经典名方芍药甘草汤的物质基准量值传递分析

目的:建立同时适用于芍药甘草汤药材、饮片与物质基准的HPLC指纹图谱检测方法,进行药材-饮片-物质基准制备过程中的物质群量值传递研究,并结合出膏率和有效成分转移率等技术经济指标,评价芍药甘草汤物质基准制备工艺流程的科学性和合理性。方法:依据古代医籍记载的方法制备芍药甘草汤物质基准;采用HPLC对15批药材、饮片、物质基准进行指纹图谱检测和有效成分含量测定,流动相乙腈-0. 05%磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长237 nm;同时,结合出膏率和有效成分转移率,进行物质基准制备过程中物质群的量值传递相关性分析。结果:建立的HPLC指纹图谱检测方法精密度、重复性和稳定性均良好,能同时适用于药材、饮片、物质基准指纹图谱的检测。在物质基准指纹图谱中,以甘草苷为参照峰,确定了共有峰16个,其中6个色谱峰归属于白芍,11个色谱峰归属于甘草,指认了7个主要色谱峰。15批药材、饮片及芍药甘草汤物质基准指纹图谱与各自对照指纹图谱的相似度均良好(≥0. 90); 15批物质基准的平均出膏率24. 81%,芍药苷、甘草苷、甘草酸从饮片到物质基准的平均转移率分别为79. 68%,63. 70%和51. 20%,且均未出现离散数据。结论:采用整体物质群控制的指纹图谱方法、制备工艺过程中物质群量值传递研究思路与技术经济指标评价相结合的模式,建立了科学合理的芍药甘草汤物质基准制备工艺评价方法,可为其他经典名方物质基准的评价研究提供参考。     

从有效成分及效应组分含量层面探讨芍药甘草复方相使配伍的药剂学环节变化

目的:从有效成分及效应组分含量层面探讨芍药甘草复方相使配伍的药剂学环节变化,为体内药动学研究奠定基础。方法:分别建立芍药甘草复方中有效成分及效应组分含量测定方法,包括采用HPLC法同步测定芍药甘草复方合煎液和单煎合并液中有效成分芍药苷、甘草苷、甘草酸铵含量;采用紫外-分光光度法测定两种煎煮液中效应组分芍药总苷、甘草总黄酮、甘草总皂苷含量。结果:各有效成分与效应组分含量差异均5%,说明配伍前后从有效成分层面到效应组分层面均无差异。结论:芍药甘草复方相使配伍体外主要成分的药剂学环节无变化,为相使配伍体内药动学研究奠定基础。     

黄芩汤分煎液与合煎液中黄芩苷、芍药苷和甘草酸含量的比较

目的:比较黄芩汤(黄芩、芍药、甘草、大枣)分煎液与合煎液中黄芩苷、芍药苷、甘草酸的含量变化.方法:采用Hypersil BDS C18柱,流动相分别以甲醇-水-磷酸(47:53:0.2),在280 nm波长测定黄芩苷;乙腈-水-磷酸(18:82:0.1),在230 nm波长测定芍药苷;甲醇-水-磷酸盐缓冲液(70:29:1)为流动相,在250 nm波长测定甘草酸.结果:3种成分的线性范围分别为黄芩苷2.88～72.00μg/mL,芍药苷2.85～22.80μg/ml,甘草酸4.16～52.00 μg/mL,黄芩苷含量为合煎液明显高于分煎液,芍药苷、甘草酸含量为合煎液与分煎液无明显差别.结论:黄芩汤不同煎煮方法对有效成分的溶出有影响,应根据实际情况进行处理.     

敦煌古医方大补肾汤标准煎液HPLC指纹图谱及多指标成分测定研究

目的 建立敦煌古医方大补肾汤（Dabushen Decoction,DD）标准煎液的HPLC指纹图谱及指标成分含量测定方法,并探寻其量值传递规律。方法 制备15批DD标准煎液,建立其HPLC指纹图谱,明确相似度及峰归属,测定指标成分5-羟甲基糠醛、甘草苷、肉桂酸、甘草酸、五味子醇甲的含量、全方出膏率及其转移率,分析饮片-标准煎液间的量值传递关系。结果 15批DD标准煎液指纹图谱的相似度均大于0.9,标定了28个共有峰,并指认5个色谱峰（5-羟甲基糠醛、甘草苷、肉桂酸、甘草酸、五味子醇甲）。指标成分5-羟甲基糠醛为1.173～1.404 mg/g,转移率为36.09%～40.79%;甘草苷为2.159～3.413 mg/g,转移率为31.91%～37.41%;肉桂酸为0.317～0.614 mg/g,转移率为32.74%～40.64%;甘草酸为4.175～6.559 mg/g,转移率为20.95%～28.48%;五味子醇甲为0.225～0.275 mg/g,转移率为3.52%～4.29%;出膏率为22.24%～26.75%,转移率为93.14%～111.01%。结论 采用指纹图谱、多指标含量及出膏率相结合的评价模式对DD标准煎液进行量值传递分析,科学合理,系统全面,可为后续DD的制剂开发和质量控制提供参考。     

芍药与甘草配伍协同增效作用的物质基础研究

目的:探讨芍药与甘草配伍增效的化学物质基础。方法:芍药和甘草中主要活性成分采用HPLC检测;对方法学进行了专属性、线性范围、精密度、稳定性、重复性、加样回收率等考察。结果:芍药单味药单煎后芍药苷检测到的含量为2.19 mg·g-1;甘草单味药单煎后甘草酸检测到的含量为17.13 mg·g-1;芍药和甘草分别单煎再按1∶1混合,芍药苷检测到的含量为5.45 mg·g-1,甘草酸检测到的含量为17.69 mg·g-1;芍药和甘草按1∶1混合煎煮,芍药苷检测到的含量为2.58 mg·g-1,甘草酸检测到的含量为18.14 mg·g-1。结论:芍药与甘草配伍,两药单煎混合芍药苷和甘草酸的含量均显著提高,但前者增高更为明显;两药混合煎煮,芍药苷和甘草酸的含量均明显提高,但以后者更为显著;芍药与甘草配伍止痛的科学基础可能与两药合用后的芍药苷和甘草酸的含量增高有关。     

配伍对三拗汤煎液中5种成分煎出量及指纹图谱的影响

目的 建立HPLC同时测定三拗汤中5种成分(麻黄碱、伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸)含量的分析,研究配伍对汤剂中5种成分煎出量的影响,并对其指纹图谱进行比较.方法 以HPLC法测定不同配伍的三拗汤水煎液中5种成分的含量.结果 该方法准确、灵敏,可用于三拗汤中多成分含量的测定.甘草减少了煎液中麻黄碱的煎出量,麻黄减少了煎液中甘草苷和甘草酸的煎出量,配伍增加了煎液中苦杏仁苷的煎出量,配伍对煎液中伪麻黄碱的的煎出量没有影响.结论 三拗汤在煎煮过程中成分含量存在动态变化.     

芍药甘草汤HPLC指纹图谱的建立和7种成分含量测定

目的:建立芍药甘草汤的HPLC指纹图谱,并同时测定其中7种成分的含量。方法:采用Diamonsil(2)C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液,梯度洗脱;变波长检测;柱温为35℃;流速为1.0 mL/min;进样量为10μL。结果:建立了芍药甘草汤HPLC指纹图谱,标定了24个共有峰,指认了没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、甘草酸7种成分。上述7种成分在相应的浓度范围内与峰面积线性关系良好,r0.9990,平均加样回收率分别为96.41%、102.71%、99.52%、101.19%、96.77%、102.36%、95.05%。结论:建立的芍药甘草汤HPLC指纹图谱和7种成分含量测定的方法简便、准确,可为芍药甘草汤的质量评价提供依据。     

基于灰色关联分析法探索芍药甘草汤对癫痫小鼠脑保护作用的谱效关系

目的:探讨芍药甘草汤物质组分对癫痫小鼠脑组织中丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)和三磷酸腺苷(ATP)酶水平影响的谱效关系,揭示芍药甘草汤抗癫痫作用的物质基础。方法:利用HPLC建立15批芍药甘草汤煎液的指纹图谱,流动相乙腈(A)-0. 1%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0～15 min,19%A;15～45 min,19%～50%A;45～46 min,50%～90%A;46～48 min,90%A),流速1. 0 mL·min-1,检测波长237 nm。采用青霉素诱导小鼠癫痫模型,考察15批芍药甘草汤煎液对癫痫模型小鼠脑组织中MDA,SOD和ATP酶水平的影响;利用灰色关联分析法将15批芍药甘草汤煎液指纹图谱特征峰峰面积与药效学指标MDA,SOD和ATP酶活性进行关联分析,建立不同物质组分与药效学指标之间的谱效关系数学模型。结果:芍药甘草汤煎液能够提高癫痫小鼠脑组织中ATP酶和SOD的含量,降低MDA含量,且大部分具有显著性差异(P0. 05,P0. 01)。在15批芍药甘草汤煎液的指纹图谱中标定出了28个共有峰,其中15个特征峰。灰色关联分析法发现对MDA,SOD和ATP酶活性影响有贡献的特征峰包括2号峰(芍药内酯苷),3号峰(芍药苷),5号峰(甘草苷)等,具体排序为3号峰6号峰12号峰8号峰2号峰5号峰9号峰4号峰10号峰7号峰13号峰11号峰15号峰1号峰14号峰。结论:芍药甘草汤是通过多组分协同作用来影响癫痫小鼠脑组织中SOD,MDA和ATP酶活性的。将灰色关联分析法引入中药复方组分与药效之间的谱效关系相关性评价中,能客观反映中药多组分协同发挥药效作用的本质,是筛选和预测中药药效物质组分的一种有效分析方法。     

基于HPLC指纹图谱同时测定经典名方芍药甘草汤中多组分的含量

目的:建立经典名方芍药甘草汤中多个物质组分的含量测定方法。方法:基于芍药甘草汤HPLC指纹图谱对芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷和甘草酸铵进行含量测定。结果:芍药苷、芍药内酯苷、甘草苷和甘草酸铵分别在0.582～2.522μg、0.711～3.081μg、0.39～1.69μg、1.68～7.28μg之间呈良好的线性关系,芍药甘草汤中芍药苷、芍药内酯苷、甘草苷和甘草酸铵含量分别不少于19.0mg/g、5.0mg/g、4.6mg/g、20.0mg/g。结论:该方法数据准确,灵敏度高,稳定可靠,能够整体反应出制剂的化学物质特征,可用于经典名方芍药甘草汤的质量控制。     

基于标准煎液的忘忧安神口服液量值传递相关性研究

目的:研究忘忧安神方饮片-标准煎液-口服液的物质群量值传递关系,评价忘忧安神口服液制备工艺的科学性和合理性。方法:制备10批忘忧安神方标准煎液及10批口服液,采用高效液相色谱法(HPLC)对10批忘忧安神方标准煎液及口服液进行指纹图谱检测及有效成分含量测定,并结合出膏率、有效成分转移率进行口服液制备过程中物质群的量值传递规律分析。结果:在饮片-标准煎液各生产环节间栀子苷、甘草苷、甘草酸、槲皮苷的平均转移率分别为77.35%、69.45%、57.95%、48.67%;在标准煎液-口服液中分别为83.60%、75.92%、75.08%、91.69%。10批忘忧安神方标准煎液及口服液与其各自对照指纹图谱的相似度均大于0.94,10批口服液指纹图谱与10批标准煎液对照指纹图谱的相似度均大于0.76。标准煎液-口服液出膏率平均传递率为63.54%。结论:采用指纹图谱、出膏率及指标性成分转移率相结合的模式,对忘忧安神口服液制备过程中的量值传递规律进行分析,建立了科学合理的忘忧安神口服液制备工艺评价方法,为口服液生产工艺过程的实施及复方制剂的质量评价研究提供参考。     

大孔吸附树脂法分离精制芍药甘草汤

目的筛选分离芍药甘草汤的最佳树脂,确定树脂精制芍药甘草汤的最佳工艺。方法以芍药苷、甘草苷、甘草酸的静态、动态吸附量和脱附率为指标对5种树脂进行筛选,并通过单因素试验确定分离精制芍药甘草汤的最优操作条件。结果HPD100树脂具有较好的吸附性能和解吸效果,其分离精制芍药甘草汤的最佳工艺为:洗脱溶媒乙醇浓度为70%,树脂用量与生药量的比值为1:1,上样液的浓度为0.05g生药/mL。在此工艺条件下HPD100对芍药苷、甘草苷、甘草酸的保留率依次为79.1%、80.6%、74.3%。结论从指标性成分保留率来看,HPD100能较好的精制芍药甘草汤。     

基于指纹图谱和网络药理学的芍药甘草汤抗肝损伤活性成分及含量测定研究＊

目的 研究芍药甘草汤抗肝损伤活性成分，并测定主要活性成分的含量，为基于药理活性的中药质控指标成分的选择提供一种新思路。方法 首先采用指纹图谱结合化学计量学分析芍药甘草汤潜在质量标记物。在此基础上，基于可测性和可溯性的原则，采用网络药理学和分子对接方法，验证芍药甘草汤抗肝损伤的主要活性成分，并对指标性成分进行含量测定。结果 指纹图谱结合化学计量学，整合网络药理学筛选出芍药甘草汤抗肝损伤主要活性成分为芍药苷（Paeoniflorin， PA）、芍药内酯苷（Albiflorin， AB）、苯甲酰芍药苷（Benzoylpaeoniflorin， BPA）、没食子酸（Gallic acid， GA）、甘草苷（Liquiritin， LQ）、芹糖异甘草苷（Isoliquiritinapioside ILQA）、异甘草苷（Isoliquiritin， ILQ）、新异甘草苷（Neoisoliquiritin， NILQ）、甘草素（Liquiritigenin， LQG）和甘草酸（Glycyrrhizic acid， GCA）；关键靶点有IL-6、VEGFA、CASP3、STAT3和ESR1，分子对接结果显示化合物与靶点能良好结合。含量测定方法学考察结果良好，各成分的平均加样回收率在96.54-104.38%，RSD值在0.39-1.17%。结论 本研究明确了芍药甘草汤抗肝损伤作用的活性成分、关键靶点及通路，为基于药理活性的中药质量控制指标的选择提供一种新思路。     

温经汤不同煎煮方法比较研究

目的:比较温经汤传统煎煮方法和现代医疗机构煎煮方法所得汤剂的质量差异,为温经汤的临床应用提供科学依据。方法:采用高效液相色谱法测定两种方法所得汤剂中芍药内酯苷、芍药苷、β-蜕皮甾酮、甘草苷、阿魏酸、甘草素、肉桂酸、桂皮醛、丹皮酚、甘草酸铵的含量,并对两种方法所得汤剂的总皂苷和浸膏率进行比较。结果:两种方法所得的汤剂中,芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、甘草素、肉桂酸、甘草酸铵含量差异具有统计学意义(P<0.05),β-蜕皮甾酮、阿魏酸、桂皮醛、丹皮酚、总皂苷、浸膏率差异均无统计学意义(P> 0.05)。结论:两种煎煮方法所得的温经汤质量存在差异,医疗机构煎煮法更具科学性。     

基于HPLC,PCA与相似度评价的芍药甘草汤传统汤剂与配方颗粒汤剂的差异规律分析

目的: 比较芍药甘草汤传统汤剂与配方颗粒汤剂的成分差异. 方法: 制备传统汤剂(TD)、自制配方颗粒汤剂(DGD-S)、市售A厂和B厂配方颗粒汤剂(DGD-A,DGD-B)共4类11批芍药甘草汤,采用HPLC建立指纹图谱,流动相乙腈(A)-0.05%磷酸水溶液(B,pH 2.42)梯度洗脱(0~8 min,16%A;8~35 min,16%~50%A;35~36 min,50%~100%A;36~38 min,100%~16%A;38~40 min,16%A),检测波长250 nm.以3批TD的平均信息为标准汤剂信息,从成分的出现或消失、指标性成分含量、共有峰面积、主成分分析及指纹图谱相似度共5个方面全面对比芍药甘草汤不同剂型的差异信息. 结果: DGD与TD比较,未见有紫外吸收的化学成分的出现与消失.指标性成分含量差别较大,其中DGD中甘草酸铵含量均与TD存在极显著差异.DGD-A中23个共有峰峰面积的总和与TD无显著差异,而DGD-S,DGD-B的共有峰面积之和与TD存在极显著差异,二者分别相当于TD的2.5,3.2倍.在PCA中,DGD-A更接近于TD,表明其各单体成分的绝对量更接近于TD,而DGD-S,DGD-B的绝对量远大于TD.DGD-A与标准汤剂的相似度最小,表明DGD-A中各成分间的比例与标准汤剂相差较大. 结论: 芍药甘草汤DGD与TD间仅有成分比例的明显差异,并无成分本身的明显差异;应按比例调整某些DGD的用量以使其与汤剂等效.     

炮制对芍药甘草汤影响的研究

实验结果表明,白芍各种炮制品不会降低芍甘汤中甘草次酸的煎出。各种芍甘汤均有不同程度的抗小鼠醋酸扭体作用,而炙甘草煎液无此作用;热板法镇痛实验.各种芍甘汤及炙甘草煎液均未呈现阳性结果;对戊巴比妥钠灌胃小鼠均有一定程度的镇静作用。     

芍药甘草汤含药血清的制备及对高胆固醇血症兔Oddi括约肌细胞内Ca2＋浓度的影响

目的：建立芍药甘草汤含药血清制备方法,并观察不同浓度芍药甘草汤含药血清对高胆固醇血症兔Oddi括约肌细胞内Ca2＋浓度的影响。方法：利用高效液相色谱法（HPLC）测定芍药甘草汤灌胃后不同时间点兔血清中芍药苷、甘草酸血药浓度,以确定最佳采血时间。同时通过共聚焦显微镜观察不同浓度芍药甘草汤含药血清对高胆固醇血症兔Oddi括约肌细胞内Ca2＋浓度变化的结果。结果：兔口服芍药甘草汤后芍药苷血药浓度在90min达到高峰,甘草酸血药浓度在60min达到高峰。高胆固醇血症组细胞内Ca2＋浓度较正常组明显升高（P〈0.01）,而芍药甘草汤含药血清可以明显降低细胞内的Ca2＋浓度,随浓度增加而作用增强（P〈0.05）。结论：芍药甘草汤通过降低细胞内的Ca2＋浓度起到对ODDI括约肌功能紊乱的治疗作用。     

芍药甘草汤对角叉菜胶诱导的炎症相关指标时序性变化研究

目的：研究中药复方芍药甘草汤对角叉菜胶诱导肿胀及相关炎症指标的时序变化关系。方法：SD大鼠随机分为正常组、模型组、芍药甘草汤高（4.8 g·kg^-1）、低（2.4 g·kg^-1）剂量组。各给药组单次给药,给药30 min后皮下注射λ-角叉菜胶建立大鼠足跖肿胀急性炎症模型,观察芍药甘草汤在造模后1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12 h不同时间点对大鼠足跖肿胀率、髓过氧化物酶（MPO）、环氧化酶-2（COX-2）、前列腺素E₂（PGE₂）炎症指标的影响,并研究其时效变化关系。结果：足跖皮下注射角叉菜胶后,模型组足跖肿胀明显,与模型组比较,芍药甘草汤高低剂量均能明显抑制角叉菜胶致大鼠的足肿胀度,高剂量在1~6 h各时间点对足跖肿胀均有明显抑制作用（P<0.05,P<0.01）,低剂量组在2,4,5,6 h对足跖肿胀有明显抑制作用（P<0.05,P<0.01）;与正常组比较,模型组MPO在1~6 h、COX-2在2~8 h,11 h、PGE₂在1~6,8~12 h明显升高（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,芍药甘草汤在2,4,5,6 h对MPO的含量有明显抑制作用,在4,5,6 h对COX-2的含量有明显抑制作用,在2,3,5,6 h对PGE₂的含量有明显抑制作用。芍药甘草汤在2,6 h对MPO和PGE₂的浓度变化均有显著抑制作用,但仅在6 h对COX-2的浓度变化有明显抑制作用。结论：中药复方芍药甘草汤对角叉菜胶诱导的不同炎症指标肿胀率有明显降低作用,浓度不同作用时间也不尽相同,对MPO,COX-2及PEG₂均具有明显降低作用,但各指标起效时间不同;具有明显的时序变化特点。     

荧光脂质体法研究芍药甘草汤对磷脂酶A2的抑制效应及其配伍作用

目的 采用荧光脂质体研究芍药甘草汤对磷脂酶A2(PLA2)的抑制效应及其配伍作用.方法 以磷脂酰胆碱和胆固醇等为主要材料,采用薄膜分散法-超声-膜挤出-葡聚糖凝胶柱色谱分离-冷冻干燥的联用技术制备包封羧基荧光素的脂质体;利用PLA2能水解磷脂破坏脂质体造成羧基荧光素渗漏的原理,将药物、PLA2和荧光脂质体共同温孵,检测从脂质体渗漏的羧基荧光索的荧光强度,该强度反映药物对PLA2的抑制强度.结果 芍药甘草汤、甘草、甘草酸和对照药氯丙嗪对PLA2活性均具有较强的抑制作用,白芍抑制作用较弱,而芍药苷几乎无抑制作用;芍药甘草汤复方对PLA2的抑制作用强于单味甘草和白芍.结论 芍药甘草汤对PLA2具有较强的抑制活性,白芍与甘草具有协同作用.     

基于药材-饮片-标准汤剂质量传递过程的白芍质量标志物研究

目的 通过建立白芍药材、饮片、标准汤剂HPLC特征图谱对白芍生产过程的共有峰进行定性分析,结合白芍药材-饮片-标准汤剂质量传递过程筛选白芍质量标志物（Q-Marker）。方法 采集10批白芍鲜药材,制备为药材、饮片和标准汤剂,采用HPLC建立白芍药材-饮片-标准汤剂特征图谱,结合相似度评价及正交偏最小二乘-判别分析（orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA）等分析初步确定的指标成分在药材-饮片-标准汤剂过程的含量及转移率,探究白芍生产过程中的质量传递规律,综合筛选白芍Q-Marker。结果 白芍药材、饮片、标准汤剂特征图谱的共有峰有9个,组内相似度较高,OPLS-DA结果显示,9号共有峰不能稳定传递;白芍药材-饮片传递过程中,没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、没食子酰芍药苷、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷8种成分转移率大于70%,可以传递稳定;饮片-标准汤剂传递过程中,芍药苷、芍药内酯苷、没食子酰芍药苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷等单萜及其苷类成分含量稳定且转移率大...     

基于指纹图谱结合化学计量学的吴茱萸-甘草配伍减毒化学成分研究

目的 研究吴茱萸与甘草配伍后发挥减毒作用的化学成分变化。方法 采用HPLC指纹图谱结合化学计量学的方法,研究甘草配伍对吴茱萸化学成分的影响,采用层次递进法进一步研究甘草中3种主要成分配伍对吴茱萸中化学成分的影响。结果 化学计量学结果表明,吴茱萸单煎液和吴茱萸-甘草药对各自聚为一类,配伍后吴茱萸中多数化学成分的含量显著降低(P<0.05),实现了吴茱萸配伍甘草前后成分的差异性分析,获取了影响差异的重要化学成分;甘草组分配伍对吴茱萸中化学成分的影响显示,甘草3种主要成分均有不同程度的影响,其中甘草多糖、甘草酸的作用明显,甘草苷对吴茱萸中化学成分的作用较小。结论 所建立的指纹图谱结合化学计量学方法能够实现吴茱萸配伍甘草前后的区分,探讨了吴茱萸-甘草配伍减毒的物质基础,为研究吴茱萸-甘草配伍的合理性提供了参考。