miR-122-5p靶向ADAM10调控Notch信号通路对人卵巢癌细胞SKOV-3的上皮-间质转化的抑制作用

目的 研究miR-122-5p对人卵巢癌细胞SKOV-3上皮-间质转化(EMT)的影响,阐明其可能机制.方法 常规体外培养人卵巢癌细胞SKOV-3,将miR-122-5p模拟物(miR-122-5p mimic)及其阴性对照(mimic NC)转染至SK-OV-3细胞,分为空白对照组(Blank组)、mimic NC组和miR-122-5p mimic组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-122-5p和ADAM10 mRNA的表达水平;Western blot检测各组细胞ADAM10蛋白的表达水平;生物信息学预测miR-122-5p与ADAM10靶向匹配,采用双荧光素酶报告系统验证两者在SKOV-3细胞中的靶向关系.再将miR-122-5p mimic和ADAM10过表达质粒(pcDNA-ADAM10)分别或同时转染至SKOV-3细胞中,分为空白对照组(Blank组)、miR-122-5p mimic组、ADAM10过表达组(pc-ADAM10组)和miR-122-5p mimic+pc-ADAM10组,采用Transwell检测SKOV-3细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测细胞Notch信号通路相关蛋白Notch1、HES1和HEY1,EMT相关蛋白Snail、E-cadherin和N-cadherin的表达水平.结果 miR-122-5p mimic组SKOV-3细胞中miR-122-5p的表达水平较mimic NC组的升高(P<0.01),表明miR-122-5p mimic稳定转染至SKOV-3细胞.miR-122-5p mimic组SKOV-3细胞中ADAM10 mRNA和蛋白的表达水平较mimic NC组的降低(P<0.01),双荧光素酶报告系统证实ADAM10是miR-122-5p靶基因.与Blank组比较,miR-122-5p mimic组SKOV-3细胞发生迁移和侵袭的数量降低(t=6.004,P<0.05;t=7.289,P<0.01),而pc-ADAM10组的升高(t=13.181,P<0.001;t=11.504,P<0.01);miR-122-5p mimic组细胞的Notch、HES1、HEY1、Snail和N-cadherin蛋白表达水平下降(P<0.05,P<0.01),而pc-ADAM10组的上升(P<0.01);miR-122-5p mimic组细胞的E-cadheirn蛋白表达水平上升(P<0.01),而pc-ADAM10组的下降(P<0.01).与pc-AD-AM10组比较,miR-122-5p mimic+pc-ADAM10能减弱pc-ADAM10的促EMT作用,且下调Notch信号通路活性.结论 miR-122-5p通过阻断Notch信号通路抑制人卵巢癌细胞SKOV-3的EMT,其机制可能与miR-122-5p靶向抑制AD-AM10的表达有关.     

miR-346在糖尿病肾病TGF-β介导的Smad信号通路中的作用

目的:观察miR-346在高糖环境下小鼠肾小球系膜细胞TGF-β介导Smad信号通路中的作用,探讨miR-346参与糖尿病肾病(DN)的发病机制。方法:体外高糖(25 mmol/L)下培养小鼠肾小球系膜细胞(MC),p Genesil-miR-346和重组TGF-β药物作为干预因素,分别设TGF-β药物刺激组(10、30 ng/m L)、TGF-β药物刺激+shRNA P53干扰组、阴性对照组。细胞免疫荧光检测细胞表型;Western法检测P53蛋白和Smad3/4蛋白的表达;实时荧光定量RT-PCR法检测mRNA表达。结果:⑴miR-346的表达可由P53通过调节miR-346基因中启动子来调节;⑵miR-346可调节Smad3/4的表达,其过程是TGF-β通过P53、miR-346通路从上游来调节的。结论:miR-346通过TGF-β/Smad信号通路调控糖尿病肾病相关基因表达,二者形成正反馈效应,在DN的发生和发展中起到非常重要的作用。     

IGF-1R/β-catenin信号通路在肿瘤耐药中的研究进展

胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)/β联蛋白(β-catenin)信号通路与多种肿瘤疾病的发生、进展、转移等相关,同时在肿瘤的耐药方面也发挥重要作用。肿瘤采用化疗、靶向药物以及单克隆抗体等方法治疗后产生的耐药会导致IGF-1R/β-catenin信号通路的异常激活,该信号通路异常活化引起的耐药也是肿瘤诊疗过程中的研究热点。深入研究IGF-1R/β-catenin信号通路的耐药机制、明确信号分子发挥的作用,可以有针对性地干扰该信号通路中特定基因的表达,进而逆转肿瘤耐药,从而为肿瘤耐药的治疗提供新的化疗方案。     

MiR-106b在2型糖尿病db/db小鼠骨骼肌中的表达及生物信息学分析

目的微小RNA(microRNA,miRNA)是一类小分子单链非编码RNA,广泛参与各种生物学过程,与肿瘤、糖尿病、心血管疾病关系密切,miR-106b与胰岛素抵抗糖尿病密切相关。文中检测miR-106b在2型糖尿病db/db小鼠骨骼肌中的表达,并对其靶基因进行预测及相关生物信息学分析,为miR-106b靶基因的实验验证提供数据支持,并为深入研究miR-106b的生物学功能和调控机制提供理论指导。方法利用实时PCR技术检测miR-106b在糖尿病db/db小鼠骨骼肌中表达。利用miRBase、NCBI、UCSC Browser等在线工具分析miR-106b序列。把利用TargetScan和StarBase 2种计算方法预测的miR-106b靶基因的交集作为分析的基因集合,分别进行基因本体(gene ontology,GO)注释描述、GO富集分析和生物通路富集分析。结果①miR-106b在2型糖尿病db/db小鼠骨骼肌表达显著升高;②miR-106b在各物种之间具有高度保守性;③预测靶基因集合分别富集在代谢调节、生物合成、细胞增殖与凋亡等基本生物学过程和蛋白结合、转录调控等分子功能上(P<0.001)。经典miR-106b预测靶基因集合显著富集于KEGG通路数据库中的Wnt信号通路、mTOR信号通路、TGF-β信号通路和胰岛素信号通路等12个信号转导通路,以及前列腺癌、慢性髓细胞性白血病、黑素瘤等12个疾病通路中(P<0.05)。结论 MiR-106b在db/db小鼠骨骼肌表达升高。miR-106b与多种肿瘤的发生和细胞周期调节有关。miR-106b参与物质代谢等过程的调控,可能在胰岛素抵抗、2型糖尿病的发病中起重要作用。     

酪氨酸激酶下游蛋白基因与肿瘤关系的研究进展

酪氨酸激酶下游蛋白(DOK)在受体酪氨酸激酶介导的信号通路中起着重要的调节作用。DOK蛋白参与细胞生命活动相关的多种信号通路的调节,其表达异常与多种肿瘤的发生和发展密切相关,但具体作用机制尚不完全清楚。研究DOK基因在肿瘤中的表达与意义对肿瘤的诊断和预后有极其重要的价值,也可为表观遗传学治疗恶性肿瘤提供新的方向和依据。     

miR-155-5p调节Wnt信号通路促进肾透明细胞癌细胞的增殖与转移

目的 研究miR-155-5p和Wnt信号通路在肾透明细胞癌细胞中的作用机制。方法 采用qRT-PCR检测细胞中miR-155-5p的表达。WB检测各细胞中Wnt信号通路相关蛋白磷酸化水平及蛋白表达水平。通过MTT实验、细胞划痕实验、Transwell实验分别检测各细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果 肾透明细胞癌细胞中miR-155-5p的表达明显高于正常细胞。过表达miR-155-5p促进肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭。加入通路蛋白抑制剂后,我们发现其会减弱过表达miR-155-5p对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的促进能力。结论 miR-155-5p和Wnt在调节肾透明细胞癌发生发展中起着关键作用,miR-155-5p可能成为肾透明细胞癌治疗的新靶点。     

Derlin-1及其与肿瘤关系的研究进展

恶性肿瘤发生率居高不下,但肿瘤的发病机制目前尚不能明确,因此深入研究肿瘤发病机制具有重要意义。内质网相关的降解蛋白-1(Derlin-1)是内质网膜上的跨膜蛋白,参与错误折叠蛋白的逆向转运,在内质网相关降解信号通路中发挥重要作用。Derlin-1在正常细胞很少表达,但在多种肿瘤细胞中表达异常。Derlin-1参与肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡、浸润及转移等过程,Derlin-1过表达能减少肿瘤细胞的凋亡及自噬作用,促进肿瘤细胞增殖,与肿瘤的发生、发展及预后等密切相关。     

大鼠发育期热性惊厥后海马microRNA差异表达谱的相关研究*

目的 通过microRNA （miRNA） 表达谱芯片分析并筛选大鼠发育期热性惊厥后脑损伤相关的 miRNA,探讨新的miRNA 在发育期热性惊厥后脑损伤中的作用,为热性惊厥的临床诊断和治疗开辟一条 新途径。方法 选取SPF 级野生型14 d 日龄SD 大鼠,通过经典热水浴连续处理7 d 诱导惊厥复制热性惊厥 模型,将反复惊厥的大鼠海马作为实验组,另选取健康大鼠海马作为对照组。利用大鼠miRNA 表达谱芯片 筛选两组海马组织差异表达miRNA（P <0.05,FC >1.5）,并利用生物信息学对芯片数据进行深入挖掘和分析; 通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）验证差异表达miRNA。结果 基于miRNA 表达谱芯片数据 分析,共获得31 个差异表达miRNA（P <0.05）,其中包括21 个上调miRNA,10 个下调miRNA。qRT-PCR 检 测结果与miRNA 表达谱芯片结果一致,证明芯片数据的可靠性;通过对所有差异表达miRNA 的靶基因GO 和Pathway 分析发现,显著富集的GO 主要包括基因转录、神经元分化、大脑及海马发育等（P <0.05）;显著富集 的Pathway 主要包括癌症相关FoxO 信号通路、PI3K/Akt 信号通路、多巴胺突触通路等（P <0.05）;miRNA 靶基 因数据库分析获得miR-148a-3p 相关靶基因186 个;差异miR-148a-3p 的靶基因GO 功能和Pathway 分析主 要涉及神经元保护、突触发生、大脑发育、FoxO 信号通路、PI3K/Akt 信号通路、Hippo 信号通路等（P <0.05）, 与神经免疫相关;miR-148a-3p 靶基因互作网络分析获得蛋白分子之间的相互关系;双荧光素酶实验表 明,NCOA1 是miR-148a-3p 调节的靶基因。结论 神经、免疫等多种相关因素可能在热性惊厥的发生、发展 中起非常重要的作用,为研究热性惊厥的发病机制提供新方向和新靶点。     

颞叶癫痫相关基因的生物信息学分析

目的从分子水平揭示癫痫的发病机制,为癫痫的基础研究和临床治疗提供新思路。方法从基因芯片公共数据库GEO中下载癫痫相关基因芯片数据,利用String、KEGG、Panther等在线分析软件对差异表达基因进行生物信息学分析。结果在71个差异表达基因所编码的蛋白中,有51个存在蛋白与蛋白的相互作用关系;其涉及的主要生物学通路包括刺激神经的配体-受体相互作用通路、促分裂原活化蛋白激酶信号通路、钙信号通路等。结论通过生物信息学分析癫痫相关基因芯片数据,提示癫痫发病是多种基因作用的结果,对相关基因的进一步分析有利于揭示癫痫的发病机制。     

miR-130a-3p在胶质母细胞瘤中的表达与靶基因分析

目的 探索miR-130a-3p在胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)细胞中的表达水平,预测并分析miR-130a-3p的靶基因.方法 采用实时聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测GBM细胞和正常人胶质细胞中miR-130a-3p的相对表达水平.选择miRanda、DIANA、TargetScan和PicTar工具预测miR-130a-3p的靶基因,对靶基因进行基因本体(gene ontology,GO)富集分析和通路富集分析,基于STRING数据库进一步建立蛋白互作网络(protein-protein interaction,PPI)并利用Cytoscape软件进行可视化分析.结果 相对于正常人胶质细胞,miR-130a-3p在GBM细胞中的表达水平显著下调.四种预测工具取交集后共筛选出302个靶基因.GO富集分析表明miR-130a-3p靶基因主要参与转录调控、蛋白泛素化、Wnt信号、miRNA介导基因沉默、DNA损伤反应、细胞迁移等生物学过程和分子功能.通路富集分析发现miR-130a-3p靶基因主要富集于转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)信号通路、磷脂酰肌醇信号通路、内吞、自噬调节、胶质瘤、FoxO信号通路等.结论 miR 130a 3p在GBM细胞中低表达,其靶基因涉及多个肿瘤发生相关的信号通路,为进一步阐明其在GBM发生过程中的调控机制以及开发靶向治疗提供参考.     

小儿耳鼻喉手术麻醉的新进展

因小儿耳鼻喉手术刺激强,时间短,且常与气道相关,故麻醉的控制有一定难度,现对国内外现阶段小儿耳鼻喉手术麻醉的改良方法及新观点进行评述,以期对临床工作有较好的指导意义。     

2001年我国医药研究的若干进展

随着国内外生命科学和生物技术等的飞速发展,我国医药技术在2001年取得了长足的进步。提前完成了我国所承担的人类基因组汁划中的1％测序任务,到2000年,中国科学家在功能基因研究和基因组多样性领域共完成研究论文1850篇,遍及医药各领域,研究手段和水平可于国际先进水平媲美,中国完全有条件在“后基因时代”成为主角之一。     

成都市属医院1，175例儿童支气管肺炎住院费用分析

为探讨成都市不同级别医疗机构儿童支气管肺炎单病种费用水平以及不同收费项目占总费用的比例特点及控制医疗费用的有效途径,为患者自主选择就诊医疗机构提供参考指导,对成都市卫生局所属不同级别医院儿童支气管肺炎住院医疗费用分析如下。1资料与方法1.1资料来自成都市卫生局2     

Malaria in children in Birmingham in the 1970s

Thirty-two children with malaria were admitted to Dudley Road Hospital, Birmingham, in the 1970s. None was admitted before 1974 and there was a rapid increase after that. All the infections were due to Plasmodium vivax and occurred in children of Asian immigrant families who had been born in or had visited India or Pakistan apart from one infant born in England who acquired the disease transplacentally. All presented within 12 months of entering or re-entering the United Kingdom. The clinical features of the 32 patients have been analysed and it is suggested that more effort should be made to educate travellers about the need for anti-malarial chemoprophylaxis and the necessity to continue it for one month after return.