温肾醒脑方对血管性痴呆大鼠Ang-1和HIF-1α表达的影响

目的:探讨温肾醒脑方对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠血管生成素-1(Ang-1)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响。方法:采用劳倦过度、房事不节法,高脂饮食法,以及反复性脑缺血再灌注结合降压法复制肾(阳)虚痰瘀型VD模型。将大鼠随机分为假手术组、模型对照组、温肾醒脑方组3组,每组18只。动物于造模后2 h开始灌胃,温肾醒脑方组以7.1 g/kg药液(体表面积换算,相当于60 kg成人量的3倍)灌胃给药,每天1次;模型对照组与假手术组给予等体积蒸馏水。各组动物在手术后2 h和处死前2h进行神经功能评分。分别于造模后3 d、7 d和14 d处死动物,采用免疫组织化学法检测Ang-1与HIF-1α表达情况。结果:与假手术组对比,模型对照组和温肾醒脑方组大鼠的神经功能评分差别均有统计学意义(P0.05或P0.01)。与同一时间点模型对照组对比,用药3d,7 d和14 d的温肾醒脑方组的神经功能评分降低,差别有统计学意义(P0.05或P0.01)。VD大鼠脑缺血后Ang-1阳性细胞随时间延长而增加,温肾醒脑方能促进其表达,与模型对照组对比差别有统计学意义(P0.01)。模型对照组大鼠HIF-1α表达增强,并随缺血时间的延长呈持续上升趋势,7d后增长速度放慢,至14 d达到最高值;温肾醒脑方组HIF-1α表达水平在各时间点均高于模型对照组(P0.01)。结论:温肾醒脑方可促进VD大鼠脑缺血后神经功能的恢复,促进脑组织中Ang-1和HIF-1α的表达。     

温肾醒脑方对血管性痴呆大鼠认知能力及Smad1、Smad4表达的影响

目的:探讨温肾醒脑方对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠认知能力及Smad1、Smad4表达的影响。方法:采用劳倦过度、房室不节法,高脂饮食法,以及反复性脑缺血再灌注结合降压法复制肾(阳)虚痰瘀型VD模型。将大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、假手术组和温肾醒脑方组,每组20只。动物术后分别存活3 d和7 d,每组每个时间点各10只。温肾醒脑方组每天给予10g/kg药物溶液,假手术组、模型对照组和正常对照组大鼠均给予等体积的无菌蒸馏水。通过定位航行实验、空间探索实验检测大鼠的认知(学习和记忆)能力;在3d、7d处死动物,免疫组化法、RT-PCR检测Smad1和Smad4基因、蛋白的表达。结果:与模型对照组对比,温肾醒脑组第4,5天的潜伏期缩短(P值依次为P0.05,P0.01),跨越平台次数和游泳总距离显著增加(P0.01)。与模型对照组对比,温肾醒脑方组Smad1阳性细胞数及其mRNA减少,Smad4阳性细胞及其mRNA增加,7d时的Smad1阳性细胞数、Smad1 mRNA和Smad4 mRNA表达有统计学意义(P0.01)。与假手术组对比,温肾醒脑方组7d时的Smad1和Smad4阳性细胞数、3d时的Smad4阳性细胞数增加,3 d和7 d时的Smad1 mRNA和Smad4 mRNA表达均增加,差别有统计学意义(P0.01)。结论:温肾醒脑方可以改善血管性痴呆大鼠的认知行为,减少Smad1与mRNA阳性细胞表达,增加Smad4与mRNA阳性细胞表达。     

六味地黄汤对发育迟缓仔鼠认知功能及脑组织NGF、EGF、bFGF表达的影响

目的:观察六味地黄汤对发育迟缓仔鼠认知功能及脑组织NGF、EGF、b FGF表达影响,阐述六味地黄汤补肾健脑的机制。方法:采用孕鼠被动吸烟复制仔鼠发育迟缓模型,于自然分娩后喂养仔鼠1个月,进行学习记忆能力的检测,采用免疫组化法及RT-q PCR检测仔鼠脑内NGF、EGF、b FGF的表达水平。结果:1造模后,与正常组相比,动物逃逸潜伏期延长,垮台次数减少(P0.05),药物治疗后,与模型组相比,逃逸潜伏期缩短,垮台次数增多,差异具有统计学意义(P0.05)。2正常仔鼠脑内NGF、EGF、b FGF基因和蛋白表达大致相同,造模后,NGF、EGF、b FGF表达减少,与正常组相比,差异具有统计学意义(P0.01或P0.05),药物治疗后,NGF、EGF、b FGF表达明显增多,与模型组相比,差异具有统计学意义(P0.01或P0.05)。结论:孕期被动吸烟可以导致仔鼠学习记忆能力降低以及脑组织NGF、EGF、b FGF表达下降,六味地黄汤能显著提高脑组织内NGF、EGF、b FGF表达水平,从而提高仔鼠的学习记忆能力可能是其补肾健脑的机制。     

解毒胶囊对乳腺增生大鼠VEGF和bFGF表达的影响

目的:探究解毒胶囊对乳腺增生大鼠乳腺组织中VEGF和b FGF表达的影响。方法:选取50只12周龄SD雌性未孕大鼠随机分为5组(正常组、模型组、方药组、三苯氧胺组、乳癖消组),每组各10只。对于模型组和3个治疗组进行乳腺增生模型的复制,造模成功后,方药组、三苯氧胺组、乳癖组分别给予解毒胶囊、三苯氧胺、乳癖消的水溶液灌胃。治疗4周后,光镜下观察各组大鼠乳腺组织的病理变化。用免疫组化和QPCR检测各组大鼠乳腺组织VEGF和b FGF表达情况。结果:光镜下可见乳腺增生大鼠模型复制成功,且解毒胶囊有治疗作用。免疫组化结果显示正常组乳腺组织内VEGF、b FGF呈阴性或弱阳性表达;模型组的VEGF、b FGF呈强阳性表达,显著高于正常组(P0.01);而治疗三组的VEGF、b FGF阳性表达明显减轻,显著低于模型组(P0.01);方药组乳腺组织内VEGF、b FGF的表达要明显低于乳癖消组(P0.01、P0.05),与三苯氧胺组相比无统计学差异。QPCR结果显示模型组与正常组相比VEGF和b FGF呈现高表达(P0.01);治疗组(方药组、三苯氧胺组、乳癖消组)与模型组相比,VEGF和b FGF表达均减弱(P0.01);其中方药组及三苯氧胺组比乳癖消组减弱明显(P0.01),其比较结果均有统计学差异。而方药组与三苯氧胺组相比,结果没有统计学差异(P0.05)。结论:解毒胶囊能够干预乳腺增生大鼠的乳腺组织VEGF和b FGF的表达情况,对乳腺增生有调节和治疗作用。     

超微六味地黄汤对老年痴呆大鼠认知功能和脑组织碱性成纤维生长因子表达的影响

目的:探讨超微六味地黄汤对老年痴呆(AD)模型大鼠学习记忆功能及碱性成纤维生长因子(bFGF)表达的影响,阐明超微六味地黄汤益智健脑的机制。方法:采用β-淀粉样蛋白(Aβ1-40)脑内注射建立AD模型,将动物随机分为正常组、假手术组、模型组、中药超微六味地黄汤10 g.kg-1组,给予不同处理,于造模后5,30 d处死动物,评价动物的认知功能,RT-PCR和ELISA检测bFGF表达水平。结果:造模后动物逃避潜伏期明显延长,治疗后中药组与模型组相比,逃避潜伏期明显缩短,差异均有统计学意义(P<0.05);超微六味地黄汤组与假手术组比较,差异无统计学意义。正常大鼠脑组织有低水平bFGF基因和蛋白表达,造模后模型组和中药组表达增强,模型组、超微六味地黄汤10 g.kg-1组与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05),但两组间差异无统计学意义;治疗后超微六味地黄汤组bFGF水平维持在相对较高的水平,而模型组基本恢复至正常组水平,超微六味地黄汤组与模型组、正常组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Aβ1-40脑内注射后动物认知功能下降,超微六味地黄汤能促进其认知功能恢复,增强AD大鼠bFGF表达,是其益智健脑的可能机制。     

心脏彩色多普勒超声评价压力负荷超载诱导的舒张性心力衰竭及益气温阳中药的干预作用

目的:通过心脏彩色多普勒超声评价压力负荷超载诱导的舒张性心力衰竭及益气温阳中药的干预作用。方法:清洁级雄性Wistar大鼠40只,随机选取10只为假手术组,余30只腹主动脉缩窄术后,随机分为模型组、中药组、缬沙坦组,每组10只。造模后8周开始药物干预,共干预16周。观察药物干预对心脏彩色多普勒超声的影响。结果:1.心肌形态测量学:造模24周后,模型组大鼠CMI、LVMI明显增加(P0.05),中药组的CMI、LVMI和模型组相比差异无统计学意义(P0.05),缬沙坦组CMI、LVMI和模型组相比差异有统计学意义(P0.05),中药组CMI、LVMI与西药组相比差异无统计学意义(P0.05)。2.M型超声心动图:(1)造模24周后,模型组大鼠IVSd显著增高(P0.05),中药组IVSd与模型组相比有减小趋势,差异无统计学意义(P=0.069),缬沙坦组IVSd与模型组相比明显减小(P0.05),中药组IVSd与缬沙坦组相比差异无统计学意义(P0.05)。(2)造模24周后,模型组大鼠LV Mass增大(P0.05),中药组LV Mass与模型组相比有统计学差异(P0.05),缬沙坦组LV Mass与模型组相比差异有统计学意义(P0.05),中药组LV Mass与缬沙坦组相比差异无统计学意义(P=NS)。(3)造模24周后,模型组大鼠LVIDd明显增大(P0.05),中药组LVIDd较模型组减小(P0.05),缬沙坦组LVIDd和模型组比较差异没有统计学意义(P0.05),中药组LVIDd与缬沙坦组相比差异无统计学意义(P0.05)。(4)造模24周后,模型组大鼠EF、FS降低,但差异无统计学意义(P0.05),中药组、缬沙坦组和模型组相比差异无统计学意义(P0.05,P0.05),中药组和缬沙坦组相比差异无统计学意义(P0.05)。3.心脏彩色血流多普勒超声:(1)造模24周后,模型组E峰显著减小(P0.05);中药组E峰较模型组增大(P0.05);缬沙坦组和模型组比较差异无统计学意义(P0.05),中药组与缬沙坦组相比差异无统计学意义(P0.05)。(2)模型组E/A比值显著降低(P0.05),中药组E/A比值较模型组显著提高(P0.05),缬沙坦组E/A比值和模型组相比差异无统计学意义(P0.05),中药组E/A比值与缬沙坦组相比差异无统计学意义(P0.05)。4.血流动力学:(1)造模24周后,模型组SAP明显升高(P0.05),中药组SAP较模型组降低(P0.05),缬沙坦组SAP较模型组降低(P0.05),中药组SAP与缬沙坦组相比差异无统计学意义(P0.05)。(2)造模24周后,模型组LVSP明显升高(P0.05),中药组LVSP较模型组降低(P0.05),缬沙坦组LVSP较模型组降低(P0.05),中药组LVSP与缬沙坦组相比差异无统计学意义(P0.05)。(3)造模24周后,模型组LVEDP明显升高(P0.05),中药组LVEDP较模型组降低(P0.05),缬沙坦组LVEDP较模型组降低(P0.05),中药组LVEDP与缬沙坦组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论:心脏彩色多普勒超声是评价压力负荷超载诱导的舒张性心力衰竭的有效方法,益气温阳中药可有效改善压力负荷超载诱导的舒张性心力衰竭。     

益气活血方对冠心病大鼠药物作用靶点及治疗机制分析

目的:分析益气活血方对冠心病大鼠药物作用靶点及治疗机制。方法:选取从本院实验动物中心饲养的SPF健康雄性Wistar大鼠60只,将其随机分成三组,即对照组、假手术组与手术组,后两组大鼠均腹腔注射升压药物(左旋硝基精氨酸),制备冠心病大鼠模型。以不同浓度(低、中、高)的益气活血方以及盐酸地尔硫卓喂食大鼠,观察两组大鼠血浆中儿茶酚胺类物质去甲状肾上腺素、肾上腺素以及环磷酸腺苷的含量变化。结果:称重后发现对照组大鼠体重明显高于建立模型后大鼠,差异有统计学意义(P0.05),而假手术组大鼠的体重与对照组相比差异无统计学意义(P0.05);模型组大鼠的心脏体重比明显高于对照组、假手术组与中药高浓度组,且最大,与这三组的心脏体重比相比,差异有有统计学意义(P0.05),与西药组、中药中浓度、低浓度组大鼠心脏体重比相比,差异无统计学意义(P0.05),中药中浓度、低浓度组大鼠心脏体重比高于中药高浓度组大鼠,但与其心脏体重比相比,差异无统计学意义(P0.05);模型组大鼠NE、E、cAMP水平相比于对照组均有所增加,差异有统计学意义(P0.05),中药高浓度组大鼠NE、E、cAMP水平相比于模型组有所降低,差异有统计学意义(P0.05),西药组大鼠NE、E、cAMP水平与模型组相比,差异无统计学意义(P0.05),中药低浓度组大鼠NE、E、cAMP水平与中浓度组相比,差异无统计学意义(P0.05),中药高浓度组与假手术组大鼠NE、E、cAMP水平与对照组相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论:益气活血方可调节大鼠血浆中儿茶酚胺类物质去甲状肾上腺素、肾上腺素以及环磷酸腺苷水平,增强心功能。     

经穴注射BMSCs联合中药对下肢缺血大鼠促血管生成相关因子的影响

目的:观察经穴注射骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)联合益气活血中药对糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)大鼠缺血后肢骨骼肌中促血管生成因子的表达情况。方法:80只SD大鼠1∶7随机分为2组:正常假手术组10只,其余70只一次性腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ,50.0 mg/kg)制成DM大鼠模型,再等比例随机分为7组,即DM假手术组、DM缺血组、益气活血中药组、局部注射BMSCs组、局部注射BMSCs+中药组、穴位注射BMSCs组、穴位注射BMSCs+中药组,每组10只。应用RT-PCR法检测大鼠后肢骨骼肌中VEGF、b FGF mRNA的表达。结果:穴位注射BMSCs+中药组术侧VEGF mRNA表达量较DM假手术组升高(P0.05);DM假手术组、局部注射组、穴位注射组术侧b FGF mRNA表达量较健侧升高(P0.05);局部注射+中药组、穴位注射+中药组术侧b FGF mRNA表达量较正常血糖假手术组、DM假手术组、DM缺血组升高(P0.05);穴位注射+中药组健侧b FGF mRNA表达量较正常血糖假手术组、DM假手术组、DM缺血组、中药组、局部注射组升高(P0.05)。结论:穴位注射BMSCs结合益气活血中药可明显促进血管生成因子VEGF、b FGF的表达,益气活血中药可能促进穴位注射BMSCs的成活率从而提高促血管生成因子VEGF、b FGF的表达。     

丹龙醒脑方对脑缺血再灌注大鼠血管新生及碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的:研究丹龙醒脑方对脑缺血再灌注大鼠血管新生及碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)的影响。方法:用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞缺血再灌注(MCAO)模型,2 h后开放血流再灌注。大鼠造模成功后分为6组,丹龙醒脑方大(14.76 g/kg)、中(7.38 g/kg)、小(3.69 g/kg)剂量组,尼莫地平(10.80 mg/kg)组,模型组,假手术组,灌胃7 d后处死大鼠取脑,用免疫组化法测定缺血海马区的内皮细胞数和微血管密度(MVD)及bFGF的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠内皮细胞计数及微血管密度、bFGF蛋白表达均增强(P0.05或P0.01);与模型组比较,丹龙醒脑方组内皮细胞数、微血管密度及bFGF蛋白表达均有明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:丹龙醒脑方能够促进脑缺血再灌注大鼠缺血脑组织血管新生,对缺血脑组织具有保护作用,其作用机制可能与上调bFGF蛋白表达有关。     

温肾醒脑方对血管性痴呆大鼠认知功能的影响及机制研究

目的:研究温肾醒脑方对血管性痴呆(Vascular dementia,VD)大鼠认知功能的改善作用及对Nrf2、Keap1相关信号通路的影响。方法:70只雄性SD大鼠随机分成正常组、假手术组、模型组、脑复康组(0.15 g/kg)、温肾醒脑方给药组(高剂量组5 g/kg、中剂量组2.5 g/kg、低剂量组1.25 g/kg),每组10只动物。采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VD模型。给予温肾醒脑方灌胃治疗后,Morris水迷宫测试治疗后VD大鼠认知功能的改善情况。检测脑组织中SOD、MDA、GSH-Px、NOS,HE染色观察脑海马组织的病理变化情况,RT-PCR大鼠脑组织NQO1、HO-1的mRNA水平和Western Blot检测Keap1、Nrf2、NQO1、HO-1蛋白水平的表达情况以及EMSA检测Nrf2与ARE结合力。结果:与正常组比较,VD模型组大鼠逃避潜伏期明显较长,游泳总距离明显缩短,穿越站台总数明显减少(P0.01);大脑组织中MDA含量显著增加,SOD、GSH-Px和NOS的含量明显减少(P0.01);大脑组织结构明显受损伤,细胞形态改变,细胞核固缩,核仁不清晰;同时大脑组织中细胞核Nrf2蛋白表达降低、细胞质中Keap1蛋白表达增加,NQO1、HO-1 mRNA和蛋白表达降低(P0.01)。与VD模型组比较,脑复康和温肾醒脑方组大鼠的认知行为得到很大的提高,脑组织MDA、SOD、GSH-Px、NOS含量和脑组织病理结构得到很好的改善,Nrf2、Keap1、NQO1、HO-1在mRNA水平或蛋白水平上有一定程度改变,特别是温肾醒脑方组大鼠的改善非常显著。结论:温肾醒脑方可以改善VD大鼠的认知行为,其机制可能与Nrf2-Keap1-NQO1/HO-1抗氧化应激信号通路相关。