β-葡萄糖苷酶转化知母皂苷制备知母皂苷AⅢ的研究

目的：研究知母皂苷AⅢ的制备工艺。方法：采用β-葡萄糖苷酶水解知母皂苷制备知母皂苷AⅢ,以转化率为指标,通过单因素考察反应温度、反应时间、pH值及酶用量对转化率的影响L16(45),正交试验优化制备工艺。结果：酶解反应的最适条件为55℃、pH5.0醋酸醋酸钠缓冲液、酶用量为600U/g、反应时间 3h。结论:β-葡萄糖苷酶水解知母皂苷制备知母皂苷AⅢ,工艺简单可靠,反应条件温和,适合工业化生产。     

蜗牛酶转化人参皂苷Rb1制备人参稀有皂苷CompoundK的研究

目的:确定蜗牛酶转化人参皂苷Rb1制备人参稀有皂苷Compound K(CK)的主要因素,并优选出转化效率高、稳定、适合工业化生产的工艺条件。方法:采用蜗牛酶水解人参皂苷Rb1制备人参稀有皂苷CK,以转化率为指标,通过单因素考察p H值、温度、底物浓度、酶用量、反应时间对转化率的影响,并通过响应面法试验优化制备工艺;采用MS,1H-NMR,13C-NMR鉴定酶解产物。结果:酶解反应的最优条件为温度55℃、p H值5.5醋酸-醋酸钠缓冲液,底物浓度1.0mg/m L,酶与底物质量比1∶1,反应时间36h,在此条件下的转化率为86.91%;经核磁图谱证实产物为人参稀有皂苷CK。结论:蜗牛酶水解人参皂苷Rb1制备人参稀有皂苷CK反应条件温和,工艺简单可靠,适合工业化生产。     

超声辅助酶解人参总皂苷制备人参稀有皂苷Compound K的研究

该实验采用超声辅助酶解人参总皂苷以制备人参稀有皂苷Compound K。以转化率为指标,通过单因素考察超声功率、超声时间等超声预处理因素和pH、温度、底物浓度、酶用量、反应时间等酶解因素对转化率的影响,并应用响应面法试验优化制备工艺;采用MS,¹H,¹³C-NMR鉴定酶解产物。结果表明,超声辅助酶解反应的最适条件为超声功率250 W,超声时间15 min,酶解pH 5.5,酶解温度50℃,酶解时间36 h,酶用量-底物4：5,底物质量浓度1.0 g·L^-1;反应产物相对分子质量622.4,核磁图谱证实产物为人参稀有皂苷Compound K。在此条件下,以人参总皂苷计,人参稀有皂苷Compound K转化率为6.91%。该工艺反应条件温和,转化率较高,工艺简单可靠,适合工业化生产。     

HPLC-MS法测定知母盐炙前后8种成分量变化

目的建立HPLC-MS法同时测定知母中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷E_1、知母皂苷BⅡ、知母皂苷BⅢ、知母皂苷Ⅰ、知母皂苷AⅡ、知母皂苷AⅢ 8种化学成分量的方法,分析炮制前后各成分量的变化。方法色谱柱为Agilent SB-C_(18)柱(50 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,体积流量0.4 mL/min,柱温30℃,进样量10μL。质谱采用大气压电喷雾离子源,选择性负离子模式监测。结果所测定的8种成分在各自的线性范围内均具有良好的线性关系(r≥0.999 7);平均回收率在97.55%~103.01%,RSD2.80%。不同产地知母8种成分的量差异较大,其中芒果苷、知母皂苷BⅡ、知母皂苷AⅢ的量较高。知母盐炙后新芒果苷、芒果苷、知母皂苷AⅡ、知母皂苷AⅢ量变化不明显,知母皂苷E_1、知母皂苷BⅡ、知母皂苷Ⅰ量下降,知母皂苷BⅢ量上升。结论该方法简单、灵敏、准确,知母盐炙前后多种成分量发生变化。     

番茄皂苷A的提取工艺研究

目的:优选番茄皂苷A的最佳提取工艺条件。方法:采用新鲜圣女小番茄为原料,研究果胶酶用量、酶解温度、树脂量这三个单因素对番茄总皂苷得率的影响。以洗脱液量、上样流速、洗脱液浓度、吸附脂量为考察因素,应用正交试验法筛选番茄皂苷A最佳的提取工艺条件。结果:得出最佳提取工艺条件为:吸附树脂为D101大孔树脂,原料树脂量比为10∶1,上样流速4 mL/min,10倍树脂柱用量80%乙醇洗脱(体积分数),果胶酶酶解条件为:酶用量0.05%(鲜果质量分数),酶解温度为50℃,酶解时间1.5 h。结论:获得一套番茄皂苷A提取率高、简单可行的生产工艺。     

果胶酶法提取番茄总皂苷的工艺研究

目的确定酶法提取番茄总皂苷的工艺条件。方法以番茄皂苷A的质量浓度为考察指标,对酶解温度、酶解pH、酶解时间、酶添加量进行单因素实验,在单因素实验的基础上,按照L9(34)正交试验设计优选其提取工艺条件。结果酶解法的最佳工艺条件为:酶解温度55℃,酶解时间2 h,酶添加量0.4‰,pH4.0,此条件下,番茄酶解液中的番茄皂苷A质量浓度值最高。通过验证实验,证明在最佳酶解条件下,加酶组的总皂苷平均得率为0.25%,明显高于不加酶组的0.14%。结论该工艺是酶解法提取番茄水溶性皂苷的最佳工艺,能有效提高番茄皂苷得率和降低提取液的黏稠度。     

调脏舒秘方治疗慢性便秘(虚证)的临床观察

  目的：优化知母皂苷涂膜剂的处方工艺。  方法：采用 L₉ (3⁴) 正交试验法,以聚乙烯醇、1,2-丙二醇、知母皂苷酶水解产物为考察因素,以成膜时间和外观性状为评价指标,对基质与药物的用量进行优化,筛选知母皂苷涂膜剂的最优处方工艺,并对制得的涂膜剂进行质量评价、含量测定和安全性评价。  结果：筛选出知母皂苷涂膜剂的最佳处方为:聚乙烯醇1.5 g、丙二醇4 ml、知母皂苷酶水解产物10 mg,所制得的涂膜剂成膜时间短,成膜性好,质量稳定、符合规定,知母皂苷AⅢ含量为(0.27±0.10)mg/ml,且动物实验显示无毒、无皮肤刺激性。  结论：该制备工艺简单,成膜性好,制得的知母皂苷涂膜剂质量可控,且安全无刺激。     

LC-MS-MS测定配伍黄柏对知母中4种有效成分含量的影响

目的:建立高效液相色谱串联质谱法(LC-MS-MS)测定知母黄柏药对中芒果苷、新芒果苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ的含量,研究不同配伍比例对4种成分含量的影响。方法:采用ZORBAX Eclipse XDB-C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm,3.5μm),柱温30℃,流动相0.1%甲酸水-乙腈,流速0.25 m L·min~(-1),梯度洗脱;质谱条件为电喷雾(ESI)离子源,负离子多反应离子监测(MRM)用于定量测定。结果:芒果苷、新芒果苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ分别在5.05~404,5.3~424,5.05~404,20.8~1 664μg·L~(-1)线性关系良好(r≥0.999);平均回收率分别为100.6%,99.2%,99.1%,98.5%。知母单煎时芒果苷、知母皂苷AⅢ含量最高;新芒果苷在知柏配伍比例1∶1时含量最高;知母皂苷BⅡ的含量各配伍比例没有明显差异。结论:该方法快速、准确,适用于知母黄柏中4种成分的含量测定。知母与黄柏配伍比例不同,芒果苷、新芒果苷、知母皂苷AⅢ的含量不同,配伍黄柏时对知母成分含量有影响。     

HPLC-ELSD法同时测定知母药材中2种皂苷含量

目的:用HPLC-ELSD同时测定知母药材中2种皂苷的含量.方法:采用Kromasil C12柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-水梯度洗脱,流速1 mL·min-1,柱温为30℃.蒸发光散射检测器漂移管温度50℃,蒸发温度70℃,以氮气为雾化气,压力为1.03×105Pa.结果:知母皂苷C在0.310～3.10 μg,知母皂苷AⅢ在0.323～3.23μg,进样质量的对数值与峰面积的对数值呈良好的线性关系.知母皂苷C回归方程为lgA=1.25421gM+5.734.7,r=0.9995,测定的平均回收率(n=6)98.1%,RSD2.0%;知母皂苷AⅢ回归方程为lgA=1.32841gM+5.937,r=0.9996,测定的平均回收率(n=6)97.3%,RSD1.5%.结论:建立的含量测定方法准确、快速,是控制知母药材质量较理想的方法.对我国北方主要知母产地药材中两种皂苷含量测定和比较表明不同产地野生知母质量差异较大.     

HPLC-ELSD 法测定滋肾通关胶囊中2种知母皂苷类成分

目的：采用HPLC-ELSD法测定滋肾通关胶囊中知母皂苷BⅡ、AⅢ的含量,为其质量标准的建立提供依据。方法：采用KromasilC18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）,以乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速为1.0mL/min,漂移管温度为115℃,载气流速为3L/min。结果：知母皂苷BⅡ和AⅢ进样量分别在0.53～21.28μg和0.54～21.36μg范围内呈良好的线性关系,精密度、重复性、稳定性的RSD均低于3%,加样回收率为103.9%和98.7%,滋肾通关胶囊中知母皂苷BⅡ和AⅢ的含量分别为0.44%和0.32%,知母药材中这两种成分的含量分别为1.19%和0.59%。结论：本研究建立了同时测定滋肾通关胶囊及知母药材中知母皂苷BⅡ和AⅢ含量的方法,为滋肾通关胶囊及知母药材质量标准的建立和完善提供了参考。     

正交试验优选人参中人参皂苷Rg_1的酶解工艺研究

目的优化酶解法提取人参皂苷Rg1的工艺条件。方法采用高效液相色谱法为测定方法,以人参皂苷Rg1提取率为指标,通过正交设计试验进行优选。结果纤维素酶酶解为最优方法,且酶用量、酶解时间、酶解温度对人参皂苷Rg1提取率有显著性影响;提取人参皂苷Rg1的最佳工艺条件为:纤维素酶用量为1.4%,酶解60min,酶解温度为45℃。结论优化后的提取工艺简单、稳定、提取率高。     

二母颗粒中知母水提工艺优化

目的:优选二母颗粒中知母的水提工艺.方法:以HPLC测定知母皂苷BⅡ、芒果苷的含量及干膏收率为指标进行综合评价,采用正交试验法,考察溶媒用量、浸润时间、提取时间及提取次数等水提工艺参数.结果:提取次数对水提工艺有显著性影响,确定较佳提取工艺为A1B1C1D3,即知母饮片加6倍量水,不浸泡,提取3次,每次30 min.结论:该优选水提工艺稳定、合理可行.     

HPLC-CAD法测定知母盐炙前后4种皂苷含量

目的比较知母盐炙前后4种皂苷含量的变化,解析盐知母降血糖增强的炮制原理。方法采Thermo C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈-水梯度洗脱,流速为1 ml/min,Corona参数:氮气压力为35 psi (约241.3 Kpa),Filter:High, Range:200 pA。结果知母皂苷BⅡ、知母皂苷E、知母皂苷BⅢ和知母皂苷AⅢ进样质量分别在0.863～4.18μg(r=0.999 3)、0.848～4.24μg(r=0.999 3)、1.060～5.30μg(r=0.999 5)、1.092～5.46μg(r=0.999 7)的范围内与峰面积呈良好线性关系;知母皂苷E的含量降低,知母皂苷BⅢ和知母皂苷AⅢ升高。结论该含量测定方法简单、灵敏、准确。盐炙可使知母皂苷类成分发生转化,是盐知母降血糖作用增强的物质基础之一。     

知母的盐制工艺优化

目的:优化知母的盐制工艺。方法:以知母皂苷BII和芒果苷的含量为考察指标,盐用量、焖制时间、炒制温度、炒制时间为考察因素,采用正交试验法优化知母的盐制工艺。结果:设定盐知母中知母皂苷BII和芒果苷的权重比为1∶1时,盐用量2.0%,焖制时间1.0 h,炒制温度180℃,炒制时间12 min为知母的最佳盐制工艺。结论:该实验优化的知母盐制工艺切实可行,可为规模化生产提供数据参考。     

纤维素酶法提取知母甾体总皂苷元工艺研究

目的:优化知母甾体总皂苷的提取工艺。方法:以甾体菝葜皂苷元的提取率为指标,应用L9(34)正交试验设计优化了知母中甾体皂苷的纤维素酶法提取工艺。结果:影响酶法提取甾体皂苷的主次因素为:酶用量>提取温度>固液比>水解时间。纤维素酶处理能显著提高甾体皂苷的提取率,加酶后甾体菝葜皂苷元提取率的平均值为84.6%,而未加酶的结果则为58.1%。结论:酶法提取新工艺能显著提高知母甾体皂苷的提取率。     

超声酶法提取三七总皂苷的研究

目的:优选三七总皂苷的最佳提取方法和提取工艺。方法:以三七提取液中总皂苷的含量和提取物得率为指标,考察乙醇回流法、超声法、超声纤维素酶法、超声果胶酶法、超声复合酶法提取三七总皂苷的优劣,并采用四因素(纤维素酶用量、果胶酶用量、超声时间、加水量)三水平正交设计法对超声复合酶法提取工艺条件进行优选。结果:得到了如下较理想的提取工艺条件:在pH为4.5,酶解温度为50°C,酶解时间为2.5 h条件下,纤维素酶用量为15 U/g(生药)、果胶酶用量为140 U/g(生药),超声时间为90 m in,加水量为8倍量。结论:所得三七提取液中总皂苷的含量为10.33%,提取物得率为35.17%,超声酶法操作简便,工艺条件稳定。     

纤维素酶法提取断血流皂苷的工艺研究

目的:研究纤维素酶酶解断血流提取总皂苷的工艺条件.方法:以断血流皂苷A提取率作评价指标,分别考察体系pH、温度、酶解时间、酶用量等因素,并采用正交实验优化最佳酶解工艺.结果:纤维素酶解断血流的最佳工艺参数为:纤维素酶量5 U/g,提取pH值为7.0,酶解温度为60 ℃,时间为40 min时,断血流皂苷A提取率为90.92%,与未加酶组相比,提取率提高18.13%.结论:纤维素酶解断血流提取总皂苷工艺可行.     

HPLC-DAD-ELSD同时测定知母中黄酮和皂苷类成分的含量

建立HPLC-DAD-ELSD同时测定知母中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BⅡ、知母皂苷BⅢ、知母皂苷AⅢ 5个黄酮及皂苷类成分含量的方法。采用Merck Purospher STAR色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸溶液(B),梯度洗脱;流速1.0 mL·min^-1;柱温35 ℃;检测波长为254 nm;ELSD检测器雾化气流速2.0 L·min^-1;漂移管温度105 ℃;进样量10 μL。该条件下5个成分的分离度良好,标准曲线在检测范围内呈良好线性。加样回收率平均值为102.0%~104.0%,RSD为0.53%~1.8%。该方法快速、准确、重复性好,为知母药材的全面质量控制奠定了基础。     

正交法优选光知母水处理工艺

目的:探讨光知母的最佳水处理工艺。方法:以菝葜皂苷元、芒果苷含量为指标选择润制时间、烘制温度、切制规格3个因素,用L9(3)4正交设计表,采用方差分析的数学分析方法,对光知母进行水处理工艺的优选。结果与结论:干燥温度、切制规格对菝葜皂苷元、芒果苷含量无明显影响,水处理时间具有显著性差异。光知母水处理最佳工艺为:润制时间15 h,干燥温度60℃,切制规格3 mm。     

正交法优选盐制知母的最佳炮制工艺

目的:优选知母的最佳炮制工艺.方法:以菝葜皂苷元和芒果苷的含量为评价指标,选择加盐量、炒制温度和炒制时间为考察因素,采用正交设计L9 (34),优选知母的最佳炮制工艺.结果:知母的最佳炮制工艺为50 g药材加15 mL的3%盐水润透,在150～160℃下炒制9 min.结论:盐制知母的最佳炮制工艺合理可行.