螺旋藻激酶对人脐静脉内皮细胞t-PAmRNA、PAI-1mRNA表达的影响

目的研究螺旋藻激酶(Spirulina kinase,SPK)对人脐静脉内皮细胞t-PAmRNA、PAI-1mRNA表达的影响,探讨其抗血栓作用机制,为开发新型溶栓药物提供理论依据。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),建立肾上腺素(Adr)损伤模型加入不同浓度的SPK,并以肝素(Hep)为阳性对照,与空白组对照,经过12,24,48 h后,逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR),扩增产物经凝胶电泳分离后,凝胶图像分析仪照相和扫描,测定各组t-PAmRNA、PAI-1mRNA与内参基因三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA的相对表达量。结果在Adr损伤模型中,2 mg/ml SPK可以上调t-PAmRNA表达,超大剂量SPK降低t-PAmRNA表达。SPK还可以随着剂量的增加明显的抑制PAI-1mRNA的表达,效果强于大剂量的肝素。结论 SPK可能通过小部分活化t-PAmRNA的表达,抑制PAI-1mRNA的表达,从而达到抗血栓的作用。     

海带多糖L01对人脐静脉内皮细胞表达和分泌PAI-1的影响

目的探讨海带多糖L01对肾上腺素刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达和分泌I型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞系ECV-304,于培养基中加入肾上腺素和不同浓度的L01,分别培养24,48,72h,酶联免疫吸附分析(ELISA)法测定HUVEC培养上清液中的PAI-1水平;逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测HUVEC内PAI-1mRNA的表达,其扩增产物电泳后进行密度扫描及半定量分析。结果10μg/mL的肾上腺素可致48h和72h的HUVEC培养液中PAI-1水平显著升高(P<0.01,P<0.05),HUVEC内PAI-1mRNA表达上调。与肾上腺素组相比,不同浓度的L01于给药后48h和72h,均能显著降低培养液中PAI-1水平(P<0.01),减少HUVEC内PAI-1mRNA表达。结论L01可拮抗肾上腺素刺激HUVEC所致PAI-1分泌增加及其mRNA表达增加,提示其对血管内皮细胞具有一定的保护作用。     

海带多糖L01对人脐静脉内皮细胞表达和分泌t-PA的影响

目的：利用人脐静脉内皮细胞体外培养模型，探讨肾上腺素刺激状态下海带多糖L01对内皮细胞的保护作用，以及其对其分泌的组织型纤溶酶原激活物（t-PA）的影响，从内皮细胞抗血栓功能方面探讨海带多糖L01对心血管系统的保护作用。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞系ECV-304，用肾上腺素刺激24h、48h、72h采样，ELISA法测定HUVECs培养上清液中的t-PA含量，逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测HUVEC细胞内t-PA mRNA的表达，其扩增产物经电泳后密度扫描及半定量分析。结果：肾上腺素模型组HUVECs培养液中t-PA（24h、48h）含量明显增加，；单给海带多糖对HUVECs t-PA分泌无影响。海带多糖L01在肾上腺素刺激下给药24h，48h后t-PA抗原分泌明显降低（P〈0．01），且具有一定的量效关系，但HUVECst-PAmRNA表达各组均无明显差异。结论：肾上腺素可刺激内皮细胞分泌t-PA抗原，海带多糖L01对血管内皮具有一定的保护作用，减少肾上腺素刺激下HUVECs分泌t-PA，而对t-PAmRNA表达无明显影响。     

心脉灵注射液对内毒素刺激人脐静脉内皮细胞ET-1和NO分泌的影响

目的观察心脉灵注射液(XML)对内毒素(LPS)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)的影响.方法体外培养人脐静脉内皮细胞,根据剂量效应实验结果,使用最适浓度的XML与内毒素100μg/L刺激的HUVEC分别孵育不同的时间,应用MTT法、放免测定法、硝酸还原酶法测定内皮细胞的活力以及培养上清液内ET-1、总硝酸根离子(Nox)的含量.结果与模型组比较,XML浓度为320g/L时,内皮细胞的活力最高(P<0.01),孵育的每个时间点,治疗组培养液中的ET-1的含量都显著降低(P<0.01),Nox的浓度有所增加(在2,4,6h时间点P<0.01).结论XML对内毒素导致的HUVEC损伤有保护作用,能够调节ET-1/NO血管舒缩因子的分泌.     

栀子苷通过PI3K通路抑制OX-LDL诱导HUVEC中KLF2表达

目的:探讨栀子苷((Geniposide)对氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中人Krüppel转录因子2(KLF2)表达的影响。方法:将人脐静脉内皮细胞随机分为空白对照组、OX-LDL模型组、栀子苷25、50、100μg/ml剂量组。造模后,除空白对照组和OX-LDL模型组外,分别用25、50、100μg/ml栀子苷预处理HUVEC 24 h。24 h后,除空白对照组外,用100μg/ml OX-LDL干预HUVEC 24 h。采用酶联免疫吸附(ELISA)检测细胞上清液中IL-6、TNF-α及KLF2的含量;CCK-8法测定细胞活性,Western Blotting检测细胞中KLF2、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)及其磷酸化蛋白(P-PI3K)的含量。结果:与OX-LDL模型组相比,栀子苷组HUVEC细胞增殖明显抑制,细胞内IL-6、TNF-α分泌明显增加,KLF2蛋白表达下降,以100μg/ml栀子苷干预效果最明显。阻断PI3K通路后,再加入栀子苷,对HUVEC的抑制效应降低,与空白对照组相比差异不明显。结论:栀子苷能显著诱导HUVEC损伤,主要与其阻断PI3K信号通路传导,进而抑制细胞中KLF2表达有关。     

小檗碱通过JNK通路降低内脏脂肪素诱导人脐静脉内皮细胞分泌IL-6和TNF-α的研究

目的研究c-Jun氨基端激酶(JNK)信号转导通路对内脏脂肪素(内脂素)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的调控作用及小檗碱的干预作用。方法体外培养HUVEC,用内脂素不同质量浓度(0、50、100、200μg/L)及不同时间(0、6、12、24、48 h)作用HUVEC,MTT法检测HUVEC增殖;流式细胞仪检测HUVEC凋亡;ELISA法检测HUVEC上清液中IL-6及TNF-α的量;Western blotting法检测HUVEC中p-JNK、Bax、Bcl-2蛋白表达;并用小檗碱(50μmol/L)及JNK通路特异性抑制剂SP600125(10μmol/L)干预HUVEC,检测小檗碱的干预作用。结果与对照组相比,100μg/L内脂素可显著抑制HUVEC增殖,诱导HUVEC凋亡,诱导HUVEC分泌IL-6及TNF-α的量显著增高,并可显著增加HUVEC内p-JNK及Bax蛋白表达,减少HUVEC内Bcl-2蛋白表达;与内脂素组相比,小檗碱及SP600125均可显著减轻内脂素对HUVEC增殖的抑制及其诱导的HUVEC凋亡,降低内脂素诱导HUVEC上清液中IL-6及TNF-α的量并能降低HUVEC中p-JNK及Bax蛋白的表达,增加HUVEC内Bcl-2蛋白表达。结论小檗碱可减少IL-6及TNF-α的分泌,减轻内脂素诱导的HUVEC损伤,其机制可能与抑制JNK信号转导通路有关。     

人参总皂苷对波动性高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 观察人参总皂苷( TSPG)在体外培养的波动性高糖环境下对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡及超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量的影响,探讨其可能的保护性干预作用.方法 参考文献报道,选用HUVEC进行体外培养,建立波动性高糖损伤模型,用MTT法检测波动性高糖对HUVEC的损伤情况;观察各实验组HUVEC形态学变化;流式细胞术检测TSPG对HUVEC凋亡的影响;测定各实验组培养上清液中SOD、MDA水平.结果 (1)空白对照组细胞呈形态较规则的铺路石样且边界清楚,其他实验组细胞生长均有不同程度的损伤,但加TSPG组细胞形态变化明显优于波动性高糖组;(2)波动性高糖可诱导HUVEC产生凋亡,凋亡率明显高于空白对照组,MDA含量升高,而SOD活性则明显下降,两组比较,差异具有显著性意义(P＜0.001);(3)人参总皂苷组的HUVEC凋亡率下降,SOD活性上升,MDA含量下降,与模型组比较,均有显著性差异(P＜0.05).结论 TSPG可明显抑制波动性高糖所致的HUVEC凋亡,可使细胞上清液中SOD活性增加,MDA含量降低,从而对波动性高糖所致的HUVEC损伤表现出一定的保护作用.     

异丙肾上腺素对大鼠血管内皮功能的影响及鸿宝心脑康胶囊的干预作用

目的:观察异丙肾上腺素(ISO)对大鼠血管内皮功能的影响及鸿宝心脑康胶囊的干预作用.方法:采用大鼠ISO心肌损伤模型,测定血浆中vWF、P-selectin、t-PA的含量和血清中NOS的活性.结果:ISO可使血浆中vWF、P-selectin和t-PA的含量升高(P＜0.01),cNOS的活性下降(P＜0.05);鸿宝心脑康胶囊可使该模型大鼠血浆中vWF、P-selectin和t-PA的含量有所降低(P＜0.05,P＜0.01),血清中cNOS的活性回升(P＜0.05).结论:ISO可损伤血管内皮分泌功能,鸿宝心脑康胶囊对血管内皮有保护作用.     

补血方协同转染TCRVβ7.1 PBMC对肿瘤化疗造成骨髓抑制的缓解机制

目的:探讨补血方协同转染TCRVβ7.1 PBMC对肿瘤化疗造成骨髓抑制的缓解机制.方法:采用体外细胞实验建立化疗损伤模型,利用MTT法测定肿瘤细胞的死亡率,利用ELISA法检测造血相关细胞因子的分泌情况.结果:与对照组相比补血方与转染TCRVβ7.1 PBMC组能够明显促进粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的分泌,并且加PBMC组与单纯化疗药组相比能够明显抑制肿瘤的生长.结论:补血方协同转TCRVβ7.1 PBMC不仅能够对肿瘤细胞起到杀伤作用,且对化疗药所引起的骨髓抑制有一定的缓解作用.     

扇贝糖胺聚糖对受氧化损伤的内皮细胞功能的影响

 目的观察血管内皮细胞受到氧自由基损伤后,血管内皮细胞粘附分子-1(VCAM-1)、血小板衍生生长因子B链(PDGF-BB)表达、内皮素(ET)以及血管紧张素Ⅱ(AⅡ)分泌的改变,研究扇贝裙边提取物-糖胺聚糖(SS-GAG)对上述变化的影响,探讨SS-GAG对血管内皮细胞损伤的保护作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),建立氧自由基诱导的HUVEC损伤模型,采用ELISA法观察SS-GAG对Fenton体系所引发的氧化损伤后HUVEC表达VCAM-1,PDGF-BB的影响;应用放射免疫方法,观察SS-GAG对氧化损伤的HUVEC分泌ET及AⅡ的影响。结果与对照组比较,Fenton体系损伤组血管内皮细胞(VEC)VCAM-1,PDGF-BB的表达明显提高(P<0.01),ET及AⅡ的分泌明显增多(P<0.01)。而细胞经不同浓度的SS-GAG预先处理后,上述表达及分泌均减少(P<0.01)。结论SS-GAG可减少氧自由基损伤血管内皮细胞后VCAM-1,PDGF-BB的表达以及ET和AⅡ的分泌,提示SS-GAG具有保护血管内皮细胞的作用,此作用可能是其抗AS的机制之一。     

沙棘总黄酮对过氧化氢损伤人血管内皮细胞的保护作用

目的:观察沙棘总黄酮对过氧化氢(H_2O_2)损伤人脐静脉血管内皮细胞株(CRL-1730)的保护作用。方法:采用H_2O_2诱导制备CRL-1730细胞损伤模型;采用Annexin V-FITC双染色法测定沙棘总黄酮对H_2O_2损伤后内皮细胞凋亡率的影响;采用ELISA法检测内皮细胞培养液中组织纤溶系统激活剂(t-PA)纤溶酶原活化物抑制剂(PAI-1)以及血管性假血友病因子(vWF)和血栓调节蛋白(TM)活性变化。结果:沙棘总黄酮能够显著降低H_2O_2损伤内皮细胞的凋亡率;与H_2O_2损伤后的模型组相比,沙棘总黄酮可以使培养液中vWF和TM活性降低,t-PA活性加强,并抑制PAI-1的分泌。结论:沙棘总黄酮具有明显的内皮细胞保护作用,其保护作用可能与清除氧自由基,抗脂质过氧化,修复和保护细胞膜的完整性有关。     

养阴化瘀剔络方对血管内皮细胞增殖及损伤保护作用的研究

目的:研究养阴化瘀剔络方对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖作用的影响和对过氧化氢(H2O2)损伤HU-VEC的保护作用。方法:250μmol/L H2O2诱导HUVEC细胞损伤,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活数量,用比色法测细胞培养液中过氧化物丙二醛(MDA)含量。结果:养阴化瘀方对正常HUVEC细胞增殖作用无明显影响,对H2O2诱导的内皮细胞损伤有明显抑制作用,对上清中H2O2诱导的HUVEC细胞损伤产生的MDA含量有一定降低作用。结论:养阴化瘀方对于H2O2诱导的HUVEC细胞损伤有明显的保护作用,对正常HUVEC增殖无影响。     

天麻素对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激的影响

目的 考察天麻素对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化应激的影响.方法 建立高糖诱导的HUVEC氧化损伤模型,用不同质量浓度的天麻素干预.MTT法检测HUVEC存活率;相关试剂盒测定一氧化碳(NO)的量、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)以及总抗氧化能力(T-AOC)的活性、丙二醛(MDA)的量,DCFH-DA染色法检测胞内活性氧(ROS)水平,实时荧光定量PCR法测定细胞中NF-κB基因的表达.结果 与对照组相比,模型组HUVEC氧化应激作用明显增强,而天麻素能提高HUVEC中NO的量及SOD和CAT活性,提高细胞的总抗氧化能力,降低MDA的量与ROS水平,显著降低细胞中NF-κB3基因的表达.结论 天麻素通过提高抗氧化酶活性、降低脂质过氧化产物和ROS水平,抑制高糖诱导的HUVEC氧化应激作用,其作用机制可能与NF-κB通路密切相关.     

黄栌的抗凝血作用

目的:观察中药黄栌根、茎水提液的抗凝血作用。方法:用冰水-肾上腺素型大鼠急性血瘀模型,测定全血凝血时间CT、体外血栓、凝血酶原时间PT、凝血酶时间TT、白陶土部分凝血活酶时间KPTT,计算血栓指数和血小板粘附率。结果:试验表明,黄栌根、茎水提液组与模型组相比,可明显缩短血栓长度(P<0.001),明显减轻血栓湿重(P<0.001)和血栓干重(P<0.05),降低血栓指数(P<0.05),明显延长全血凝血时间(P<0.01),TT值(P<0.01)和KPTT值(P<0.05);黄栌根、茎水提液组抗凝血及抗血栓作用与阿司匹林组相比无显著差异(P>0.05)。结论:中药黄栌能延长TT和KPTT,具有明显的抗凝血和抗血栓作用。     

岩大戟内酯B刺激MCF-7细胞条件培养基降低人脐静脉血管内皮细胞的增殖和迁移

目的:观察岩大戟内酯B(jolkinolide B,JB)刺激MCF-7条件培养基对人脐静脉血管内皮细胞的影响,并分析岩大戟内酯B的作用机制。方法:分别用25,55,85 mg·L~(-1)岩大戟内酯B刺激MCF-7人乳腺癌细胞为JB刺激组,正常培养的MCF-7细胞为MCF-7组。获得25,55,85 mg·L~(-1)JB刺激的MCF-7细胞上清液为相应浓度的条件培养基。利用各组条件培养基分别培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)为25,55,85 mg·L~(-1)JB组,正常培养的HUVEC为非条件培养基组。分别用噻唑蓝(MTT)比色法,Annexin V-FITC细胞凋亡实验,细胞划痕实验和transwell细胞小室迁移实验观察25,55,85 mg·L~(-1)JB组HUVEC增殖、凋亡、迁移的变化;并利用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测JB对MCF-7细胞的作用机制,酶联免疫吸附试验(ELISA)分析各组条件培养基中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的含量变化。结果:与正常组比较,25,55,85 mg·L~(-1)JB组HUVEC细胞凋亡数目逐渐升高(P0.01),HUVEC增殖显著降低(P0.01);25,55,85 mg·L~(-1)JB组HUVEC细胞划痕面积闭合率和细胞迁移率较非条件培养基组均显著降低(P0.01)。与MCF-7比较,25,55,85 mg·L~(-1)JB均能够明显抑制MSC-7细胞蛋白激酶B/信号传导及转录激活因子3/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/STAT3/m TOR)信号通路表达,下调MCF-7细胞表达的VEGF因子。结论:岩大戟内酯B通过抑制Akt/STAT3/m TOR信号通路下调MCF-7细胞旁分泌VEGF,抑制血管内皮细胞的增殖或迁移活性。     

Corilagin对血管内皮细胞的保护作用及LOX-1蛋白表达的影响

目的 观察Corilagin对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的保护作用及其机制.方法 MTT法检测Corilagin对ox-LDL损伤HUVEC的保护作用,免疫荧光测定LOX-1的蛋白表达.结果 Corilagin对HUVEC无明显的毒性作用,Corilagin减弱ox-LDL对HUVEC的损伤作用,Corilagin下调ox-LDL诱导的HUVEC LOX-1蛋白表达.结论 Corilagin对ox-LDL损伤HUVEC具有一定的保护作用.     

朱日很滴丸含药血清对ox-LDL损伤的HUVEC转录因子Nrf2核转位的影响

目的:研究朱日很滴丸含药血清对经ox-LDL损伤的HUVEC的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法:将氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共孵育,建立内皮细胞损伤模型,加入朱日很滴丸含药血清进行干预。MTS法检测朱日很滴丸含药血清对氧化损伤内皮细胞的活性影响;实时荧光定量PCR法(qPCR)和蛋白免疫印迹法(Westorn blot)检测朱日很滴丸含药血清对内皮细胞氧化损伤模型中Nrf2的mRNA水平和蛋白表达的影响;细胞免疫荧光法检测HUVEC中Nrf2蛋白的核转位情况。结果:与空白对照组比较,模型组、溶媒对照血清组细胞存活率明显降低,Nrf2 mRNA及蛋白表达明显下调,核质比明显降低。与溶媒对照血清组相比,朱日很滴丸各剂量20%含药血清组可提高氧化损伤的内皮细胞的活性,Nrf2的mRNA水平和蛋白表达明显上调,朱日很滴丸0.79 g/kg组20%含药血清,Nrf2蛋白的核、质比明显增加;20%含药血清各剂量组细胞核中Nrf2荧光强度明显增强,且有剂量依赖性。结论:朱日很滴丸可明显降低HUVEC的氧化应激损伤,其作用机制可能与促进转录因子Nrf2核转位有关。     

沙棘总黄酮对内皮细胞分泌功能的影响

目的:观察沙棘总黄酮对ECV-304细胞分泌组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、血管性血友病因子(vWF)的影响并探讨其可能的活性成分。方法:以不同浓度的沙棘总黄酮和异鼠李素与培养的ECV-304细胞共同孵育18 h后,用ELISA法检测培养液中t-PA,PAI-1,vWF的含量。结果:沙棘总黄酮和异鼠李素均可剂量依赖性抑制ECV-304细胞PAI-1的分泌,与空白对照组相比,两者高,中剂量组均有显著性差异(P&lt;0.01),低剂量组无显著性差异;沙棘总黄酮和异鼠李素对ECV-304细胞分泌t-PA和vWF均无明显影响。结论:沙棘总黄酮抑制内皮细胞PAI-1的分泌,异鼠李素可能是该作用的活性成分之一。     

三七总皂苷对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞的细胞间黏附分子-1的影响

目的 研究三七总皂苷对氧化型低密度脂蛋白(ox LDL )损伤血管内皮细胞的保护作用,以探讨其治疗动脉硬化闭塞症 (ASO)的机制。方法 以培养原代人脐静脉内皮细胞（HUVEC）作为靶细胞, 用ox LDL造成HUVEC损伤模型,以三七总皂苷进行干预。光镜下观察细胞形态变化,MTT法检测细胞活性;采用蛋白定量法检测HUVEC与单核细胞的黏附率;用流式细胞仪测定HUVEC的细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的蛋白表达。结果 ox-LDL作用HUVEC后12、24 h时,HUVEC损伤明显,细胞活性显著降低,人单核细胞与HUVEC的黏附率显著升高, HUVEC的ICAM 1的蛋白表达水平也明显升高, 均明显高于正常对照组(P＜0.05,P＜0.01),而三七总皂苷能使ox-LDL损伤的HUVEC形态趋于正常,活性增强,并明显降低人单核细胞与HUVEC的黏附率,显著降低ICAM-1蛋白的表达水平,与ox-LDL组比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),这种作用随着剂量的增加而增强。结论 三七总皂苷能通过下调内皮细胞表面黏附分子的表达抑制单核－血管内皮细胞黏附,从而发挥对血管内皮细胞的保护作用,这可能是其治疗ASO的机制之一。     

益气活血法对缺氧损伤血管内皮细胞保护作用的研究

目的:观察以黄芪注射液和盐酸川芎嗪注射液联合用药为代表的益气活血法对缺氧损伤的血管内皮细胞的保护作用。方法:建立人脐静脉内皮细胞缺氧损伤模型,实验设对照组、模型组、黄芪组、川芎嗪组及联合用药组。采用MTT检测法、Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞术凋亡检测法和ELISA检测法,观察药物对HUVEC增殖、凋亡和功能(分泌NO和ET)的影响。结果:与模型组比较,黄芪组和川芎嗪组及联合用药组均可不同程度地减轻缺氧对HUVEC的损伤,提高其生存率,降低其凋亡率,促进NO的分泌,抑制ET的分泌,两药联用比单用效果好。结论:益气活血法可通过促进增殖、抗凋亡及改善细胞分泌功能,有效减轻缺氧后血管内皮细胞的损伤。