清开灵注射液HPLC/UV/MS/MS指纹图谱研究

目的:建立一种HPLC/UV/MS/MS清开灵注射液(板蓝根,栀子,金银花等)指纹图谱研究方法,为其质量控制提供新思路。方法:采用Phenom enex Luna C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相分别为0.1%甲酸水溶液和乙腈梯度洗脱,流速0.5 mL/m in;采用电喷雾离子阱质谱(ESI-ITMS)分析,正、负离子二级扫描。结果:得到分离度和重现性良好的HPLC/UV/MS/MS指纹图谱,对其指纹图上13个色谱峰进行了初步定性,成功鉴别了新绿原酸、绿原酸和异绿原酸3个异构体。结论:本方法建立了清开灵注射液HPLC/UV/MS/MS指纹图谱,为中药复杂体系的分析及其质量控制提供了一种有效、可靠的模式。     

RANK/RANKL/OPG系统的临床研究进展

核因子-κB(RANK)和其配体RANKL的,属于肿瘤坏死因子受体激活剂(TNF)受体配体的家庭的一员,二者结合后,破骨细胞活性增强,引起的骨吸收。而骨保护素(OPG)能与RANK竞争RANKL,抑制破骨细胞的过度表达,或者能干扰骨髓基质细胞与破骨细胞之间相互作用而诱导破骨细胞的凋亡,RANK/RANKL/OPG系统参与了不同疾病的骨吸收导致一系列溶骨性病变。骨代谢疾病中RANKL和OPG的问题,为治疗方案提供了新的靶标,正成为临床相关研究的热点之一。     

HPLC-DAD/ELSD-ESI-TOF/MS��������Ƭ�л�ѧ�ɷּ����ָ�궨��ָ��ͼ���о�

??OBJECTIVE To analyze and identify the compositions using HPLC-DAD/ELSD-ESI-TOF/MS for establishing the multi index quantatitive HPLC fingerprint of the Jinming Tablet, in order to providing scientific basis for its quality control.METHODS The Agilent SB C₁₈ column (4.6 mm??250 mm, 5 ??m) was used with a mobile phase of acetonitrile-0.2% acetic acid in gradient elution, the flow rate was 0.8 mL??min^-1, the sample voume was 30 ??L, the column temperature was maintaine at 25 ??, the detection wavelength was set at 280 nm. ESI-TOF/MS positive and negative ion mode scanning was used to qualitatively analyze the components in methanol water extract from Jinming Tablet.RESULTS Twenty compounds in Jinming Tablet extract could be primarily identified by HPLC-DAD on-line detection, in which five compounds were determined; based on the analysis of multiple batches of samples, the multi index chromatographic fingerprint was established, meanwhile combined with similarity analysis to achieve the quality evaluation of Jinming Tablet.CONCLUSION The HPLC-DAD/ELSD fingerprint film analysis method for Jinming Tablet is established, which could provide reference for the quality control of the material basis of other compound.     

知母药材的HPLC/PDA/ELSD指纹图谱研究

[目的]建立知母药材的高效液相色谱仪-二极管阵列检测器-蒸发光散射检测器联用(HPLC/PDA/ELSD)指纹图谱。[方法]采用Waters Symmetry Shield TM RP C18(5μm,4.6 mm×250 mm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1%冰醋酸,梯度洗脱流速1.0 m L/min,柱温30℃,检测波长258 nm,ELSD检测器载气气压30 Psi,漂移管温度80℃。[结果]建立了知母的HPLC/PDA/ELSD指纹图谱,在HPLC-PDA色谱图中标定了17个共有峰,HPLC-ELSD色谱图中标定了14个共有峰。[结论]该方法重复性好,可用于知母药材的全面质量控制。     

乌头汤对CIA大鼠MCP-1/CCR2/ERK1/2信号的作用

目的:研究乌头汤对胶原诱导关节炎大鼠体内MCP-1/CCR2/ERK1/2信号的影响。方法:50只SD大鼠,随机选10只为正常组,剩下40只造胶原诱导关节炎模型,造模成功后随机分成模型组、乌头汤低剂量组(3.75 g·kg~(-1)·d~(-1))、乌头汤高剂量组(7.5 g·kg~(-1)·d~(-1))和甲氨蝶呤组(1 mg·kg~(-1)·w~(-1)),灌胃给药28 d后取材。采用ELISA法检测大鼠血清中单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)的含量,免疫组织化学法检测大鼠踝关节中MCP-1的表达水平,利用Western Blotting检测大鼠踝关节中CC趋化因子受体2(CC chemokine receptor 2,CCR2)和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular-signal-regulated kinases 1/2,ERK1/2)及其磷酸化形式的表达水平。结果:乌头汤能显著降低胶原诱导关节炎大鼠血清及踝关节中MCP-1的含量,同时能够显著降低模型大鼠踝关节中CCR2的含量及ERK1/2的磷酸化水平,但对总的ERK1/2没有明显影响。结论:乌头汤具有下调胶原诱导关节炎大鼠体内MCP-1/CCR2/ERK1/2信号的作用。     

骨碎补总黄酮作用于OPG/RANKL/RANK轴系统的相关研究

目前虽未见骨碎补总黄酮直接作用于OPG/RANKL/RANK轴系统的研究报告,关于骨碎补总黄酮的多项临床及动物实验表明,其检验指标与OPG/RANKL/RANK轴系统互为联系,进而提示骨碎补总黄酮可能会影响OPG/RANKL/RANK轴系统的表达,本文现将相关研究做一综述。     

耳甲电针对抑郁模型大鼠海马Raf/ERK/RSK/CREB信号通路的影响

目的:观察耳甲电针对慢性不可预知性温和刺激(CUMS)诱导的抑郁大鼠海马细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路的影响,探讨耳甲电针抗抑郁效应的机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、耳甲电针组、PD98059抑制剂(PD)组、二甲基亚砜(DMSO)组、PD+耳甲电针组,每组10只。采用孤养结合连续21 d CUMS方法制备抑郁大鼠模型。耳甲电针组、PD+耳甲电针组于耳甲区的"心"和"神门"耳穴给予连续28 d电针刺激,每天30 min;PD组、DMSO组、PD+耳甲电针组分别给予连续28 d侧脑室注射PD98059、DMSO、PD98059,每只5μL/d。记录造模前后、干预后各组大鼠糖水消耗量。采用Western blot法检测干预后各组大鼠海马Raf、p-Raf、ERK、p-ERK、RSK、CREB、p-CREB蛋白的相对表达量。结果:与空白组比较,模型组大鼠糖水消耗量及海马Raf、p-Raf、ERK、p-ERK、RSK、CREB、p-CREB均显著降低(P<0. 01)。与模型组比较,耳甲电针组大鼠糖水消耗量及海马Raf、p-Raf、ERK、p-ERK、RSK、CREB、pCREB均显著升高(P<0. 05,P<0. 01),PD+耳甲电针组p-Raf、ERK、CREB明显升高(P<0. 01,P<0. 05),PD组p-ERK明显下降(P<0. 05)。与耳甲电针组比较,PD+耳甲电针组p-ERK、RSK和pCREB明显下降(P<0. 05,P<0. 01)。结论:海马内Raf/ERK/RSK/CREB信号通路可能参与了耳甲电针的抗抑郁效应,且该效应在一定程度上可被ERK阻断剂所抑制。     

瓜蒌皮提取物基于PI3K/Akt/NO信号通路保护缺氧/复氧损伤心肌细胞的机制

目的:研究磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/一氧化氮(PI3K/Akt/NO)信号通路在瓜蒌皮提取物保护心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用。方法:以2.5 mmol·L~(-1)Na_2S_2O_4诱导心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,实验分为正常组、模型组、瓜蒌皮提取物组及抑制剂组。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测心肌细胞中一氧化氮(NO)的释放量及内皮型一氧化氮合酶(e NOS),诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的活性水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中Akt,e NOS,i NOS mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定Akt,磷酸化Akt(p-Akt),e NOS,i NOS蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组心肌细胞活力明显下降(P0.01),心肌细胞NO释放量减少(P0.01),心肌细胞中p-Akt,Akt及e NOS mRNA和蛋白表达显著降低(P0.01),而i NOS mRNA和蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,瓜蒌皮提取物预处理24 h后能改善心肌细胞形态,明显提高心肌细胞活力(P0.01)。瓜蒌皮提取物能促进p-Akt,Akt及e NOS mRNA和蛋白表达(P0.01),抑制i NOS mRNA和蛋白的表达(P0.01),增加心肌细胞NO的释放量(P0.01)。PI3K抑制剂LY294002与瓜蒌皮提取物联合处理后,逆转了瓜蒌皮提取物对心肌细胞的上述作用,导致细胞存活率下降。结论:瓜蒌皮提取物可能通过激活PI3K/Akt信号通路上调e NOS,下调i NOS的表达,增加内源性NO的基础含量水平,发挥抗凋亡作用,从而改善缺氧/复氧损伤诱导的心肌细胞损伤。     

RANKL/RANK/OPG系统及其在激素性骨坏死中的作用

近几年的研究表明,核因子kB受体活化因子配基/核因子kB受体活化因子/骨保护蛋白(RANKL/RANK/OPG)系统对保持骨重建的动态平衡具有重要意义;糖皮质激素通过影响RANKL/RANK/OPG系统的正常功能导致骨量减少;对RANKL/RANKL/RANK/OPG系统的外源性干预可阻断和逆转骨质吸收.糖皮质激素时RANKL/RANK/OPG系统影响的研究为治疗激素所致骨坏死开辟了广阔的前景.本文拟对近年对RANKL/RANK/OPG系统及其在激素性骨坏死中的病机和治疗研究进展作一综述.     

基于GLP-1R/cAMP/PKA/CREB的泽泻汤促进白色脂肪棕色化/激活棕色脂肪作用机制研究

基于GLP-1R/cAMP/PKA/CREB探讨泽泻汤(Zexie Decoction, ZXD)体内外促进白色脂肪棕色化/激活棕色脂肪的作用机制。西式饮食(western diet, WD)诱导高脂血症小鼠模型,设置对照组,WD组(模型组),ZXD低、中、高剂量组;体外诱导3T3-L1细胞成脂分化模型,以毛喉素(forskolin, FSK)作为阳性对照,设置ZXD低、中、高剂量组。免疫组化与免疫荧光结果提示,与WD组相比,泽泻汤促进白色和棕色脂肪组织中UCP1表达;同时泽泻汤上调了细胞中UCP1、CPT1β、PPARα等基因;Western blot检测PGC-1α、UCP1、PPARα的蛋白表达也表现出随泽泻汤剂量依赖性升高,表明泽泻汤促进白色脂肪棕色化/激活棕色脂肪。苏木素-伊红(HE)染色结果显示,相较于WD组,泽泻汤处理后,白色和棕色脂肪细胞明显缩小,ATGL、HSL、MGL、PLIN1的mRNA表达显著上调;油红O染色和生化试剂盒检测细胞TC、TG水平均提示泽泻汤改善脂质蓄积,促进脂肪分解。p-CREB免疫组化和免疫荧光发现,泽泻汤处理逆转了WD导致的p-CREB表达降低...     

基于TLR4/MyD88/NF-κB通路探讨茯砖茶改善ApoE-/-小鼠非酒精性脂肪肝的作用

目的 研究茯砖茶对载脂蛋白E敲除(ApoE^-/-)小鼠肝组织TLR₄/MyD88/NF-κB通路的影响，探讨其抑制非酒精性脂肪肝(NAFLD)形成的作用机理。方法 将50只ApoE^-/-小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组和茯砖茶高、中、低剂量组(2.16、1.44、0.72 g/kg),每组10只，高脂饲料连续喂养17周并同时予以相应药物灌胃干预；另取8周龄C57BL/6J野生小鼠作为空白组，普通饲料喂养17周并予以生理盐水灌胃干预。给药结束后，取肝脏行HE染色观察组织病理变化，采用RT-qPCR法检测小鼠肝组织Toll样受体4(TLR₄)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子Kappa B(NF-κB)、白细胞介素-1β(IL-β)、脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达。结果 模型组小鼠肉眼可见肝脏体积增大，边缘变钝，呈黄色油腻感，镜下可见大小不等的脂肪空泡形成，证实模型制备成功；茯砖茶高、中剂量组小鼠脂肪变性程度轻于模型组，茯砖茶各剂量组小鼠肝组织TLR₄、MyD88、NF-...     

天心解郁方对抑郁模型大鼠的作用及大脑内CAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路的影响

目的：探索天心解郁方对抑郁模型大鼠的作用及大脑内CAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路的影响。方法：雄性SD大鼠80只，剔除后随机分为空白组、模型组、天心解郁组、西药组、疏肝组、温肾组和疏肝健脾组7组，每组10只。除空白组外，其余组别按照慢性利血平诱导抑郁模型的方法造模28 d，造模前30 min给药，分别灌胃给药饮用水、天心解郁水煎液、氟西汀溶液、路优泰溶液、巴戟天寡糖胶囊溶液、舒肝解郁胶囊溶液，给药28 d后对各组大鼠的体质量、行为学指标、血清学细胞因子、脑组织相关靶点进行检测。结果：造模28 d后，与模型组相比，天心解郁组旷场实验水平运动得分、垂直运动得分和总路程的增加(P<0.05)，强迫游泳不动时间的缩短(P<0.001)，且较温肾组、疏肝组、疏肝健脾组更明显。与模型组相比，天心解郁组和温肾组可以增加大鼠血清内的CAMP含量(P<0.001, P<0.01)，其余组别则无明显变化(P>0.05)。与模型组相比，天心解郁组可以增加皮层内的PKA表达，促进海马内CREB、BDNF、ADRB2蛋白表达。与模型组相比，温肾组可以增加皮层内的PKA水平，其余组别无明显影响。结论：天心解郁方可能通过影响大脑内CAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路，发挥抗抑郁作用，较单纯疏肝、温肾或疏肝健脾的方法，疗效更好，治疗靶点更多元化。     

百合鸡子汤通过BDNF/TrkB介导的PI3K/Akt/mTOR信号通路对CUMS大鼠抗抑郁的影响

目的探究百合鸡子汤通过BDNF/TrkB介导的PI3K/Akt/mTOR信号通路对CUMS大鼠抗抑郁的影响。方法CUMS法复制大鼠抑郁模型,观察百合鸡子汤对大鼠抑郁行为学和前额叶皮质BDNF/TrkB介导的PI3K/Akt/mTOR信号通路关键蛋白表达的影响。结果抑郁行为学的强迫游泳实验中,CUMS组大鼠不动时间延长,而百合鸡子汤组、氟西汀组大鼠抑郁行为均得到改善(P<0.01)。Western blot检测发现,CUMS降低了大鼠前额叶皮质组织的BDNF、p?TrkB、p?PI3K、p?Akt、p?mTOR的表达,而百合鸡子汤干预能够上调这些蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论百合鸡子汤具有一定的抗抑郁作用,BDNF/TrkB及其下游的PI3K/Akt/mTOR信号通路可能为其作用机制。     

肉桂酸对db/db小鼠肝脏PI3K/AKT/FoxO1信号通路的影响＊

目的 通过研究肉桂酸对db/db小鼠肝脏PI3K/AKT/FoxO1信号通路的影响，探讨其在肝脏胰岛素抵抗方面的作用机制。方法 连续两日同一时间测空腹血糖，并参考体重用随机分层抽样法将18只db/db小鼠分为模型组、吡格列酮组和肉桂酸组，正常组为同周龄db/m + 小鼠，每组6只，分别给予肉桂酸溶液与等量DMSO灌胃4周。Elisa法检测血清胰岛素水平，全自动生化分析仪检测血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和游离脂肪酸（FFA），Western blot法检测肝脏组织PI3K、AKT、FoxO1的蛋白表达。结果 肉桂酸可降低db/db小鼠空腹血糖水平及血清ALT、AST、TG、TC和FFA的水平；其亦可上调肝脏组织PI3K、p-FoxO1、p-AKT蛋白表达水平，下调FoxO1蛋白表达水平。结论 肉桂酸可以改善db/db小鼠的空腹葡萄糖水平，调节血脂及改善胰岛素抵抗，其作用机制可能是通过激活PI3K/AKT/FoxO1信号通路来实现的。     

补肾中药影响骨质疏松相关蛋白RANK/RANKL/OPG系统的研究进展

RANK/RANKL/OPG是参与调节骨重建的最重要的分子系统之一,与骨疾病相关的骨质疏松症有密切联系。近年来RANK/RANKL/OPG系统与骨代谢关系的研究不断深入,中医药在这方面也取得了一定的进展。研究证明,补肾中药不论是单体、单味中药还是中药复方都能影响RANK/RANKL/OPG系统,从而抑制破骨细胞分化成熟,达到治疗骨质疏松的目的。当然,这仅从RANK/RANKL/OPG这一系统来阐述中医药治疗骨质疏松症的机制,而骨质疏松症是一种多系统、多层次的内分泌疾病,探究中医药的具体作用机制还有待进一步研究。     

基于L-Arg/NOS/NO通路探讨八段锦干预原发性高血压的机制研究

目的通过对原发性高血压(EH)患者进行24周的八段锦运动干预,从L-Arg/NOS/NO通路阐明八段锦调控EH患者血压的作用机制。方法选取62例EH志愿者,随机分为八段锦组和对照组各31例,对照组进行常规治疗与健康教育;八段锦组在此基础上进行八段锦运动,共干预24周。检测2组干预前后精氨酸酶Ⅱ(Arg-Ⅱ)蛋白表达、一氧化氮合酶蛋白(NOS)活性和蛋白表达、一氧化氮(NO)水平,分析比较2组干预前和干预后每4周的血压值。结果与干预前比较,八段锦组NOS蛋白表达水平、蛋白活性和NO水平均明显提高(P<0.05),其中NOS蛋白表达水平和NO水平高于对照组(P<0.05);2组患者的收缩压(SBP)在时间、组别以及时间与组别的交互效应上均有统计学意义(P<0.05);2组患者的舒张压(DBP)在时间、组别上具有统计学意义(P<0.05),在交互效应上无统计学意义(P>0.05)。结论八段锦运动具有降低EH患者SBP与DBP的作用,其机制可能与上调L-Arg/NOS/NO通路中的NOS表达与促进NO生成有关。     

LC/MS/MS法测定人血浆中人参皂甙-Rd浓度

目的:建立液相色谱-质谱(LC/MS/MS)法测定人血浆中人参皂甙-Rd浓度。方法:血浆样品采用固相萃取法处理。用电喷雾离子化和正离子多离子反应监测(MRM)方式检测人参皂甙-Rd(m/z 964.6→767.5;964.6→325.3),内标物:龙胆苦甙(m/z374.1→195.1;357.1→195.1)。结果:人参皂甙-Rd的最低定量限为3.00 ng/m l;线性范围为3.00~5000.00 ng/m l;方法回收率在81.01%~83.39%范围,日内、日间变异系数(RSD)均小于15%。结论:该法准确、灵敏、特异,适用于血浆人参皂甙-Rd浓度的测定。     

消疣擦剂/消疣丸抗HPV/CA复发30例

尖锐湿疣(CA)是一种由人乳头瘤病毒(HPV)感染引起的以生殖器、会阴、肛门为主要发病部位的性传播疾病(STD).近年来,其发病率迅速上升,虽有多种治疗方法,但居高不下的复发率仍是治疗该病颇为棘手的问题.2003-10-2005-06,我们采用消疣擦剂、消疣丸,外涂内服,治疗CA,预防其复发,取得满意效果.现报道如下.     

基于BDNF/TrKB/CREB信号通路探讨温胆汤干预精神分裂症认知障碍

精神分裂症(SCZ)认知功能障碍,是SCZ除阳性和阴性症状之外的另一大核心症状,认知障碍通常在SCZ其他症状之前出现,并贯穿于疾病的全过程,其临床表现多样,病机复杂,难以根治。SCZ认知障碍属于中医“癫狂”病范畴,本研究认为“痰迷心窍”为癫狂主要病机,其病理特征与现代医学大脑海马神经元细胞BDNF/TrKB/CREB信号通路传导影响认知记忆存在关联。由于温胆汤是治疗痰证的有效方剂,本文结合文献研究和前期实验基础,从致病机理层面,深入探讨了温胆汤对精神分裂症认知障碍干预机制,为进一步研究温胆汤治疗精神分裂症认知障碍提供理论依据。     

UPLC/Q-TOF-MS/MS分析蛇床子提取物大鼠体内外化学成分

目的采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪联用技术(U PLC/Q-TOF MS/MS)对蛇床子超临界提取物的体内外成分进行分析和鉴定。方法用ACQUITY UPLC BEHC18色谱柱,以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,检测波长254 nm,使用ESI离子源,在正离子模式下采集数据;采用与标准品对比和质谱数据分析及检索文献的方法鉴定化学成分。结果检测出蛇床子超临界提取物中9个化合物,其中5个成分经过鉴定确认均为香豆素类,大鼠口服蛇床子提取物的血浆中检测出欧前胡素和蛇床子素两个原形成分。结论 UPLC/Q-TOF MS技术快速有效,具有较高的灵敏度和分辨率,适宜于鉴定中药复杂的体内外活性成分。