并导致第45位的氨基酸由甘氨酸（Gly）转变为谷氨酸（Glu）；SNP2：G185A，所有的纯合突变均发生在五指山小型猪品系中（4／6，66．67％），而所有的杂合突变则发生在中国农大小型猪品系中（3／10，30％）；SNP3：G200A，全部发生在中国农大小型猪品系中，且均为杂合突变（3／10，30％）；SNP4：C295T，发生在广西巴马小型猪品系中的突变既有杂合突变（1／6，16．67％）也有纯合突变（2／6，33．33％），发生在中国农大小型猪品系中的突变全为杂合突变（2／10，20％）；SNP5：T337G，只出现在中国农大小型猪品系中，且为杂合突变（1／10，10％）。结论SNP1，在所有测定的小型猪品系中检出，这可能是所测小型猪共有的特性。SNP2，可能是小型猪品系之间的差异。SNP3和SNP4，可能是小型猪品系之间的差异，也可能是个体的差异。SNP5，可能是个体差异。     

我国特有三个小型猪品系PGC-1基因外显子8的多态性分析

目的分析我国特有的三个小型猪品系巴马小型猪、中国农大小型猪、五指山小型猪过氧化物酶体增殖物激活受体γ协同激活子1基因第8外显子的单核苷酸多态性（SNPs）分布特点,为我国小型猪在糖尿病和代谢性疾病研究中提供基础资料。方法以三个品系小型猪基因组DNA为模板,应用特异性引物进行PCR扩增,扩增产物纯化测序,进行BLAST比对分析。结果测序结果表明在小型猪PGC-1基因外显子8有5个单核苷酸多态性位点为：Ala354Val（450C→T）,Gly363Gly（478C→T）,     

广东省实验用小型猪主要病原微生物学及寄生虫学调查

目的调查广东省实验用小型猪主要病原微生物和寄生虫的感染情况。方法从广东省4家生产单位随机抽取小型猪154头,包括巴马小型猪、蕨麻小型猪、西藏小型猪和五指山小型猪4种品系,采集皮毛、鳞屑、血清、肛拭子、粪便等样品检测20种病原,对结果进行生产单位和品系间的差异性分析。结果所检4家单位的所有品系小型猪均存在多种病原复合感染,猪链球菌2型(50.7%)、胸膜肺炎放线杆菌(40.3%)、肺炎支原体(100.0%)、乙型脑炎病毒(41.3%)、猪圆环病毒2型(74.8%)、猪传染性胃肠炎病毒(73.8%)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(44.7%)7种病原的检出率相对较高,猪细小病毒(26.0%)、猪伪狂犬病病毒(15.6%)、肠道中蠕虫(3.2%)有一定检出率;要求强免的猪瘟病毒(62.8%)、口蹄疫病毒(35.8%)免疫合格率较低,猪伪狂犬病病毒免疫合格率高达98.4%。本次调查未检出沙门氏菌、布鲁氏菌、猪痢疾蛇样螺旋体、皮肤病原真菌、甲型流感病毒、弓形虫、体外寄生虫和粪便球虫。结论广东地区存栏实验用小型猪存在多种病原复合感染,需加强免疫和质量控制,逐步建立高等级群体;同时也为实验用小型猪地方标准乃至国家标准的制/修订提供了依据。