三七、绞股蓝对动脉粥样硬化模型家兔主动脉基质金属蛋白酶及其抑制因子表达的影响

目的观察三七、绞股蓝及其总皂苷对动脉粥样硬化模型家兔主动脉基质金属蛋白酶及其抑制因子表达的影响,并从基因水平探讨其作用机制。方法40只新西兰兔随机分为5组,即三七绞股蓝饮片组、三七绞股蓝总皂苷组、阳性药物组、模型组与正常对照组,以高脂饲料和免疫损伤联合复制动脉粥样硬化模型,各药物组在造模的同时预防给药,12周后检测各组实验兔血清脂质水平,观察兔主动脉病理学变化,RT-PCR检测主动脉壁基质金属蛋白酶9（MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）表达水平。结果模型组的血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的含量均明显高于正常对照组（P〈0.01）,三七绞股蓝饮片组的TC明显低于模型组（P〈0.05）,三七绞股蓝总皂苷组的TG明显低于模型组（P〈0.05）。各药物预防组的主动脉病理形态学变化与模型组比较有明显差异（P〈0.01,P〈0.05）。与正常对照组比较,模型组的主动脉组织MMP-9mRNA的表达明显增强,TIMP-1mRNA的表达明显减弱。与模型组比较,三七绞股蓝饮片组、皂苷组的MMP-9mRNA表达量水平均降低,TIMP-1mRNA的表达明显增加。结论三七绞股蓝配伍可调节MMP-9/TIMP-1mRNA的表达,降低血脂水平,具有抗动脉粥样硬化作用,下调主动脉组织MMP-9mRNA的表达,上调TIMP-1mRNA的表达可能是其作用机制之一。     

三七总皂苷对LPS诱导的BV2小胶质细胞炎症反应的保护作用

目的:探讨三七总皂苷对脂多糖(LPS)刺激所致BV2小胶质细胞炎症反应的保护作用及其机制。方法:MTT比色法检测不同浓度三七总皂苷对BV2小胶质细胞活性的影响;免疫荧光法检测IL-1β、NF-κB的定位及表达;PCR法检测IL-1β、TNF-α、iNOS mRNA的表达;Western blot法检测IL-1β、TNF-α、COX-2蛋白表达。结果:三七总皂苷在6.25～50μg/mL对BV2小胶质细胞生长无明显影响。与LPS模型组比较,各浓度(6.25、12.5、25、50μg/mL)三七总皂苷均能不同程度抑制IL-1β、TNF-α、iNOS mRNA和IL-1β、TNF-α、COX-2蛋白表达;50μg/mL三七总皂苷能有效抑制NF-κB的核转移及IL-1β在胞浆内的表达。结论:三七总皂苷对LPS刺激所致的BV2小胶质细胞炎症反应有保护作用,其机制可能与抑制NF-κB通路激活有关。     

薯蓣皂苷元对LPS诱导的人胚肺成纤维细胞的干预机制研究

目的基于MAPK信号通路研究薯蓣皂苷元对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)的影响,探讨薯蓣皂苷元干预肺间质纤维化的机制。方法通过LPS诱导MRC-5细胞建立肺纤维化模型,利用CCK-8法检测细胞增殖水平,免疫荧光法检测α-平滑肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)表达水平,ELISA法检测TGF-β1、IL-6蛋白表达水平,Western blot测定p-38、p-p38、jnk、p-jnk表达水平。结果以LPS诱导MRC-5细胞能够成功建立肺纤维化细胞模型,40μmol/L薯蓣皂苷元组细胞增殖水平较模型组明显降低(P0.01),薯蓣皂苷元组α-SMA表达水平较模型组均有明显下降(P0.01)。与模型组比,10μmol/L薯蓣皂苷元组、40μmol/L薯蓣皂苷元组TGF-β1表达水平明显下降(P0.01),20μmol/L薯蓣皂苷元组TGF-β1表达水平未见明显下降(P0.05);与模型组比,10μmol/L薯蓣皂苷元组IL-6表达水平未见明显下降(P0.05),而20μmol/L及40μmol/L薯蓣皂苷元组IL-6表达明显高于模型组(P0.01);各组p-38、jnk表达水平无明显差异(P0.05),p-p38、p-jnk表达水平薯蓣皂苷元组较模型组明显下降(P0.01)。结论薯蓣皂苷元通过下调LPS诱导的MRC-5细胞中的TGF-β1的表达,可以抑制Smad通路及非Smad通路中诱导肺纤维化的信号通路,阻碍上皮细胞间质化(EMT)进程。并且通过下调TGF-β1表达,薯蓣皂苷元可以有效地抑制MAPK通路中的p38MAPK通路及jnk通路的磷酸化激活,降低α-SMA表达,减少炎性反应、细胞凋亡的发生,从而达到抗肺纤维化的目的。     

氨氯地平对ox-LDL诱导人单核巨噬细胞MMP-9表达的影响

目的研究氨氯地平对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导健康人单核巨噬细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）mRNA及蛋白表达影响。方法采用体外密度离心法分离健康人单核细胞培养并传至4代后,以佛波酯（40ng/mL）诱导为巨噬细胞,培养48h后用于实验。根据实验要求分为空白对照组、ox-LDL组、不同剂量（0.1μmol/L,1μmol/L,10μmol/L）氨氯地平组。RT-PCR检测各组MMP-9mRNA的表达情况。Elisa检测各组MMP-9蛋白的表达。结果单核巨噬细胞经100μg/mL ox-LDL诱导后,与空白对照组比较MMP-9mRNA和蛋白表达显著增加;经ox-LDL诱导后不同剂量氨氯地平组与ox-LDL组比较MMP-9mRNA和蛋白表达显著降低,并呈浓度效应依赖关系,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 ox-LDL可使人单核巨噬细胞MMP-9的表达增加,氨氯地平可呈浓度效应依赖性地减少ox-LDL诱导人单核巨噬细胞MMP-9的表达,从而在稳定斑块,减少急性冠脉事件发生中起作用。     

瑞舒伐他汀联合氨氯地平对ox-LDL诱导的人单核巨噬细胞MMP-9mRNA和蛋白表达的影响

目的瑞舒伐他汀联合氨氯地平降低对氧化修饰的低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的健康人单核巨噬细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）mRNA及蛋白的表达进而促进粥样斑块的稳定。方法体外密度梯度离心法分离并培养单核巨噬细胞并传至2代～4代用于实验,根据实验要求分为空白对照组（单核巨噬细胞培养24h）、ox-LDL对照组（ox-LDL 100μg/mL诱导后单独培养24h）、瑞舒伐他汀组（单独加入瑞舒伐他汀0.01μmol/L、0.1μmol/L、1.0μmol/L培养24h）、瑞舒伐他汀联合氨氯地平组（加入不同剂量瑞舒伐他汀联合氨氯地平0.01μmol/L、0.1μmol/L、1.0μmol/L共同作用24h）;分别提取各组细胞RNA,用半定量逆转录聚合酶链式反应法（RT-PCR）测定MMP-9mRNA表达;用ELISA法测定MMP-9的蛋白含量。结果单核巨噬细胞经100μg/mLox-LDL诱导后,与空白对照组比较MMP-9mRNA和蛋白表达显著增加;ox-LDL诱导后不同剂量瑞舒伐他汀联合氨氯地平组,与ox-LDL对照组及瑞舒伐他汀组比较可加强抑制MMP-9mRNA和蛋白表达作用。并呈剂量-效应关系,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论外周血单核巨噬细胞在ox-LDL诱导后,MMP-9mRNA和蛋白含量明显增加,瑞舒伐他汀与氨氯地平联合后,可以加强抑制单核巨噬细胞MMP-9mRNA和蛋白表达的作用,进而增强急性冠脉综合征（ACS）患者粥样斑块的稳定性。     

竹节参总皂苷通过NF-κB通路对LPS致RAW264.7细胞炎症的保护作用研究

目的： 探讨竹节参总皂苷对脂多糖（LPS）刺激的RAW264.7巨噬细胞的抗炎作用。方法：噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度的竹节参总皂苷对RAW264.7细胞活性的影响;一氧化氮（NO）试剂盒法检测竹节参总皂苷对LPS刺激RAW264.7细胞的NO释放量;酶联免疫吸附法（ELISA）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素1-β（IL-1β）分泌;逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）,TNF-α,IL-1β mRNA的表达;免疫印迹法（Western blot）检测胞核内核转录因子-κB p65（NF-κB p65）蛋白表达。结果：竹节参总皂苷的安全用药范围为≤80 mg·L^-1;与LPS模型组相比,竹节参总皂苷各剂量组（0.1,1,10,40 mg·L^-1）均能显著降低LPS刺激下RAW264.7细胞NO,TNF-α和IL-1β分泌;竹节参总皂苷各剂量组（10,40 mg·L^-1）均能抑制iNOS,TNF-α,IL-1β mRNA表达和NF-κB p65蛋白表达。结论：初步证实了竹节参总皂苷对LPS致RAW264.7巨噬细胞炎症的保护作用,作用机制可能与 NF-κB通路有关。     

黑种草子总皂苷对炎症介质及ERK/MAPK信号转导通路的影响

目的:研究黑种草子总皂苷的抗炎机制。方法:IFN-γ和LPS协同造成小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症模型;Griess反应测定细胞上清液中NO产量;FRAP法测定细胞总抗氧化能力;RT-PCR检测iNOS,COX-2,IL-1β,IL-6,TNF-α,PPAR-γmRNA表达;Western blot检测iNOS,PPAR-γ,p-ERK蛋白表达水平。结果:黑种草子总皂苷呈剂量依赖性抑制细胞上清液中NO含量,提高细胞总抗氧化能力,下调iNOS,COX-2,IL-1β,IL-6 mRNA和iNOS蛋白的表达,抑制ERK磷酸化,上调PPAR-γ mRNA和蛋白表达。但对TNF-α mRNA表达影响不大。结论:黑种草子总皂苷部分通过抑制MAPK信号转导通路中的ERK磷酸化来下调iNOS基因和蛋白的表达从而减少NO的产量,下调COX-2,IL-1β,IL-6炎症介质表达;同时提高细胞总抗氧能力及上调抗炎介质PPAR-γ的表达而发挥抗炎效果。     

阿托伐他汀对THP-1源性巨噬细胞CD40及MMP-9的抑制作用

目的 观察他汀类药物对人单核／巨噬细胞（THP-1细胞）基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达是否存在抑制作用及其作用是否与CD40—CD40L信号通路有关，探讨他汀类药物可能的非调脂抗动脉粥样硬化机制。方法 先加入不同浓度的阿托伐他汀（1．25μmol／L、2．50μmol／L、5．00μmol／L）作用1h，再向培养的THP-1细胞中加入氧化型低密度脂蛋白（80mg／L）共同孵育24h，分别运用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测CD40及MMP-9mRNA，酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定培养基的MMP-9浓度。结果 阿托伐他汀抑制THP-1细胞CD40和MMP-9mRNA的表达，同时抑制MMP-9蛋白的表达（P〈0．05），并呈浓度依赖性。结论 阿托伐他汀能抑制THP-1细胞CD40的表达以及MMP-9的表达和分泌，这种作用可能是他汀类药物减轻动脉粥样斑块炎症，防止斑块破裂的机制之一。     

三七皂苷R1水凝胶对兔耳皮肤增生性瘢痕的修复作用及对bFGF、TGF-β_1表达的影响

目的考察三七皂苷R1水凝胶对兔耳皮肤瘢痕的修复作用及对重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和转化生长因子-β_1(TGF-β_1)表达的影响。方法取健康新西兰大耳白兔24只,制备兔耳皮肤瘢痕模型后随机分为4组,每组6只。模型组瘢痕处外涂空白水凝胶基质,0.5 g/L三七皂苷R1组和1 g/L三七皂苷R1组分别涂抹含浓度为0.5 g/L、1 g/L三七皂苷R1溶液制备的水凝胶制剂,积雪苷组外涂积雪苷霜软膏,均每日2次,连续外涂5周。记录各组瘢痕修复情况,HE染色和Masson染色观察瘢痕组织微观变化,计算瘢痕增生指数、成纤维细胞数量和胶原纤维面密度,Western blot和RT-PCR法分别检测瘢痕组织中bFGF、TGF-β_1蛋白和mRNA表达水平。结果与模型组比较,各给药组兔耳瘢痕颜色显著变淡,瘢痕面较平坦且软,组织真皮层厚度明显变薄,胶原疏松有序排列,瘢痕增生指数、成纤维细胞数量和胶原纤维面密度明显降低,瘢痕组织中bFGF蛋白和mRNA表达升高,TGF-β_1蛋白和mRNA表达降低,且1 g/L三七皂苷R1组和积雪苷组各指标改善情况明显优于0.5 g/L三七皂苷R1组,差异均有统计学意义(P均0.05);1 g/L三七皂苷R1组和积雪苷组各指标比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论三七皂苷R1水凝胶对兔耳皮肤增生性瘢痕具有一定的抑制和修复作用。     

瓜子金皂苷己抑制脂多糖诱导的小胶质细胞激活作用

摘要: 目的 观察瓜子金皂苷己（polygalasaponin F, PGSF）对脂多糖（LPS）诱导的BV-2小胶质瘤细胞激活的作用及其作用机制。方法 以0.1μg?mL LPS刺激BV-2 细胞构建炎症模型,以酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞培养基上清中的白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子（TNF-α）浓度、以Griess法检测一氧化氮（NO）的浓度;以免疫印迹法（Western Blot）或逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测细胞炎性蛋白酶诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和环氧合酶-2（COX-2 ）的蛋白和mRNA表达,以及其炎症信号受体TLR4 mRNA表达。结果 PGSF（10、1、0.1μmol/L）可浓度依赖性地降低LPS诱导的BV-2细胞培养基中TNF-α（P<0.01、P<0.01）、IL-1β（P<0.05、P<0.05）和NO的浓度（P<0.05）,同时下调细胞内iNOS蛋白（P<0.05、P<0.05）和mRNA（P<0.01、P<0.05）表达以及COX-2的蛋白（P<0.05）和mRNA（P<0.05）表达,此外逆转TLR4 mRNA表达的上调(P<0.05)。结论 PGSF能够负调控LPS诱导的BV-2小胶质细胞释放炎性介质,抑制小胶质细胞激活,发挥对抗神经炎症的作用,此抗炎作用可能由TLR4受体介导。     

人参总皂苷与三七总皂苷对高糖刺激下腹膜间皮细胞分泌转化生长因子β_1和纤维连接蛋白的影响

目的:观察人参总皂苷与三七总皂苷对高糖刺激下腹膜间皮细胞分泌转化生长因子β1(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)的影响。方法:采用胰蛋白酶消化法分离大鼠腹膜间皮细胞,建立稳定的细胞培养模型,加入2.5%腹膜透析液作用3h,吸弃后加入终浓度为100μg/mL的人参总皂苷与三七总皂苷,分别于24h、48h后用ELISA法检测上清液中TGF-β1和FN的水平。结果:高糖腹透液刺激后,在24h、48h腹膜间皮细胞分泌FN及TGF-β1均明显增加,与空白组比较,差异有显著性意义或非常显著性意义(P0.05,P0.01)。对高糖刺激后的腹膜间皮细胞培养24h,与高糖组比较,三七总皂苷能抑制FN分泌(P0.01);人参总皂苷培养24h、48h均能降低FN的水平(P0.01)。人参总皂苷培养24h能减少高糖刺激后腹膜间皮细胞分泌TGF-β1(P0.01),三七总皂苷培养24h、48h均能降低TGF-β1的水平(P0.05,P0.01)。结论:三七总皂苷及人参总皂苷对高糖培养24h的腹膜间皮细胞分泌FN、TGF-β1均有明显的抑制作用,人参总皂苷对FN分泌的抑制持续时间更长,三七总皂苷对TGF-β1分泌的抑制持续时间更长。     

三七总皂苷对脑缺血再灌注后细胞外基质破坏及氧化应激的影响

目的：研究三七总皂苷（PNS）对脑缺血再灌注后细胞外基质破坏及氧化应激的影响,探讨三七总皂苷抗缺血性脑损伤的机制。方法：将C57BL/6小鼠随机分成假手术组、模型组、PNS组及依达拉奉组,连续给药4天后结扎双侧颈总动脉20min,再灌注24h后检测基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）及组织基质金属蛋白酶抑制物-1（tissue inhibitor of meta11oproteinase-1,TIMP-1）在脑组织的表达;脑缺血20min再灌注60min后测定脑组织丙二醛（Malonaldehyde,MDA）、还原型谷胱甘肽（Glutathione,GSH）、一氧化氮（NitricOxide,NO）含量和超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）、一氧化氮合酶（Nitric Oxide Synthase,NOS）活性。结果：.脑缺血再灌注后,脑织织MMP-9表达增强,与假手术组比较,差异具有统计学意义（P〈0.01）,而TIMP-1表达无显著性变化;脑缺血再灌注后脑组织MDA含量显著升高,SOD活性和GSH含量显著降低,NO含量和NOS活性均显著升高,与假手术组比较,差异均具有统计学意义（P〈0.01）。PNS可显著升高脑缺血再灌注后TIMP-1蛋白表达,降低MMP-9蛋白表达,与模型组比较,差异均具有统计学意义（P〈0.01,P〈0.05）;PNS可显著降低MDA和NO含量,与模型组比较,差异均具有统计学意义（P〈0.01,P〈0.05）,但对SOD、NOS活性和GSH含量无显著影响。结论：三七总皂苷对脑缺血再灌注后的细胞外基质破坏及氧化应激损伤具有抑制作用。     

重楼总皂苷对LiCl诱导人胃癌MKN-45细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨重楼总皂苷(Rhizoma Paridis total saponin,RPTS)在体外对人胃癌MKN-45细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,探讨其作用的可能机制。方法体外培养MKN-45细胞,取对数生长期细胞,加入不同质量浓度RPTS(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μg/m L)处理24h,采用MTT法检测细胞增殖情况;细胞划痕实验、Transwell小室实验检测RPTS对MKN-45细胞迁移和侵袭的影响;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测RPTS对LiCl诱导的MKN-45细胞上清液中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的上调表达的影响;免疫印迹技术(Western blotting)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分别检测RPTS(10、20、40μg/m L)对Li Cl诱导的MKN-45细胞中肿瘤侵袭转移相关分子血管内皮生长因子(VEGF)、环加氧酶-2(COX-2)以及Li Cl作用靶点糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)蛋白和基因表达水平的影响。结果与对照组比较,RPTS 5.0、10.0、20.0、40.0μg/m L可明显下调MKN-45细胞的增殖活性(P0.05、0.001);RPTS 2.5、5.0、10.0μg/m L可抑制MKN-45细胞的迁移和侵袭能力(P0.01、0.001)。与模型组比较,RPTS能够显著下调Li Cl诱导的MKN-45细胞上清液中MMP-9的表达水平(P0.05、0.01);下调细胞中VEGF、COX-2 mRNA和蛋白表达水平;上调Li Cl作用位点GSK-3βm RNA和蛋白表达水平(P0.05、0.001)。结论 RPTS具有体外抑制MKN-45细胞迁移和侵袭的能力,其作用机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。     

益气养阴逐瘀方对LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症模型体外抗炎活性的影响

目的:研究益气养阴逐瘀方对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞系RAW 264. 7细胞炎症模型相关细胞因子表达及经典活化(M1)/选择性活化(M2)炎症表型转化的影响。方法:运用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同给药浓度的益气养阴逐瘀方对RAW 264. 7细胞增殖情况的影响;利用LPS诱导RAW 264. 7细胞,构建体外炎症模型,采用格里斯试剂法(Griess)检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的分泌量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清中M1/M2型相关炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-1β(IL~(-1)β),一氧化氮合酶(i NOS),白细胞介素-10(IL~(-1)0),转化生长因子-β(TGF-β),精氨酸-1(Arg-1)的表达量;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测M1型巨噬细胞标志基因TNF-α,IL-6,IL~(-1)β,i NOS和M2型巨噬细胞标志基因IL~(-1)0,TGF-β,Arg-1 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内相关蛋白TNF-α,IL-6,IL~(-1)β,i NOS的表达。结果:MTT比色法显示,与空白组比较,益气养阴逐瘀方2. 0 g·L~(-1)及以下时对细胞增殖无明显影响。Griess法显示,与空白组相比,LPS组NO释放量显著上调(P 0. 01);与LPS组相比,各给药组NO释放量均显著下调(P 0. 01)。ELISA显示,与空白组相比,LPS组M1/M2型巨噬细胞相关炎症因子表达均显著上调(P 0. 01);与LPS组相比,益气养阴逐瘀方各给药组可明显下调M1型巨噬细胞促炎症因子表达(P 0. 01),对M2型巨噬细胞抗炎症因子无影响。Real-time PCR显示,与空白组相比,LPS组M1/M2型巨噬细胞相关mRNA表达显著上调(P 0. 01);与LPS组相比,益气养阴逐瘀方各给药组可明显下调M1型巨噬细胞促炎症因子基因表达(P 0. 05,P 0. 01),对M2型mRNA表达无影响。Western blot显示,与空白组比较,LPS组TNF-α,IL-6,IL~(-1)β,i NOS蛋白的表达显著上调(P 0. 01);与LPS组相比,益气养阴逐瘀方各给药组TNF-α,IL-6,IL~(-1)β,i NOS蛋白的表达均下调,且于2. 0 g·L~(-1)下调最显著(P 0. 01)。结论:益气养阴逐瘀方可以有效抑制LPS诱导的RAW 264. 7细胞炎症。其诱导已经分化的促炎亚型M1型巨噬细胞向抗炎亚型M2型巨噬细胞转化不明显,其抗炎机制可能与通过抑制巨噬细胞向M1亚型方向极化从而发挥免疫调节作用,以减少NO,TNF-α,IL-6等相关炎症因子分泌相关。     

牡丹皮提取物抑制TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞的间质转化和肺成纤维细胞的活化

目的:探讨牡丹皮提取物(丹皮酚、总苷和多糖提取物按照一定比例形成的组合物)对TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞的间质转化和肺成纤维细胞的活化的影响。方法:MTT法分析牡丹皮对两种细胞增殖的影响。TGF-β1诱导A549肺泡上皮细胞的间质转化和MRC-5肺成纤维细胞的活化,用不同剂量的牡丹皮干预;圆形度定量法分析细胞形态,免疫细胞化学法检测细胞E-cad和Collagen-I蛋白的表达;双抗体夹心酶联免疫吸附法检测Collagen-I和FN水平。结果:12.5~200μg/m L牡丹皮对A549细胞和MRC-5细胞的增殖没有显著性影响(P0.05)。对于A549细胞,与正常组比较,TGF-β1组圆形度和E-cad表达显著降低(P0.01),Collagen-I表达显著升高(P0.01);与TGF-β1组比较,牡丹皮不能显著抑制圆形度的变化(P0.05),但50~200μg/m L牡丹皮能显著抑制E-cad表达的下调(P0.05或0.01),200μg/m L牡丹皮能显著抑制Collagen-I表达的上调(P0.05)。对于MRC-5细胞,与正常组比较,TGF-β1组FN、Collagen-I的分泌量显著增加(P0.01);与TGF-β1组比较,100μg/m L和200μg/m L牡丹皮提取物组的上述两种蛋白的分泌量显著减少(P0.05或0.01)。结论:牡丹皮提取物抑制TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞的间质转化和肺成纤维细胞的活化,提示牡丹皮可能具有抑制肺纤维化的形成和发展的作用。     

氨基酸转化三七花中稀有人参皂苷及提取液对脂多糖诱导的RAW264.7细胞活性的影响

目的通过添加食品级氨基酸将三七Panaxnotoginseng花中普通人参皂苷转化为稀有人参皂苷,并对转化前后提取物的抗炎活性进行比较。方法应用单因素和正交试验考察了不同氨基酸种类、氨基酸浓度、反应温度、反应时间和液固比对稀有人参皂苷转化的影响,探讨并分析了转化前后三七花提取物对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞增殖和抗炎活性的影响。结果天冬氨酸是最佳催化剂,在温度为120℃、天冬氨酸为5%、液固比为30m L/g和反应时间为2h时,4种稀有人参皂苷总转化含量为(47.12±0.52)mg/g。转化前后三七花提取物在1.56~200μg/m L,显著抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞的活性(P<0.05),显著抑制NO和白细胞介素-6(IL-6)的释放(P<0.05)。在质量浓度≥6.250μg/m L时,转化后三七花提取物显著对LPS诱导RAW264.7细胞炎症有更好的抑制作用(P<0.05),NO和IL-6促炎因子的分泌也显著减少(P<0.05)。结论对稀有人参皂苷的转化提供了绿色、安全和高效的转化方法。三七花在转化后对LPS诱导的炎症反应有明显的抑制作用,为三七花的开发利用提供了新思路。     

清热、活血类中药有效成分对THP-1巨噬泡沫细胞形成及分泌IL-1β、TNF-α的影响

目的探讨清热、活血类中药有效成分抑制巨噬细胞泡沫化的作用及机制。方法以氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)和细菌脂多糖(LPS)诱导THP-1细胞成为巨噬泡沫细胞,采用油红O染色脂质半定量分析法和ELISA法检测中药有效成分对THP-1巨噬泡沫细胞形成及培养上清中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量的影响。结果20μmol/L的黄连素、黄芩苷、大黄素、丹参酮ⅡA和100 mg/L的三七总皂苷可显著降低THP-1巨噬泡沫细胞油红O染色阳性率;20μmol/L的大黄素、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA可显著降低THP-1巨噬细胞的IL-1β分泌量;20μmol/L的黄连素可显著降低THP-1巨噬细胞的TNF-α分泌量。结论清热、活血类中药有效成分可抑制巨噬细胞泡沫化及其炎症因子IL-1β和/或TNF-α的分泌,抑制炎症因子的释放可能是其抗泡沫细胞形成的机制之一。     

黄芪皂苷干预乳腺癌细胞MCF-7的体外实验研究

目的:研究黄芪皂苷在体外对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞的增殖与凋亡的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法:取对数生长期的人乳腺癌细胞MCF-7,分为对照组和不同浓度黄芪皂苷组(2.5μg/m L,5μg/m L,10μg/m L,20μg/m L);采用CCK-8法检测黄芪皂苷对MCF-7细胞增殖抑制率的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Realtime PCR法检测Bcl-2、BAX、MMP-9、nm23-H1 m RNA的表达情况。结果:黄芪皂苷能抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖,抑制作用呈剂量-效应和时间-效应关系;黄芪皂苷能够诱导MCF-7的凋亡,早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率均随着黄芪皂苷作用浓度的增加及作用时间的延长而增加;黄芪皂苷能上调BAX和nm23-H1基因的表达,同时使Bcl-2和MMP-9基因的表达下调。结论:黄芪皂苷在体外对乳腺癌细胞MCF-7的增殖和转移有抑制作用,其作用途径是通过调节细胞凋亡相关基因与肿瘤转移相关基因的表达,从而诱导肿瘤细胞的凋亡。     

三七总皂苷对过氧化氢损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用研究

目的:观察三七总皂苷(PNS)对过氧化氢损伤人脐静脉内皮细胞(HUVECs)LDH释放量、胞内SOD活性的影响,研究其对受损细胞粘附分子ICAM-1及MCP-1 mRNA表达的影响,探讨三七总皂苷对HUVECs的保护作用及其在动脉粥样硬化中作用的可能机制。方法:三七总皂苷预孵育细胞4h后,加入300μmol/L H2O2,继续培养24h,MTT法检测细胞活力,采用试剂盒测定LDH释放量、SOD酶活力,荧光实时定量PCR(RT-PCR)法检测三七总皂苷作用下内皮细胞ICAM-1及MCP-1 mRNA的表达。结果:三七总皂苷在25~100μg/ml浓度范围内可显著提高受损细胞活力,并能显著降低LDH漏出率,提高胞内SOD酶活力;RT-PCR结果表明H2O2组内皮细胞表达的ICAM-1和MCP-1 mRNA明显高于正常细胞组,而同时加入50及100μg/ml的三七总皂苷后两者mRNA表达明显下降。结论:三七总皂苷可保护血管内皮细胞免受H2O2的损害,改善受损细胞氧化指标,降低参与动脉粥样硬化相关细胞因子表达,从而预防和治疗动脉粥样硬化。     

三七总皂苷对MC3T3-E1细胞增殖和成骨分化的影响

目的 探讨三七总皂苷对激素性股骨头坏死的保护作用。方法 采用CCK-8法检测三七总皂苷(1～1 000 mg/L)和地塞米松(10μmol/L)对MC3T3-E1细胞增殖的影响，偶氮偶联法检测三七总皂苷(10、50、100 mg/L)和地塞米松对MC3T3-E1细胞ALP活性的影响，茜素红染色法检测三七总皂苷和地塞米松对细胞矿化的影响，RT-qPCR法和免疫荧光染色法检测三七总皂苷和地塞米松对细胞蛋白Col-Ⅰ、OCN、OPN蛋白和mRNA表达的影响，Western blot法检测三七总皂苷和地塞米松对细胞Runx2蛋白和Wnt/β-catenin通路靶蛋白表达的影响。结果 10μmol/L地塞米松能抑制MC3T3-E1细胞增殖。与正常组比较，10～100 mg/L三七总皂苷能促进MC3T3-E1细胞增殖(P<0.05),并可降低地塞米松对细胞增殖的抑制作用(P<0.01)。此外，三七总皂苷能降低地塞米松对MC3T3-E1细胞ALP活性和钙沉积的抑制作用(P<0.01),地塞米松可降低MC3T3-E1细胞Col-I、Runx2、OCN、OPN蛋白表达和Wnt/β-ca...